应用分子标记对Duchenne型肌营养不良胎儿的产前基因诊断

目的:对未知遗传类型的Duchenne肌营养不良(DMD)家系早期妊娠风险胎儿进行产前基因诊断,确定能否接续妊娠,并探讨检测技术。方法:通过TRIzol方法从孕妇羊水中提取胎儿DNA,用Promega提血试剂盒提取家系其他成员外周血中的DNA。选取Xp21.1区附近的6对荧光引物对12个样本DNA进行PCR扩增和多态性连锁分析,以确定风险X染色体;通过DMD50和SRY2对引物的多重PCR扩增确定胎儿性别。连锁分析与性别鉴定相结合对胎儿进行产前诊断。结果:发现该胎儿为1正常女胎,未携带风险X染色体,且胎儿产后复查结果与产前检测一致。结论:这种方法提示对缺失或/和非缺失型DMD风险胎儿的检测可一步完成,而且扩大了基因的检测范围,诊断结果更为准确可靠。     

6个假肥大型肌营养不良家系的产前诊断

目的对6个假肥大型肌营养不良家系进行基因型分析，并为其家庭提供产前分子诊断评估再生育风险。方法联合多重连接依赖性探针扩增（MLPA）检测和单体型连锁分析分别对6个家系行杜氏进行性肌营养不良（DMD）的DMD基因诊断。所有产前诊断标本均通过STR位点检测排除母血污染。结果MLPA检测结果显示，6例先证者中DMD基因缺失型5例，重复型1例；2例先证者母亲未携带DMD基因变异，其中1例疑似生殖腺嵌合；产前诊断患胎3例，携带者1例，正常女胎2例。单体型连锁分析结果显示1例与MLPA检测结果不一致，1例发生基因内重组，其余4例均一致。结论MLPA技术联合单体型连锁分析可快速准确检出胎儿DMD基因型，疑似新发突变家系再生育时孕妇仍有产前诊断必要性。     

Duchenne型肌营养不良症患者32例基因缺失分析及产前诊断

目的:探讨Duchenne型肌营养不良症(DMD)基因缺失突变的类型,建立基因诊断技术平台.方法:应用寡核苷酸引物扩增DMD基因18个外显子区域,对27例家系32例DMD患者进行基因缺失分析,用4对二核苷酸重复序列多态引物对DMD家系进行扩增片段长度多态性连锁分析.并对10例先证者有DMD基因缺失的家系进行产前诊断.结果:27例DMD家系中19例(70.4%)有至少1个外显子缺失,且缺失热点区域集中在外显子12、13、45、47、48、49和50,所有携带者至少有1个或1个以上多态性位点为杂合态,缺失诊断结合多态分析进行诊断,10例男性胎儿中2例具有外显子缺失.结论:基因缺失诊断结合连锁分析可快速、准确地进行DMD的产前诊断.     

6例非缺失型Duchenne型肌营养不良家系产前基因诊断

目的 :建立非缺失型Duchenne型肌营养不良家系产前基因诊断平台。方法 :用Duchenne基因非编码区(CA)n重复序列结合染色体核型分析 ,对 6个非缺失型DMD家系进行产前基因诊断。结果 :在非缺失型的家系产前诊断中 ,发现获得风险X染色体的男胎 3例 ,女胎 1例 ,余 1例女胎和 1例男胎均未携带风险X染色体。检测结果的可靠性经出生婴儿DNA分析及临床症状检测得到部分证实。结论 :胎儿性别鉴定结合基因连锁分析的方法 ,在规范的检测程序和有效的质量控制下 ,能准确地对非缺失型DMD进行产前遗传学诊断 ,是目前预防患儿出生有效的实验室检测方法。     

非缺失型Duchenne型肌营养不良症家系16例产前诊断

目的:探讨使用Duchenne型肌营养不良症(DMD)基因区域多态性位点在非缺失型DMD家系产前诊断的价值.方法:用DMD基因非编码区4个(CA)n重复序列多态性结合染色体核型分析,对16例非缺失型DMD家系进行产前诊断.结果:产前诊断发现4例男胎、2例女胎获得风险X染色体,余1例女胎和9例男胎均未携带风险X染色体.且检测结果的可靠性经出生婴儿DNA分析及临床症状检测得到证实.结论:胎儿性别鉴定结合基因连锁分析的方法,在规范的检测程序和有效的质量控制下,能准确地对非缺失型DMD进行产前遗传学诊断,可有效预防患儿出生.     

散发型DMD/BMD家系突变分析及产前诊断研究

目的 分析散发型DMD/BMD家系中患者的致病突变,为部分家系的胎儿进行产前基因诊断,明确该类家庭中女性成员是否致病突变携带者,分析该类家系新发突变的比例.方法 共收集30个散发DMD/BMD家系,应用传统mPCR方法 分析DMD基因缺失热区中的18个外显子;应用MLPA方法,对家系中的30例患者及23个家系中的28位女性成员,进行DMD基因全部79个外显子的定量分析,并为其中19个家系进行20例产前诊断.结果 mPCR检测到19例缺失突变;MLPA检测到21例缺失突变和3例重复突变,并明确缺失突变范围.在检测到突变的家系中,10例母亲为缺失突变携带者,2例为重复突变携带者,9例母亲不是携带者,新发突变比例为37.5%.7例患者的姐妹中5例为携带者(3例缺失,2例莺复),2例不是携带者.经产前诊断,12例男性胎儿中5例为患者,8例女性胎儿中2例为携带者.结论 MLPA方法 可全面检测DMD基因缺失及重复突变、明确女性携带者,为产前诊断提供准确信息.     

散发型DMD/BMD家系突变分析及产前诊断研究

目的 分析散发型DMD/BMD家系中患者的致病突变,为部分家系的胎儿进行产前基因诊断,明确该类家庭中女性成员是否致病突变携带者,分析该类家系新发突变的比例.方法 共收集30个散发DMD/BMD家系,应用传统mPCR方法 分析DMD基因缺失热区中的18个外显子;应用MLPA方法,对家系中的30例患者及23个家系中的28位女性成员,进行DMD基因全部79个外显子的定量分析,并为其中19个家系进行20例产前诊断.结果 mPCR检测到19例缺失突变;MLPA检测到21例缺失突变和3例重复突变,并明确缺失突变范围.在检测到突变的家系中,10例母亲为缺失突变携带者,2例为重复突变携带者,9例母亲不是携带者,新发突变比例为37.5%.7例患者的姐妹中5例为携带者(3例缺失,2例莺复),2例不是携带者.经产前诊断,12例男性胎儿中5例为患者,8例女性胎儿中2例为携带者.结论 MLPA方法 可全面检测DMD基因缺失及重复突变、明确女性携带者,为产前诊断提供准确信息.     

散发型DMD/BMD家系突变分析及产前诊断研究

目的 分析散发型DMD/BMD家系中患者的致病突变,为部分家系的胎儿进行产前基因诊断,明确该类家庭中女性成员是否致病突变携带者,分析该类家系新发突变的比例.方法 共收集30个散发DMD/BMD家系,应用传统mPCR方法 分析DMD基因缺失热区中的18个外显子;应用MLPA方法,对家系中的30例患者及23个家系中的28位女性成员,进行DMD基因全部79个外显子的定量分析,并为其中19个家系进行20例产前诊断.结果 mPCR检测到19例缺失突变;MLPA检测到21例缺失突变和3例重复突变,并明确缺失突变范围.在检测到突变的家系中,10例母亲为缺失突变携带者,2例为重复突变携带者,9例母亲不是携带者,新发突变比例为37.5%.7例患者的姐妹中5例为携带者(3例缺失,2例莺复),2例不是携带者.经产前诊断,12例男性胎儿中5例为患者,8例女性胎儿中2例为携带者.结论 MLPA方法 可全面检测DMD基因缺失及重复突变、明确女性携带者,为产前诊断提供准确信息.     

散发型DMD/BMD家系突变分析及产前诊断研究

目的 分析散发型DMD/BMD家系中患者的致病突变,为部分家系的胎儿进行产前基因诊断,明确该类家庭中女性成员是否致病突变携带者,分析该类家系新发突变的比例.方法 共收集30个散发DMD/BMD家系,应用传统mPCR方法 分析DMD基因缺失热区中的18个外显子;应用MLPA方法,对家系中的30例患者及23个家系中的28位女性成员,进行DMD基因全部79个外显子的定量分析,并为其中19个家系进行20例产前诊断.结果 mPCR检测到19例缺失突变;MLPA检测到21例缺失突变和3例重复突变,并明确缺失突变范围.在检测到突变的家系中,10例母亲为缺失突变携带者,2例为重复突变携带者,9例母亲不是携带者,新发突变比例为37.5%.7例患者的姐妹中5例为携带者(3例缺失,2例莺复),2例不是携带者.经产前诊断,12例男性胎儿中5例为患者,8例女性胎儿中2例为携带者.结论 MLPA方法 可全面检测DMD基因缺失及重复突变、明确女性携带者,为产前诊断提供准确信息.     

散发型DMD/BMD家系突变分析及产前诊断研究

目的 分析散发型DMD/BMD家系中患者的致病突变,为部分家系的胎儿进行产前基因诊断,明确该类家庭中女性成员是否致病突变携带者,分析该类家系新发突变的比例.方法 共收集30个散发DMD/BMD家系,应用传统mPCR方法 分析DMD基因缺失热区中的18个外显子;应用MLPA方法,对家系中的30例患者及23个家系中的28位女性成员,进行DMD基因全部79个外显子的定量分析,并为其中19个家系进行20例产前诊断.结果 mPCR检测到19例缺失突变;MLPA检测到21例缺失突变和3例重复突变,并明确缺失突变范围.在检测到突变的家系中,10例母亲为缺失突变携带者,2例为重复突变携带者,9例母亲不是携带者,新发突变比例为37.5%.7例患者的姐妹中5例为携带者(3例缺失,2例莺复),2例不是携带者.经产前诊断,12例男性胎儿中5例为患者,8例女性胎儿中2例为携带者.结论 MLPA方法 可全面检测DMD基因缺失及重复突变、明确女性携带者,为产前诊断提供准确信息.     

Determination of fetal sex by amplification of Y-chromosome-specific DNA

This paper describes a rapid and highly sensitive method for determination of fetal sex. Y-chromosome-specific sequences as well as Alu-specific sequences were amplified with polymerase chain reaction (PCR). Then fetal sex was determined by comparison of the two amplified DNA sequences. Polymerase chain reaction can be performed on lysed amniotic fluid cells or chorionic villus samples or dried blood spots on filter paper blot without prior DNA extraction. The analysis of the amplified DNA was performed immediately by agarose gel electrophoresis without DNA hybridization with radioactive probe. By using this method, determination of sex was performed on 3 fetuses at risk for DMD, and on 2 fetuses at risk for hemophilia, prenatal detection was confirmed by examination of the neonates.     

胎儿有核红细胞在DMD产前基因诊断中的应用

目的探讨胎儿有核红细胞（FNRBCs）在DMD产前基因诊断中的可行性。方法对6例进行性肌营养不良症携带者孕妇（孕12～18周）抽取外周血进行密度梯度离心，富集胎儿细胞，在显微操作下吸取胎儿有核红细胞。对所富集细胞经提取DNA进行人Y染色体特异DNA扩增，判定胎儿性别。将其应用于DMD产前诊断中，并与用羊水进行产前诊断比较。结果SRY片段经PCR后，3例男性胎儿可见特异性条带，3例女性胎儿未见此电泳条带。母体外周血FNRBCs的DNA产前诊断中，2例为女性正常胎儿，1例为女性携带者，2例为正常男性胎儿，1例为DMD患儿，结果与用羊水进行产前诊断和产后个体性别证实一致。结论密度梯度离心结合显微操作方法分离FNRBCs能用于性别鉴定和遗传病的产前诊断。     

巨细胞病毒宫内感染的初步研究

目的：寻找巨细胞病毒宫内感染产前诊断的途径。方法：应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对２４例妊娠患有巨细胞病毒（ＣＭＶ）活动性感染的产妇，分娩的新生儿脐血抗ＣＭＶ－ＩｇＭ型抗体和羊水及尿液ＣＭＶ－ＤＮＡ进行检测。结果：２４例ＣＭＶ活动性感染孕妇中有１４例发生宫内感染，宫内感染率５８．３％，与对照组比较有高度显著性差异。宫内感染儿羊水ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率７８．６％，显著高于脐血ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率．孕妇尿液排毒状态与宫内感染的发生无明显关系。结论：宜将ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇视为有宫内感染潜在危险的对象；羊水ＰＣＲ－ＣＭＶ检测可望成为产前诊断ＣＭＶ宫内感染的有效手段。     

Using Fluorescence in situ Hybridization to Identify DMD／BMD Deletion Carriers

Objective To identify the deletions in Duchenne/Becker muscular dystrophy (DMD/BALD) by using fluorescence in situ hybridization (FISH) Methods The exon-specific cosmid DNA probes (representing 18 exons) were used to perform one-color FISH on metaphase and interphase preparations. The peripheral blood samples from 9 normal people (4 males and 5 females) and 5 females from independent .deletion DMD/BMD families, as well as 2 amniotic fluid specimens and 2 chorionic villus samples (CVS) from normal pregnant females were analyzed. Results 72%～100% of peripheral blood lymphocyte metaphases or interphases, 60%～70% of amniocyte interphases, and 95～99% of chorionic villus cell interphases showed expected signals. One suspected female was identified as deletion carriers and two were excluded. Conclusion FISH in combination with other available techniques allows efficient screening of DMD/BMD deletion carriers, which also lay the ground work for prenatal diagnosis for potential fetal carriers.     

孕妇血浆胎儿DNA的父源性α地中海贫血产前基因诊断

目的检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性东南亚缺失型α地中海贫血1（SEAα地贫1）基因突变,进行无创伤性产前基因诊断。方法应用荧光聚合酶链反应（PCR）和基因扫描方法分析10例孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变及短串联重复序列（STR）;同时以常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的基因诊断结果作对照。结果10例孕妇血浆胎儿DNA均检测到父源性STR等位基因。有4例检出父源性SEAα地贫1基因突变;6例未检出父源性SEAα地贫1基因突变,与常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的产前基因诊断结果一致。结论应用荧光PCR和基因扫描方法检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变,可排除血红蛋白H病胎儿。     

胎儿遗传病实验诊断标本采集方法的对比分析

目的探讨提高胎儿遗传病产前诊断准确性的不同标本采集方法。方法28例妊娠17—27周孕妇，在超声引导下单人徒手经母腹穿刺，同时取羊水、胎儿脐血行染色体、基因检查。结果羊水、胎儿脐血DNA进行短串联重复序列（STR）单体连锁分析5个位点排除母体细胞污染。羊水和脐血染色体、基因产前诊断结果一致性达100％。结论经母腹穿刺同时取羊水、胎儿脐血行胎儿遗传病产前诊断是减少误诊、漏诊、假阴性、假阳性的有效、可行的重要方法。     

胎心监护联合脐血血气分析及Apgar评分预测羊水粪染新生儿窒息的临床价值

目的：探讨胎心监护联合脐动脉血气分析及Apgar评分对羊水粪染窒息新生儿的预测价值。方法对585例羊水粪染新生儿进行分娩前胎心监护,出生后立即采集脐动脉血进行pH值测定,进行Apgar评分,分析3项指标与脏器损伤的关系,以及三者联合诊断羊水粪染新生儿窒息的灵敏度、特异度及符合率。结果585例羊水粪染新生儿中共确诊窒息49例,占8．4％。随着pH值、Apgar评分的降低出现脏器损伤的新生儿比例升高（P＜0．05）,胎心监护异常组的脏器损伤发生率较正常组明显升高（ P＜0．05）。低Apgar评分（≤7分）联合异常胎心监护、脐动脉血pH值＜7诊断羊水粪染新生儿窒息的敏感性为44．9％,特异性为100．0％,符合率为57．1％;低Apgar评分联合脐动脉血pH值＜7．2、异常胎心监护诊断窒息的敏感性为83．7％,特异性为78．6％,符合率为82．5％。结论胎心监护联合脐动脉血气分析、Apgar评分可有效地预测评价羊水粪染新生儿窒息,为窒息新生儿及时采取正确的治疗措施提供了可靠的依据。     

从剖宫者产羊水和宫颈标本中检出沙眼衣原体的研究

目的;三文通过检查配对母胎标本中的沙眼衣原体（Ｃｒ）,拟探讨Ｃｔ垂直传播的机制。方法：应用细胞培养,聚合酶链反应（ＰＣＲ）检查配对对母胎标本（宫颈、羊水、新生儿睑结膜）中的沙眼衣原体（Ｃｒ）。结果：１０２例剖宫产配对母胎标本中,宫颈、羊水、新生儿睑结膜均为阳性有２４例。宫颈阴性、羊水、新生儿睑结膜阳性共６例。宫颈阳性、羊水、新生儿睑结膜阴性共４例。宫颈、羊水、新生儿睑结膜均为阴笥有６８例。孕妇的Ｃ     

慢性肉芽肿病高危儿产前诊断研究

目的探讨羊水脱落细胞基因分析及宫内胎儿脐血中性粒细胞呼吸爆发试验在慢性肉芽肿病（CGD）高危儿产前诊断中的应用价值。方法对重庆医科大学附属儿童医院基因分析确诊的6例CGD患儿[5例X连锁CGD（X-CGD）,1例常染色体隐性遗传CGD（AR-CGD）]家系中8例高危儿经羊膜腔穿刺抽取羊水,提取羊水脱落细胞RNA和DNA,经PCR扩增、测序分析CYBB或CYBA基因;其中2例高危儿在B超引导下,经皮采集胎儿脐血,采用流式细胞术检测中性粒细胞呼吸爆发功能,对上述基因进行分析。结果羊水脱落细胞CYBB、CYBA基因分析结果显示：在5例X-CGD患儿家系的7例高危儿中,1例为正常女性胎儿,2例女性胎儿突变基因携带情况不明确,1例为正常男性胎儿,2例为X-CGD男性胎儿,1例为可疑X-CGD男性胎儿;1例AR-CGD患儿家系中的高危儿为可疑AR-CGD女性胎儿。上述2例可疑CGD胎儿脐血中性粒细胞呼吸爆发功能均异常低下,脐血基因分析验证1例为X-CGD男性胎儿,1例为AR．CGD女性胎儿。4例正常胎儿顺利出生,4例CGD胎儿行人工流产术。结论羊水脱落细胞基因分析与宫内胎儿脐血中性粒细胞呼吸爆发试验相结合,可为CGD高危儿提供可靠的产前诊断。