卵裂期胚胎、囊胚的玻璃化冷冻解冻的妊娠结果分析

目的 比较卵裂期胚胎、囊胚行玻璃化冷冻解冻后的妊娠结果.方法 回顾性分析2010年6月～2010年9月在该院生殖中心行玻璃化冷冻解冻患者共185周期的妊娠情况;其中卵裂期胚胎冷冻解冻后移植者127周期,卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养后移植者42周期,囊胚冻融后移植16周期.结果 玻璃化冷冻解冻患者共185周期,移植176周期,获得妊娠75周期,妊娠率42.61%;卵裂期胚胎冻融后移植者,卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养者,囊胚冻融移植者复苏率分别为96.76%(299/309)、95.83%(161/168)、94.12%(32/34),着床率分别为22.37%(66/295)、23.44%(15/64)、50%(14/28).妊娠率分别为40.94%(52/127)、33.33%(11/33)、75%(12/16).卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养的患者共42人,其中有9人未形成可移植囊胚而取消移植.其他两组解冻后没有取消移植的例数.结论 3组的玻璃化冻融复苏率无统计学差异.囊胚冷冻解冻能获得较高的着床率和妊娠率.     

囊胚期冷冻胚胎移植的临床应用探讨

目的探讨囊胚期冷冻胚胎移植的临床应用价值.方法对2002年10月～2003年12月在湘雅医院生殖医学中心接受囊胚培养并行囊胚期冷冻胚胎移植的病例进行分析,了解囊胚期与卵裂期冷冻胚胎解冻后的胚胎成活率、植入率及妊娠率.结果冷冻囊胚解冻后胚胎数、胚胎成活率、植入率和妊娠率与卵裂期冷冻胚胎无显著差别(P＞0.05),囊胚解冻后经15 h过夜培养,42枚中有22枚成活,其中8枚Ⅰ,Ⅱ级继续发育或囊胚腔扩张,3例获得妊娠,妊娠率为37.5%.结论囊胚期冷冻胚胎移植同样能达到卵裂期冷冻胚胎移植的临床效果,同时增加解冻与移植间隔时间可更好地选择冻融囊胚移植,对提高妊娠率可能有一定意义.     

非优良胚胎形成的囊胚与卵裂期优良胚胎的冻融胚胎移植的临床结局比较

目的探讨不同发育天数胚胎的发育潜能,为D3非优良胚胎进行囊胚培养及其冻融移植提供依据。方法回顾性分析687
例复苏周期胚胎移植患者的资料,根据胚胎冷冻时间不同,分为3 组：D5 冷冻组（n=87）、D6 冷冻组（n=111）和D3 冷冻组（n=
489）,采用外源性雌孕激素或自然周期准备内膜,比较各组间的临床妊娠率、流产率、种植率等指标。结果每组移植周期临床
妊娠率、流产率、种植率分别为：D5 冷冻组58.6%、9.8%、42.9%;D6 冷冻组32.4%、19.4%、23.3%;D3 冷冻组44.9%、16.4%、
26.9%。D5冷冻组的临床妊娠率和种植率均明显高于另外两组,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论D3的非优良胚胎
继续培养,若能够形成囊胚,所形成的D5囊胚冻融移植的临床结局优于D3的优良胚胎和非优良胚胎形成的D6囊胚冻融移植
的临床结局。因此D3的非优良胚胎的囊胚培养及其冻融移植具有临床应用价值,且在冻融胚胎移植周期若有不同冷冻时间的
胚胎可供选择时,可以优先选择非优良胚胎来源的D5囊胚,其次选择D3的卵裂期胚胎。
     

剩余胚胎继续培养囊胚的潜在价值

目的:探讨在新鲜周期中,经ⅣF/ICSI-ET、冷冻后的剩余胚胎在体外继续培养至囊胚的意义。方法:在新鲜周期中,将D3天发育的胚胎选择评分较高的进行移植,部分胚胎玻璃化冷冻保存后,所剩余的胚胎通过序贯微滴培养法在体外继续培养至囊胚阶段,将优质囊胚进行玻璃化冷冻。在未妊娠患者下一周期将其解冻、移植,比较同时期D3通过玻璃化冷冻解冻移植后的卵裂期胚胎与囊胚期胚胎的植入率、妊娠率、单胎率和多胎率。结果:422例不孕症患者D3天移植冷冻后剩余的胚胎1842枚形成囊胚437枚(23.72%),优质囊胚315枚(17.10%);将优质囊胚行玻璃化冷冻;其中42例患者的62枚囊胚在下一周期解冻后移植,其植入率(41.94%)极显著高于243例患者的536枚卵裂期胚胎解冻后移植的植入率(20.90%)(P<0.01);而妊娠率(54.76%)显著高于解冻后卵裂期胚胎的妊娠率(36.63%)(P<0.05);但是单胎率(71.26%vs 85.71%)和多胎率(28.74%vs 13.64%)无显著差异(P>0.05)。结论:囊胚体外培养可以筛选出具有发育潜能的剩余胚胎,最大限度地利用胚胎,从而提高可用胚胎数和临床妊娠率。     

复苏周期胚胎选择策略研究

目的:分析冷冻胚胎复苏移植周期(FET)移植不同胚胎的临床结局,探讨不同解冻方案对临床妊娠结局的影响,为进一步优化FET周期胚胎选择策略提供依据。方法:回顾性分析2017年2月—2018年3月487例FET周期,分为四大组双囊胚组(91例)、双卵裂胚组(175例)、单囊胚组(176例)和单卵裂胚组(45例),单囊胚又分为单优质囊胚组、单可用囊胚组和单次级囊胚组,单优质卵裂胚分为单Ⅰ级组和单Ⅱ级组,比较各组间的临床妊娠率。结果:四大组中双囊胚组临床妊娠率最高(P<0.05),单囊胚组与双卵裂胚组临床妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但多胎妊娠率显著低于双卵裂胚组。单囊胚组中单优质囊胚组和单可用囊胚组妊娠率均高于单优质卵裂胚组的单Ⅰ级组和单Ⅱ级组,单Ⅱ级组显著高于单次级囊胚组(P<0.05)。结论:选择单囊胚移植可以获得与双卵裂胚近似的临床妊娠率,并可有效避免多胎妊娠;单优质卵裂胚临床结局优于单次级囊胚。     

慢速冷冻胚胎TET周期当天ET与解冻后培养一天ET结果分析

【目的】探讨第3天（D3）慢速冷冻胚胎解冻后当天移植（Embryo Transfer, ET）和体外培养1 d后ET在自然周期和人工周期中对临床结局的影响。【方法】回顾性分析本中心2009年1月至2010年12月期间的解冻胚胎数≥1,且≤3的552个卵裂期冷冻胚胎TET周期的临床结果,根据解冻后体外培养时间分为A组（当天ET）和B组（培养1 d后ET）,这两个组再分为自然周期组和人工周期组。【结果】D3冷冻胚胎在自然周期和人工周期,A、B两组女方年龄、平均移植胚胎数、胚胎评分以及妊娠率均没有统计学意义（P>0.05）,但是,在自然周期和人工周期中B组种植率较A组均有统计学意义(17.9 vs 12.3,P<0.05; 17.3%vs 8.7%,P<0.05)。【结论】体外培养时间对D2冷冻胚胎临床结局没有影响,而D3冷冻胚胎TET时,解冻后培养一天再进行ET有利于胚胎种植。     

授精第三天4细胞及5细胞期胚胎的冷冻价值

目的 分析授精第3天为4细胞及5细胞期胚胎冻融及移植后对临床结局的影响,探讨其冷冻价值。方法 收集270个冻融胚胎移植（FET）周期,授精第3天胚胎采用程序化冷冻法冻存,快速解冻法复苏后移植,根据冷冻日胚胎所含细胞数比较各细胞数胚胎复苏存活率,并分为4、5细胞组与≥6细胞组,比较两组间的临床妊娠率、种植率及因胚胎因素取消周期率（简称周期取消率）。结果 （1）270个周期共解冻胚胎939枚,复苏存活率为65.3% (613/939);移植胚胎561枚,临床妊娠率27.2%(67/246),种植率15.2%（85/561）;（2）4、5细胞组周期取消率显著高于≥6细胞组（P＜0.01）,且移植胚胎数显著低于≥6细胞组（P＜0.05）,但胚胎复苏成功并移植后两组妊娠率、种植率及活产率均无显著性差异（P＞0.05）。结论 冻存4、5细胞期胚胎与≥6细胞期胚胎妊娠率无统计学差异,提示具有冷冻价值。     

胚胎因素对冷冻胚胎移植周期结局的影响

目的:探讨影响冷冻胚胎复苏率和移植成功率的胚胎因素。方法:回顾性分析149个冷冻胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)周期的临床资料,按胚胎发育时间、冷冻前胚胎质量、复苏后胚胎损伤情况分别进行分组,比较不同分类各组间的胚胎复苏情况和(或)临床妊娠率的差异。结果:受精第二天冷冻组与第三天冷冻组的胚胎复苏存活率和临床妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。冷冻胚胎中有优质胚胎者的种植率和临床妊娠率均显著高于无优质胚胎者(P<0.05)。全部移植完整存活胚胎和混合移植组的临床妊娠率和种植率均显著高于全部移植受损胚胎者(P<0.05)。结论:冷冻前胚胎质量和复苏后胚胎卵裂球损伤程度是影响临床妊娠率的重要因素。     

薄型子宫内膜患者不同方案冷冻胚胎移植的临床结局分析

目的 探讨不同内膜准备方案对薄型子宫内膜患者冷冻胚胎移植临床结局的影响.方法 回顾性分析内膜厚度<7 mm、行自然周期或激素替代周期行冻融卵裂期胚胎或囊胚移植的161例患者的临床资料.按方案和移植胚胎类型不同分为4组:N3组,自然周期,移植卵裂期胚胎,37例;N5组,自然周期,移植囊胚,39例;H3组,激素替代周期,移植卵裂期胚胎,44例;H5组,激素替代周期,移植囊胚,41例.比较各组的种植率、临床妊娠率、早期流产率、周期取消率.结果 H3组周期取消率高于N3组(P<0.05),种植率、临床妊娠率、早期流产率两组差异无统计学意义(P>0.05).H5组周期取消率高于N5组(P<0.05),种植率、临床妊娠率、早期流产率两组比较差异无统计学意义(P>0.05).N5组与N3组种植率、临床妊娠率、周期取消率、早期流产率比较差异无统计学意义(P>0.05).H5组种植率、临床妊娠率均高于H3组(P<0.05).结论 薄型子宫内膜患者冷冻胚胎移植采取激素替代周期相对于自然周期并无优势;周期规律的选择自然周期更好;选择囊胚移植可以提高妊娠率.     

影响冻融胚胎复苏率和移植成功率因素分析

目的探讨影响冻融胚胎复苏率和移植成功率的相关因素。方法回顾性分析573个冷冻胚胎移植（FET）周期的临床资料,按冷冻前胚胎质量、胚胎发育时间、解冻后胚胎复苏程度和冷冻方法分别进行分组,分析不同分类各组间的胚胎复苏情况和（或）临床妊娠率差异。结果冷冻当天胚胎中有优质胚胎者的临床妊娠率显著高于无优质胚胎者（31．8％vs20．0％）（P〈0．05）。受精第2天冷冻者与受精第3天冷冻者的胚胎复苏率和临床妊娠率差异无统计学意义（79．1％vs82．9％和25．5％vs31．2％）（P〉0．05）。解冻后完全移植100％卵裂球完整者和混合移植者的临床妊娠率显著高于完全移植部分卵裂球损伤者（36．7％vs24．1％和29．2％vs24．1％）（P〈0．05）。冷冻方法改进后的胚胎复苏率和全胚复苏率显著高于冷冻方法改进前（82．0％vs66．3％和50．0％vs27．5％）（P〈0．05）。结论胚胎质量与胚胎复苏率和临床妊娠率密切相关,冷冻胚胎解冻后全胚复苏率与临床妊娠率正相关,冷冻过程中的操作细节是胚胎实验室保证冻融胚胎复苏、移植成功的重要因素。     

胚胎冷冻技术应用于抗菌肽转基因小鼠的保种传代

目的研究胚胎冷冻在抗菌肽转基因FVB小鼠保种传代中的应用。方法对6~8周正常雌性FVB小鼠进行超排分别与雄性杂合子抗菌肽转基因FVB小鼠交配，收集2-cell胚胎，进行胚胎冷冻。1周后进行胚胎复苏移植，通过PCR方法对仔代鉴定。结果冻存胚胎140枚，复苏获得存活胚胎98枚，移植85枚，产仔38只，获得阳性后代12只。结论通过胚胎冷冻技术保种及复苏移植技术可对抗菌肽转基因小鼠进行传代。     

Lats1基因敲除小鼠保种的研究

目的　以Lats1基因敲除小鼠为例 ,研究国家遗传工程小鼠资源库遗传小鼠的保种技术路线及方法。方法　采用了胚胎移植 ,目的基因检测 ,胚胎冷冻等技术。结果　在库内得到 2 4只Lats+ -小鼠 ,扩群后 ,冷冻保存 110枚胚胎。结论　上述方法能确保Lats1基因敲除小鼠资源库保种成功。     

恒河猴tPA基因的克隆、测序与真核表达

本试验采用高浓度乙二醇（EG-8）作为胚胎冷冻保护剂,以高浓度的半乳糖作为解冻稀释液,对MMTV-Wnt-1转基因小鼠的早期囊胚进行玻璃化冷冻保存。结果在EG-2中平衡4-6min和解冻时间为3-5min时获得了最佳冷冻效果。此条件下冷冻胚胎的总回收率为88.61%（109/123）;回收胚胎在体外发育率达88.99%（97/109）;孵化率达81.65%（89/109）;发育胚胎的移植出生率为38.36%（69/181）;冷漠胚胎移植出生后经PCR检测一半小鼠整合阳性。结果表明使用高浓度的乙二醇作为冷冻保护剂和以高浓度的半乳糖作为冻稀释液能有效地保存转基因小鼠胚胎。     

不同胚胎冷冻方法对人类早期胚胎解冻后的复苏效果及临床结局的影响

目的 比较玻璃化冷冻与程序化冷冻对人类早期胚胎解冻后复苏效果及临床结局的影响.方法 辅助生殖技术获取的剩余可利用人类胚胎2 884枚,其中采用玻璃化冷冻复苏666个周期,解冻胚胎1 516枚、复苏1 383枚、移植胚胎1 375枚;程序化冷冻复苏506个周期,解冻胚胎1 368枚、复苏1 090枚、移植1 077枚.比较两种方法的复苏效果及临床结局.结果 玻璃化冷冻组胚胎复苏率、胚胎完整率分别为92.02％、92.11％,高于程序化冷冻组的79.68％、69.63％(P＜0.05);两组种植率、临床妊娠率、周期取消率、多胎妊娠率、早期流产率、新生儿胎龄、早产率、新生儿出生体重、出生缺陷率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 玻璃化冷冻较程序化冷冻有更高的胚胎复苏率及胚胎完整率,胚胎利用率高,两种冷冻方法的临床结局相似,适用于人类胚胎的冷冻.     

胚胎因素对冻融胚胎移植结局影响

目的探讨胚胎质量与冻融胚胎移植结局的关系。方法对367个冻融胚胎移植周期中胚胎分为优质胚胎和非优质胚胎2组,并在胚胎解冻后根据其卵裂球损伤程度在2组内分别进行妊娠率和胚胎种植率比较。结果367个FET治疗周期中,优质胚胎组的临床妊娠率和种植率明显高于非优质组（P〈0．05）,分别是37．81％和20．72％与22．86％和10．57％。每组无损伤组胚胎临床妊娠率和胚胎种植率均优于损伤组。但优质胚胎组中损伤卵裂球少于2个其临床妊娠率和胚胎种植率与无损伤组无差异。损伤卵裂球多于2个则差异显著（P〈0．05）。结论胚胎质量是影响冻融胚胎种植率的重要因素。     

胚胎冷冻保存技术及进展

随着冷冻保存技术的发展,胚胎的冷冻保存在生殖医学中的地位越来越重要,已成为辅助生殖的核心步骤及生育力保存的重要方法。过去几年中,全球范围内胚胎冷冻周期数呈指数级增长。胚胎冷冻的优点不断凸显,冻胚移植越来越受人们的关注。如何完善胚胎冷冻技术及如何改善临床结局是目前关注的重点及努力的方向。因此,本文从胚胎冷冻技术的发展历程、应用、分类及目前研究进展几个方面进行全面述评。     

转基因技术和冷冻胚胎技术的实验数据建立

目的 建立一系列转基因技术和冷冻胚胎技术的实验室数据库。方法 a)显微注射法注射1864个1-细胞期受精卵,注射后存活的1283个胚胎进行胚胎移植,获得20只阳性转基因动物。b)设计不同单位的激素剂量(PMSG HCG)获得每个品系的小鼠平均排卵量和最佳激素剂量。e)采用常规法和玻璃化法进行胚胎冷冻保存,并就囊胚和桑椹胚两个不同时期进行复苏成活率的比较。结果 和讨论a)建立转基因技术和胚胎冷冻保存的实验数据库(随着实验技术的不断提高还将不断的完善)。胚胎显微注射存活率为68．8％;转基因阳性鼠出生率为16．16％;基因整合率为1．56％。b)激素诱发5种品系小鼠的平均超排卵数为：C57BL/6J(日本)15．6;C57BL/6J 19．6;BDF1(日本)21．4;C3H(日本)14．8;KM 30。e)胚胎冷冻保存复苏,出生幼子存活率为30％～31％。     

玻璃化冷冻人卵母细胞体外受精－胚胎移植9例临床分析

目的：探讨人卵母细胞玻璃化冷冻在体外受精－胚胎移植（ IVF-ET）中的应用效果。方法行IVF-ET 治疗、因取卵日男方因素无法进行受精的患者9例,对其成熟卵子进行玻璃化冷冻保存,解冻后进行卵胞浆内显微授精（ICSI）,记录卵子复苏、受精、卵裂及移植后妊娠情况。结果9例患者共解冻复苏58枚卵子,复苏率68．2％（58／85）;复苏后进行ICSI的成熟卵子中,受精40枚,形成胚胎34枚,受精率69．0％,卵裂率85．0％。7个移植周期共移植胚胎15枚,临床妊娠3例,临床妊娠率42．9％。结论人卵母细胞玻璃化冷冻可以获得一定的临床妊娠率,在IVF-ET中可作为临床治疗的选择之一。     

C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究

目的 建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术.方法 通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测.结果 体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78％,移植产仔率是21.31％,后代的阳性率是23.08％;体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33％,移植产仔率是15.78％,后代的阳性率是33.33％.结论 两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法.