Hematopoietic-supportive effect of (2S, 3R)-ent-catechin on marrow-depressed mice

Hematopoiesis is an active process of cell proliferation, differentiation and release. It is the process during which hematopoietic stem cells (HSCs) proliferate and differentiate to mature blood cells under the effect of hemetopoietic growth factors (HGFs) in certain hematopoietic microenvironment. HSCs are sources of hematopoiesis of a body that can self-renew, differentiate to blood cells of every lineage and maintain the constancy of them. As the major tissue of hematopoiesis bone marrow is filled with all kinds of blood cells in various developmental stages. Under the normal conditions, the ordered proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells (HSC/HPC) depend on the regulation of cytokine network.     

栽培鸡血藤藤茎次生代谢产物的动态积累变化研究

【目的】研究栽培鸡血藤藤茎中次生代谢产物在不同生长期的动态积累变化趋势,为其采收期的合理制定提供科学依据。【方法】参照《中国药典》（2010年版一部）附录XA测定醇溶性浸出物的含量;采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,采用高效液相色谱法同时测定原儿茶酸、儿茶素及表儿茶素的含量。【结果】鸡血藤藤茎中醇溶性浸出物、总黄酮及指标性成分原儿茶酸、儿茶素和表儿茶素的含量均随着生长年限的增加呈递增的趋势;而1年中不同月份样品的醇溶性浸出物、总黄酮、表儿茶素的含量变化均呈抛物线状,7～9月含量达到峰值;儿茶素的含量则一直呈上升状态;7～9月采收的4～6年生鸡血藤样品中醇溶性浸出物已达到现行版《中国药典》的要求。【结论】初步建议栽培鸡血藤藤茎以7年生以上采收为宜,其最佳采收年限与采收月份有待进一步研究确定。     

趋化素样因子（CKLF1）对骨髓细胞增殖活性的研究

目的 研究趋化素样因子1（CKLF1）对造血功能的调节作用。方法 利用MTT法,检测CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中,对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用;并在兰固体培养基中,观察其对人低密度骨髓细胞集落形成的刺激作用。结果 COS－7细胞表达的CKLF1能明显促进人和小鼠骨髓细胞的增殖,并能促进人骨髓细胞的集落形成,与GM－CSF有协同刺激作用。结论 CKLF1能促进人和小鼠骨髓造血干／祖细胞的增殖和分化。     

密花豆扦插苗与种子苗的生长及光合特性研究

目的 探究密花豆(Spatholobus suberectus Dunn)扦插苗与种子苗的生长动态和光合特性差异.方法 通过盆栽及大田栽培试验,对同龄密花豆扦插苗与种子苗的株高、基径、成活率及光合特性进行对比分析.结果 在盆栽及大田试验中,密花豆扦插苗与种子苗的株高和基径均呈直线增大趋势,且种子苗的长势优于扦插苗.盆栽...     

VEGFR1阳性造血祖细胞簇与人大肠癌转移的关系

目的 观察血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)阳性造血祖细胞与人大肠癌转移的关系及机制.方法 将人大肠癌细胞株SW480/M5瘤块原位接种至裸鼠结肠,建立大肠癌原位移植肝转移裸鼠模型,应用FCM观察转移灶内VEGFR1阳性造血祖细胞与大肠癌细胞的数量与比例及其相互关系,应用Western blot观察转移相关因子的表达.结果 肿瘤转移灶及尚未形成转移的常见部位均可见VEGFR1阳性造血祖细胞细胞簇.并且与肿瘤转移的时间呈正相关,而无肿瘤裸鼠未见此细胞簇形成;在肿瘤转移过程中,基质金属蛋白酶9、基质细胞衍生因子1蛋白表达逐渐增强.结论 VEGFR1阳性造血祖细胞簇形成总是伴随大肠癌转移.可能促进转移相关因子表达,促成转移的发生.     

rhG-CSF联合rhTPO促进异基因造血干细胞移植后造血重建的临床研究

目的 探讨重组人粒细胞刺激因子(recombinant human-granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)和重组人血小板生成素(recombinant human-thrombopoietin,rhTPO)促进异基因造血干细胞移植后造血功能重建的作用.方法 选取15例异基因造血干细胞移植患者,其中同胞间全相合移植6例,非血缘全相合移植7例,半相合移植2例,于移植后 1d予以rhG-CSF(300μg/d)和rhTPO(15 000u/d)治疗,观察患者造血重建的时间和相关并发症发生情况.结果 患者于移植 15d( 8～ 20d)N＞0.5×109/L,移植 19d( 11～ 23d)PLT＞30×109/L,提示造血功能重建.移植 30d复查短串联重复序列(STR)检测,均提示重建造血为供者造血.随访至今,所有患者造血稳定重建.15例患者中10例出现感染、发热;15例患者均出现不同程度的皮下出血,多表现为皮肤淤点淤斑,2例患者出现鼻出血;3例患者在造血重建前夕出现全身骨痛.3例出现Ⅱ度以下急性移植物抗宿主病(GVHD),2例患者出现轻度的慢性GVHD.结论 rhG-CSF联合rhTPO促进异基因造血干细胞移植后造血重建疗效肯定,减少移植感染、出血等并发症的发生率,缩短层流病房住院日,减少血小板、红细胞等血液制品的输入量,降低移植费用.     

肾上腺素与rhG—CSF协同动员小鼠造血干祖细胞的研究

目的通过比较肾上腺素和重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）单独或联合应用动员小鼠外周血造血干祖细胞（HSPC）的效果,以了解肾上腺素对HSPC的动员作用,为临床制定更为优良的动员方案奠定实验方面的基础。方法BALB／c小鼠48只,随机分成4组,每组12只。A组作为对照组,皮下注射生理盐水（NS）100μl·d^-1;B组皮下注射rhG—CSF250μg·kg^-1·d^-1;C组腹腔注射肾上腺素2．5mg·kg^-1·d^-1;D组皮下注射rhG—CSF250μg·kg^-1·d^-1＋腹腔注射肾上腺素2．5mg·kg^-1·d^-1（rhG—CSF后3h）,各组均连续用药5天。动态观察各组小鼠外周血中自细胞数（WBC）、Lin^-c—kit^＋（KL）、Lin^-c—kit^＋Sca-1^＋（KSL）细胞比例的变化。结果D组外周血WBC数及KL、KSL细胞比例明显高于B组（P〈0．05）或C组及A组（P〈0．01）;B组外周血WBC数及KL、KSL细胞比例明显高于C组及A组（P〈0．01）;C组外周血WBC数明显高于A组（P〈0．01）,但KL、KSL细胞比例与A组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论肾上腺素可协同rhG—CSF参与HSPC的动员。     

粒细胞集落刺激因子联用激素和(或)免疫抑制剂动员供体小鼠外周血造血干细胞对其免疫系统的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联用激素和(或)免疫抑制剂动员供体小鼠外周血造血干细胞对其免疫系统的影响.方法:根据对供体C57BL/6小鼠动员方案不同分为4组,G-CSF组(250 μg/kg,连用4 d),G-CSF(250 μg/kg,共4 d) 甲泼尼龙组(100 mg/kg,第3天),G-CSF(250 μg/kg,共4 d) 甲泼尼龙(100 mg/kg,第3天) 环孢素A组(100 mg/kg,第3天)和PBS对照组.观测动员后供体小鼠T淋巴细胞对BALB/c小鼠脾细胞的单向混合淋巴细胞反应(MLR),ELISA法测定供体鼠脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平,RT-PCR半定量测定IFN-γ、IL-4的mRNA水平.结果:3个实验组MLR刺激效率分别为42%、21%和39%,与PBS对照组的68%相比有显著性差异(P＜0.01);各实验组与PBS对照组相比,培养上清中IFN-γ表达明显减低,IL-4、TGF-β1明显增高(P＜0.01),而各实验组之间无显著差异;RT-PCR半定量测定发现IFN-γ mRNA表达明显减低,IL-4明显增高(P＜0.01).结论:G-CSF联用激素和(或)免疫抑制剂动员供体小鼠外周血造血干细胞可降低其T淋巴细胞异基因反应性,改变其细胞因子分泌类型,可能易于诱导受体免疫耐受.     

Inducing effects of macrophage stimulating protein on the expansion of early hematopoietic progenitor cells in liquid culture

Background Macrophage stimulating protein （MSP） is produced by human bone marrow endothelial cells. In this study we sought to observe its effects on inducing the expansion of early hematopoietic progenitor cells which were cultured in a liquid culture system in the presence of the combination of stem cell factor （SCF）, interleukin 3 （IL-3）, interleukin 6 （IL-6）, granulocyte macrophage-colony stimulating factor （GM-CSF）, erythropoietin （EPO） （Cys） and MSP or of Cys and bone marrow endothelial cell conditioned medium （EC-CM）. Methods Human bone marrow CD34^＋ cells were separated and cultured in a liquid culture system for 6 days. Granulocyte-macrophage colony forming unit （CFU-GM） and colony forming unit-granulocyte, erythrocyte, macrophage, megakaryocyte （CFU-GEMM） were employed to assay the effects of different treatment on the proliferation of hematopoeitic stem/progenitor cells. The nitroblue tetrazolium （NBT） reductive test and hoechest 33258 staining were employed to reflect the differentiation and apoptosis of the cells respectively. Results MSP inhibited the proliferation of CFU-GM and CFU-GEMM in semi-solid culture and the inhibitory effect on CFU-GEMM was stronger than on CFU-GM. MSP inhibited the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators. Bone marrow （BM） CFU-GEMM was 2.3-fold or 1.7-fold increase or significantly decreased in either Cys＋EC-CM, Cys＋MSP or Cys compared with 0 hour control in liquid culture system after 6 days. Conclusion MSP, a hematopoietic inhibitor, inhibits the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators and makes the early hematopoietic progenitor cells expand in a liquid culture system.     

VEGF及CD34在外阴皮肤黏膜上皮内非瘤样病变及外阴上皮内瘤变中的表达

目的：探讨外阴真皮组织内血管形成及密度（MVD）改变与外阴皮肤黏膜上皮内非瘤样病变（NNEDV）及外阴上皮内瘤变（VIN）的关系。方法：血管内皮生长因子（VEGF），人原始造血细胞抗原（CD34）染色采用免疫组织化学S-P法。结果：外阴硬化性苔藓（LS）和VIN中VEGF高表达与正常皮肤比较均有显著差异（P〈0．05）。LS和VIN中MVD与正常皮肤比较均有显著差异（P〈0．05）。结论：LS组织中存在微循环障碍，局部缺血缺氧，代偿性刺激血管生成因子表达增高。     

细胞表面黏附分子在造血干细胞动员中的作用机制

目的　研究粒系集落刺激因子 (G CSF)进行干细胞动员时干细胞表面黏附分子的变化 ,从黏附分子角度说明G CSF的动员机制。方法　将重组人G CSF(惠尔血 )或生理盐水注射于小鼠皮下 ,每日两次 ,连续 7d ,收集G CSF使用前后骨髓和外周血单个核细胞 ,计数外周血Sca 1 干细胞数目和骨髓有核细胞数 ,同时分别检测细胞表面CD49d、CD44的表达和干细胞与骨髓基质蛋白黏附能力的变化。结果　重组人G CSF对小鼠有和人类相似的动员作用 ,使用G CSF 7d后外周血Sca 1 细胞数增高近 2倍 ,骨髓有核细胞数明显下降 ,同时骨髓和外周血单个核细胞表面CD49d表达以及细胞黏附能力都有所下降 ,而对照组无类似现象。结论　G CSF可能通过降低某些黏附分子的表达 ,削弱造血细胞与骨髓基质的黏附而产生动员效果     

粒细胞集落刺激因子对瓣膜置换患者肾功能、外周血内皮祖细胞和炎性因子的影响

目的观察接受心肺转流术(cardiopulmonary bypass,CPB)瓣膜置换手术的患者,应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)动员后,肾功能、外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)和炎性因子的变化,探讨动员剂G-CSF对CPB瓣膜置换术后患者肾功能、EPCs及炎性因子的影响。方法将40例患者随机分为治疗组(G-CSF,600μg/d,术前共7d)和对照组(不施加干预),每组20例。患者入院时(T1)、术后第1天(T2)、术后第3天(T3)以及术后第7天(T4)采集外周血,测定肌酐(serum creatinine,SCr)、胱抑素C(cystatine C,CysC),计算肾小球滤过率(glomerularfiltration rate,GFR);分离、培养EPCs、并测定其数量。检测2组患者血C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的水平。结果入院时,2组患者各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。术后第1天,2组GFR水平低于术前,其余指标均高于术前(P<0.05);治疗组炎性因子水平较对照组降低(P<0.05),GFR、SDF-1、EPCs数量较对照组升高(P<0.05)。术后第3天,2组患者GFR水平均达到最低谷,其余指标均高于术前(P<0.05);治疗组患者肾功能损害比对照组轻,SDF-1、EPCs数量较对照组明显升高(P<0.01),IL-6、TNF-α差异无统计学意义(P>0.05)。术后第7天,2组患者EPCs数量、SDF-1水平均持续增高,但治疗组比对照组变化更加显著(P<0.01)。SDF-1浓度与循环EPCs数量呈正相关,治疗组CRP比对照组明显降低(P<0.05)。结论 CPB患者术后肾功能在第3天明显降低,第7天逐渐恢复至术前水平。G-CSF可增高SDF-1的水平,有效动员CPB瓣膜置换患者外周血EPCs,亦可降低CRP,对术后肾功能起到保护作用。     

人巨细胞病毒对脐血多向祖细胞体外生长的影响及干预研究

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对脐血多向造血祖细胞(CFU-Mix)体外增殖的影响及黄芪对此的保护作用.方法采用甲基纤维素半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV-AD169感染的CFU-Mix集落数、抑制率、集落峰值及集落维持时间;用聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR技术检测集落细胞内HCMV-AD169DNA.在110感染组中加入黄芪,观察黄芪对HCMV-AD169感染的CFU-Mix集落增殖抑制的干预作用.结果 HCMV-AD169感染的CFU-Mix集落数较对照组明显减少(P＜0.05),集落数随病毒感染滴度的增高而减少,抑制率随病毒感染滴度的增高而逐渐增加;感染组集落维持时间较对照组明显缩短(P＜0.01),但各组集落峰值出现时间无明显差异(P＞0.05);用PCR技术在感染组集落细胞内检测到HCMV-AD169DNA;在110感染组中加入黄芪后,CFU-Mix集落数明显提高,集落增殖提高率为38.9%,集落维持时间较110感染组明显延长(P＜0.01),荧光定量PCR技术检测集落细胞内HCMV-DNA copies较110感染组明显减少.结论在体外HCMV-AD169对CFU-Mix生长和集落形成有明显的抑制作用,HCMV能直接感染多向造血祖细胞,此可能与临床HCMV感染引起贫血、血小板减少和粒细胞减少有关;黄芪在体外有明显的抗HCMV作用.     

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＩＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化疗药物联合应用的作用机理。研究结果表明：３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ）、三尖杉酯碱（Ｈ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异；ＧＭＣＳＦ、ＩＬ３均能增加ＶＰ１６、ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用；ＧＭＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不能增加３种化疗药物的细胞毒性     

G—CSF对颈动脉狭窄模型兔内皮祖细胞的动员作用

目的观察粒细胞集落刺激因子（Granuloeyte Colony Stimulating Factor,G—CSF）对动脉狭窄模型兔外周血内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells．EPCs）数量的影响。方法以颈动脉狭窄模型兔为研究对象,随机分为两组,G—CSF注射组（n=14）和对照组（n=10）,两组动物分别予以25μg/kg·d的G—CSF和等量的生理盐水腹部皮下注射,连续注射7d后,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞。将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,培养7天后贴壁细胞进行化学分析。激光共聚焦显微镜鉴定Dil—acLDL和HTC—UEA-1双染色阳性细胞为正在分化的EPCs。用倒置荧光显微镜进行细胞计数。结果G—CSF组外周血内皮祖细胞比对照组明显增多,两组差异有统计学意义（t=4．815P〈0．001）。结论短期应用G—CSF对颈动脉狭窄模型兔外周血内皮祖细胞有动员作用。     

人脐血基质细胞自发分泌多种造血生长因子的实验研究

目的探讨体外培养的人脐血基质细胞分泌血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、干细胞生长因子(stem cell factor,SCF)的能力.方法留取不同培养时相点的培养液上清,ELISA法检测上清中TPO、GM-CSF、SCF的浓度,并与骨髓基质细胞的培养上清液对照比较其特点.结果人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可分泌TPO、GM-CSF和SCF等造血生长因子,二者造血生长因子的分泌随着培养时间的延长而逐渐下降,其中人脐血基质细胞分泌TPO和SCF的高峰期出现在第7天,而GM-CSF的分泌则无高峰期的出现;通过与骨髓基质细胞分泌三种造血生长因子量进行对比发现,人脐血基质细胞SCF和GM-CSF的分泌量低于骨髓基质细胞,而TPO的分泌高于同期培养的骨髓基质细胞.结论人脐血基质细胞与骨髓基质细胞一样具有分泌造血生长因子,支持调控造血的作用.     

重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白单次给药对恒河猴造血细胞的动员作用

目的 研究重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白(GW003)对造血细胞的动员作用.方法 7只健康成年恒河猴单次皮下注射GW003 150 μg/kg,分别于给药前后不同时间检测外周血细胞数和进行造血细胞集落培养.结果 GW003对健康成年恒河猴造血祖细胞、白细胞、中性粒细胞、未成熟粒细胞及单核细胞均有明显的动员...     

硫培非格司亭在外周血造血干细胞移植中的应用观察

目的 探讨硫培非格司亭注射液和重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)注射液在外周血造血干细胞移植术后对刺激粒细胞生长的有效性及经济效应。方法 回顾性分析2018年4月～2019年4月我院收治的行外周造血干细胞移植术的患者70例,按照随机数字表法分为硫培非格司亭组和重组人粒细胞刺激因子组（ rhG-CSF组）,每组35例。在自体造血干细胞移植术后1 d或异基因造血干细胞移植术后5 d分别予硫培非格司亭注射液和重组人粒细胞刺激因子皮下注射。对比两组患者粒细胞生长速度,比较两组患者治疗期间的不良反应发生率及经济效应。结果 硫培非格司亭组和rhG-CSF组在粒细胞平均植活天数比较中无统计学意义（P＞0.05）;药物相关并发症骨关节肌肉疼痛、发热、皮损的发生率比较差异无统计学意义（P＞0.05）,但rhG-CSF组皮损例数多于硫培非格司亭组;粒细胞上升期骨关节肌肉疼痛发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。注射次数比较：硫培非格司亭组患者只需注射1次,rhG-CSF组患者需注射8～17次,平均注射14次。经济费用比较：硫培非格司亭组费用为3080元,rhG-CSF组平均费用为2876元。结论 硫培非格司亭注射液在外周血造血干细胞移植术后对粒细胞促升有效,其注射简单、方便,病员依从性及舒适度相较更高,可在外周血造血干细胞移植中推广应用。     

牛血小板衍生生长因子的提取及其生物活性研究

从新鲜牛血中提取出部分纯化的血小板衍生生长因子(PDGF),对其生物活性进行了观察。收集新鲜牛血小板,用加热100℃处理和CM—SephadexC—50离子交换层析法提取出PDGF,并用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析,发现PDGF有四种主要成分,分子量分别为70、30、27和15KD。植入兔角膜后见该PDGF可刺激毛细血管生长和成纤维细胞增殖,是一种耐热、耐酸、易被胰蛋白酶破坏、灭活的阳离子多肽。     

造血干细胞移植期间辐照成分血输注的疗效观察

目的：观察输注γ射线辐照成分血预防输血相关移植物抗宿主病(TA-GVHD)及输血效果。方法：观察HSCT术后60例患者输注经γ射线辐照的红细胞悬液共236U(2U／次)、新鲜机采法浓缩血小板共120个治疗量(10U／治疗量)，比较输血前后的外周血血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)和血小板计数(PLT)，观察输注后1个月患者有无皮肤、骨髓、肝肠等系统器官受损表现。结果：辐照成分血输注后24h，患者外周血Hb、RBC、PLT均明显升高，有显著性差异，所有患者均未出现TA-GVHD相关的脏器受损表现。结论：γ射线辐照成分血可以有效预防TA-GVHD，并达到升高血红蛋白含量，增加机体携氧能力；提高血小板计数．有效预防出血的目的。