科学家解读关键蛋白促进癌症进展的分子机制

正据Tamiya H 2017年12月11日(J Clin Invest,2017 Dec 11.doi:10.1172/JCI95410)报道,Sanford Burnham Prebys医学发现研究院的研究人员通过研究发现了SHARPIN蛋白的新角色,除了作为"线性泛素链装配复合物"(LUBAC)中3个蛋白中的其中之一外,SHARPIN还能够调节名为PRMT5的表观遗传总开关,PRMT5能够控制与黑色素瘤相关的多个蛋白,LUBAC能够调节NFκB     

成纤维细胞活化蛋白—实体肿瘤免疫治疗新靶点

肿瘤毛细血管内皮细胞表面抗原或间质细胞表面抗原的靶向治疗为肿瘤的治疗开辟了新的研究领域.这些靶向抗原的筛选及其抗体在临床中的应用已成为近年来肿瘤研究的热点.成纤维细胞活化蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族成员,选择性表达于肿瘤间质活化的成纤维细胞表面,而在正常组织成纤维细胞表面很少表达或不表达,成纤维细胞活化蛋白(FAP)的蛋白水解酶活性能够促进肿瘤的生长和增殖.这使其成为肿瘤免疫靶向治疗理想的候选蛋白.     

pcDNA3.1(+)TPA构建及其在人皮肤成纤维细胞的表达活性

为建立TPA基因治疗缺血性心脏疾病及防止血管再狭窄的新方法。构建真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA ,并采用脂质体法将其转入体外培养的人皮肤成纤维细胞 ,并观察外源性TPA表达情况。结果发现 :真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA在人皮肤成纤维细胞中获有效表达 ,酶联免疫吸附法TPA蛋白表达定量检测结果为 6 4 7.8ng/(10 6细胞·2 4h) ,未转pcDNA3.1(+)TPA的人皮肤成纤维细胞测得为 19.2ng/ (10 6细胞·2 4h) ;发色底物法测得外源性TPA活性为 12 5.0U/ (10 6细胞·2 4h) ,未转pcDNA3.1(+)TPA的人皮肤成纤维细胞测得为 5.8U/ (10 6细胞·2 4h)。提示 :pcDNA3.1(+)TPA转入人皮肤成纤维细胞后 ,外源性TPA基因获有效表达 ,为TPA基因治疗缺血性心脏病的临床研究提供了前提基础     

成纤维细胞生长因子与器官发育

背景：成纤维细胞生长因子能够影响多种器官组织的形态发生、分化及功能,对多种器官的发育具有决定性作用。 目的：综述近年来关于成纤维细胞生长因子在器官发育中所起的作用,为进一步研究器官发育提供理论基础。 方法：检索Pubmed(1995/2010)和CNKI(2001/2010)数据库,检索关键词分别为“fibroblast growth factor, tooth development, kidney development, lung development, salivary gland development”,“成纤维细胞生长因子、牙齿发育、肾脏发育、肺发育、涎腺发育”。纳入与成纤维细胞生长因子结构、功能及其与器官发育相关的研究,同一领域研究则选择近期发表及发表在权威杂志的文章。 结果与结论：共收集文献850篇,排除发表时间较早及重复研究文献,共纳入37篇英文文献和2篇中文文献。目前研究发现,牙齿、肺、肾脏、羽毛、毛发、心脏、涎腺的发育都是从上皮与间充质相互作用开始的。成纤维细胞生长因子能够促进上皮和间充质细胞之间的相互作用,诱导两种细胞的增殖并抑制其凋亡,成纤维细胞生长因子与器官发育紧密相关。     

成纤维细胞生长因子受体3在软骨发育分化过程中的意义

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)是一组结构相似的多肽类家族，目前已发现有19个成员，其在胚胎发育、血管新生、伤口愈合、肿瘤形成中发挥重要作用。这些作用的发挥是通过与其细胞表面受体相结合后而介导的。目前已克隆出4种成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor，FGFR)，虽然4种FGFRs结构相似，但每种FGFR在机体发育的不同阶段及不同组织中各有其特殊的表达方式。近来研究证明，在软骨和骨的发育分化过程中，FGFR3发挥着重要的作用，我们对此进行综述。     

科学家发现能有效编程癌症免疫疗法的关键开关蛋白

正据Milner JJ 2017年12月6日(Nature,2017 Dec 6.DOI:10.1038/nature24993)报道,Scripps研究所和加利福尼亚大学的研究人员通过联合研究发现,一种名为Runx3的特殊蛋白或能对杀伤性T细胞进行"编程"来帮其在肿瘤和感染位点建立"住所"。在杀伤性T细胞中Runx3蛋白能对染色体发挥作用来以特殊方式编程基因,从而帮助T细胞在实体瘤中不断积累。     

α-SMA在口腔粘膜下纤维性变成纤维细胞中的表达

目的探讨肌成纤维细胞在口腔粘膜下纤维性变(OSF)发病机制中的作用.方法免疫组化法检测组织中和体外培养成纤维细胞中平滑肌肌动蛋白α (α-SMA)的表达;免疫组化法和RT-PCR法检测槟榔碱对OSF及正常成纤维细胞产生α-SMA和其mRNA表达情况.结果正常口腔粘膜组织中除血管壁外无阳性染色,而OSF组织中在粘膜下层有大量梭形细胞胞浆被染成棕黄色;体外培养的正常组织来源成纤维细胞中有很少量的α-SMA蛋白表达,OSF来源的成纤维细胞中早期有大多数细胞(85.80%±3.56%)表达α-SMA;槟榔碱干预成纤维细胞后不能增加平滑肌肌动蛋白α蛋白和mRNA的表达.结论肌成纤维细胞可能在OSF的发病机制中起重要作用,OSF组织中的肌成纤维细胞可能不是槟榔成分直接作用于成纤维细胞转化而来的.     

成纤维细胞Toll样受体和NOD的表达及功能研究进展

Toll样受体(TLR)和核苷酸结合寡聚体结构域蛋白(NOD)是先天性免疫应答中识别各种病原微生物保守结构的模式识别受体,与多种细菌和病毒感染性疾病相关。成纤维细胞广泛分布于机体各个组织,通常是一种不活跃的细胞。研究发现,一些组织的成纤维细胞表达多种TLR和NOD,并积极主动参与先天性免疫反应。本文综述了TLR和NOD的组成、结构及功能,并总结了一些重要组织中成纤维细胞TLR和NOD的表达及其介导的免疫相关作用。     

丙酮酸乙酯对类风湿性关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丙酮酸乙酯对滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法收集胶原诱导的关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)和正常大鼠滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。光镜及免疫荧光法检测Vimentin蛋白鉴定滑膜成纤维细胞;分别用1、2、5、10、20 mmol/L浓度的丙酮酸乙酯作用于滑膜成纤维细胞;流式细胞术及CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显微镜观察细胞形态特征符合滑膜成纤维细胞,且Vimentin蛋白表达阳性;5种剂量的丙酮酸乙酯均能抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,但是未见明显剂量依赖效应,以5 mmol/L剂量组作用效果最为明显。结论丙酮酸乙酯能够抑制滑膜成纤维细胞增殖同时促进其凋亡,且以5 mmol/L剂量组作用最为明显。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用

背景：碱性成纤维细胞生长因子是具有多功能的细胞生长因子,对来源于中胚层及神经外胚层的细胞有明显的促进增殖作用。 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用。 方法：将第5代人牙周膜细胞,以1×108 L-1的浓度分别接种到96孔板,随机分成4组,分别加入含0,1,10,100 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子、体积分数为15%胎牛血清的α-MEM培养基进行培养。在第1,3,5,7天测定细胞的增殖情况,在第1,7天检测碱性磷酸酶活性。 结果与结论：4组之间人牙周膜细胞增殖情况的差异有显著性意义(F=6.586,P=0.024),随着碱性成纤维细胞生长因子质量浓度的增大,吸光度值均增大,其中100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组的吸光度值均大于其他组(P < 0.05);碱性成纤维细胞生长因子各组的碱性磷酸酶活性均低于对照组(P=0.000),浓度越大,活性越低(P < 0.05)。结果显示碱性成纤维细胞生长因子在1-100 μg/L范围内质量浓度越高,促进人牙周膜细胞增殖和抑制碱性磷酸酶活性的作用越强。     

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）抗体研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是由Gospodarowiz等[1]于1974年在牛脑垂体中发现的,因对3T3细胞有强烈的促增殖和有丝分裂作用,且等电点为9.6而得名.此次发现展开了对成纤维细胞生长因子的鉴定,纯化及测序等研究的序幕.     

癌相关成纤维细胞对结肠癌细胞增殖侵袭能力的影响

目的 观察结肠癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblast,CAF)对结肠癌HCT-116细胞增殖及侵袭能力的影响,探讨癌细胞微环境在结直肠癌发生、发展过程中的作用.方法 采集结肠癌手术标本CAF及结肠正常成纤维细胞进行原代及纯化培养.观察HCT-116细胞被CAF及成纤维细胞作用后其形态学、增殖能力及侵袭能力的变化.结果 结肠CAF较成纤维细胞异型性明显,接触抑制和密度抑制丧失.结肠CAF及成纤维细胞免疫组化标记CK(AE1/AE3)均(-),成纤维细胞和CAFα-SMA均(+);CAF条件培养基组HCT-116增殖活性增高,CAF间接共培养HCT-116细胞G2期和S期所占比例明显增加,CAF作用下HCT-116细胞侵袭能力明显增强(P＜0.05).结论 CAF促进结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭及迁移;CAF条件培养基中可能存在可溶性活性物质,具有促进HCT-116细胞增殖侵袭能力的作用.     

酸性成纤维细胞生长因子与胚胎干细胞的造血分化

背景：有研究表明,在卵黄囊造血、胎肝造血和胚胎干细胞向造血干细胞分化过程中,酸性成纤维细胞生长因子可强烈表达。 目的：探讨酸性成纤维细胞生长因子对小鼠胚胎干细胞造血分化的作用,在拟胚体培养阶段施加酸性成纤维细胞生长因子,验证酸性成纤维细胞生长因子对造血形成细胞产生的调控作用。 方法：培养小鼠胚胎干细胞,将饲养层上生长状态良好的小鼠胚胎干细胞用胰酶消化成单个细胞后,利用悬滴法制备拟胚体,拟胚体继续悬浮培养,以1,2和5 μg/L酸性成纤维细胞生长因子分别培养3,5,7,9 d,通过免疫荧光法检测胚胎干细胞与拟胚体中酸性成纤维细胞生长因子的表达,流式细胞术检测Flk-1⁺与CD133⁺阳性细胞率。 结果与结论：酸性成纤维细胞生长因子在拟胚体中呈阳性表达。在5 μg/L酸性成纤维细胞生长因子作用下,Flk-1⁺细胞随时间增加表达增加,CD133⁺细胞表达模式与Flk-1⁺细胞类似。在1 μg/L时,Flk-1⁺细胞在7 d时表达达到高峰,随后下降。CD133⁺细胞表达结果类似。而在2 μg/L时,5 d时Flk-1⁺细胞表达升高,随后下降,在9 d时表达又增高。而CD133⁺细胞则总体呈现升高趋势。酸性成纤维细胞生长因子可促进Flk-1⁺与CD133⁺细胞的产生,证明酸性成纤维细胞生长因子能够有效促进拟胚体的扩增以及成血管血液干细胞的产生与增殖。     

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素致肾小管上皮损伤的拮抗效应

背景:体内实验证实成纤维细胞生长因子能有效保护庆大霉素致肾小管上皮细胞的损伤,但对体外培养细胞的作用如何不多见。目的:在建立庆大霉素肾毒性体外细胞模型的基础上,观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素肾毒性的保护作用。方法:采用酶加网筛方法分离纯化昆明小鼠肾小管上皮细胞,调整细胞浓度为1×108L-1,将细胞悬液移入96孔细胞培养板,分组培养:空白对照组:正常培养;庆大霉素组:10,30,50μL/孔(即400,1200,2000U/孔)记为G1、G2、G3;碱性成纤维细胞生长因子组:20,50,80μL/孔(即90,225,360ng/孔)记为B1、B2、B3;庆大霉素加碱性成纤维细胞生长因子干预组:先加碱性成纤维细胞生长因子12h后,再加庆大霉素12h培养,分9个剂量组,即G1B1、G1B2、G1B3、G2B1、G2B2、G2B3、G3B1、G3B2、G3B3,每组4复孔。观察细胞形态及数量变化。结果与结论:庆大霉素对肾小管上皮细胞的损伤呈剂量依赖性,中、高浓度组的上皮细胞皱缩,变圆,肿胀,贴壁差,内部胞质破坏严重,结构紊乱,低浓度组细胞数量改变不明显,并且开始有成纤维细胞出现;碱性成纤维细胞生长因子各组细胞饱满、折光性强,数量明显增多,50μL/孔浓度以上效果显著,与80μL/孔差异无显著性意义;庆大霉素加碱性成纤维细胞生长因子干预组中低浓度庆大霉素组细胞未见明显损害,细胞数量反而增多,中浓度庆大霉素组损害的细胞崩解减少、细胞皱缩和贴壁差的程度有所减轻,高浓度碱性成纤维细胞生长因子干预后细胞形态良好,但高浓度庆大霉素所致细胞肿胀、坏死损伤任何浓度的碱性成纤维细胞生长因子干预都无法改善。50μL/孔碱性成纤维细胞生长因子对中、低浓度庆大霉素所致肾毒性有拮抗作用,对高浓度庆大霉素所致肾毒性无保护作用。     

大鼠肝纤维化过程中肝内成纤维细胞的免疫组化研究

目的肝脏内存在有两种成纤维细胞,一种是肝星形细胞(hepatic stellate cell,HSC),一种是门脉区域的成纤维细胞。用免疫组化方法对这两种细胞群在肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)中活化后的细胞形态进行组织学鉴别。方法Wistar系雄性鼠用于实验动物模型制作:CCL4腹腔注射和胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)诱导肝纤维化动物模型,用SABC法来检测。一次抗体分别为GFAP、α-SM、Desmin、Vinculin。结果CCl4腹腔注射后48h中央静脉周围的星形细胞在GFAP、α-SMA、Desmin、Vinculin染色呈强阳性;另外,BDL96h后门脉区域成纤维细胞在α-SMA、Vinculin染色中显示阳性,而在GFAP、Desmin染色中未发现有变化。结论α-SMA、Vinculin在肝星形细胞和门脉区域成纤维细胞有相同的阳性结果,GFAP、Desmin被证明能够用于区别有活性的肝星形细胞和门脉区域的成纤维细胞。     

FGF7通过上调SOD2抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达

目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制.方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因.血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导mCFs建立心肌纤维化的细胞模型.流式细胞术检测过表达...     

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞DNA合成的作用

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种肝素结合的碱性多肽细胞生长因子,它首先由Gospodarowicz于1974年从牛垂体中提出,并发现bFGF能引起Balb/c 3T3成纤维细胞的增殖,并促进WI38二倍体成纤维细胞及来源于成年人根鞘和鼠胚皮肤的成纤维细胞的生长。我们利用基因重组技术,牛bFGF基因以Puc18作载体,在E.Coli JM103中表达成功,经纯化后得到分子量为20 000的牛bFGF。将这bFGF加入来源于鼠胚皮肤而处于休眠期的成纤维细胞,以~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入量为指标,观察到此bFGF有明显的促进成纤维细胞DNA合成的作用。 实验选用第三至第六代,取于昆明种小白鼠鼠胚皮肤的成纤维细胞。以5×10~4/ml的密度将其接种到96孔培养板上,8小时后换上含1％胎牛血清的DMEM,继续培养16～24小时,使细胞处于休眠期。然后加100ng/ml的bFGF,以此为O点,在每个设定的时间点前7小     

把人体皮肤成纤维细胞重编程为干细胞

近年来,关于人体干细胞的研究,特别是将已分化细胞(如人皮肤的成纤维细胞)转化成人体胚胎干细胞的研究取得了突破性进展。在反转录因子OCT3/4、SOX2、C-MYC和KLF4的作用下,人皮肤的成纤维细胞可以转变为多能干细胞,具备了多种干细胞的能力,有望在多种疾病的机制研究和治疗中发挥重要的作用。本文将对这项最新的研究成果进行介绍。     

重组反转录病毒碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨的影响

背景：国内外有关成纤维细胞生长因子基因转染促血管和促肌肉生长的研究较多,而成纤维细胞生长因子基因促成骨的研究未见报道。 目的：观察重组反转录病毒retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨能力的影响。 方法：从健康志愿者全骨髓中分离培养人骨髓基质细胞,体外扩增纯化后分为4组：①retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组：培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子基因重组反转录病毒。②retrovirus pLXSN组：培养液中加入反转录病毒空载体。③阳性对照组：培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠。④空白对照组：不给予特殊处理。 结果与结论：经多次换液传代,人骨髓基质细胞呈均一梭形形态。处理后retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少。免疫组织化学染色见retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组碱性成纤维细胞生长因子表达明显强于其他3组。retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子和阳性对照组可引起细胞碱性磷酸酶活性增高和矿化结节及骨胶原形成。提示基因重组反转录病毒成纤维细胞生长因子转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用。     

胰蛋白酶与糖皮质激素影响肺成纤维细胞增殖与骨架蛋白的表达

背景：肺成纤维细胞不但是肺组织的结构支持细胞,还能够通过增殖、收缩、趋化及分泌细胞外基质等多种功能在肺组织的炎症损伤-修复过程中发挥关键作用。 目的：观察原代培养的人肺成纤维细胞在胰蛋白酶或糖皮质激素作用下增殖特性与骨架蛋白表达的变化。 方法：采用人肺成纤维细胞体外培养,胰酶处理24 h,终浓度分别为0,0.5,1.0,5,10 mg/L胰酶;地塞米松处理72 h,在有血清培养条件下进行,浓度范围10^-9-10^-6 mol/L。MTT法测定成纤维细胞增殖情况;免疫印迹方法测定细胞波形蛋白和肌动蛋白的表达。 结果与结论：胰蛋白酶在低浓度(0.1-0.5 mg/L)时刺激肺成纤维细胞增殖;而较高浓度(1-10 mg/L)明显抑制细胞生长。地塞米松对肺成纤维细胞增殖作用的影响不明显。胰蛋白酶显著上调肺成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白的表达,但对波形蛋白的表达无明显影响;地塞米松(10^-9-10^-6 mol/L)显著抑制波形蛋白的表达。结果表明在慢性阻塞性肺病等支气管肺慢炎症性疾病的发病过程中,胰蛋白酶和糖皮质激素可以通过参与成纤维细胞增殖和骨架蛋白的表达发挥作用。