云南重楼种苗繁育技术

目的：研究云南重楼种苗繁育技术。方法：在对云南重楼种苗繁育技术多年试验研究的基础上,总结了云南重楼有性和无性繁育技术。结果：通过种子胚后熟催芽处理,当年出苗率达到30％以上,种子育苗5年开花结果可移栽作种苗,根茎单重达到8～15g;带顶芽的切段当年可移栽,成苗率达到90％以上,不带顶芽的切段第3年开花结果成苗,成苗率达到98％以上,根茎单重达到7～12g。结论：通过此技术可实现云南重楼种苗的规范化快速生产,促进云南重楼的产业化栽培和发展。     

滇重楼种子育苗初步研究

通过对滇重楼有性繁殖技术的实践开展,从滇重楼生物学特性、采种母株选择、采种母株的管理、人工授粉方法、授粉节点时间选择、种子成熟期的界定、育苗地选址要求、育苗地整地、种子处理、播种方法、田间管理等一系列细节性农事操作措施,初步提出适宜农村滇重楼种子育苗繁育的实用技术,从种子采收时间、种子消毒方法、土壤除虫方法、播种方法 (播种时间、覆土厚度、松针覆盖)、田间管理等一系列措施,提出适度遵循滇重楼种子育苗生长发育特征的实用滇重楼种子育苗实用技术。     

云南重楼种苗繁育技术

目的:研究云南重楼种苗繁育技术。方法:在对云南重楼种苗繁育技术多年试验研究的基础上,总结了云南重楼有性和无性繁育技术。结果:通过种子胚后熟催芽处理,当年出苗率达到30%以上,种子育苗5年开花结果可移栽作种苗,根茎单重达到8～15g;带顶芽的切段当年可移栽,成苗率达到90%以上,不带顶芽的切段第3年开花结果成苗,成苗率达到98%以上,根茎单重达到7～12g。结论:通过此技术可实现云南重楼种苗的规范化快速生产,促进云南重楼的产业化栽培和发展。     

多因素处理对云南重楼及其多芽品系种子萌发的影响

目的探讨温度、内源激素、授粉方式等条件对云南重楼及其多芽品系种子萌发和出苗的影响进行研究,建立促进云南重楼种子萌发技术体系,为重楼种子育苗提供科学指导,缓解目前重楼优质种源严重不足、商品药材严重供不应求、市场价格高居不下的瓶颈问题。方法采用湿沙培养各条件下处理过的云南重楼种子,测定发芽率和平均发芽时间,并将催芽后的种子播种于大田,考察出苗率、平均出苗时间。结果经4～18℃变温湿沙培养处理的重楼种子获得了较高的发芽率和出苗率;赤霉素处理能促进云南重楼种子的萌发,缩短平均发芽时间,100、200 mg/L赤霉素处理效果较好;人工授粉的种子发芽率和出苗率显著高于自然授粉的种子(P0.05);云南重楼及其多芽品系间发芽率和出苗率无明显差别。结论将除去外种皮的人工授粉的种子用100 mg/L赤霉素处理,经4～18℃变温湿沙培养至萌芽,萌芽种子播种于大田,可缩短云南重楼种子的出苗周期1年,获得高达80%以上的出苗率。     

云南重楼果皮化学成分研究

目的：研究云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.) Hand.＿Mazz.果皮中的化学成分。方法：采用HPD-100大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、ODS柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析和半制备型高效液相色谱等方法对云南重楼果皮70%乙醇渗漉提取物中的化学成分进行系统研究,通过NMR和HR-MS现代波谱学技术结合参考文献对化合物的结构进行鉴定。结果：从云南重楼果皮的70%乙醇渗漉提取物中分离得到16个化合物,分别鉴定为：山柰酚(1)、槲皮素(2)、异鼠李素(3)、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷(4)、紫云英苷(5)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(6)、异槲皮苷(7)、金丝桃苷(8)、kaempferol-3-O-β-D-galactopyranosyl-(l→6)-β-D-glucopyranoside(9)、isorhamnetin-3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(10)、异鼠李素-3-O-β-D-龙胆二糖苷(11)、20-羟...     

多叶重楼与云南重楼中4种重楼皂苷的积累差异

目的考察多叶重楼Paris polyphylla Smith var.polyphylla与云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的积累差异。方法 HPLC法测定多叶重楼根、叶、茎中4种重楼皂苷含有量,建立20批样品的指纹图谱,聚类分析对2种植物不同部位中各重楼皂苷的积累差异进行评价。结果不同居群多叶重楼中各重楼皂苷含有量及其总量均有显著差异(P0.05,P0.01)。根中未检测到重楼皂苷Ⅵ,重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ平均含有量最高;叶中重楼皂苷Ⅶ平均含有量和总含有量最高;茎中仅检测到重楼皂苷Ⅶ,总含有量最低。多叶重楼和云南重楼根的相似度较高,叶和茎较低。根据不同部位重楼皂苷总含有量,样品可分为3类。结论可考虑将多叶重楼作为云南重楼的替代品。     

封面介绍——云南重楼

云南重楼Paris polyphylla Smith var．yunnanens／s（Franch．）Hand．-Mazz．为百合科植物,以干燥根茎入药,名为重楼。     

封面介绍——云南重楼

云南重楼Paris polyphylla Smith var．yunnanens／s（Franch．）Hand．-Mazz．为百合科植物,以干燥根茎入药,名为重楼。     

云南重楼的甾体皂苷类成分

目的：对重楼属（Paris）植物云南重楼（Pads polyphylla Smith vat. yurmanensis）的甾体皂苷类成分进行研究。方法：采用大孔树脂，硅胶柱色谱，Sephadex LH-20及RP-C18等技术分离纯化单体化合物，根据理化性质、波谱数据鉴定其结构。结果：从云南重楼乙醇提取物中分离并鉴定了9个甾体皂苷类化合物：（23S．25s） -3β3,23,27-trihydroxyspirost-5-en-3- O-β- D-glueopyranosyl- （1→6） -β- D-glueopyranoside （ 1 ）、重楼皂苷Ⅰ（2）、重楼皂苷Ⅱ （ 3 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranoside （ 4 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-αrabinofuranosyl （ 1 → 4 ）-β- D- glueopyranoside （5）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2） -β- D-glueopyranoside （6）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranosyl （ 1 → 3 ） [ α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2 ） ]-β- D-glueopyranoside （ 7 ）, （ 25 R ） permogenin-3- O-α- L - arabinofuranosyl （ 1 → 4） [ a-L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2）-β-D-glueopyranoside （8）, （ 25R ） permogenin-3-O-α-L- rhamnopyranosyl （ 1→4）-α-L-rhamnopyranosyl （ 1→4）-[ α- L-rhamnopyranosyl（1→2） ]-β-D-glueopyranoside（9） 。结论：化合物1为新化合物。     

云南重楼与球药隔重楼皂苷含量差异及光合特性研究

目的 了解云南重楼与球药隔重楼皂苷含量差异及光合特性,为重楼人工栽培及药用资源开发利用奠定理论基础。方法 以6年生云南重楼和球药隔重楼为材料,使用HPLC测定皂苷含量,LI-6800光合测定仪测定光合参数,紫外吸收法测定生化参数,石蜡包埋法测定叶片显微结构。结果 云南重楼与球药隔重楼皂苷含量及光合特性具有较大差异：(1)球药隔重楼总皂苷含量较云南重楼高118.97%,云南重楼中薯蓣皂苷类含量占总皂苷的95.86%;(2)球药隔重楼光补偿点仅为7.20μmol·m^-2·s^-1,且净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO₂浓度/环境CO₂浓度均显著低于云南重楼;(3)球药隔重楼叶绿素b含量显著高于云南重楼,且叶绿素a/b含量显著低于云南重楼;(4)云南重楼可溶性糖、可溶性蛋白及脯氨酸含量显著高于球药隔重楼,MDA含量显著低于球药隔重楼;(5)球药隔重楼叶片厚度、栅海比显著高于云南重楼。结论 球药隔重楼具有较高的皂苷含量且具有更好的抗寒性及耐阴性,可以考虑将球药隔重楼作为云南重楼的替代品进行深入研究与开发...     

滇重楼的化学成分研究

目的研究滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis根茎中的化学成分。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果从醋酸乙酯层中分离得到了7个化合物,分别鉴定为豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、1-O-(β-D-葡萄糖基)-(2S,3S,4E,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基十六酰氨基]-4(E),8(E)-十八二烯-1,3-二醇(Ⅱ)、β-蜕皮激素(Ⅲ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ)。结论化合物Ⅱ为首次从该属植物中分离得到。     

根际促生菌剂对滇重楼生理特性及无机元素的影响

目的:研究接种不同根际促生菌剂(PGPR)对滇重楼幼苗的生长发育和入药品质的影响,为培育优质滇重楼药材提供参考.方法:通过室温盆栽接种试验方法,采用单因素完全随机设计,研究了5种不同PGPR对滇重楼生理特性及无机元素的影响.结果:接种外源不同PGPR可以不同程度地促进滇重楼的生长发育,延缓叶片的衰老,提高新根茎和老根茎...     

滇重楼糖基转移酶基因的克隆和原核表达

目的:克隆滇重楼皂苷类成分生物合成途径中关键酶糖基转移酶基因(PpUGT1,PpUGT7),并对其进行生物信息学分析、相对表达量分析和原核表达.方法:试剂盒法提取滇重楼RNA并反转录,根据滇重楼转录组数据设计特异性引物,克隆基因全长,使用软件对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time P...     

长药隔重楼化学成分研究

目的研究长药隔重楼Paris polyphylla var.pseudothibetica根茎中的化学成分,为阐明其有效成分及扩大重楼属植物的药用资源提供科学依据。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、正反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果从长药隔重楼中分离得到了12个化合物,分别鉴定为:薯蓣皂苷元(1)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、β-谷甾醇(6)、豆甾醇(7)、胡萝卜苷(8)、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、山柰酚(10)、β-蜕皮激素(11)、蔗糖(12)。结论化合物1～9为首次从该植物中分离得到。     

基于SSR分子标记的滇重楼遗传多样性研究

目的研究滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis自然居群的遗传多样性,为滇重楼资源的保护和合理利用提供数据。方法采用SSR分子标记对滇重楼5个不同居群共115份样品进行遗传多样性分析。结果筛选出8对可用SSR引物,多态位点百分率(PPB)为100%,多态信息量(PIC)为0.745 6。在居群水平和物种水平上,观测等位基因数(N_a)分别为8.425 0和17.750 0,有效等位基因数(N_e)分别为4.960 9和7.500 7,观测杂合度(H_o)分别为0.295 5和0.294 8,期望杂合度(H_e)分别为0.654 8和0.774 4,Shannon’s信息指数(I)分别为1.520 1和2.038 6。遗传分化系数(F_(st))为0.172 8,基因流(N_m)为1.196 6。利用UPGMA聚类分析,将5个居群分为2类。结论滇重楼遗传多样性水平较高,居群内和居群间具有一定的遗传分化。对保护和发展滇重楼资源提出若干措施,为滇重楼的保护和科学可持续利用提供参考。     

滇重楼丛枝菌根的研究

目的:研究滇重楼根部丛枝菌根真菌(AMF)侵染情况及根际土中AMF孢子的种类与数量.方法:采用Phillips和Hayman染色法挑选滇重楼丛枝菌根.同时,采用Gendemann的湿筛倾析法获得AMF孢子,进行形态学鉴定.结果:丛枝菌根真菌能侵染滇重楼根系并形成典型的丛枝菌根(AM),侵染率在35.3%～98.6%,且侵染强度较强.从滇重楼根际采集的10个土样中共分离出24种AMF,Acaulospora属11种,Glomus属7种,Gigaspora属3种,Scutellospora属3种,分别是附柄无梗囊霉、双网无梗囊霉、凹坑无梗囊霉、孔窝无梗囊霉、浅窝无梗囊霉、光壁无梗囊霉、柯氏无梗囊霉、多果无梗囊霉、波兰无梗囊霉、瑞氏无梗囊霉、细凹无梗囊霉、白色球囊霉、双型球囊霉、沙荒球囊霉、草莓球囊霉、纯黄球囊霉、微丛球囊霉、凹坑球囊霉、微白巨孢囊霉、珠状巨孢囊霉、分支巨孢囊霉、美丽盾巨孢囊霉、透明盾巨孢囊霉、吉尔莫盾巨孢囊霉.其中,双网无梗囊霉是滇重楼的优势种.结论:AMF是滇重楼丰产栽培中的一种潜在应用价值的生物资源.     

滇重楼鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达研究

目的克隆滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis三萜皂苷生物合成途径中的关键酶鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并进行原核表达。并用Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1基因和SE2基因的相对量。方法以滇重楼根为材料提取总RNA并反转录为cDNA。以cDNA为模板,根据转录组数据中的2组SE基因全长序列设计特异性引物,对SE基因进行克隆后转入到pEASY-T1 Simple Cloning Vector中,经测序鉴定正确后,构建pEASY-E1-SE表达载体,利用Art Media protein Expression/Amp+培养基自动诱导表达。Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1和SE2基因的相对量。结果获得了2条滇重楼SE基因,命名为ppSE1和ppSE2。ppSE1的全长为1 932 bp,开放阅读框(ORF)为1 578 bp,编码525个AA;ppSE2的全长为1 828 bp,ORF长为1 548 bp,编码515个氨基酸。荧光定量PCR结果显示ppSE1基因和ppSE2基因在茎和叶中的表达具有显著差异,ppSE1的表达在叶中最为显著。酶切和测序结果表明,原核表达载体pEASY-E1-SE构建成功;SDS-PAGE分析显示,在BL21(DE3)表达感受态细胞中成功诱导表达了SE基因的2种融合蛋白。结论克隆了滇重楼的SE基因,获得了在体外具有生物学活性的SE蛋白。ppSE1基因和ppSE2基因在滇重楼中具有不同的表达模式,在滇重楼次生代谢产物的合成中起着不同的作用。     

滇重楼环阿屯醇合酶基因的克隆及序列分析

目的 获取滇重楼甾体皂苷合成途径关键酶环阿屯醇合酶基因(PpCAS)的全长cDNA序列,并进行序列分析.方法 利用同源克隆和RT-PCR技术获得PpCAS基因保守片段,采用RACE技术获得PpCAS基因的3'及5'末端序列,并采用生物信息学方法进行序列分析.结果 PpCAS基因全长cDNA为2 309 bp,其开放阅读框(ORF)为2 283 bp,可编码760个氨基酸的蛋白质;PpCAS推导的蛋白质相对分子质量为8.69×104,等电点(pI)为6.54;其氨基酸序列与GenBank中其他植物CAS的同源性在60％～83％ PpCAS蛋白.结论 从滇重楼中首次获得PpCAS基因cDNA全长序列,该基因具有CAS同源基因的典型特征.     

高温胁迫对滇重楼生理指标的影响

目的探究滇重楼对高温抗性适应能力,为滇重楼在中南地区规模化引种栽培提供依据。方法以滇重楼生长健壮苗为实验材料,在25℃/20℃(昼温/夜温)、33℃/28℃(昼温/夜温)、39℃/34℃(昼温/夜温)的不同温度条件下连续胁迫处理7 d,测定其叶片生理指标,并进行显著性与相关性分析。结果随着温度的升高与胁迫时间的持续延长,在33℃/28℃与39℃/34℃下处理7 d后,滇重楼叶相对含水量明显下降,分别比对照(25℃/20℃)低17.38%、58.25%;相对电导率与丙二醛(MDA)含量均持续上升,其中39℃/34℃处理下上升幅度最大,电导率比对照高3.59倍,MDA含量比对照高2.55倍;39℃/34℃处理下可溶性糖含量逐渐下降,比对照低33.25%;可溶性蛋白含量均呈波浪状变化,33℃/28℃处理组波动幅度较大,7 d后上升为对照的1.32倍;处理组超氧化物歧化酶(SOD)活性均先升高后下降,39℃/34℃处理组4 d后达到峰值,比对照高2.35倍;处理组过氧化物酶(POD)活性均逐渐上升,39℃/34℃处理组4 d后上升为对照的2.33倍,之后变化幅度逐渐减缓。结论温度对滇重楼的各项生理指标均有明显的影响,温度为25℃/20℃条件下,植物生长状态良好,为适宜生长温度,33℃/28℃温度条件下,长时间的持续胁迫处理会引起植株叶片损伤,39℃/34℃持续高温胁迫则会严重损伤植株生理活性与形态结构,严重时甚至会导致植株死亡。     

接种时期对丛枝菌根真菌侵染的滇重楼幼苗生长发育及甾体皂苷含量的影响

目的研究不同接种时期对丛枝菌根(AM)真菌侵染的滇重楼幼苗生长发育及重楼皂苷含量的影响,为栽培驯化出高品质的滇重楼奠定基础。方法采用HPLC测定不同接种时期滇重楼中重楼皂苷I、II、VI、VII的含量;采用曲利苯蓝染色法、紫外分光光度法等方法对不同接种时期及不同AM真菌组合的滇重楼的侵染率、生理指标、根茎生物量等进行分析。结果不同接种时期的AM真菌侵染率较强,保护酶活性、光合色素和可溶性糖含量提高,可溶性蛋白无明显变化,丙二醛含量降低,滇重楼幼苗的抗逆性提高,生长发育良好;栽培种源1年实生苗(2015年8月采收,T7时期)的品质相对较低,栽培种源1年实生苗(2015年6月、7月采收,T5、T6时期)的与栽培种源2年实生苗(2015年8月采收,T8时期)的品质最佳;不同的AM真菌混合组中,S2、S3和S6处理组的效果更佳。结论接种时期对AMF侵染的滇重楼幼苗生长发育及重楼皂苷含量存在一定的影响。