阿霉素致大鼠心衰心肌肌球蛋白重链变化

为观察阿霉素所致大鼠心衰时心肌肌球蛋白重链的变化及心肌结构的改变，采用雄性SD大鼠22只，随机分为2组：①正常对照组：ip等体积生理盐水；②阿霉素组（ADR）：于实验开始后第2、4天ip ADR 1mg/kg；第6、8天ip ADR 2mg/kg；第10天、12天ip ADR 3mg/kg；第14、16天ip ADR 4mg/kg,16d累计用药剂量达20mg/kg。停药24h后，称体重、心肌重量、左心室重复及心肌蛋白的提取、肌球蛋白重链（MHC）分析，电镜观察心肌细胞超微结构的变化。结果表明ADR组大鼠的体重、心体比及左室心体比（LVM／BW）均较正常对照组有显著改变（P＜0．01）。电镜下可见心肌纤维溶解，肌质网扩张空泡化，线粒体水肿，嵴断裂。心肌α-MHC向β-MHC转化，即α-MHC含量下降，β－MHC含量上升。结果提示阿霉素导致的心肌损害伴有心肌细胞结构和功能蛋白质合成的改变。     

低压低氧环境对大鼠心肌肌球蛋白重链表达的影响

【目的】 研究模拟高原低压低氧环境对小鼠心肌肌球蛋白重链α、β亚型表达的影响。【方法】取清洁级SD大鼠20只,随机分成2组：常氧组和模拟高原6000m低压低氧组。记录各组大鼠心脏指数。制作各组心肌组织切片,常规HE染色观察心肌细胞形态改变。免疫荧光法检测各组心肌肌球蛋白重链α-MHC和β-MHC两种亚型蛋白的表达变化。【结果】常氧组和低压低氧组大鼠心脏指数差异不具有统计学意义（P〉0．05）。HE染色可见低压低氧组大鼠心肌细胞水肿,心肌间质内小血管及毛细血管明显扩张充血。低压低氧组大鼠心肌中MHC蛋白质表达水平异常改变,即α-MHC蛋白表达量增高而α-MHC蛋白表达量下降。【结论】模拟高原6000m高原低压低氧可致大鼠心肌细胞形态异常改变同时可刺激心肌MMC亚型表达出现“由快到慢”的趋势,提示MHC表达异常参与了心脏重塑,可能是高原低压低氧致心力衰竭发生、发展的基础。     

阿霉素致大鼠心衰心肌肌球蛋白重链变化

阿霉素(Doxorbincin,Adrinmycin,简称ADR)是一种临床应用广泛的蒽环类抗肿瘤药,对很多肿瘤均有较好的疗效。然而,ADR具有严重的心脏毒性作用,这在一定程度上限制了ADR的大剂量、长期应用。本实验目的是观察对阿霉素所致大鼠心衰时的心肌肌球蛋白重链的变化及心肌结构的改变。     

β-肌球蛋白重链基因与心肌肥厚

心肌肥厚是多种心血管病的一种病理改变。近年研究表明心肌肥厚是一种复杂的多种因素参与调节的动态过程。笔者就β-肌球蛋白重链基因与心肌肥厚的关系在分子遗传学水平做一综述。     

原发性心肌病β肌球蛋白重链基因突变研究

目的 探讨β－肌球蛋白重链（βMHC）基因点突变与肥厚型心肌病（HCM）及扩张型心肌病（DCM）发病的关系。方法 选择56例原发性心肌病病人（HCM13例，DCM43例）及53例健康对照，应用聚合酶链反应（PCR）限制性扩增心脏β－肌球蛋白重链基因第13、14外显子，用DdeⅠ、NⅠaⅢ限制性内切酶酶解其扩增产物，分析有无8848位及9124位点突变。结果 1例扩张型心肌病病人出现8848位点突变应产生的394bp片段，提示该病人可能存在8848位点突变。HCM病人未发现突变。结论 β－肌球蛋白重链基因可能是DCM遗传易感性的基因标志之一。     

人心肌肌凝蛋白重链的制备研究

目的：探讨制备人心肌肌凝蛋白重链（MHC）的方法,为制备其抗体提供抗原。方法：采用改良性制备人心肌MHC,通过SDS-PAGE及Western印迹分析其纯度及抗原特性。结果：①SDS-PAGE显示,纯化的人心肌MHC呈现只有一分子量较大的代表人心肌MHC带的典型图像;②Western印迹显示,200ku处有一典型的感光带。结论：所用的改良法能有效地提取纯化人心肌MHC,可满足制备其抗体的需要。     

模拟失重影响大鼠比目鱼肌梭内外肌纤维肌球蛋白重链的表达

【目的】探讨模拟失重条件下大鼠比目鱼肌梭外肌纤维和梭内肌纤维肌球蛋白重链表达的变化。【方法】采用免疫组织化学技术 ,检测模拟失重条件下大鼠比目鱼肌梭内肌纤维及梭外外肌纤维对单克隆抗体NOQ7.5 .4.D和MY32的免疫反应性。【结果】经历模拟失重的大鼠比目鱼肌Ⅰ型纤维 (对NOQ7.5 .4.D呈阳性反应 )的构成比减少 ,Ⅱ型纤维 (对抗体MY32呈阳性反应 )的构成比增加。模拟失重 3d ,7d ,14d ,30d组Ⅰ型肌纤维分别占 86 96 % ,84 91% (P <0 0 1) ,6 9 14%(P <0 0 1) ,6 6 0 7% (P <0 0 1) ;Ⅱ型纤维分别占 16 14% ,18 2 1% (P <0 0 1) ,31 0 8% (P <0 0 1) ,32 15 % (P <0 0 1)。核袋纤维对NOQ7.5 .4.D的免疫反应性增强 ,核链纤维无改变 ,呈阴性反应 ;核袋纤维对MY32的免疫反应性减弱 ,核链纤维对MY32的反应增强。【结论】模拟失重除影响肌梭外肌纤维MHC的表达、引起肌纤维类型转换外 ,还导致梭内肌纤维MHC表达表型发生改变。     

肌球蛋白与心脏功能

心脏收缩-舒张是一个非常复杂的生理过程,受诸多生理性和/或病理性因素影响而发生变化,因此而影响心功能.     

抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体IgG亚类与慢性心力衰竭的关系

目的 研究抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体 IgG亚类的产生与心力衰竭之间的关系。方法 应用腹主动脉缩窄术与左冠状动脉结扎术建立两种慢性心力衰竭大鼠模型,测定血流动力学变化;以合成的大鼠心肌肌凝蛋白重链部分肽段（1135－1150 氨基酸残基）为包被抗原,采用间接 ELISA 方法检测大鼠血清中心肌肌凝蛋白重链自身抗体 IgG 亚类的水平及动态变化。结果 (1)自身抗体IgG1、IgG2a和IgG2b亚类均呈阳性之大鼠（PPP组）收缩和舒张功能显著低于自身抗体IgG1、IgG2a和IgG2b亚类均呈阴性之大鼠（NNN组）,其LVSP（92.93 8.99 vs 121.49 10.00,P＜0.01）、LVDP（15.82 4.85 vs 11.02 2.45 ,P＜0.05）、+dp/dtmax（1511.35 298.38 vs 2509.95 159.17,P＜0.01 ） -dp/dtmax (-1348.97 234.89 vs -2176.95 439.86 , P＜0.01）;（2）PPP组,其±dp/dtmax显著低于自身抗体IgG1阴性、IgG2a和IgG2b阳性之大鼠（NPP组）,（1511.35 298.38 vs 2168.71 120.11,P＜0.01;-1348.97 234.89 vs -2026.24 149.56,P＜0.01）;（3）自身抗体IgG1和IgG2a 阳性、IgG2b阴性之大鼠（PPN组）,其±dp/dtmax显著低于NNN组,（1376.03 268.32 vs 2509.95 159.17,P＜0.01;-1340.62 298.42 vs -2176.95 439.86 ,P＜0.05）;（4）PPN组,其±dp/dtmax显著低于NPP组,(1376.03 268.32 vs 2168.71 120.11,P＜0.01;-1340.62 298.42 vs -2026.24 149.56 , P＜0.01）。 结论 腹主动脉缩窄术所致的压力超负荷型大鼠CHF模型和左冠脉结扎术所致的低心输出量型大鼠CHF 模型,在CHF的发生、发展过程中均有AMHCA IgG亚类的产生;AMHCA 的产生不单纯是 CHF 的伴随现象,可能参 与了CHF 的病理生理过程。     

Alterations in myosin heavy chain isoform gene expression during the transition from compensatory hypertrophy to congestive heart failure in rats

Objective To explore the molecular mechanism underlying the decreased velocity of tension rise in rat myocardium during congestive heart failure (CHF) and left ventricula r hypertrophy (LVH) induced by aortic stenosis.Methods The maximum velocity of tension rise (+dT/dt(max)) was measured in left ventricular papillary muscle and the mRNA level of myosin heavy chain (MHC) isof orms in the left ventricle were detected by Northern blot analysis.Results The value of +dT/dt(max) in CHF and LVH group were 64.17% and 37.15% lower than sham-operated controls (Sham) (P&lt;0.01); values in the CHF group were 42.99% lower than that of LVH (P&lt;0.01). The level of α-MHC mRNA in LVH was not different from that of the Sham (P&gt;0.05), but decreased significan tly in CHF to 42.3% of Sham and 56.1% of LVH (P&lt;0.01). The level of β- MHC mRNA was up-regulated by 88.3% (P&lt;0.01) in LVH compared with Sham and the level of β-MHC in CHF was 1.5-fold and 3.7-fold higher than that in L VH and Sham respectively (P&lt;0.01). The ratio of α-MHC/β-MHC mRNA in LV H and CHF decreased to 42.4% and 9.8% respectively of the value in Sham (P &lt;0.01). Correlation between α-MHC/β-MHC mRNA level and +dT/dt(max) wa s analyzed which showed that these values were positively correlated with a corr elation coefficient of 0.875 (P&lt;0.01).Conclusion The decreased ratio of α-MHC/β-MHC mRNA was the major molecular mechanism un derlying the decreased +dT/dt(max) in CHF and LVH myocardium. The decreased ratio of α-MHC/β-MHC mRNA in LVH was mainly due to the up regulation of β-MHC mRNA while in CHF both down regulation of α-MHC and up regulatio n of β-MHC were involved.     

人参总皂苷合黄连小檗碱对慢性心衰大鼠心肌肌球蛋白重链的影响

目的:探讨人参总皂苷(GS)合黄连小檗碱(Ber)对慢性心衰大鼠心肌肌球蛋白重链(α-MHC,β-MHC)表达的影响.方法:连续12 d皮下注射较大量异丙肾上腺素(ISO)建立慢性心衰大鼠模型,ISO总量80 mg/kg,随机分为模型组、GS+Ber组、卡托普利组、参麦注射液组,另设对照组.GS+Ber组各以20 mg/(kg.d)灌胃,卡托普利组以45 mg/(kg.d)灌胃,参麦注射液组以5 mL/(kg.d)腹腔注射,模型组和对照组以蒸馏水灌胃.4 wk后检测各组血流动力学指标、心脏质量指数,实时荧光定量PCR检测α-MHC,β-MHC mRNA表达.结果:对照组与各组相比,左室内压峰值(LVSP)、左室等容收缩期压力上升最大速率(+dp/dtmax)、左室舒张期压力下降最大速率(-dp/dtmax)以及α-MHC mRNA表达明显下降,左室舒张末压(LVEDP)、心脏质量指数以及β-MHC mRNA表达显著升高(均P<0.01);GS+Ber组、卡托普利组与模型组相比,LVSP,±dp/dtmax,α-MHC mRNA表达明显升高,LVEDP、心脏质量指数以及β-MHC mRNA表达显著降低(P<0....     

慢性电刺激对成肌分化的C2C12细胞肌型转换的影响

目的研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimula-tion with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响。方法以体外2%马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型。实验分3组:对照组、CsA组和KN93组。对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3 d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10+40 Hz,1.5 h/d,共2 d)处理。通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性。结果在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHCⅠ的mRNA及蛋白的表达。与分化对照组MHCⅠmRNA相对表达量(0.79±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC I型纤维的表达(与对照组比P<0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC I蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02)。对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93(0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P<0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P>0.05)。CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P<0.05),但仍显著低于正常水平(P<0.05)。结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHCⅠ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据。     

家兔半膜肌各亚部肌球蛋白重链表达差异的实验研究

目的利用家兔半膜肌各亚部肌纤维类型的分布特征,观察骨骼肌两型肌纤维肌球蛋白重链（MHC）的构成特点,为进一步探讨两型肌纤维的区别以及两型肌纤维转化机制奠定基础。方法取成年家兔半膜肌,通过改良肌球蛋白ATP酶染色法观察半膜肌四个亚部肌纤维类型的构成,应用RT-PCR方法检测各亚部4种MHC亚型mRNA的表达情况。结果固有半膜肌只含有慢肌（Ⅰ型）肌纤维,表达MHCⅠ型和少量MHCⅡa型基因。副半膜肌腹侧亚部除含有少量Ⅰ型肌纤维外,主要含有快肌（Ⅱ型）肌纤维,表达少量MHCⅠ型基因以及MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因等四种类型;而副半膜肌背侧和外侧亚部只含有Ⅱ型肌纤维,仅表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因。结论家兔半膜肌各亚部肌纤维类型几乎均呈单一类型分布。固有半膜肌亚部主要表达MHCⅠ型基因;副半膜肌各亚部主要表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因,以MHCⅡx型基因为主,各亚部之间存在细微差别。     

兔下颌角截骨后咬肌肌球蛋白重链mRNA表达的变化

目的:通过对兔下颌角弧形截骨后咬肌肌球蛋白重链(MHC)mRNA测定,研究咬肌在骨架缩短后的适应性变化规律。方法:3月龄雌性新西兰大白兔25只,行左侧下颌角弧形截骨,右侧不手术作自身对照。2、4、8、12和24周分别处死5只动物,提取咬肌MHCⅠ、MHCⅡ型和内参GAPDH的mRNA进行RT-PCR。结果:手术侧较对侧MHCⅠ型的mRNA转录降低,12周后正常。MHCⅡmRNA 2周时先降低,4周后恢复正常。2、4、8周MHCⅡ/MHCⅠ手术侧较对侧增加。结论:下颌骨架缩短后咬肌发生适应性的改建,咬肌组分的这种变化有利于建立口颌系统新的平衡和咀嚼功能的恢复。     

慢性阻塞性肺病患者膈肌肌凝蛋白重链表型的变化

目的:研究以呼吸负荷和肺容量慢性增加为特点的慢性阻塞性肺病(COPD)患者膈肌中肌凝蛋白表型的变化.方法:24例患者经开胸手术取膈肌标本.通过非变性电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结合Western印迹分析检测膈肌肌凝蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)各种异构体组分改变.分析患者第1秒用力肺活量(FEV1)、肺总量(TLC)和功能残气量(FRC)等检测结果与慢MHC(β-MHC)占总MHC比例的相关性.结果:慢性过度负荷与β-MHC比例增加,快MHC比例减少有关;COPD患者β-MHC比例为(75.36±9.00)%,明显高于对照组的(50.00±4.81)%(P＜0.01);β-MHC比例与FEV1呈线性负相关(r=-0.89, P＜0.01),与TLC呈线性正相关(r=0.60, P＜0.01),与FRC呈线性正相关(r=0.74, P＜0.01).结论:COPD患者快肌凝蛋白比例减少而慢肌凝蛋白比例增加,这种改变与肺过度充气有关,也可能反映膈肌对于新的功能需要的适应.     

兔胆囊切除术后Oddi括约肌离体收缩及肌球蛋白重链表达变化

目的：探讨兔胆囊切除术后奥迪氏括约肌（SO）自身发生的适应性变化.方法：将60只成年新西兰大白兔随机分为4组,其中A,D组各18只;B,C组各12只.设A组为对照组,采用假手术方式,开腹暴露胆囊后即关闭腹腔,饲养8wk.B,C,D组为实验组,分别完整切除胆囊后饲养2,4,8wk.按设计的时间点饲养结束后将兔麻醉并取出SO,每组各取12只经离体测压后提取总蛋白通过Western Blot蛋白检测肌球蛋白重链（MHC）表达变化.另各取A,D组中剩余的6只大鼠的SO行石蜡切片免疫组化检测MHC表达变化.结果：与A组相比较,实验B,C,D组离体SO压力波幅和SO中的MHC表达均逐渐升高,差异具有统计学意义（P〈0.01）.免疫组化结果显示,D组相对于A组平滑肌细胞中的MHC浓染.结论：兔胆囊切除术后SO括约肌发生了适应性收缩能力增强,MHC表达上调变化,可能是胆囊切除术后患者SO括约肌功能障碍多发生障碍的病理基础之一.     

哺乳类心脏肌浆球蛋白重链基因中的富嘧啶基内含子的唯一保守性

研究了人类和大鼠的心脏α和β-肌球蛋白重链基因中的嘧啶基比例。编码MyHC尾的外显子均是缺少嘧啶基的。这一特殊发现,即某些内含子是富嘧啶基的,而此种富嘧啶基状态在人类和大鼠均有保留,使所有四种等位基因共有两个富含嘧啶基的内因子,并且每对标准基因均含有两种不同的富含嘧啶基内因子。此种强烈保守性与这些内含子的序列无关。基于基因组序列的对比研究所得到的上述发现提示基因组序列除了编码心脏肌球蛋白重链多肽的作用以外,还具有其他附加的功能。     

抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体IgG亚类对腹主动脉缩窄术后大鼠左室功能的影响

[目的]探讨抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体(AMCHA)IgG亚类的产生与腹主动脉缩窄术后大鼠左室功能的关系。[方法]应用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,测定血流动力学变化,计算左心室重量/体重(LVW/BW)比值;以合成的大鼠心肌肌凝蛋白重链部分肽段(1135-1150氨基酸残基)为包被抗原,采用间接ELISA方法检测大鼠血清中心肌肌凝蛋白重链自身抗体(MCHA)IgG亚类的水平及动态变化。[结果]CHF大鼠手术组与假手术组相比左室压力上升和下降最大速率降低(+dp/dtm ax:2103.91±606.89 vs 3196.64±383.29;-dp/dtm ax:-1709.60±460.96 vs-2762.64±514.42,P<0.01),左室舒张末压升高(LVEDP:17.49±8.33 vs-5.69±1.19,P<0.01)、左室收缩压升高(LVSP:131.67±25.14 vs 111.98±4.63,P<0.05)、左心室重量/体重比值升高(LVW/BW:3.04±0.44 vs 2.57±0.20,P<0.01),术后1~2周,IgG1、IgG2 a和IgG2b自身抗体...