顺铂对食管癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 研究顺铂对食管癌细胞周期和端粒酶活性的影响，为其临床应用提供理论依据。方法 用2μg/ml顺铂处理食管癌EC9706细胞，流式细胞仪分析细胞周期的改变，TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变。结果 顺铂可使食管癌细胞阻滞于S期，诱导细胞凋亡；同时降低食管癌端粒酶活性。结论 顺铂对食管癌有治疗作用，端粒酶活性可作为观察食管癌化疗疗效的一个指标。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白和细胞凋亡对细胞端粒酶活性的影响

丙型肝炎病毒(HCV)核心区编码的HCV-C蛋白维持病毒外形，还有较强的免疫调节功能，是细胞免疫的主要识别位点，在HCV致病过程中起着重要作用。端粒酶活性上调被认为是肿瘤发生的一种机制，HCV引发肝细胞癌(HCC)是否与上调肝细胞端粒酶活性有关?本实验拟对上述问题进行初步探讨，以部分阐明HCV导致HCC发生的机制。     

西咪替丁对人结肠癌细胞生长及凋亡的影响

目的探讨西咪替丁对体外培养的人结肠癌细胞株LoVo的抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法采用MTT比色法、流式细胞术、形态学观察和TUNEL法检测不同浓度的西咪替丁溶液处理LoVo细胞后的生长状况、形态学、分子生物学改变.结果西咪替丁可抑制LoVo细胞的增殖,且有剂量依赖性的趋势;1×10-2M西咪替丁处理LoVo细胞48h后,在光镜、电镜检测中,可见典型的凋亡细胞;流式细胞术检测凋亡率为32.7%,bcl-2相关蛋白表达率为36.74%;TUNEL法进一步从分子生物学角度证实凋亡的发生.结论西咪替丁对结肠癌细胞LoVo有抑制作用,主要机制为诱导其发生凋亡,凋亡发生的原因与西咪替丁可下调bcl-2蛋白的表达有关.     

健脾理气药诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的研究

目的观察健脾理气药的诱导凋亡效应,为其临床应用进一步提供依据.方法采用血清药理学方法研究中药的体外效应.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测含中药兔血清对肝癌细胞的抑制效应,以Annexin V标记法、DNA含量测定、电子显微镜方法检测含中药血清诱导凋亡及细胞周期阻滞效应.免疫组化法观察含中药血清对P53,P21WAF1/CIP1蛋白的影响,RT-PCR法观察含中药血清对P21WAF1/CIP1 mRNA表达水平的影响.结果含中药血清有一定的抑制肝癌细胞作用,其作用3 d的抑制率为6.6%,作用6 d的抑制率为36.2%.含中药血清作用2 d诱导9.8%±4.0%的肝癌细胞凋亡,使细胞周期阻滞于S期,并上调P53蛋白、P21WAF1/CIP1 mRNA及蛋白的表达.结论健脾理气药具一定的诱导凋亡及抑制肝癌细胞效应,上调p53,p21WAF1/CIP1基因的表达为分子机制.     

富马毒素B1诱导的小鼠肝细胞凋亡及端粒酶活性改变

目的了解富马毒素B1(FB1)诱导小鼠肝细胞凋亡与端粒酶活性改变之间的关系。方法给实验BALB／c小鼠喂饲含1mg／mlFB1饮用水，分别在不同时问取小鼠肝组织，用TUNEL方法观察小鼠肝细胞凋亡发生情况，同时用RT-PCR-ELISA法检测肝细胞端粒酶活性。结果在摄入FB1时间不同的各个实验组小鼠肝组织中均检测到端粒酶活性并观察到肝细胞凋亡明显增加。端粒酶活性随摄入FB1时间增长而明显升高；但肝细胞凋亡与端粒酶活性变化有时相差异，表现为凋亡细胞指数先明显升高，然后逐渐减少的特点。结论FB1诱导小鼠肝细胞凋亡和其致癌作用是同时存在的，但表现为初期以细胞凋亡为主要损害形式，远期则趋向细胞癌性变的酶学改变。     

亚砷酸诱导肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨亚砷酸(As2O3)对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法应用细胞计数、FITC-TUNEL染色后荧光摄象及流式细胞仪技术探讨亚砷酸对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.结果亚砷酸能明显抑制肝癌HepG-2细胞的生长,5μmol/LAs2O3组抑制程度明显大干1μmol/L As2O3组(P＜0.01),二者与不加药阴性对照组相比均有显著性差异(P＜0.01),亚砷酸对肝癌细胞的生长抑制具有时间依赖性,5μmol/L As2O3组已表现出细胞毒作用;1μmol/L As2O3组作用d 3开始出现凋亡细胞,FITC-TUNEL染色后荧光摄象可见典型的凋亡细胞.流式细胞仪可观察到凋亡细胞具有时间依赖性.结论亚砷酸能够抑制肝癌HepG-2细胞的增殖,且能诱导肝癌细胞的凋亡,具有治疗肝癌的潜在价值.     

健脾散结方对Lewis肺癌小鼠细胞相关凋亡蛋白及端粒酶活性的影响

目的观察健脾散结方对Lewis肺癌小鼠细胞相关凋亡蛋白及端粒酶活性的影响。方法选用C57BL/6小鼠接种Lewis肺癌细胞建立动物模型,按实验分组分别干预21 d,观察肿瘤生长情况,采用SABC免疫组化法检测Survivin、c-myc表达,PCR-ELISA法检测端粒酶活性。结果健脾散结方组、顺铂组、联合组的抑瘤率分别为42.36%、57.38%、69.71%;与模型组比较,各药组均可降低Survivin与c-myc表达(P0.05或P0.01),且联合组最明显,健脾散结方与顺铂有协同作用;各药组端粒酶活性均低于模型组(P0.05),且健脾散结方组、顺铂组与联合组比较均有显著差异(P0.05)。结论健脾散结方抑制肿瘤作用可能与下调Survivin、c-myc表达,诱导细胞凋亡,抑制端粒酶活性有关。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞影响的研究

细胞凋亡(Apoptosis)是由基因控制的细胞主动死亡方式.应用药物选择性诱导肿瘤细胞凋亡能改善肿瘤的预后[1].染色体端粒(Telomere)是位于细胞染色体末端的一种特殊结构,在人体细胞中,端粒由串联的短片段重复序列(TTAGGG)n及一些结合蛋白组成,在染色体的定位、复制、保护和控制细胞生长寿命等方面起重要作用,并与细胞凋亡密切相关[2].端粒酶 (Telomerase)是一种核糖核蛋白,它通过不断合成端粒重复序列添加至染色体末端,维持染色体稳定.Bcl-2(B-cell lymphoma/leukemia-2)基因是一种癌基因,可抑制多种因素引起的细胞凋亡,Bcl-2蛋白高表达是端粒酶激活的途径之一[3].我们旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASDDN-t)诱导肝癌细胞凋亡[4],抑制端粒酶活性,从而抑制肝癌细胞的生长,为肝癌基因治疗提供依据.     

肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨肺癌平治疗肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法孵育A549人肺癌细胞，通过电镜、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测肺癌平药物血清作用后对细胞凋亡及相关基因bcl-2、p53表达的影响。结果肺癌平药物血清作用后电镜下可见凋亡小体形成，流式细胞仪检测可见亚二倍体核型峰的特征，免疫细胞化学法显示抑癌基因p53主要定位在细胞核，部分细胞浆也有淡染。癌基因bcl-2主要表现为胞浆着色，流式细胞仪分析药物血清作用后，p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，两种基因表达明显增强。结论肺癌平治疗肺癌的作用机制是通过诱导肺癌细胞凋亡及影响相关基因bcl-2、p53表达实现的。     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞株增殖和诱导凋亡作用

目的体外培养人肝癌细胞株HepG-2,BEL-7402,观察测定应用不同浓度三氧化二砷后多种指标的变化,从多个角度探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及其机制.方法应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透射电镜、扫描电镜、流式细胞仪、细胞免疫组化法,分别对不同浓度加药组及对照组HepG-2,BEL-7402细胞的存活,形态学改变,细胞DNA含量的分布以及Bc1-2,Bax蛋白的表达进行了观察和测定.结果0.5,1,2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株细胞的生长增殖.流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减小、核变圆、胞质内出现分化良好的细胞器,0.5,1,2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成.细胞免疫组化法测定Bcl-2,Bax蛋白的表达以及两者之间的比率均有变化.结论三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡.诱导肝癌细胞凋亡与Bd-2,Bax蛋白的表达改变有关.     

化疗药对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响

目的研究常用化疗药物对人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１端粒酶活性的影响．方法利用端粒重复扩增实验（ＴＲＡＰ）结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,测定ＳＭＭＣ７７２１细胞经过几种化疗药物（顺铂、阿霉素、丝裂霉素、５ＦＵ）不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化．结果当各种药物大剂量处理细胞４ｈ后再祛除药物培养２０ｈ后,顺铂对酶的活性完全抑制,丝裂霉素有部分抑制,阿霉素和５ＦＵ无抑制作用;而未经２０ｈ再培养则无作用;小剂量药物处理细胞５ｄ,其结果同大剂量相似．结论顺铂和丝裂霉素对人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞端粒酶活性有抑制作用,可能与药物的作用机制有关．     

羟基磷灰石纳米粒子诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡后bcl-2和bax表达的变化

目的探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在羟基磷灰石（HAP）纳米粒子诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡后表达的变化。方法采用免疫组化法检测bcl-2蛋白和bax蛋白表达。结果不同浓度的HAP纳米粒子处理细胞24、48、72h后bcl-2蛋白的表达降低，bax蛋白的表达升高，与对照组比较均有显著性差异，并且均呈现时间和剂量依赖性。结论。HAP纳米粒子诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡，与凋亡调控基因bax表达增强、bcl-2表达减少有关。     

细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的调控作用

目的研究3种化疗药物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,探讨端粒酶与ERK在肝癌细胞凋亡过程中的调节作用及相互之间的关系. 方法用MTT法、流式细胞术检测法、端粒重复序列扩增法(TRAP法)、生物发光分析法及western blot检测法. 结果 3种化疗药物使肝癌细胞增殖受抑并诱发凋亡(细胞凋亡率分别为21.12%、28.83%、12.30%)的同时,端粒酶活性也有不同程度减低(抑制率分别为0.28%±0.08%,0.25%±0.16%,0.24%±0.11%);处于活化状态的磷酸化ERK1/2蛋白表达水平下降. 结论 ERK通路可能是化疗药物下调端粒酶活性,进而促进细胞凋亡的机制之一.     

RNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 研究shRNA干扰GRP78对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响。方法 将GRP78特异性shRNA质粒载体Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721,采用流式细胞术(FCM)检测转染效率、分析细胞周期分布和凋亡,从蛋白和mRNA水平检测干扰GRP78效果,MTT 法检测干扰GRP78对SMMC-7721增殖的影响。结果Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721细胞48h后,GRP78表达下降,空白对照组GRP78 mRNA的表达量为1,无关shRNA组为0.95,而Pla-anti-GRP78组为0.25(P<0.05);转染Pla-anti-GRP78的SMMC-7721细胞G2期阻滞(55.2%,P<0.05);空白对照组凋亡率为6.6%,无关shRNA组为8.1%,而Pla-anti-GRP78组高达58.2%(P<0.05)。 结论　shRNA干扰GRP78表达抑制SMMC-7721的增殖,并诱导其凋亡。     

牛蒡子苷元对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察牛蒡子苷元（ARG）对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的ARG作用于SMMC-7721细胞,并设不加ARG对照组。MTT法测算细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR法检测细胞中的Bcl-2 mRNA。结果与对照组比较,随ARG浓度增加,SMMC-7721细胞增殖率逐渐降低（P均〈0.05）,G0/G1期细胞比例显著增加（P均〈0.05）,G2、M、S期细胞比例减少（P均〈0.05）;随ARG浓度增加、作用时间延长,SMMC-7721细胞凋亡率显著增加（P均〈0.05）,Bcl-2 mRNA表达量减少（P均〈0.05）。结论 ARG可明显抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡;可能与ARG下调细胞中Bcl-2基因的表达有关。     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性和诱导细胞凋亡

目的 研究端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）对肺癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 实验分为ASODN组、正义寡核苷酸（SODN）组和空白对照组,所用ASODN和SODN的浓度分别为10μmol/L,脂质体为16mg/L,采用端粒重复扩增法、逆转录－聚合酶链反应、Western Blot及流式细胞术分别观察各组端粒酶活性、hTERP mRNA和蛋白质表达以及细胞凋亡。结果 ASODN组显著下调或抑制肺癌细胞端粒酶活性和hTERT表达,但直到第21天才出现细胞凋亡增多。结论 端粒酶活性与hTERT表达密切相关。     

羟基磷灰石纳米粒子诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的观察不同浓度的羟基磷灰石纳米粒子对肝癌SMMC-7721细胞作用的影响。方法将羟基磷灰石纳米粒子以不同浓度和时间作用于肝癌SMMC-7721细胞，采用MTT比色法观察细胞毒性；应用电镜技术及HE染色法观察凋亡细胞的形态；原位末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋产率。结果羟基磷灰石纳米粒子以剂量依赖和时间依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的生长，作用48h后的半数有效抑制浓度IC50值为179．8μg／ml。HE染色和透射电镜观察到凋亡特性的形态学改变。结论HAP抑制SMMC-7721细胞的增殖，诱导细胞凋亡，HAP也许会成为临床治疗肝癌自可有效抗肿瘤药物。