三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护机制. 方法: MTT法检测细胞存活率;PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中Bax,Bcl-2的表达;ELISA法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的酶活性. 结果: 6.25,12.5,25,50,100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡均有一定保护作用,并呈剂量依赖关系;PI/Annexin V双染流式细胞术检测结果表明Aβ_1-42可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可显著降低细胞凋亡率.Western blot结果显示,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;ELISA分析显示不同剂量的三七皂苷R₁可抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞caspase-3和caspase-9的激活,但对caspase-8的激活没有影响. 结论: 三七皂苷R₁通过抑制线粒体相关的凋亡通路激活,减少Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.     

黄精丸对阿尔茨海默病大鼠大脑的抗氧化作用及Aβ1-42，APP蛋白表达的影响

目的:探讨黄精丸药方(Huangjingwan,HW)对阿尔茨海默病(AD)大鼠大脑的抗氧化作用及β-淀粉样多肽1-42(Aβ_(1-42)),淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法:SD大鼠随机分成正常组,假手术组,AD模型组,HW低、中、高剂量组(相当药丸剂量1,3,9 g·kg~(-1)·d~(-1)组)。给大鼠腹腔注射1. 25%D-半乳糖液(120 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续6周)后,再右侧脑室一次性注射Aβ_(1-42)10μg,制作大鼠AD模型;造模2周后各药物组大鼠灌胃相应剂量试验药物,假手术组及AD模型组大鼠灌胃给生理盐水1 m L,每天1次。灌胃持续8周。采用跳台实验评价各大鼠的学习记忆能力;体质量10%的负荷游泳实验测试各大鼠的体能耐力变化;比色法检测各大鼠大脑组织超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽还原酶(GR),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)抗氧化酶系活性,谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)含量变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各大鼠大脑组织白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Aβ_(1-42)与APP蛋白含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各大鼠大脑APP蛋白表达变化。结果:与正常组比较,AD模型组大鼠表现出明显的痴呆状态,少动易呆卧,学习反应时间延长,学习记忆错误次数显著增多,体能衰减明显,大脑内抗氧化酶(SOD,GR,GSH-Px)活性及抗炎因子GSH水平显著降低,炎症因子MDA,IL-1β,TNF-α水平显著升高,Aβ_(1-42)蛋白含量显著升高,APP蛋白含量显著下降(P 0. 01)。与AD模型组比较,HW低、中、高剂量均可改善AD大鼠的痴呆症状,提高学习记忆成绩,改善机体虚弱、提高体能,升高大脑内SOD,GR,GSH-Px活性及抗炎因子GSH水平,降低MDA,IL-1β,TNF-α水平,并能降低大脑内Aβ_(1-42)及升高APP蛋白水平(P 0. 05,P 0. 01);且1～9 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量范围内的HW,随剂量增加,药效作用越明显。结论:HW有防治AD的功能,这一作用与HW可以增强脑内抗氧化系统功能、降低神经炎症反应、降低氧化应激引发的Aβ_(1-42)沉积、维持APP蛋白表达水平等有关。     

芍药苷对纤维状Aβ_(1-42)介导的血脑屏障体外模型损伤的影响

目的:探究芍药苷对纤维状Aβ1-42介导的血脑屏障体外模型损伤的影响。方法:(1)利用MTT法检测芍药苷对Aβ1-42介导的b End.3细胞活力的影响;(2)利用免疫组化法鉴定原代提取的星形胶质细胞;(3)利用b End.3细胞与原代星形胶质细胞体外非接触式体外共培养模型,通过测定各组透过共培养模型的荧光素钠强度,评价芍药苷对纤维状Aβ1-42介导的血脑屏障体外模型通透性的影响。结果:与模型组相比,芍药苷低、中、高剂量组能显著提高b End.3细胞活性,差异均具有统计学意义(P0.05),其中低、中剂量组的保护作用与芍药苷浓度成正相关,而高剂量组有所下降;芍药苷低、中、高剂量组均能降低血脑屏障的通透性,而低、中剂量组与模型组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷对Aβ1-42诱导的血脑屏障通透性增加具有明显的抑制作用。     

黑逍遥散对AD模型小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE表达的影响

目的:研究黑逍遥散对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)小鼠海马区β淀粉样多肽1-42(β-amyloid 1-42peptide,Aβ1-42),糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),脑啡肽酶(neprilysin,NEP),胰岛素抵抗酶(insulindegrading enzyme,IDE)表达的影响。方法:42只APP/PSI双转基因小鼠称体质量后,按随机原则分为4组,分别为模型组,阳性药组(盐酸多奈哌齐,3. 25 mg·kg-1),黑逍遥散高、低剂量组(6,3 g·kg-1)。10只同月龄、同种系的野生型C57BL/6J小鼠为正常组。连续灌胃12周后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态改变,采用免疫组化技术分别检测小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE蛋白的表达。结果:治疗3个月后,与正常组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期均延长,跨原平台次数减少(P 0. 01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著增强,NEP与IDE蛋白阳性表达显著减弱(P 0. 01),HE染色显示AD模型小鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,用药各组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著减弱,NEP与IDE蛋白阳性表达显著增强(P 0. 05,P 0. 01),HE染色显示各治疗组小鼠海马神经细胞损伤减轻。结论:黑逍遥散能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力,可能与调节Aβ在海马区的异常沉积和降解作用等方面来减轻AD小鼠认知能力损伤有关。     

黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的体外血脑屏障模型损伤的影响及机制探究

目的探究黄芪甲苷对纤维状Aβ_(1-42)诱导的体外血脑屏障(BBB)模型损伤的影响及可能机制。方法制备Aβ_(1-42)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞b End.3和原代大鼠星形胶质细胞As非接触式共培养BBB模型,分为对照组、模型组(Aβ_(1-42)30μmol/L)及黄芪甲苷低、高剂量(50、200μmol/L)组;利用噻唑蓝(MTT)法检测黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞活力的影响;通过检测荧光素钠透过体外BBB模型的量鉴定BBB的通透性;Western blotting法检测细胞凋亡执行蛋白半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)、活化的半胱天冬蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平以及BBB内皮细胞间相关连接蛋白细胞质透明带蛋白-1(ZO-1)、Claudin-5、Occludin的表达水平。结果 MTT结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷低、高剂量组均能显著提高b End.3细胞活性(P0.001),且保护作用与黄芪甲苷浓度呈正相关;荧光素钠通透性实验结果显示,与模型组相比较,黄芪甲苷预处理可显著降低BBB的通透性(P0.001)。Western blotting结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷预处理后,cleaved Caspase-3/Caspase-3显著降低,ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达水平显著增加(P0.001)。结论黄芪甲苷可能是通过抑制Aβ_(1-42)诱导的脑微血管内皮细胞b End.3的凋亡及增加其连接蛋白表达而发挥BBB保护作用。     

39个中药材提取物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用筛选研究

以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,建立茁淀粉样蛋白（Aβ_{25-35）诱导细胞损伤的阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）体外细胞筛选模型,并将其应用于筛选39个中药材提取物中的抗神经细胞损伤活性组分。方法：采用CCK-8法进行活性初筛,CCK-8法和Hoechst33342/PI双染色分析法复筛活性组分。结果：初筛和复筛结果一致表明,39个药材提取物中黄柏40%乙醇部位（HB40）和95%乙醇部位（HB95）有较好的抗Aβ损伤活性。结论：提示黄柏有潜在的治疗抗阿尔茨海默病的药用价值。}     

黑逍遥散对Aβ25-35诱导AD大鼠模型脑组织和血清SOD,GSH-Px及MDA的影响

目的: 观察黑逍遥散对β淀粉样蛋白(Aβ_25-35)诱导阿尔芡海默病(AD)模型大鼠脑组织和血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)的影响,探讨黑逍遥散防治AD的作用及其机制。 方法: 雄性SPF级SD大鼠110只,先按随机数字表挑选16只大鼠作为假手术组,其余大鼠手术7 d后进行水迷宫测试,将测试合格的大鼠再按照随机数字表法分为5组:模型组、阳性对照组、黑逍遥散高、中、低剂量组,每组14只。假手术组14只。采用Aβ_25-35海马区注射诱发大鼠脑内神经元损伤,复制大鼠AD模型;造模后7 d,黑逍遥散各组大鼠分别按低、中、高剂量(4.2,8.50,17.0 g·kg^-1·d^-1)ig给药,阳性对照组给予石杉碱甲片溶液0.02 mg·kg^-1·d ig,模型组、假手术组ig给予等容量双蒸水,每日上午1次,连续治疗28 d。末次给药后处死大鼠并采集血清和脑标本,比色法测大鼠血清和脑匀浆SOD,MDA,GSH-Px活性; 结果: 与假手术组比较,模型组大鼠血清和脑组织匀浆中的SOD,GSH-Px显著降低,MDA含量显著增高;与模型组比较,黑逍遥散能显著升高Aβ_25-35诱导AD模型大鼠血清和脑组织中SOD 与GSH-Px活性、降低MDA含量(P<0.05)。 结论: 黑逍遥散通过抗氧化作用起到保护AD 模型大鼠的作用。     

二苯乙烯苷调控CREB/BDNF信号通路对Aβ25-35损伤的小鼠神经元突触的保护作用

目的:研究中药何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)损伤的小鼠海马神经元的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:小鼠海马神经元细胞分离自新生48 h内胎鼠大脑海马,培养9 d待神经元成熟后,采用免疫荧光法对其进行鉴定。将培养成熟的神经元细胞分为正常组、模型组(Aβ25-35孵育造模)和TSG组(Aβ25-35孵育造模后,分别加入TSG 6.25,12.5,25,50,100μmol·L~(-1))。细胞增殖毒性检测(CCK-8)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞活性,免疫荧光法检测突触素-1(SYN-1)蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测突触后膜致密蛋白-95(PSD-95)和突触体素(SYP)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA的表达,免疫荧光法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CREB,磷酸化CREB(p-CREB)和BDNF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低,LDH释放量显著增高(P0.01),SYN-1,PSD-95和SYP的含量明显降低(P0.05,P0.01),p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达明显下调(P0.05,P0.01);与模型组比较,不同浓度TSG均可提高细胞存活率,降低LDH释放量(P0.05,P0.01),TSG对Aβ25-35造模的小鼠海马神经元细胞的最适治疗浓度为25μmol·L~(-1); 25μmol·L~(-1)TSG能够显著增强SYN-1的表达量(P0.01),明显提高PSD-95和SYP的含量(P0.05);上调p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达(P0.05,P0.01),但对CREB mRNA及蛋白的表达无显著影响。结论:TSG对Aβ25-35损伤的小鼠海马神经元突触具有保护作用,其机制可能与促进CREB的磷酸化使p-CREB表达增多,并促进神经营养因子BDNF的释放有关。     

贯叶金丝桃素对AD模型小鼠学习记忆能力及海马组织中Aβ_(1-42),βAPP及BACE1蛋白表达的影响

该文研究贯叶金丝桃素(HF)对5月龄APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力及海马组织中β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、β淀粉样前体蛋白(βAPP)及β位点剪切酶1(BACE1)蛋白表达的影响,并初步探讨其作用机制。将5月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(12 mg·kg-1·d-1)及HF高、中、低剂量组(600,300,150 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组15只;另选15只同周龄同背景C57BL/6J小鼠设为正常对照组。药物使用前均稀释相同体积,采用灌胃给药,正常组及模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,连续给药7个月。Morris水迷宫法检测AD模型小鼠学习记忆能力的变化,免疫组织化学方法和Western blot技术测定Aβ1-42,βAPP及BACE1的蛋白表达水平。Morris水迷宫结果提示,与正常组相比,模型组小鼠的学习记忆能力显著下降(P0.01);与模型组相比,HF各组及罗格列酮组小鼠学习记忆能力均有提高(P0.01或P0.05);免疫组织化学和Western blot技术检测结果表明,与正常组相比,模型组小鼠海马CA1区Aβ_(1-42),βAPP及BACE1蛋白表达均明显增加(P0.01);与模型组相比,HF各组及罗格列酮组小鼠海马CA1区Aβ_(1-42),βAPP及BACE1蛋白表达均有减少(P0.01或P0.05)。HF改善AD模型小鼠学习记忆能力的机制可能是通过抑制脑内βAPP及BACE1蛋白的表达,从而减少AD模型小鼠脑内Aβ_(1-42)蛋白的生成及淀粉样斑块沉积。     

补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1(TGF-β1)/骨形成蛋白-4(BMP-4)诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:应用TGF-β1/BMP-4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖。细胞分为正常组(10%正常大鼠血清),诱导增殖组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4的10%正常大鼠血清),4%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,6%正常大鼠血清及4%补肺益肾大鼠血清),6%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,4%正常大鼠血清及6%补肺益肾大鼠血清)及8%补肺益肾方含药血清组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,2%正常大鼠血清及8%补肺益肾大鼠血清)。24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,Brd U)法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1),结缔组织生长因子(CTGF),分化抑制因子-1(ID-1)和ID-2 mRNA的表达。结果:TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加(P0.05),补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8%浓度显著抑制细胞增殖(P0.01)。TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达(P0.05),8%补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导的p-Smad2/3表达(P0.05)。TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加(P0.01),8%补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达(P0.05)。结论:补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径。     

转化生长因子β1刺激大鼠肺成纤维细胞增殖的体外研究

目的: 探讨转化生长因子β₁(TGF-β₁)对大鼠肺成纤维细胞体外增殖的影响。 方法: 体外原代及传代培养SD大鼠肺成纤维细胞,传至第4代,进行细胞增殖实验。细胞随机分为5组,即无血清细胞基础培养液(DMEM)组、分别含10.0,5.0, 2.5, 1.25 μg·L^-1 TGF-β₁ DMEM组。分别在24, 48, 72 h 3个不同刺激时间点应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察SD大鼠肺成纤维细胞增殖情况。进行统计学方差分析及多重比较,探讨TGF-β₁刺激大鼠肺成纤维细胞增殖的最佳浓度和最佳时间点。 结果: 24 h时间点各组数据经方差分析,差异无统计学意义。48 h时间点各组数据结果进行非参数检验,P<0.05,差异有统计学意义。72 h时间点各组数据结果进行方差分析,P<0.05,差异有统计学意义;进一步进行多重比较:与空白组比较,TGF-β₁ 10.0, 2.5 μg·L^-1组(P<0.05),TGF-β₁ 1.25, 2.5 μg·L^-1组(P<0.01);其余各组比较均无显著差异。 结论: TGF-β₁刺激质量浓度2.5 μg·L^-1, 作用于大鼠肺成纤维细胞72 h,细胞增殖显著。     

柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响

目的:探讨柚皮素对β淀粉样蛋白(Aβ)_(25-35)损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响及其与雌激素受体(ER)及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用Aβ_(25-35)干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、柚皮素(400,40,4,0.4,0.04,4×10~(-3),4×10~(-4),4×10~(-5)μmol·L~(-1))组、阳性药雌二醇(E2)(1 nmol·L~(-1))+Aβ_(25-35)组、柚皮素(0.4,0.04,4×10~(-3),4×10~(-4),4×10~(-5)μmol·L~(-1))+Aβ_(25-35)组,E2+Aβ_(25-35)+ER拮抗剂(ICI182780)(1μmol·L~(-1))组,柚皮素+Aβ_(25-35)+ICI182780组,E2+Aβ_(25-35)+PI3K阻断剂(LY294002)(50μmol·L~(-1))组、柚皮素+Aβ_(25-35)+LY294002组。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖率,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)作为荧光探针检测细胞中总活性氧(ROS)含量,硫代巴比妥酸(TBA)法和氧化酶法分别检测细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中磷酸化Tau蛋白/总Tau蛋白(p-Tau/t-Tau)的表达。结果:根据MTT实验结果,筛选0.4μmol·L~(-1)为柚皮素最佳有效浓度;与空白组比较,模型组细胞增殖率显著降低(P0.01),与模型组比较,柚皮素+Aβ_(25-35)组细胞增殖率显著升高(P0.01)。此外,与空白组比较,模型组细胞中ROS,MDA的含量及p-Tau/t-Tau表达显著升高(P0.01),SOD活性显著降低(P0.01),与模型组比较,柚皮素+Aβ_(25-35)组细胞中ROS,MDA的含量及p-Tau/t-Tau表达显著降低(P0.01),SOD活性显著升高(P0.01),与柚皮素+Aβ_(25-35)组比较,ICI182780,LY294002的加入显著逆转了柚皮素在上述指标中的作用(P0.01)。柚皮素的作用效果与E2相似。结论:柚皮素可提高细胞增殖率,对Aβ_(25-35)损伤PC12细胞有保护作用,其作用可能是通过激活ER及PI3K/Akt信号通路降低Aβ_(25-35)损伤PC12细胞中ROS,MDA含量及p-Tau/t-Tau表达、促进SOD活性来实现的。     

氧化苦参碱对TGF-β1诱导心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的新生SD乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:胰酶消化差速贴壁法分离纯化SD乳鼠原代心肌细胞。实验分为4组,包括正常组,模型组[转化生长因子-β_1(TGF-β_1),20×10-5g·L~(-1)],OMT高剂量组(TGF-β_1+0.1 g·L~(-1)OMT),OMT低剂量组(TGF-β_1+0.05 g·L~(-1)OMT)。OMT预保护2 h后,采用TGF-β_1孵育48 h建立心肌细胞损伤模型。利用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,生化法检测乳酸脱氢酶(LDH)外漏量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测p38,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK),c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的表达水平。结果:TGF-β_1显著引起心肌细胞损伤,OMT(0.1,0.05 g·L~(-1))能够抑制TGF-β_1诱导的心肌细胞存活率下降及LDH外漏量增加。OMT高剂量组(0.1 g·L~(-1))可下调TGF-β_1诱导的心肌细胞p-p38,p-ERK1/2,p-JNK的蛋白表达,但对p38,JNK,ERK1/2总蛋白表达无影响。结论:OMT对TGF-β_1诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与其抑制p38,ERK1/2,JNK蛋白的磷酸化有关。     

三七皂苷对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:研究三七皂苷(PNS)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的大鼠肾小管细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用,并从沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/TGF-β_1/Smad通路分析其可能机制。方法:在DMEM培养基中,用10%胎牛血清培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常组,TGF-β_1组(5μg·L~(-1)),白藜芦醇组(50 mg·L~(-1)),SIRT1阻断剂EX527组(10μmol·L~(-1)),PNS组(100 mg·L~(-1)),EX527+PNS组(EX527 10μmol·L~(-1),PNS 100 mg·L~(-1)),48 h后收集细胞;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测SIRT1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏附蛋白(E-cadherin),TGF-β_1,Smad3,Smad4 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1,α-SMA,E-cadherin,TGF-β_1蛋白表达。结果:与正常组比较,TGF-β_1组α-SMA mRNA及蛋白表达明显增多(P 0. 05),E-cadherin表达显著减少(P 0. 01);与TGF-β_1组比较,PNS,白藜芦醇组,E-cadherin mRNA及蛋白表达均显著增加(P 0. 01),α-SMA表达显著减少(P 0. 01),EMT发生被抑制,同时,SIRT1表达显著增加(P 0. 01),TGF-β_1,Smad3,Smad4表达显著降低(P 0. 01)。在SIRT1阻断剂EX527的干预下,PNS则不能发挥明显抑制作用。结论:PNS可以阻止TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞EMT的发生,其机制可能是通过激活SIRT1进而抑制TGF-β_1/Smad通路实现的。     

木犀草素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:研究木犀草素对β淀粉样肽(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及其机制。方法:从BALB/c乳鼠大脑皮层培养原代神经元,实验设计为对照组,模型组(7μmol·L-1Aβ25-35),不同木犀草素给药治疗组(10~90μmol·L-1),孵育12 h,水溶性四氢唑盐(WST-1)法检测细胞存活率,Hoechst 33258/碘化丙啶(PI)双染检测细胞凋亡,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达,荧光酶标仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,ELISA法检测细胞上清中白介素(IL)-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:模型组细胞存活率为48.5%,与对照组相比显著降低(P0.05)。10,30,60,90μmol·L-1木犀草素给药组细胞存活率分别为60.8%,62.4%,71.7%,73.6%,选取60μmol·L-1木犀草素为后续实验浓度。60μmol·L-1木犀草素可以明显提高Aβ25-35损伤神经元的细胞活力,由48.5%增至71.7%(P0.01),并且能抑制神经元的凋亡。与模型组相比较,降低凋亡蛋白Caspase-3的过表达(P0.01);降低细胞内ROS,由模型组100.4%降至64.2%(P0.01)。与模型组相比,调节抗炎因子IL-10,给药组IL-10上调至634.8 ng·L-1,下调促炎因子TNF-α至176.7 ng·L-1(P0.01)。结论:木犀草素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能是抑制ROS水平,调节炎症因子从而达到抗凋亡作用。     

积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所致的PC12细胞损伤模型及SAMP8小鼠脑内SOD, GSH-Px的影响

目的：研究积雪草乙酸乙酯提取物对β淀粉样蛋白25-35片段（Aβ_25-35）所致的PC12细胞损伤模型及快速老化模型小鼠（SAMP8）脑内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的影响。方法：细胞以1×10⁴个/mL密度接种,预防实验在接种24 h后同时给予含不同质量浓度的药物培养液和终浓度为10 μmol·L^-1的Αβ_25-35溶液,治疗实验在接种24 h后给予终浓度为10 μmol·L^-1的Αβ_25-35溶液,24 h后给予含不同质量浓度的药物培养液,作用72 h后采用MTT法检测积雪草乙酸乙酯提 取物对Aβ_25-35片段所造成的PC12细胞老年性痴呆（AD）损伤模型的预防和治疗作用;Hoechst 33258荧光显微镜染色法观察积雪草乙酸乙酯提取物作用Aβ_25-35片段所致PC12细胞AD损伤模型的形态学变化,SAMP8）40只随机分为模型对照组、积雪草乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组（以生药量计为40,20,10 g·kg^-1）和石杉碱甲组（0.386 mg·kg^-1）,8只/组,连续ig给药2个月后,ELISA法测定积雪草乙酸乙酯提取物对SAMP8大脑组织SOD和GSH-Px的影响。结果：Aβ_25-35片段所致的PC12细胞AD模型的预防和治疗实验中,不同浓度的积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ_25-35片段所致PC12细胞AD损伤有不同程度的保护作用;荧光显微镜观察到用药组的凋亡细胞数少于模型对照组与MTT的结果相符;ELISA结果显示除低剂量组外,其他各组的SAMP8大脑组织的SOD均高于模型对照组（P<0.05或P<0.01）,中剂量组和石杉碱甲组SAMP8大脑组织的GSH-Px比模型对照组高（P<0.05或P<0.01）。结论：积雪草乙酸乙酯提取物在体外对由Aβ_25-35片段所致的PC12细胞损伤有较好的保护和治疗作用,并能通过提高SAMP8脑内SOD,GSH-Px水平起到抗氧化,清除体内自由基而延缓衰老的作用。     

丹皮酚对急性心肌梗死模型大鼠心肌病理改变及TGF-β1,CollagenⅢ表达的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对急性心肌梗死模型大鼠心肌病理改变及转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)表达的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠,采用左冠状前降支(LAD)结扎法制作在体大鼠急性心肌梗死模型,记录结扎前及结扎后10,20,40,60,120 min,24 h心电图变化,测量各个时点ST段的偏移幅度并进行统计学分析,将造模成功后的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组;另有只穿线不结扎的假手术组,共6组,丹皮酚低、中、高剂量组分别给予ip 8.0,12.0,16.0 mg·kg~(-1)剂量的丹皮酚注射液,假手术组与模型组每天ip等体积生理盐水,卡托普利组用蒸馏水稀释其片剂碾成的药粉,给予ig 10.0 mg·kg~(-1),所有干预均1次/d;28 d后取材,HE染色观察心肌组织病理生理学改变情况,采用免疫组织化学法检测左室梗死区TGF-β_1和CollagenⅢ蛋白的表达。结果:HE染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠左室病理生理学改变显著,梗死灶边缘部分心肌细胞发生肥大、伸长,左心室壁部分心肌凝固性坏死,凋亡细胞胞核固缩、胞质伊红深染,另有部分组织发生疏松水肿,与模型组比较,各治疗组大鼠心肌细胞病理改变均不同程度减轻;免疫组织化学染色结果显示:模型组与假手术组比较,TGF-β_1及collagenⅢ蛋白的表达明显增多(P0.01);治疗组各组及卡托普利组与模型组比较,TGF-β_1及collagenⅢ蛋白表达均降低(P0.01,P0.05)。结论:丹皮酚可降低心肌梗死大鼠心肌的病变程度,改善心室重构及心功能,其作用机制可能是通过降低心肌组织中TGF-β_1及collagenⅢ的表达来实现的。     

柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨柴胡疏肝散对肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用机制。方法:60只Wistar大鼠被随机均分为6组:正常组、模型组、柴胡疏肝散高、中、低剂量组、柴胡疏肝散预防组。除正常组外,其余各组均采用猪血清ip诱发HF,0.5 m L/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成HF。预防组于造模同时给药(以柴胡疏肝散6.3 g·kg-1),柴胡疏肝散高、中、低剂量组[(12.6,6.3,3.15)g·kg-1]于造模第6周给药,连续10周。采用RT-PCR法检测各组肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4和Smad7的mRNA表达,免疫组化法分别检测肝组织TGF-β1,磷酸化Smad 2/3(p-Smad 2/3)和Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β1,Smad2,Smad3的mRNA和TGF-β1,p-Smad 2/3蛋白表达均显著增加(均P0.01),Smad7基因表达显著降低(均P0.01);与模型组比较,柴胡疏肝散中剂量组TGF-β1和Smad3 mRNA表达均显著降低,p-Smad 2/3和TGF-β1蛋白表达显著减弱(P0.05,P0.01),Smad7基因表达显著增加(P0.01)。结论:柴胡疏肝散有明显的抗HF作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

三七皂苷通过抑制自噬减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨三七皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）抗转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的肾小管上皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养NRK-52E肾小管上皮细胞,分为空白组、TGF-β₁组、TGF-β₁+12.5 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+25 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+50 mg·L^-1 PNS组,PNS干预48 h,收集细胞及上清,采用倒置显微镜观察细胞形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白、自噬相关蛋白表达;流式液相多重蛋白定量技术检测炎症因子含量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导后细胞呈梭形改变且呈明显的EMT表现,即E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显下调（P<0.05）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达明显上调（P<0.05）,PNS处理后,大部分细胞形态趋向正常并逆转EMT的发生。同时,与空白组比较,TGF-β₁组肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显升高,IL-10水平下降,凋亡率增加（P<0.05）,PNS作用后,TNF-α水平下降,IL-10水平升高,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。并且TGF-β₁能明显上调肾小管上皮细胞自噬相关蛋白Beclin1和自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）的表达（P<0.05,P<0.01）,而PNS抑制其表达。结论 PNS对TGF-β₁诱导的肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制自噬来减轻炎症和凋亡,进而抵抗TGF-β₁诱导的损伤。     

β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导星形胶质细胞活化所致PC12细胞损伤的保护作用研究

该文探讨β-细辛醚对Aβ1-42诱导星形胶质细胞活化所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制,为β-细辛醚在阿尔兹海默病(Alzheimer’s diease,AD)防治中的应用提供实验依据。首先,采用实时无标记动态细胞分析技术(Real time cell analysis,RTCA)构建RA-h/PC12共培养体系,实时动态观察Aβ1-42诱导星形胶质细胞损伤后对共培养体系中PC12细胞存活率的影响,根据系统自动生成的存活率曲线和参数选出最佳的药物干预时间,采用不同浓度的β-细辛醚对星形胶质细胞进行干预,观察共培养体系中PC12细胞存活率的改变;其次,采用MTT法检测Aβ1-42作用于RA-h对PC12细胞存活率的影响以及β-细辛醚的干预效应,验证RTCA的检测结果;进一步采用ELISA法检测下室培养液中IL-1β,TNF-α,BDNF的水平;Western blot法检测PC12细胞NF-κB的活性和ERK,p38,JNK磷酸化水平。结果显示,β-细辛醚(55.5 mg·L-1)能显著减缓Aβ1-42诱导的RA-h活化引起的PC12细胞存活率下降(P0.01),显著降低下室培养液中IL-1β,TNF-α的水平和PC12细胞ERK,p38,JNK磷酸化水平(P0.01);β-细辛醚(166.7 mg·L-1)能促进下室培养液中BDNF的释放(P0.05)。以上结果表明,Aβ1-42诱导RA-h活化并释放IL-1β,TNF-α等炎症因子加剧PC12细胞的损伤;β-细辛醚能降低IL-1β,TNF-α和促进BDNF的释放,抑制PC12细胞NF-κB的活性和ERK,p38,JNK磷酸化水平。