健脾中药胃肠安对胃癌MKN45细胞侵袭迁移能力的影响

目的:研究健脾中药胃肠安对胃癌细胞MKN45侵袭、迁移等生物学行为的影响及其分子机制。方法:体外培养MKN45细胞,分为胃肠安方低剂量(0.5 mg·mL~(-1))组、高剂量(1 mg·mL~(-1))组和对照组,采用Transwell小室实验评价胃肠安方对胃癌细胞MKN45侵袭能力的影响、细胞划痕实验检测胃肠安对MKN45细胞迁移能力的影响,Western Blotting检测经胃肠安干预后的MKN45细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9的蛋白水平。结果:Transwell侵袭和迁移实验显示,胃肠安干预后的MKN45细胞穿膜数明显减少;细胞划痕实验显示,胃肠安可显著抑制MKN45细胞迁移;Western Blot结果显示,胃肠安干预后的MKN45细胞的MMP2、MMP9蛋白表达水平明显降低。结论:胃肠安可降低MKN45细胞的侵袭能力,抑制胃癌细胞迁移。胃肠安抑制人胃癌细胞MKN45的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关,这可能是胃肠安影响胃癌细胞侵袭与转移的机制之一。     

胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制

目的:观察健脾复方胃肠安对人胃癌MKN45细胞自噬的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:体外培养人胃癌MKN45细胞,采用细胞活力检测法(CCK-8)检测不同质量浓度胃肠安(250,500,1000,2000 mg·L^-1)作用体外培养的人胃癌细胞MKN45细胞,共孵育24,48,72 h,检测细胞增殖活力的改变;采用吖啶橙(AO)染色和单丹磺胺戊二胺(MDC)染色观察胃肠安对胃癌MKN45细胞自噬小体及自噬囊泡的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测微管相关蛋白1轻链3(LC3),酵母ATG6同源物(Beclin1),泛素结合蛋白-1(p62),自噬相关基因5(ATG5),自噬相关基因7(ATG7)mRNA和蛋白的表达。结果:CCK-8实验显示,与空白组比较,胃肠安(500,1000,2000 mg·L^-1)可明显抑制MKN45细胞的增殖能力(P<0.05,P<0.01);AO和MDC染色显示,与空白组比较,随着胃肠安浓度的增加,自噬小体和自噬囊泡含量逐渐增加;Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,胃肠安(1000 mg·L^-1)组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),p62表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论:胃肠安可诱导人胃癌MKN45细胞自噬,其机制涉及上调自噬相关基因Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达,下调p62 mRNA和蛋白表达,促进自噬标志蛋白LC3-I向LC3-Ⅱ转化。     

胃肠安颗粒剂与汤剂抑制人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长、淋巴结转移作用比较及对RUFY3,SNAI1,VEGF和EMT蛋白的影响

目的:观察胃肠安颗粒与汤剂对MKN45人胃癌裸鼠皮下移植瘤皮下移植瘤生长、淋巴结转移作用及对RUN和FYVE结构域蛋白3(RUFY3),锌指转录因子1(SNAI1),血管内皮生长因子(VEGF)和上皮细胞间质转化(EMT)蛋白的影响。方法:建立人胃癌MKN45细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白(生理盐水0. 5 m L/只)组,胃肠安颗粒(胃肠安颗粒3. 54 g·kg-1)组,胃肠安煎剂(生药35. 49 g·kg-1)组。观察各组裸鼠皮下移植瘤瘤重、腋窝淋巴结的体积,苏木素-伊红(HE)染色检测各组淋巴结的形态,免疫组化检测包括RUFY3,SNAI1,VEGF,E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)相关蛋白表达。结果:与空白组比较,胃肠安颗粒组和胃肠安煎剂组皮下移植瘤瘤重显著降低(P 0. 01),腋窝淋巴结体积显著减小(P 0. 01); HE染色显示淋巴结中均可见转移的肿瘤细胞;裸鼠胃癌组织RUFY3,SNAI1,VEGF,N-cadherin,Vimentin蛋白表达显著降低(P 0. 01),E-cadherin蛋白表达显著增加(P 0. 01)。结论:胃肠安颗粒与胃肠安煎剂在抑制人胃癌皮下移植瘤生长和淋巴结转移方面具有相同疗效,可在一定程度上代替汤剂使用;胃肠安颗粒和胃肠安煎剂均能降低裸鼠皮下移植瘤中RUFY3,SNAI1,VEGF,N-cadherin,Vimentin蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,提示胃肠安可能通过调节RUFY3,SNAI1,VEGF,EMT相关蛋白的表达而起到抑制肿瘤转移的作用。     

黄芪多糖对人胃癌细胞系MKN45的生长抑制作用及细胞周期的影响

目的:研究黄芪多糖对胃癌细胞MKN45的生长抑制作用及细胞周期的影响。方法:用RPMI 1640培养液对人胃癌细胞MKN45进行传代培养,采用MTT法检测黄芪多糖对MKN45的生长抑制作用,采用流式细胞术检测黄芪多糖对MKN45细胞周期的影响。结果:MTT法实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,效应均呈浓度和时间依赖性。结论:黄芪多糖能抑制胃癌细胞增殖,其机制之一是影响细胞周期使之阻滞于G0/G1期。     

胃肠安对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察健脾中药胃肠安颗粒对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的影响。方法:建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为生理盐水(生理盐水0.5 m L/只)组,胃肠安煎剂(生药35.49 g·kg-1)组,胃肠安颗粒(胃肠安颗粒3.54 g·kg-1)组,比较各组裸鼠瘤重情况,采用免疫组化法比较各组裸鼠瘤体Ki67抗原和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,透射电镜检测各组瘤体细胞形态,脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记法(TUNEL)检测各组瘤体细胞凋亡情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中肿瘤指标及酶学标志物。结果:胃肠安颗粒组和胃肠安煎剂组瘤体质量均低于空白组(P0.01);胃肠安颗粒组和胃肠安煎剂组PCNA,Ki67蛋白表达低于空白组(P0.01);透射电镜显示胃肠安颗粒组和胃肠安煎剂组皮下移植瘤细胞出现细胞凋亡、坏死并且凋亡指数均高于空白组,ELISA法显示胃肠安颗粒组与胃肠安煎剂组肿瘤标志物及酶学指标癌胚抗原(CEA),糖类抗原199(CA199),糖类抗原724(CA724),乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)水平均低于空白组(P0.05)。结论:健脾中药胃肠安颗粒同胃肠安煎剂一样均可抑制人胃癌裸小鼠皮下移植瘤生长的作用,可能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡促进其分化而实现,其具体的机制需作进一步的研究。     

黄芪莪术配伍药物血清对胃癌MKN45细胞增殖和分化的影响

目的:观察黄芪、莪术配伍药物血清对人胃癌细胞株MKN45增殖和分化的影响,比较中药配伍和单味药应用的不同,为益气活血方法治疗胃癌提供实验依据。方法:通过中药血清药理学方法制备黄芪、莪术配伍药物血清,采用MTT法检测药物血清对MKN45细胞的增殖抑制率;酶标仪测定分化标志酶AKP、LDH的活性。结果:MTT法实验中,莪术组作用48h后对细胞的抑制作用与正常组相比有显著意义(P<0.01),作用72h,莪术组、配伍组对细胞增殖仍有抑制作用,与正常组相比有显著意义(P<0.01),且配伍组在24h、48h、72h均对MKN45细胞增殖维持稳定的抑制率。通过酶标仪检测,配伍组作用的MKN45细胞AKP、LDH活性表达均明显降低,与正常组相比有显著意义(P<0.05),配伍组与黄芪组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芪、莪术配伍药物血清能够抑制胃癌MKN45细胞增殖并诱导其分化,与单味药应用相比具有增效、疗效稳定优势,提示益气活血法是中医药治疗胃癌的有效治则治法。     

大蒜素诱导人胃癌MKN45细胞凋亡作用机制分析

目的:探讨分析大蒜素对体外培养的人胃癌细胞MKN45的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用MTT法、Hoechst33342荧光染色、流式细胞术、RT-PCR法、免疫组化法检测不同浓度的大蒜素在与人胃癌细胞MKN45作用24 h后,对人胃癌MKN45细胞的影响作用。结果:大蒜素对人胃癌细胞caspase-3 m RNA的诱导表达上调,浓度为8μg/m L对人胃癌MKN45细胞的增殖抑制率高达98%。结论:大蒜素对人胃癌细胞MKN45的增殖有抑制作用,其作用机制可能是大蒜素通过增强人胃癌细胞caspase-3 m RNA的表达,来诱导人胃癌细胞的凋亡。     

白及多糖及其与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞株的影响

目的:探讨白及多糖及其与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞株的影响。方法:以人胃癌MKN45细胞株为对象,采用MTT法测定细胞增殖,HPLC测定细胞内药物浓度,对白及多糖及其与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞株增殖作用进行了观察研究。结果:白及多糖在体外无明显的直接杀伤人胃癌细胞作用,但低、中、高剂量的白及多糖与5-Fu联用均可增加5-Fu的抗肿瘤作用(P0.05);HPLC测定细胞内药物浓度结果显示,在5-Fu剂量相同的情况下,白及多糖与5-Fu联用可使细胞内5-Fu浓度增加(P0.05)。结论:白及多糖能增加5-Fu的抗肿瘤作用。     

黄芩素对肿瘤细胞MKN45凋亡与增值的影响

目的探讨黄芩素诱导胃癌细胞株MKN45凋亡的作用机制,为黄芩素在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法采用MTT法检测黄芩素抑制细胞增殖的半数抑制浓度(IC50);采用不同浓度的黄芩素处理细胞,用流式细胞仪检测胃癌细胞株MKN45的凋亡情况;采用免疫组化方法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达情况。结果黄芩素对细胞生长的IC50为126.39umol/L。50、100、200μmol/L黄芩素能够诱导胃癌细胞MKN45凋亡,凋亡率与剂量呈正相关。50、100、200μmol/L黄芩素诱导caspase-3的表达。结论黄芩素能诱导胃癌细胞凋亡,可能与其诱导caspase-3的表达有关;并明显抑制癌细胞增殖,具有抗MKN45细胞作用。     

化痰散结方对人胃癌MKN45细胞的体内外抑制作用

目的:观察化痰散结方对人胃癌MKN45细胞及其裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法:应用CCK-8法检测化痰散结方对体外胃癌MKN45细胞的生长抑制作用.建立裸鼠MKN45人胃癌移植瘤模型,并随机分为模型组、中药组和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-fu)组,模型组灌胃生理盐水0.02 mL/g,中药组灌胃化痰...     

丹参酮ⅡA对人胃癌细胞株MKN-45体外侵袭和转移能力的影响

目的：探讨丹参酮ⅡA对人胃癌细胞株MKN45体外侵袭转移能力的影响及其作用机制。方法：MKN45细胞体外培养,MTT法检测细胞增殖抑制率,细胞黏附侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,western blot检测各组培养细胞E-cadherin、CD44V6蛋白表达的变化。结果：与对照组比较,丹参酮ⅡA呈时间剂量性抑制胃癌MKN45细胞的增殖;各浓度丹参酮ⅡA处理组MKN45细胞与Matrigel胶的异质性黏附和侵袭、趋化能力均明显受抑制,有明显的剂量依赖性。western blot显示,丹参酮ⅡA能显著降低CD44V6蛋白、并上调E-cadherin蛋白的表达,与对照组相比,两者均剂量效应性显著。而不同时间组比较,E-cadherin蛋白按72h〈48h略呈负相关趋势（P〈0.05）,CD44V6蛋白的时间梯度差异性不很明显（P〉0.05）。结论：丹参酮ⅡA能抑制胃癌MKN45细胞侵袭和转移,其机制可能与直接抑制细胞侵袭转移活动,抑制MKN-45细胞相关基因蛋白CD44V6,促进黏附分子E-cadherin蛋白表达有关。     

参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭转移作用机制

目的:观察参芪抑瘤方(抑瘤方)血清抑制MKN-45增殖和侵袭转移作用,并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Trans-well和划痕实验观察细胞侵袭与迁移能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测环氧合酶-2(COX-2)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达;免疫组化检测细胞COX-2,PTEN蛋白表达。结果:参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预24,48,72 h后,抑制率为31.25%,33.09%,34.50%;参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预48 h后,细胞侵袭能力、转移能力和迁移能力分别下降了36.18%,49.46%,36.46%;COX-2 mRNA表达量下降90%,PTEN升高89.72%;与空白血清组比较,参芪抑瘤方组COX-2蛋白表达减弱;PTEN蛋白表达增强(P0.05)。结论:参芪抑瘤方药物血清通过影响COX-2,PTEN mRNA和蛋白表达,抑制MKN-45细胞的增殖,减弱其侵袭转移能力。     

黄芪多糖对胃癌细胞的生长抑制和促凋亡作用

目的研究黄芪多糖对胃癌细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法用RPMI1640培养液对低分化人胃腺癌细胞株MKN45、高分化人胃腺癌细胞株MKN28进行传代培养,取对数生长期细胞培养24h后分别予不同浓度的塞来昔布和黄芪多糖,空白阴性对照组只加培养液不加细胞。用噻唑蓝（MTT）法观察黄芪多糖及塞来昔布对胃癌细胞株MKN45和MKN28增殖的影响;用流式细胞术方法测药物作用后细胞凋亡和细胞周期变化。结果黄芪多糖和塞来昔布均可抑制胃癌细胞株MKN45和MKN28的增殖,效应呈浓度和时间依赖性,塞来昔布各浓度组加药24、48 h后,MKN45、MKN28均明显低于空白阴性对照组（P〈0.05,P〈0.01）;而黄芪多糖5～20 mg/mL范围内加药24、48 h后MKN45、MKN28均明显低于空白阴性对照组（P〈0.01）,而黄芪多糖2～2.5 mg/mL浓度组加药48 h MKN28低于空白阴性对照组（P〈0.05）。黄芪多糖可诱导MKN45细胞凋亡,阻滞MKN45细胞周期于G1期,但对MKN28细胞凋亡和细胞周期无明显影响;塞来昔布可诱导MKN45细胞凋亡,但对MKN28细胞凋亡及2种细胞的细胞周期均无明显影响。结论黄芪多糖能抑制胃癌细胞增殖,其机制之一是影响细胞周期使之阻滞于G1期,诱导细胞凋亡。     

胃癌组织中Hpa、bFGF及FGFR-2表达水平的研究

目的探讨胃癌组织中Hpa、bFGF及FGFR-2表达水平与胃癌发生、发展的关系。方法对55例胃癌、癌旁组织及正常胃组织应用免疫组化方法检测Hpa、bFGF及FGFR-2的表达水平并进行分析。结果对照组的bFGF、FGFR-2表达低于其余2组(P均<0.05);Hpa在胃癌组表达显著高于其他2组(P<0.01);bFGF、FGFR-2及Hpa的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关(P均<0.01)。结论bFGF、FGFR-2及Hpa可能在胃癌的浸润和转移中起重要作用,可作为胃癌生物学行为的重要指标。     

大黄素对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡的研究

目的：研究大黄素（Emodin）对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用。方法：用噻唑蓝（MTT）法观察Emodin对MKN45的生长抑制作用;用DNA Ladder凝胶电泳法、荧光染色法、流式细胞仪法分析Emodin的诱导凋亡作用。结果：与对照组相比,Emodin能明显抑制MKN45细胞的生长且与浓度、时间呈依赖性,其IC50（48小时）为（47.5±0.3）μmol/L;Emodin处理胃癌细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带;吖啶橙（AO）染色观察示细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成;流式细胞仪分析Emodin能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2/M期阻滞。结论：Emodin对人胃癌细胞MKN45有明显的生长抑制作用,且该作用与诱导细胞凋亡有关。     

基于SNAIL信号通路及肠道菌群研究密点麻蜥抑制胃癌肝转移的作用机制

目的 基于SNAIL信号通路及肠道菌群研究密点麻蜥Eremias multiocellata对胃癌肝转移的抑制作用及机制。方法 36只BALB/c裸鼠随机分为对照组和造模组,造模组脾脏注射HGC-27胃癌细胞,造模4周剖腹探查验证造模成功。随后将造模组随机分为模型组、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU,0.025 g/kg）组和密点麻蜥（2.6 g/kg）组,每组8只。对照组和模型组ig生理盐水,密点麻蜥组ig密点麻蜥水煎剂,5-FU组ip 5-FU,连续干预4周后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组裸鼠肝组织病理变化;采用Western blotting检测各组裸鼠肝组织SNAIL及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白表达;取末次给药2 h后各组裸鼠新鲜粪便进行16S rRNA高通量测序检测肠道菌群的变化。结果 与对照组比较,模型组裸鼠肝组织出现肝小叶破坏、肝组织坏死,中性粒细胞浸润,癌细胞核大深染;肝组织SNAIL、N-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.001）,E-caherin蛋白水平显著降低（P＜0.001）。与模型组比较,密点麻蜥组肝细胞排列趋于整齐,结构完整,癌组织灶变小;肝组织中SNAIL、N-cadherin蛋白表达水平显著降低（P＜0.001）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.001）。16S rRNA结果显示,与对照组比较,模型组裸鼠肠道菌群失调紊乱,厚壁菌门/拟杆菌门（Firmicutes/Bacteroidetes,F/B）值下降,经密点麻蜥干预后F/B值升高。门水平上,密点麻蜥主要对厚壁菌门进行调节,厚壁菌门在对照组中丰度占比40.9%,与对照组比较,模型组中厚壁菌门的丰度降低到26.4%。经密点麻蜥干预后厚壁菌门丰度提高到30.2%。属水平上,密点麻蜥主要对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群中差异菌属（拟杆菌属Bacteroides、梭状芽孢杆菌属Clostridia_UCG-014、副拟杆菌属Parabacteroides、幽门螺旋杆菌Helicobacter）发挥调节作用。结论 密点麻蜥可能通过降低SNAIL蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,降低N-cadherin蛋白表达,来抑制EMT发展进程,发挥对胃癌肝转移的抑制作用。此外,密点麻蜥通过调节厚壁菌门丰度,增加作用于癌细胞表面G蛋白偶联受体的短链脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFAs）含量,调节机体自身免疫相关菌属（拟杆菌属、梭状芽孢杆菌属、副拟杆菌属）,降低致病菌幽门螺旋杆菌的丰度,发挥对胃癌肝转移的抑制作用。     

裸鼠人胃癌细胞核转录因子NF—κBP^65蛋白与端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白的表达及关系

目的：通过观察胃癌细胞核转录因子NF-κBP^65蛋白与端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白的表达及关系,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机数字表法分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预对胃癌组织NF-κBP^65蛋白、hTERT蛋白表达的影响及相关性。结果：①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κBP^65蛋白的阳性表达与模型组相比,P〈0．05,有统计学意义;②消痰散结方中剂量组、5-Fu组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组比较明显降低,P〈0．05,有统计学意义;消痰散结方高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组有显著差异,P〈0．01;③胃癌细胞NF-κBP^65蛋白与hTERT蛋白表达呈显著正相关（r=0．929,P〈0．01）。结论：胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF—κB及高表达的hTERT蛋白,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF—κB活性,阻断了NF—κB对hTERT的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,从而阻断胃癌发展,控制胃癌复发与转移。