糖尿病大鼠病程早期视网膜蛋白激酶C对NO通路的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)和一氧化氮合酶(NOS)在糖尿病早期视网膜功能改变中的作用,观察早期糖尿病大鼠视网膜内PKC对NOS表达及NO含量的影响。方法2周糖尿病大鼠玻璃体腔注射PKC抑制剂后用ELISA法测定PKC活性,用半定量RT-PCR法测定NOS mRNA表达量,间接法测定NO含量。结果糖尿病模型建立2周后视网膜内PKC活性、nNOSmRNA及NO含量均明显高于正常组(P<0·01),i NOS mRNA稍高但差异无统计学意义(P>0·05)。注射PKC抑制剂后12h、24h时nNOS mRNA含量明显降低(P<0·05),24h时NO含量亦降低P<0·01。结论PKC抑制剂可降低糖尿病早期视网膜nNOS的异常高表达。PKC影响nNOS表达可能是视网膜神经细胞功能紊乱和血管通透性增高的机制之一。     

黄芪甲苷诱导NO生成并激活PKCε对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究黄芪甲苷(AsⅣ)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,阐明其作用机制。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、再灌注模型组、阳性药尼可地尔(10mg.kg-1)组、AsⅣ(5mg.kg-1)组及AsⅣ+氯化白屈莱赤碱(CHE)(3mg.kg-1)组,每组6只,结扎左冠状动脉前降支30min,松扎再灌注120min制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,检测AsⅣ对其血清中LDH、MDA和SOD以及NO的影响,同时光镜下观察心肌细胞病理组织形态学变化,Western blotting法检测心肌细胞胞浆及胞膜PKCε蛋白表达。结果:AsⅣ组与模型组比较,LDH漏出量降低(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.01),SOD活力增强(P<0.01),NO含量增加(P<0.01)。HE染色组织形态学观察,与模型组比较,AsⅣ组心肌细胞形态有明显的改善,炎细胞浸润也有减轻。Western blotting法检测,AsⅣ组心肌细胞胞膜PKCε表达量高于模型组(P<0.05)。CHE减弱了ASⅣ的这种保护作用;与AsⅣ组比较,AsⅣ+CHE组LDH漏出量升高(P<0.05),MDA含量升高(P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),PKCε胞膜表达量降低(P<0.05),心肌细胞水肿明显、胞质着色较浅。结论:AsⅣ通过诱导NO的生成对大鼠心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,PKCε的激活可能是AsⅣ保护心肌细胞信号传导通路的组成部分。     

热休克蛋白 90调节内皮一氧化氮合酶 (一个新近认识的心血管疾病调节物 )

阐述热休克蛋白 90( hsp90)作为一个心血管疾病新的调节物,在调节内皮一氧化氮合酶( eNOS)功能方面的作用:血管内皮一氧化氮( NO)主要来源于 eNOS; eNOS同时有产生 NO和氧阴离子自由基(O2)的功能. NO与(O2)的平衡在调节心血管方面有着重要的作用,当这个平衡被打破时可导致多种心血管疾病的发生发展;实验发现,当 hsp90与 eNOS结合增加时, eNOS耦联产生 NO,当 hsp90与 eNOS结合减少或结合后无发生结构改变时 eNOS非耦联产生(O2) .进而提出深入探讨 hsp90调节 eNOS机制的必要性.     

Trichloroethylene改变融合期内皮细胞一氧化氮和氧自由基的平衡

[目的] Trichloroethylene (TRI) 是一种与先天性心脏病发生有关的环境污染物,我们最近报道在分裂期的内皮细胞( EC)中, TRI可以通过减少热休克蛋白 90( hsp90)与内皮一氧化氮合酶( eNOS)结合,从而抑制刺激状态下一氧化氮( NO)产生和增加刺激状态下 eNOS依赖的超氧阴离子自由基(O2)产生和抑制血管内皮生长因子刺激的内皮细胞分裂.但 TRI在融合期 EC中的影响仍未清楚.本实验目的是探讨 TRI对融合期 EC的影响.[方法] TRI 5 μ mol/L 预处理融合期 EC,用钙离子导体 A23187 5 μ mol/L 刺激,然后,检测 NO与(O2)的产生以了解 EC和 eNOS的功能情况.用免疫印迹方法检查 eNOS,位点于丝氨酸 1179的磷酸化 eNOS,与 eNOS结合的 hsp90水平来决定 eNOS的激活状态.[结果] TRI减少 A23187刺激状态下亚硝酸盐和硝酸盐的产生从 (1.16 ± 0.15) nmol· mg- 1到 (0.91 ± 0.3) nmol· mg- 1 (P < 0.05);在对照情况下, L- NAME 增加 A23187 刺激状态下的(O2)产生从 (0.015 ± 0.007) nmol/(min· mg)到 (0.044 ± 0.008) nmol/(min · mg) (P< 0.05);在 TRI处理的培养中, L- NAME 减少 A23187刺激状态下的产生从 (0.057 ± 0.022) nmol/(min · mg)到 (0.039 ± 0.005) nmol/(min · mg) (P< 0.05),并且 oxypurinol减少 A23187刺激状态下的(O2)产生从 (0.057 ± 0.022) nmol/(min · mg)到 (0.034 ± 0.012) nmol/(min · mg) (P< 0.05); TRI 对 eNOS, p- eNOS 和 hsp90的表达无影响,但减少 hsp90与 eNOS的结合.[结论] 这些数据表明,在融合期 EC中, TRI 不但改变 hsp90与 eNOS 结合,使 eNOS 从产生 NO变为产生 (O2),而且激活第二氧化酶-黄嘌呤氧化酶,而增加(O2)产生.这些内皮功能的改变可能导致许多心血管疾病的发生.     

急性心肌梗死不同时期血浆一氧化氮及内皮素变化的临床研究

目的：探讨内皮细胞损伤在急性心肌梗死发病中的作用及与梗塞相关并发症的关系。方法：将71例急性心肌梗死病人分为2组：A组41例，为无梗塞后缺血事件发作及严重并发症；B组30例，为有梗塞后缺血事件发作及严重并发症，并设立对照组15例。梗塞后4-6、24、72h及1周采用放免法测定血浆内皮素（ET），铜离子活化镉还原法测定血清中硝酸盐（NO3^-），采用Swan-Ganz导管测定肺毛细血管楔嵌压（PCWP）。结果：A组血浆ET在发病4-6h迅速升高，24h达高峰，1周恢复正常。而血浆NO于发病24h开始升高，72h达高峰值，1周恢复正常。B组ET在各个时点上均高于A组，在1周后仍高于对照组，B组血浆NO在各个时点上均低于A组，1周后仍低于对照组。且ET与PCWP呈显著正相关关系（r=0.82），而NO与PCWP无显著相关性。结论：急性心肌梗死时动态观察血浆ET、NO的变化，有助于判定梗塞后缺血事件的发生及并发症的出现，且血浆ET的持续升高会加重心功能的损害。     

重组热休克蛋白72对体外培养大鼠肝细胞脂肪变性的影响

目的探讨重组热休克蛋白72（HSP72）对体外50％胎牛血清培养的大鼠肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤的影响。方法sD大鼠肝细胞分4组培养。①对照组：DMEM培养液（不含血清）与多粘菌素B;②实验组1：对照组培养液中加50％胎牛血清;③实验组2：对照组培养液中加50％胎牛血清与重组HSP72;④实验组3：对照组培养液中加重组HSP72。动态检测各组肝细胞内甘油三酯（TG）含量、脂肪变性率及悬液中ALT、AST含量。SPSS11．5软件统计分析实验结果。结果对照组肝细胞内TG含量及悬液中AIJT、AST含量无显著变化（均P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0。实验组1、2肝细胞脂肪变性明显,肝细胞内TG及悬液中ALT、AST含量较对照组均显著升高（均P〈0．01）,且与其它组比较实验组2变化更为显著（P〈0．01）;实验组3肝细胞内TG无明显变化（P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0,但悬液中A¨、AST含量却较对照组有显著升高（均P〈0．01）。结论重组HSP72能导致肝细胞损伤,但不能诱导肝细胞脂肪变性;重组HSP72能加重50％胎牛血清所诱导的肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤。     

急性脑梗死患者血一氧化氮、乳酸和C反应蛋白的浓度变化及其临床意义

目的探讨脑梗死患者急性期血中一氧化氮(NO)、乳酸(LA)与C反应蛋白(CRP)的浓度变化及其临床意义。方法采用可见光分光光度法和速率散射比浊法等测定55例急性脑梗死患者血中NO和LA浓度及CRP的含量,并与40例正常对照者进行比较。结果急性脑梗死患者LA、NO浓度和CRP的含量分别为(85.71±23.34)μmol/L、(1.96±0.95)mmol/L、(10.8±2.11)mg/L,明显高于对照组的(49.26±11.58)μmol/L、(0.89±0.17)mmol/L和(5.65±1.46)mg/L(P<0.05或P<0.01),且三者之间呈明显正相关(r值分别为0.89、0.71和0.78,两两比较P<0.01或P<0.001)。结论NO、LA和CRP均参与急性脑梗死急性期的病理变化过程。     

热休克蛋白70抑制大鼠感染性脑水肿炎症因子的研究

为了探讨热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）对大鼠感染性脑水肿的保护作用,该文采用百日咳菌液所致的大鼠感染性脑水肿模型及将大鼠进行热休克处理,观察脑组织中白细胞介素１－β（ＩＬ－１β）、肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）及一氧化氮（ＮＯ）水平的变化,并应用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析检测大鼠脑组织的ＨＳＰ７０表达。结果发现感染性脑水肿脑组织ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α及ＮＯ浓度均增高,热休克处理可降低以上三者的浓度,Ｗｅ     

PKC和HSP70表达在缺血预处理大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)和热休克蛋白70(HSP70)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用.方法 将大鼠随机分为对照组(CON)、缺血再灌注组(IR)和缺血预处理后缺血再灌注组(IPC).除病理组织学变化外,用免疫组化检测各组中不同灌注时间的PKC和HSP70的变化.结果 病理组织学肾小管评分IPC组均低于IR组(P＜0.05),而IPC组和CON组之间无显著性差异(P＞0.05);PKC的表达IPC组明显高于IR组(P＜0.01),并且在再灌注2 h和6 h时,IPC组中的表达明显高于CON组(P＜0.05);HSP70的表达IPC组明显高于IR组(P＜0.01),并且在再灌注2 h和6 h时,在IPC组中的表达明显高于CON组(P＜0.01).结论 缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤有保护作用,其保护机制可能与PKC的激活以及与HSP70的诱导合成增多有关.     

黄芪甲苷诱导NO生成并激活PKCε对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究黄芪甲苷（AsⅣ）对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,阐明其作用机制。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、再灌注模型组、阳性药尼可地尔(10 mg/kg) 组、AsⅣ (5 mg/kg)组及AsⅣ+氯化白屈莱赤碱(CHE)（3 mg/kg）组,每组6只,结扎左冠状动脉前降支30 min,松扎再灌注120 min 制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,检测AsⅣ对其血清中LDH、MDA和SOD以及NO的影响,同时光镜下观察心肌细胞病理组织形态学变化, Western blotting 法检测心肌细胞胞浆及胞膜PKCε 蛋白表达。结果：AsⅣ组与模型组比较,LDH漏出量降低 (P<0.05), MDA含量明显降低(P<0.01), SOD活力增强(P<0.01), NO含量增加(P<0.01)。HE染色组织形态学观察,与模型组比较,AsⅣ组心肌细胞形态有明显的改善,炎细胞浸润也有减轻。Western blotting 法检测,AsⅣ组心肌细胞胞膜PKCε表达量高于模型组（P<0.05）。CHE减弱了ASⅣ的这种保护作用;与AsⅣ组比较,AsⅣ+CHE组LDH漏出量升高 (P<0.05), MDA含量升高(P<0.01), SOD活力降低(P<0.01),PKCε胞膜表达量降低（P<0.05）,心肌细胞水肿明显、胞质着色较浅。结论：AsⅣ通过诱导NO的生成对大鼠心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,PKCε的激活可能是AsⅣ保护心肌细胞信号传导通路的组成部分。     

缺血预处理对缺血再灌注肝脏中HSP70表达的影响

目的 观察缺血预处理（IPC）对缺血再灌注大鼠肝脏中热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。方法 利用大鼠肝脏缺血再灌注（ischemia reperfusion,I/R)损伤模型,比较不同次数的缺血预处理组与I／R组以及各预处理级璋血清谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）,肝组织中丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量,并观察了肝组织中酶的漏出和脂质过氧化物的形成减少,肝细胞抗氧自由基能力增强,血清及肝组织中NO含量升高。组织中PMNs浸润量降低,HSP70及iNOS蛋白及mRNA表达增多。结论 缺血预处理对肝脏I／R损伤有显著的保护作用。NO参与了缺血预处理对HSP70表达的正性调控过程。一次缺血10min再灌注10min是理想的肝脏缺血预处理方式。     

血府逐瘀胶囊对急性心肌梗死再灌注后心肌及内皮素-1、一氧化氮／一氧化氮合酶体系影响的实验研究

目的：观察血府逐瘀胶囊对急性心肌梗死（acute myocardial infarction．AMI）再灌注后心肌组织及一氧化氮（nitric oxide,NO）／一氧化氮合酶（nitric oxide synthase．NOS）体系和内皮素-1（endothelin-1，ET-1）的影响，探讨其改善血管内皮功能的机制。 方法：Yorkshire猪45只，随机分成假手术组、模型对照组和血府逐瘀胶囊治疗组。开胸结扎左冠状动脉前降支90min后，松解2h制备AMI再灌注模型。测定造模前后和再灌注后血清ET-1和NO的含量；冠状动脉造影观察心肌血流恢复情况；Western blot分析心肌组织内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）和ET—1蛋白表达；病理学分析心肌组织形态变化。 结果：血府逐瘀胶囊组造模后和再灌注后血ET-1水平低于模型组（P〈0．01），而NO表达水平明显高于模型组（P〈0．01）。冠状动脉造影提示治疗组冠状动脉血流通畅情况优于对照组，但结果没有统计学意义（P=0．253）。Western blot显示血府逐瘀胶囊组eNOS蛋白表达较模型组有所提高。ET-1蛋白表达则有所下降（P〈0．01）。HE染色及微血管密度分析显示与模型对照组相比，血府逐瘀胶囊组毛细血管扩张程度明显减轻。心肌组织损伤明显改善，微血管密度明显增加。 结论：内皮细胞受损可能是无再流现象发生的重要机制之一．血府逐瘀胶囊可能通过调控NO和ET-1基因表达来达到对AMI的治疗作用。     

PPAR-γ激动剂促大鼠急性心肌梗死后血管新生与eNOS表达调控

目的 研究PPAR-γ激动剂罗格列酮对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后血管新生及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达调控的影响.方法 健康成年SD大鼠60只,用随机数字表法分为假手术组、对照组、罗格列酮组、罗格列酮+L-NAME(NOS抑制剂)组、L-NAME组,每组12只.结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死动物模型.灌胃给予罗格列酮(3 mg·kg~(-1)·d~(-1))2周,同时腹腔内注射给予L-NAME(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))2周.检测梗死周围缺血区CD31阳性染色血管数;以Western blot及RT-PCR检测缺血区丝氨酸1177磷酸化内皮型一氧化氮合酶(phosphorylized endothelial nitric oxide synthase at Ser1177,p-eNOS Ser~(1177))蛋白及eNOS mRNA的表达.结果 ①与对照组比较,罗格列酮组心肌梗死后CD31阳性染色血管数显著增加(P＜0.05),而NOS抑制剂L-NAME则抑制了罗格列酮的这一作用.②罗格列酮组eNOS mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而p-eNOS Ser~(1177)蛋白水平显著升高(P＜0.05).结论 罗格列酮能促进大鼠急性心肌梗死后血管新生,其机制可能与其促进eNOS的磷酸化,从而介导内皮源性一氧化氮(endothelium-derived nitric oxide,EDNO)合成增加有关.     

MAPK在eNOS基因转染对心肌梗死后心脏保护中的作用

目的:eNOS及NO在心肌梗死后减轻心脏重塑和细胞凋亡方面发挥着重要作用,然而,eNOS的抗炎作用?MAPK在eNOS/NO介导的心脏重塑作用仍不清楚?方法:采用Wistar大鼠,实验分为24 h组和7天组,分别观察eNOS基因转染对心肌梗死后炎症?信号通道蛋白表达?心脏功能和心室重塑的影响?心肌梗死前4天通过心脏表面注射进行局部eNOS基因转染,通过免疫组化和测定NO的产量观察eNOS基因的转染情况;采用颈动脉插管法测定心脏功能;采用Masson染色检测心肌梗死面积;免疫组化检测ED-1表达观察炎症情况?采用Western blot 法检测eNOS基因转染对心肌MAPKs信号通道蛋白表达的影响?结果:研究发现eNOS基因转染后,eNOS表达明显增加,NO生成明显提高,与MI对照组及Ad.Null 组比较[(0.42 ± 0.09)vs(0.18 ± 0.06)or(0.16 ± 0.05)nmol/mg,n=7,P < 0.01]?与MI组及Ad.Null 组比较,eNOS基因转染能明显减少心肌梗死后ED-1的表达?心肌梗死面积[(22.5 ± 2.8%)vs(46.4 ± 2.9 %)or(43.5 ± 3.3%),n=7,P < 0.01],心脏功能明显改善?P38MAPK?JNK表达明显减少?结论:与其他实验组比较,eNOS基因转染后心肌梗死导致的炎症明显减轻?心肌梗死面积明显减少?心脏功能明显改善,eNOS基因对心脏的保护作用可能与抑制P38MAPK?JNK的表达有关?eNOS的这种心脏保护作用可以被L-NAME所阻断?     

Nitric oxide opens second window of protection in ischemic preconditioning via induction of heat-shock protein 72

Objective To examine the inhibition of nitric oxide (NO) synthesis during ischemic preconditioning (IP) upon the induction of heat-shock protein 72 (HSP72) and the size-limiting effect of the second window of protection on infarction. Methods Rabbits were subjected to either 4 cycles of 5-min long coronary artery occlusion separated by 10 min of reperfusion, or a sham operation. During this procedure, we administered 10 mg/kg of N［G］-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME, an inhibitor of NO synthase) intravenously 5 min before IP followed by its continuous infusion (1.5 mg/kg/min). Twenty-four hours after IP or the sham operation, the hearts were rapidly excised for assay of HSP72 expression or were subjected to 30 min of coronary artery occlusion followed by 120 min of reperfusion, at which point infarct size (IS) was measured. Results Twenty-four hours after IP or the sham operation, there was no difference in heart rate or mean arterial pressure between the groups. Immunoblotting revealed an increase in HSP72 protein levels in the IP group, which was blocked by L-NAME. IS in the IP rabbits was reduced compared with controls (29.8±3.7% vs. 50.8±4.3 %, P&lt;0.01). IS in the IP rabbits was elevated as a result of L-NAME treatment (46.0±5.1%). Administration of L-arginine reversed the effects of L-NAME on the induction of HSP72 and IS (33.5±4.0%). The intravenous administration of S-nitroso-N-acetylpenicillamine (an NO donor, 15 μg/kg/min) over 20 min increased the induction of HSP72 and reduced IS (31.3±5.7%, P&lt;0.01 vs. control) 24 h later. Conclusion These findings suggest that NO may be involved in the induction of HSP72 and the opening of the second window of protection of IP.     

急性心肌梗死患者血浆蛋白C和 D-二聚体测定及临床意义

目的 探讨急性心肌梗死患者血浆蛋白C活性和D-二聚体水平及意义。方法 采用发色底物法（蛋白C）和免疫比浊法（D-二聚体）对22例急性心肌梗死患者血浆蛋白C活性和D-二聚体进行了检测，并与正常对照组（n=20）进行比较。结果 急性心肌梗死患者血浆D-二聚体水平明显高于正常对照组（P〈0．01），而蛋白C活性检测与正常对照组没有明显差别（P〉0．05）。结论 蛋白C不是引起急性心肌梗死的主要因素，D-二聚体增高对于诊断急性心肌梗死具有一定的价值。     

急性心梗患者PC系统改变的临床意义

采用Laurell’s火箭电泳法对急性心梗(AMI)患者的蛋白 C PC:Ag),总蛋白 S(TPS)和游离蛋白S(FPS)进行了检测。AMI患者入院当天及第14天的PC系统指标无明显改变,但急性期死亡患者的PC:Ag及FPS明显低于对照组(P<0.05,P<0.02);再发梗塞患者的PC:Ag和FPS亦明显低于正常对照组(p<0.05,p<0.02),TPS明显高于对照组(P<0.05)。AMI患者PC:Ag与ATⅢ:Ag呈直线负相关。     

冠心病患者血浆NO和ET水平变化的临床研究

目的探讨一氧化氮(NO)和内皮素(ET)水平变化在冠心病发病中的作用及临床意义。方法分别采用硝酸还原法和放射免疫分析法对不稳定性心绞痛(UA)组(n=26)、急性心肌梗死(AMI)组(n=23)及正常对照组(n=22)血浆NO和ET的含量同时进行测定。结果冠心病患者AMI组、UA组患者血浆NO水平均低于正常对照组(P<0.01),且AMI组明显低于UA组(P均<0.01);AMI组、UA组患者血浆ET水平高于正常对照组(P<0.01),且AMI组明显高于UA组(P<0.01)。结论血浆NO和ET代谢失调导致了冠状动脉痉挛和血栓形成,二者共同参与了冠心病的发病,是诱发心绞痛的重要原因。     

热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡及其机制

目的：探讨缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡发生的机制及热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡的机制。方法：采用结扎小鼠左冠状动脉制备在体小鼠心肌缺血-再灌注损伤（I/R）模型,经DNA ladder检测细胞凋亡,并检测caspase-3,caspase-8,caspase-9的活性。部分小鼠经热休克预处理后再进行上述实验。 结果：缺血-再灌注后心肌组织中出现DNA梯状条带,caspase-3,caspase-8,caspase-9活性显著增高;热休克预处理后,多种热休克蛋白（HSPs）表达增加,DNA片断化减轻及caspase的活性受到抑制。结论：缺血-再灌注损伤可激活膜死亡受体信号通路和线粒体信号通路,导致心肌细胞凋亡;通过诱导多种HSPs的表达,热休克预处理可抑制上述两条信号通路的活化和心肌细胞凋亡的发生。