反义Id基因转染HT29细胞后TGF—α,βmRNA表达的研究

为了探讨Ｉｄ基因的反义核酸对ＨＴ２９细胞生长和增殖的作用，本研究用反义的Ｉｄ基因要人结肠癌细胞株ＨＴ２９细胞后，发现ＨＴ２９细胞的生长受到抑制，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率及软琼脂集落形成明显降低，ＴＧＦ－ＲＮＡ表达降低，而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ升高上述结果初步表明，Ｉｄ基因的反义核酸可抑制ＨＴ２９细胞的 增殖，为结直肠癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ在转染后变化的相互关系有待进一步探     

转化生长因子α，β对人结肠腺癌细胞株HT_（29）细胞生长调节影响的研究

用生长曲线、３Ｈ－ＴｄＲ参入及细胞周期分析等方法，研究了ＴＧＦ－α，β在体外对人结肠腺癌细胞株ＨＴ（２９）细胞的生长调节作用，为进一步探讨ＴＧＦ－α，β对ＨＴ（２９）细胞的生长调节作用机制，采用Ｄｏｔ杂交分析探讨了ＴＧＦ－α，β对ＨＴ（２９）细胞ｃ－ｍｙｃ基因ｍＲＮＡ表达的影响。结果发现ＴＧＦ－α可促进ＨＴ（２９）细胞生长和增殖，而ＴＧＦ－β则抑制其生长和增殖，ＴＧＦ－α可增加其ｃ－ｍｙｃ基因表达，而ＴＧＦ－β则抑制其ｃ－ｍｙｃ基因表达。本研究还采用肿瘤细胞无血清培养技术以及分子生物学方法，观察了ＨＴ（２９）细胞自分泌生长以及在其自分泌生长调控中ＴＧＦ－α，β，βｍＲＮＡ表达。研究发现ＨＴ（２９）细胞具有自分泌调控生长能力，在无血清培养条件下ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达增加，而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达则受到某种程度的抑制。上述研究结果表明ＴＧＦ－α，β分别作为正、负生长调节因子在ＨＴ（２９）细胞自分泌生长调节中可能具有重要作用。ＴＧＦ－α，β平衡失调同结、直肠癌发生、发展具有密切关系。     

转化生长因子α，β在人结、直肠癌、癌旁及正常肠粘膜组织中mRNA表达及其基因变化的分析

转化生长因子α，β（ＴＧＦ－α，β）分别作为正负自分泌生长调控因子，其在结、直肠癌的发生和发展过程中具有重要作用。本研究采用Ｄｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等分子生物学方法，探讨了１２例人结、直肠癌组织、癌旁及正常肠粘膜组织中ＴＧＦ－α，βｍＲＮＡ表达程度及其基因变化。研究发现，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ的表达由高到低依次为癌、癌旁及正常肠粘膜组织，但癌组织及癌旁肠粘膜组织间无显著差异（Ｐ＞０．０５）。另外，发现１例病人的癌旁组织ＴＧＦ－αｍＲＮＡ的表达明显升高，且高于其相应的癌组织。ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达由高到低的顺序与ＴＧＦ－αｍＲＮＡ相反，为正常肠粘膜组织、癌旁肠粘膜组织和癌组织，前两者间无显著差异（Ｐ＞０．０５），而其与癌组织间均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。其中有２例病人的癌旁组织中，ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达高于其相应的正常组织。研究还发现，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达可能与其基因扩增有关，而引起ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达变化的机制尚不清楚。上述研究结果初步表明：人结、直肠癌组织中ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达的增加和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达的降低，可能通过自分泌和旁分泌生长调控作用同结、直肠癌的发生和进展有密切     

反义周期蛋白B1基因转染HT29细胞后若干细胞增殖调控相关基因表达的变化

用基因重组技术将插入有反义周期蛋白Ｂ１（ｃｙｃｌｉｎＢ１）基因ｐＸＪ４１－ｎｅｏ质粒，转染人结肠腺癌ＨＴ２９，获得了ＨＴＢ１细胞株。ＨＴＢ１细胞显示出ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ明显的表达抑制。为了探讨ＨＴＢ１细胞生长变慢和它的增殖相关基因表达之间的关系，我们用异硫氰酸胍－酚一步法提取ＨＴＢ１和ＨＴ２９细胞的总ＲＮＡ，并用一些有关的基因探针进行杂交实验。其结果表明：ｃ－ｍｙｃ和ＣＤＫ４在ＨＴＢ１中的表达低于在ＨＴ２９中的表达；而另一方面，ｐ５３、Ｒｂ、ＴＧＦβ和ｃｙｃｌｉｎＤ３在ＨＴＢ１细胞中的表达高于对照组。而ｃｄｃ２基因表达二者维持相似水平。根据研究结果我们发现，转染有反义ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的ＨＴＢ１细胞在一组正、负调节基因的协同作用下，导致细胞周期运转的变化。     

PAI—1在TGF—β1基因和反义TGF—β1基因转染人肝癌？…

目的：通过对人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）转染ＴＧＦ－β１基因及反义ＴＧＦ－β１基因,观察该细胞ＰＡＩ－１表达的变化。方法：采用电穿孔法进行基因转染,并用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法另以鉴定后,分别应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ观察该细胞表达ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ的变化。结果：过表达的ＴＧＦ－β１细胞克隆ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达均高于对照组,而低表达ＴＧＦ     

肺巨细胞癌不同转移亚克隆生长因子表达及反应性差异的探讨

目的研究肺巨细胞癌高转移亚系ＰＧｂＥ１和中度转移亚系ＰＧＬＨ７细胞之间部分生长因子的表达及反应性差异。方法利用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测了生长因子ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ｂＦＧＦ和ＡＮＧ及受体ＥＧＦＲ、ＩＬ－６Ｒ和ＩＬ－８Ｒ的表达状况;其次采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察了重组ＴＧＦα、ＴＧＦβ１和ＩＬ－６对此两个细胞生长的影响。结果ＰＧｂＥ１细胞中ＴＧＦα、ＥＧＦＲ、ＩＬ－６和ＩＬ－６Ｒ的表达水平明显高于ＰＧＨ７细胞,而ＴＧＦβ１、ｂＦＧＦ、ＩＬ－８、ＩＬ－８Ｒ和ＡＮＧ的表达在两个细胞间无明显差别;重组ＴＧＦα和ＩＬ－６对两个细胞均具有生长刺激作用;ＴＧＦβ１具有双重效应。结论ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ｂＦＧＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、和ＡＮＧ等生长因子可能以自分泌方式参与肺巨细胞癌的生长增殖调控,而ＴＧＦα和ＩＬ－６在肺巨细胞癌的转移中发挥更为重要的作用。     

转化生长因子β1 mRNA在实验性肝癌间质差异形成中的 …

目的：应用原位分子杂交技术观察了ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ在实验性大鼠胆管细胞性肝癌（ＣＣ）和肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中的表达,探讨肝癌间质差异形成的可能机制。方法：大鼠肝癌组织经ＨＥ和Ａｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ染色确认ＣＣ或ＨＣＣ,用ＴＧＦ－β１反应ＲＮＡ探针检测ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达,同时以ＴＧＦ－β１正链,β－ｍＲＮＡ呈弱到中等强度的表达,少数ＣＣ的间质细胞也有ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达。结论：由于Ｔ     

重组人转化生长因子－β1对造血细胞基因表达的影响

用ＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交法测定ｒｈ－ＴＧＦ－β对１１例血液病患者骨髓有核细胞的部分癌基因和细胞因子基因ｍＲＮＡ表达的影响。结果呈明显的个体差异。用ＡＢＣ免疫酶标法测定ｒｈ－ＴＧＦ－β对１０例脐带血白细胞和２２例血液病患者骨髓有核细胞ＨＬＡ－Ⅱ类抗原表达的影响。结果表明：ｒｈ－ＴＧＦ－β对ＨＬＡ－ＤＱ抗原表达可有下调作用。     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β2对LAK,CD3AK细胞的免疫抑 …

目的 探讨淫羊藿甙逆转转化生长因子β２（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ β２ＴＧＦβ２）对ＬＡＫ、ＣＤ３ＡＫ细胞的免疫抑制作用及其机制。方法 采用ＭＴＴ法,ＲＴ－ＰＣＲ和流式细胞术。结果 淫羊藿降转受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ和ＣＤ３ＡＫ细胞的杀伤活性,并能部分恢复受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２Ｒα表达和ＣＤ３ＡＫ细胞内穿孔素ｍＲＮＡ水平,以及ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性。     

反义周期蛋白B1基因抑制HT29细胞的增殖

用ＤＮＡ重组技术将人类ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的全长ｃＤＮＡ，反向插入到真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ的ＢａｍＨ１位点，得到ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的反义ＲＮＡ表达载体ｐＡＳ－Ｂ１。利用ＤＮＡ磷酸钙共沉淀方法，将ｐＡＳ－Ｂ１转染进ＨＴ２９细胞。在含有Ｇ４１８的培养基中，挑选出独立的细胞克隆。利用ｃｙｃｌｉｎＢ１ｃＤＮＡ作探针，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定出一株内源性ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ受到抑制的细胞株ＨＴＢ１。比较ＨＴＢ１与对照细胞ＨＴ２９发现，ｃｙｃｌｉｎＢ１的反义ＲＮＡ明显抑制ＨＴ２９细胞的增殖，细胞内３Ｈ－ＴｄＲ参入量减少。流式细胞光度术分析，处于Ｇ１期细胞比率的升高与Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞数量的下降都十分显著。     

转化生长因子β受体研究进展

转化生长因子β（ＴＧＦ－β）是一种多功能的细胞因子，其信号结构独特，为丝氨酸／苏氨酸激酶。Ⅱ型受体被ＴＧＦ－β激活后进一步导致Ⅰ型受体的活化，ＴＧＦ－β的信号由Ⅱ型受体和Ⅰ型受体的受体复合物转导至细胞内，以上二者合称信号受体。Ⅲ型受体的大分子蛋白多聚糖本身不参与ＴＧＦ－β的信号转导，却能间接调节ＴＧＦ－β的作用。有关肿瘤和ＴＧＦ－β受体的研究表明细胞表面ＴＧＦ－β受体的丢失与肿瘤发生相关，转染正常的信号受体基因在体外可抑制肿瘤细胞的增殖。在其他相关的疾病中，ＴＧＦ－β作用机制以及各型受体对ＴＧＦ－β作用调节机制的研究正在进行中。     

转化生长因子α,β1对大鼠肺泡Ⅱ型细胞生长的影响

目的 探讨转化生长因子α和β１对肺泡Ⅱ型细胞增生的影响及其作用机制。方法 采用原代培养的成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞,加入ＴＧＦα、ＴＧＦβ１作用４８小时,测定肺泡Ⅱ型细＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量和细胞数量,并用斑点杂交、原位杂交和免疫组化方法检测细胞内细胞周期蛋白Ｄ１、细胞周期依赖性激酶４ ｍＲＮＡ和蛋白的表达。结果 随ＴＧＦα浓度递增,肺泡Ⅱ型细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量和细胞数量均逐渐增加,呈量效正相关;ＴＧ     

低氧对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1表达的影响

应用核酸原位杂交及增强化学发光免疫斑点法,观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条 件培养液（ＮＥＣＣＭ和 ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_１（ＴＧＦβ_１） ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果表 明：Ｈ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ表达为Ｎ组的１．３６倍（Ｐ＜０．０１）,同时在其培养上清液中,ＴＧＦβ_１蛋白含量也明显升高为Ｎ 组的１．８倍。ＨＥＣＣＭ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ和蛋白表达较ＮＥＣＣＭ组均下降,ｍＲＮＡ为ＮＥＣＣＭ组的９０％,Ｐ＜０．０１。蛋 白含量为后者的６２．２％。提示：（１）低氧促进入胚肺成纤维细胞合成和分泌ＴＧＦβ_１。（２）在低氧条件下,肺动脉内皮 细胞可能合成某种因子,抑制成纤维细胞ＴＧＦβ_１基因转录和蛋白表达。     

实验性肺纤维化大鼠肺组织整合素α5β1和转化生长因子-β的表达

目的　研究纤维连接蛋白受体整合素α５β１ 在大鼠肺纤维化中的作用。方法　用免疫组化方法观察实验性大鼠肺纤维化纤维连接蛋白（ＦＮ） 及其受体整合素α５β１ 和转化生长因子β（ＴＧＦβ）表达的动态变化;用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交和免疫细胞化学方法观察ＴＧＦβ对体外培养的大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果　（１）实验组１～３ 天,病灶内上皮细胞和内皮细胞整合素α５β１ 表达明显增强,炎细胞及增生的间质细胞亦呈阳性反应。以后,整合素α５β１ 阳性反应主要见于明显增生的间质细胞,并与ＴＧＦβ阳性分布相似。ＦＮ的变化与整合素α５β１ 的变化同步。（２）ＴＧＦβ作用后,大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ 及其蛋白表达增强（α５、β１ ｍＲＮＡ 杂交条带的积分光密度值,依次分别是对照的６．６ 、４．４ 倍;α５β１ 蛋白染色积分光密度值为对照的３．６ 倍） 。结论　整合素α５β１在肺间质细胞活化、增殖、分化及细胞外基质合成中起了极其重要作用。     

人肺癌细胞中生长因子的自泌循环和癌基因表达

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ核酸杂交技术对４个人肺癌细胞系进行了表皮生长因子（ＥＧＦ）、转化生长因子α（ＴＧＦα）以及表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的基因表达研究，发现这些肺癌细胞系中均有ＥＧＦ和ＴＧＦ＿α的基因表达，３／４中亦有ＥＧＦＲ的基因表达。这些癌细胞系中自泌的生长因子作用于自身的ＥＧＦ受体形成的自泌循环，不断刺激其自身的增殖，这可能是癌细胞无休止生长的主要原因之一。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ核酸杂交结果还表明：在这４个肺癌细胞系中，无ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的细胞系中有大量的ＥＧＦ和ＴＧＦα的基因表达。用ＥＧＬ抗ＥＧＦ和抗ＥＧＦＲ抗体处理这些人肺癌细胞系，抗ＥＧＦ和抗ＥＧＦＲ抗体在一定程度上可抑制其增殖，这也说明这些癌细胞中生长因子自泌环路的存在。     

成年大鼠星形细胞经LPS、前炎症因子和免疫调节因子刺激后β-趋化因子的分泌

目的研究在中枢神经系统（ＣＮＳ）的炎症性疾病中,作为构成血脑屏障结构的组成部分之一,可引起白细胞浸润的星形细胞分泌趋化因子的影响因素。方法通过星形细胞体外培养,经不同细胞因子刺激,用原位杂交检测成年大鼠星形细胞β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。结果ＩＦＮ－γ可引起ＭＣＰ－１,ＲＡＮＴＥＳ,ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＴＮＦ－α可引起ＲＡＮＴＥＳ和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＬＰＳ可引起ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０下调由ＬＰＳ引起的ＭＣＰ－１和ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＴＮＦ－α引起的ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－１０还可下调由ＴＮＦ－α引起的ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。结论成年大鼠体外试验中的星形细胞可由ＬＰＳ和前炎症因子刺激,产生β－家系趋化因子ｍＲＮＡ的表达。而调节因子如ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＬＰＳ引起的β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。     

TGF—β上调在Wistar大鼠抑制EAMG发生中的重要作用

用ＡＣｈＲ加ＣＦＡ免疫大鼠后，Ｌｅｗｉｓ大鼠出现典型的临床肌无力，而ＷｉｓｔａｒＦｕｒｔｈ（Ｗ．Ｆ）大鼠不出现任何症状。为阐明Ｗ．Ｆ大鼠对ＡＣｈＲ耐受的机制，检测了表达ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ的ＭＮＣ和肌肉ＡＣｈＲ。结果表明，Ｗ．Ｆ大鼠免疫后第５、７周ＰＩＬＮ中ＡＣｈＲ诱导的ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达细胞数比Ｌｅｗｉｓ大鼠低，ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达细胞数比Ｌｅｗｉｓ大鼠高，肌肉ＡＣｈＲ含量比Ｌｅｗｉｓ大鼠高。提示ＩＦＮ－γ和ＴＧＦ－β与ＥＡＭＧ的发生有关，ＴＧＦ－β上调可抑制ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达，减少肌肉ＡＣｈＲ丢失，进而预防和抑制ＥＡＭＧ发生     

17-β-雌二醇对大鼠垂本前叶细胞转化生长因子基因表达的影响

实验采用无血清原代培养大鼠垂体前叶细胞及原位杂交方法，观察了不同剂量（１０１０、１０８和１０６ｍｏｌ／Ｌ）的１７β雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）对大鼠垂体前叶细胞转化生长因子α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒα，ＴＧＦα）和转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）基因表达的影响。结果表明：１０１０ｍｏｌ／ＬＥ２作用２４ｈ后，对两种生长因子的表达均无显著影响；而１０８ｍｏｌ／Ｌ和１０６ｍｏｌ／ＬＥ２则显著升高ＴＧＦαｍＲＮＡ，分别为对照组的１５倍和１６倍（ｐ＜０００１）；同时明显降低ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ，使ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ水平分别降低为对照组的７０％和５５％（ｐ＜０００１）。说明一定浓度的Ｅ２对正常大鼠垂体前叶细胞ＴＧＦα和ＴＧＦβ１基因表达有明显影响，提示这两种生长因子可能以自分泌／旁分泌机制，参与Ｅ２对垂体前叶细胞功能的部分作用     

转化生长因子β对肠上皮的生长调节

转化生长因子β（ＴＧＦ－β）是一种多功能调节肽，对肠上皮细胞的增殖、发育、转化和分化都有一定的调节作用。ＴＧＦ－β抗增殖的一个重要机制是能抵抗其它肽类生长因子的促有丝分裂作用。它通过提高α２－整合素和癌胚抗原的表达、将细胞进程阻止在Ｇ１期诱导分化开始，而促进肠上皮分化。ＴＧＦ－β与细胞外基质有密切关系。结肠细胞失去对ＴＧＦ－β的反应有助于结肠癌的发生。     

生长因子对培养的肺泡Ⅱ型细胞分泌功能及形态的影响

目的：探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）、转化生长因子α和β１（ＴＧＦα，ＴＧＦβ１） 对肺泡Ⅱ型细胞（ＡＴⅡ） 磷脂分泌功能及细胞形态（ 肥大） 的影响。方法：原代培养的成年大鼠ＡＴⅡ中，加入生长因子作用４８ ｈ，应用化学测定法测定培养介质中总磷脂含量，采用图像分析技术测量细胞体积参数。结果：ＥＧＦ、ＴＧＦα均可使总磷脂含量增加，而ＴＧＦβ１ 则使总磷脂含量降低；随ＥＧＦ、ＴＧＦα浓度增加，ＡＴⅡ平均直径（ＤＱ） 、体积（ＶＱ） 和表面积（ＳＱ） 均逐渐增大，ＴＧＦβ１ 对细胞体积变化无明显影响；ＴＧＦα和ＴＧＦβ１ 同时加入培养体系中，总磷脂含量及细胞体积均无明显改变。结论：ＥＧＦ、ＴＧＦα能促进ＡＴⅡ磷脂分泌和细胞肥大；ＴＧＦβ１ 对ＴＧＦα的作用有抑制效应。