肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠治疗肝豆状核变性的效果分析

〔摘 要〕 目的：探讨肝豆汤加减联合二巯基丙磺酸钠治疗肝豆状核变性患者的安全性及疗效性。方法：选取广东药科 大学附属第一医院于 2018 年 1 月至 2019 年 12 月期间收治的 86 例肝豆状核变性患者,随机分为对照组与观察组,各 43 例。 其中观察组给予肝豆汤加减联合二巯基丙磺酸钠进行干预治疗,对照组单独给予二巯基丙磺酸钠治疗,对两组的临床疗效 及安全性进行比较。结果：治疗前两组患者的 Berg 平衡量表（BBS）评分与尿酮水平比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 治疗后观察组患者的 BBS 评分与尿酮水平改善程度优于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;观察组患者不良反应 共发生 6 例（13.95 %）低于对照组的 13 例（30.23 %）,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：肝豆汤加减联合二巯 基丙磺酸钠治疗肝豆状核变性具有明显的改善神经功能、改善肝功能、提高驱铜疗效作用,并可有效防止单独西药驱铜治 疗引起的白细胞减少。     

肝豆汤联合DMPS治疗对肝豆状核变性门脉血流动力学的影响

目的:观察肝豆汤联合DMPS(二巯基丙磺酸钠)治疗对肝豆状核变性患者门脉血流动力学指标门静脉内径(PVD)、门静脉最大血流速度(PVX)、脾静脉内径(SVD)、脾静脉最大血流速度(SVX)、门静脉血流量(PVFV)、脾静脉血流量(SVFV)的影响及临床意义。方法:将61例患者随机分为3组,A组采用DMPS+肝豆汤治疗,B组采用肝豆汤治疗,C组采用DMPS治疗,并一律给予本院规定的低铜饮食及常规保肝治疗。分别观察治疗前后门脉血流动力学指标PVD、PVX、SVD、SVX、PVFV、PVFV水平变化及24h尿铜水平。结果:治疗后3组PVD均缩小,而尤其以A组改善明显(P0.01);治疗后组间比较,A组与B组、C组比较,差异有显著性意义(P0.05)。治疗后SVD宽度A组、B组与治疗前比较,差异均有显著性意义(P0.05);C组治疗前后比较,差异无显著性意义(P0.05);治疗后C组与A组比较,差异有显著性意义(P0.05);B组与A组比较,差异无显著性意义(P0.05)。与治疗前比较,各组治疗后PVX、SVX变化均不明显,差异无显著性意义(P0.05)。与治疗前比较,各组PVFV均有显著下降,其中以A组改善最为明显(P0.01);组间比较,治疗后A组与B组、C组比较,差异均有显著性意义(P0.05)。与治疗前比较,各组SVFV均有显著改善,其中以A、B 2组改善最为明显(P0.01);治疗后A组与C组比较,差异有显著性意义(P0.05)。治疗后各组尿铜水平(取6疗程中尿铜的平均值)均较治疗前显著改善(P0.01),治疗后各组组间尿铜水平比较,差异也有显著性意义(P0.05),其中以B组最低,与A组、C组比较,差异均有非常显著性意义(P0.01)。结论:肝豆汤联合DMPS治疗肝豆状核变性疗效确切。     

肝豆灵联合多巴丝肼治疗湿热内蕴型肝豆状核变性伴震颤的临床观察

目的 观察肝豆灵联合多巴丝肼治疗湿热内蕴型肝豆状核变性(wilson’s disease, WD)伴震颤的临床疗效和安全性。方法 选取WD伴震颤患者,采用随机数字法将年龄在20～50岁之间的30例湿热内蕴型WD伴震颤患者分为对照组15例和治疗组15例。在常规排铜治疗上,对照组给予多巴丝肼口服,治疗组在对照组方案基础上加用肝豆灵口服,2组总疗程为4周,治疗后对比2组患者的临床疗效。观察治疗前后统一Wilson分级量表(UWDRS)、中医证候积分、血常规和肝肾功能指标。结果 治疗后统一Wilson分级量表(UWDRS)、中医证候积分均低于治疗前(P<0.05)。组间比较,治疗组优于对照组(P<0.05);治疗后组间比较提示治疗组在治疗后总有效率为86.67%,对照组为66.67%,治疗组优于对照组(P<0.05);2组不良反应比较,差异无统计学意义(P<0.05)。结论 肝豆灵联合多巴丝肼治疗湿热内蕴型WD伴震颤患者能提高临床疗效和改善中医证候,且疗效优于多巴丝肼单用。     

中西医结合治疗对脑型肝豆状核变性患者记忆力影响的研究

目的探讨中西医结合治疗对脑型肝豆状核变性(HLD)患者记忆力的影响。方法30例脑型HLD患者给予中药肝豆汤配合二巯基丙磺酸钠治疗2个月后,分别用韦氏成人记忆量表(WAMS)测定,对其记忆力变化进行观察,并选30例正常人为健康对照组。结果经中西医结合治疗后患者记忆力(1→100、100→1、累积、图片、触觉、全量表分、记忆商数)较治疗前显著提高。结论铜离子在HLD患者脑内沉积可损害记忆;早期及时的治疗对脑型HLD患者记忆力的恢复是有帮助的。     

肝豆汤治疗肝豆状核变性78例临床舌象观察

目的观察分析肝豆状核变性（HLD）患者常见舌象特征及其规律在HLD患者中医临床辨证施治中的意义。方法根据所收集的HLD流行病学观察资料,将其中较常见的舌象进行统计学分析。结果78例HLD舌象具有一定的特征。结论HLD中医证候的舌象可为HLD的中医辨证施治提供一定的依据。     

大黄肝豆汤联合青霉胺治疗肝豆状核变性的疗效观察

目的探讨中西医结合治疗肝豆状核变性的疗效及机制。方法将确诊为肝豆状核变性的40例患者随机分成中西医结合组和对照组(各20例)。对照组用青霉胺(PCA),中西医结合组在PCA治疗的基础上加服中药大黄肝豆汤,疗程均为1个月。观察对比两组治疗前后症状、病情轻重分级等变化,检测24h尿铜含量。结果中西医结合组和对照组的有效率分别为95%和65%(χ2=5.6314,P<0.05);24h尿铜含量显著增高(P>0.05);副反应发生率低于对照组。结论大黄肝豆汤联合青霉胺治疗肝豆状核变性有效。目的探讨中西医结合治疗肝豆状核变性的疗效及机制。方法将确诊为肝豆状核变性的40例患者随机分成中西医结合组和对照组(各20例)。对照组用青霉胺(PCA),中西医结合组在PCA治疗的基础上加服中药大黄肝豆汤,疗程均为1个月。观察对比两组治疗前后症状、病情轻重分级等变化,检测24h尿铜含量。结果中西医结合组和对照组的有效率分别为95%和65%(χ2=5.6314,P<0.05);24h尿铜含量显著增高(P>0.05);副反应发生率低于对照组。结论大黄肝豆汤联合青霉胺治疗肝豆状核变性有效。     

肝豆汤对肝豆状核变性皮肤成纤维细胞模型铜代谢的影响

目的 在细胞水平探讨中药复方肝豆汤治疗肝豆状核变性的机理。方法 通过建立２３例肝豆状核变性皮肤成纤维细胞模型，观察加入含肝豆汤兔血清前后细胞内Ｃｕ＾２＋、Ｚｎ＾２＋等微量元素含量的变化。结果 加入含肝豆汤兔血清前与加入２４ｈ后相比较，细胞内铜含量从（８０．９４±３４．７６）ｎｇ／ｍｇ，减少到（４６．９０±２２．１４）ｎｇ／ｍｇ（Ｐ〈０．０１），细胞内锌含量从（１４０．４３±３３．８１）ｎｇ／ｍｇ，     

肝豆汤联合DMPS驱铜治疗对Wilson病湿热内蕴型认知功能障碍的影响

目的:探讨肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠(DMPS)治疗对湿热内蕴型肝豆状核变性患者的认知功能障碍影响。方法:回顾性分析湿热内蕴型肝豆状核变性患者85例,其中治疗组45例,对照组40例,其中治疗组给予中药肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠治疗,对照组为单独应用二巯基丙磺酸钠治疗的患者;治疗共进行4个疗程,每个疗程为8 d,DMPS驱铜治疗6 d后间歇休息2 d,在治疗前后分别进行蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评定,并检测认知功能相关指标血清超氧化物歧化酶(SOD),同型半胱胺酸(Hcy)水平的变化,观察24 h尿铜的改变,并检测肝功能、肾功能、白细胞、血小板等相关安全性指标。结果:两组患者在治疗后,MoCA评分总分较本组治疗前均明显改善,其中以治疗组改善最为明显;治疗后两组间子项目的评分比较,其中视空间与执行功能、注意力治疗组改善显著优于对照组(P0.05);两组血清学指标SOD水平组均改善明显,治疗组显著优于对照组(P0.05),治疗后Hcy水平治疗组明显改善(P0.05),对照组无明显变化;两组驱铜效果均较为显著(P0.01),两组组间对比,治疗组优于对照组(P0.05)。结论:肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠可显著改善Willson病认知功能,血清SOD,Hcy水平显著改善,驱铜效果明显,不良反应轻微,安全有效。     

中西医结合治疗对肝豆状核变性患者智商影响的前瞻性研究

２８例肝豆状核变性（ＨＬＤ）患者治疗前与中药肝豆汤配合西药驱铜治疗２个月后，分别应用韦氏成人智力量表（ＷＡＩＳ－ＲＣ）测定，对其智商变化进行对比观察，并选３０例为健康对照组。结果表明ＨＬＤ患者言语智商（ＶＩＱ）、操作智商（ＰＩＱ）及全量表智商（ＦＩＱ）较对照组普遍显著降低（Ｐ均〈０．００５），尤以视空间障碍更为突出，证明铜离子在ＨＬＤ脑内沉积不仅损害神经运动功能且严重损害智能。经中西医结合治疗后总     

中药肝豆汤治疗Wilson病疗效机制的研究进展

Wilson病(WD)是一种以铜代谢障碍为生化特征的可治性神经遗传病,目前以青霉胺(PCA)为代表的金属络合剂驱铜治疗等治疗方法存在一定的局限性,使其治疗范围和效果受到限制,基因治疗尚处于实验室研究阶段,走向临床尚需时日。笔者等在现代医学对WD认识的基础上,根据对WD中医病机、证候学、中药方剂治疗学等方面的研究结果,创用中药组方肝豆汤治疗WD患者,获得了良好的临床疗效。基于此,笔者等在多个国家自然科学基金项目的资助下,从铜代谢的分子通路,Wnt/β-catenin通路和丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路等调控肝损伤的细胞信号通路,细胞外信号调节激酶(ERK)通路和肝激酶B1(LKB1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路等调控神经元损伤的细胞信号通路等角度对肝豆汤治疗WD的疗效机制进行了系列研究,结果发现中药组方肝豆汤能多层次、多靶点调控铜代谢障碍所致的WD肝细胞和神经元细胞的调亡、自噬等细胞程序性死亡过程,并通过TX小鼠等WD的动物模型验证了上述实验结果,从而证明了肝豆汤组方的合理性、配伍的必要性和用药的准确性,并为肝豆汤组分的进一步优化提供了依据。文章最后对肝豆汤治疗WD疗效机制的未来研究方向提出了一些设想和可行性建议。     

肝豆灵片联合二巯丙磺酸钠对痰瘀互结型肝豆状核变性患者血清丙二醇、超氧化物歧化酶的影响

目的:观察肝豆灵联合二巯丙磺酸钠治疗对痰瘀互结型肝豆状核变性患者血清丙二醇(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)的影响,并探讨其作用机制。方法:选取安徽中医药大学第一附属医院脑病科确诊为肝豆状核变性的住院患者120例,随机分为对照组和治疗组,各60例,其中对照组使用二巯丙磺酸钠常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用肝豆灵片,治疗4个疗程。在治疗前后分别进行血清MDA,SOD,24 h尿铜、神经功能评分等相关指标评估。结果:与治疗前比较,两组治疗后血清MDA含量均减低,SOD活性均增加(P0.05),治疗组优于对照组(P0.01);两组神经功能评分均下降(P0.05),治疗组疗效优于对照组(P0.01);两组治疗后24 h尿铜均有明显改善,其中治疗组改变显著(P0.01),治疗组驱铜效果优于对照组(P0.05);两组肝功能指标均有降低(P0.05),治疗组显著优于对照组(P0.01)。两组铜蓝蛋白与铜氧化酶治疗前后变化不大。根据两组不良反应分析,发现治疗组副作用小。结论:中西医结合治疗能明显降低肝豆状核变性患者中血清MDA含量,增加SOD活性,可以加强驱铜效果,改善临床症状,在一定程度上可以延缓病情进展,减轻患者痛苦。且不良反应较少,安全性高,在临床上得到广泛运用。     

肝豆汤联合言语训练治疗湿热内蕴型Wilson病构音障碍的临床疗效

目的 通过观察肝豆汤（GDD）联合言语训练治疗Wilson病（WD）湿热内蕴型构音障碍患者的临床疗效,评价GDD的有效性,为WD湿热内蕴型构音障碍患者选择合适的治疗方案提供更多临床数据及理论支持。方法 抽取符合条件的WD湿热内蕴型患者且存在构音障碍症状者60例,依照随机分组法将其分为对照组和观察组,每组30例。对照组为言语训练+二巯基丙磺酸钠（DMPS）,观察组在对照组的基础上联合肝豆汤治疗,8 d为1个疗程,共治疗4个疗程。比较两组治疗前后临床总有效率（Goldstein临床分级）、中国康复研究中心构音障碍分级评定评分、中医证候积分、24 h尿铜含量、改良Frenchay构音障碍评定量表评分。结果 治疗后,观察组患者总有效率为90.0%（27/30）,对照组患者总有效率为70.0%（21/30）,观察组患者总有效率明显高于对照组（Z=-1.986,P<0.05）。与本组治疗前比较,两组患者改良Frenchay构音障碍评分、中国康复研究中心构音障碍分级评定、24 h尿铜均明显升高（P<0.05,P<0.01）,中医证候积分显著降低（P<0.01）。与对照组治疗后比较,除呼吸、颌评分外,观察组患者在反射功能、唇运动、软腭运动、喉运动、舌运动及言语功能改善更明显（P<0.05,P<0.01）,总体来说观察组较对照组改善构音障碍疗效更优;中国康复研究中心构音障碍分级、24 h尿铜含量均显著升高（P<0.01）,观察组疗效更优。研究期间患者DPMS排铜治疗及口服GDD过程中均未出现发热、皮疹、口腔及眼睑黏膜红肿、剥脱性皮炎、呕吐腹泻或过敏性休克等严重不良反应,无病例脱落情况。结论 GDD联合言语训练治疗可以使湿热内蕴型WD构音障碍患者症状改善,疗效提高,在一定程度上提升患者的生活水平,可广泛运用于临床。     

肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠脾脏免疫功能调节的作用

目的：探讨肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠脾脏免疫功能的调节作用,并探讨相关的作用机制。方法：将小鼠分为正常组、模型组、四硫钼酸铵组、肝豆汤低、中、高剂量组,每组20只。正常组选取DL小鼠常规饲养30 d;模型组和肝豆汤低、中、高剂量组选取TX小鼠分别予生理盐水、肝豆汤（22,44,66 g·kg^-1）各2 mL·kg^-1·d^-1灌胃,四硫钼酸铵组予四硫钼酸铵2 mg·kg^-1·d^-1灌胃,每日2次,连续30 d。上述4组采用电感耦合等离子体-质谱法（ICP-MS）测脾组织微量元素,流式细胞术检测小鼠脾组织T淋巴细胞亚群CD4⁺,CD8⁺,CD4⁺/CD8⁺;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）,白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）,白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）,白细胞介素-18（interleukin-18,IL-18）,γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的蛋白表达量。结果：ICP-MS结果显示：与模型组比较,肝豆汤可以降低TX小鼠脾组织铜含量（P<0.01）,流式细胞术检测显示,与正常组比较,模型组脾组织内CD4⁺,CD8⁺增高（P<0.01）,CD4⁺/CD8⁺降低（P<0.01）,与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组脾组织内CD4⁺,CD8⁺降低（P<0.05）,CD4⁺/CD8⁺增高,但差异无统计学意义,肝豆汤低剂量组与模型组比较CD4⁺,CD8⁺降低,CD4⁺/CD8⁺增高,但差异均无统计学意义;Western blot检测显示,与正常组比较,模型组脾组织内IL-2,IL-8,IL-17,IL-18,TNF-α,IFN-γ的蛋白表达量增高（P<0.01）,与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组及四硫钼酸铵组IL-2,IL-8,IL-17,IL-18,TNF-α,IFN-γ蛋白表达量均降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,低剂量肝豆汤组IL-2,IL-8,IL-17,TNF-α相对表达量降低（P<0.05）。结论：TX小鼠脾脏存在免疫功能紊乱,且以负向免疫调节为主。肝豆汤对TX小鼠脾脏免疫功能紊乱具有一定的改善作用。     

肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠肝细胞内铜代谢通路的分子调控机制

目的:探讨肝豆汤调控毒牛奶(TX)小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:20只家兔适应性喂养3 d后,随机分为空白组(生理盐水)和肝豆汤组(4.5 g·kg-1·d~(-1)),每日2次ig,连续10 d,制得含药血清;采用2步灌注法分离提取DL,TX小鼠肝细胞,采用原子吸收法检测加含不同百分含量(5%,10%,15%,20%)含肝豆汤兔血清作用24 h后,对TX小鼠肝细胞内微量元素的影响,另设空白组;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤兔血清作用后腺嘌呤核苷三磷酸7b(adenosine triphosphate7b,ATP7b),抗氧化蛋白1(anti-oxidant1,ATOX1),铜转运体1(copper transporter1,CTR1),金属巯蛋白(metallothionein,MT),超氧化剂物歧化酶铜伴侣蛋白(copper chaperone of superoxide dismutase,CCS),细胞色素氧化酶17(cytochrome-coxidase17,COX17)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组TX小鼠肝细胞内铜含量升高,锌含量降低,铁含量升高,ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达明显降低,CTR1,MT蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,含肝豆汤兔血清可显著降低TX小鼠肝细胞内铜含量,增加锌含量,降低铁含量(P0.05,P0.01);Western blot检测结果显示,含肝豆汤兔血清可明显增加ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达(P0.05,P0.01),降低CTR1,MT蛋白表达(P0.01)。结论:肝豆汤可能是通过调控细胞内铜代谢相关蛋白,上调ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达,抑制CTR1,MT表达,从而发挥细胞内排铜作用。肝豆汤可通过多靶点、多途径调控铜代谢通路达到降低肝细胞内铜含量的治疗效果。     

肝豆灵汤改善痰瘀互结型Wilson病患者肝脏功能的临床观察

目的:观察肝豆灵汤对痰瘀互结型Wilson病患者肝脏功能的临床疗效。方法:将2015年1月至2017年12月安徽中医药大学第一附属医院脑病中心收治的Wilson病痰瘀互结型患者72例,随机分为治疗组和对照组,各36例。两组均予以二巯丙磺酸钠常规治疗,对照组予以口服护肝片,治疗组予以肝豆灵汤口服,治疗共6个疗程。在治疗前后分别进行中医证候疗效、肝脏功能血清酶学[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)],胆红素代谢指标[总胆红素(TBIL)],血清肝纤维化指标[层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)],凝血指标[纤维蛋白原(FBG)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)]等相关指标评估。结果:中医证候疗效总有效率治疗组为86. 11%(31/36),对照组为63. 89%(23/36),治疗组优于对照组(P 0. 05);两组治疗后ALT,AST,AKP,TBIL水平均显著改善(P 0. 01),其中治疗组优于对照组(P 0. 01);两组治疗后肝纤维化指标显著改善(P 0. 01),其中治疗组优于对照组(P 0. 01);两组治疗后凝血指标均有不同程度改善(P 0. 05,P 0. 01),其中在降低PT,APTT,TT水平,提高FBG水平等方面优于对照组(P 0. 05,P 0. 01)。结论:肝豆灵汤能显著改善Wilson病痰瘀互结型患者的肝脏功能,具体表现在改善血清酶学及胆红素指标,逆转肝纤维化,促进凝血因子产生,减轻出血倾向,从而延缓病情进展,提高患者生活质量。     

肝豆汤治疗湿热内蕴型Wilson病伴快动眼期睡眠行为障碍的临床疗效

目的：探讨肝豆汤治疗湿热内蕴型Wilson病(WD)伴快动眼期睡眠行为障碍(RBD)的疗效。方法：从2019年4月至2023年8月在安徽中医药大学第一附属医院脑病科入院患者中,选取符合纳入标准的湿热内蕴型WD伴RBD患者62例,由计算机分发器随机分为对照组、观察组各31例。对照组予以常规驱铜治疗,观察组在对照组基础上加用肝豆汤治疗。8 d为1个疗程,共3个疗程。比较两组治疗前、后的中医证候积分、RBD筛查问卷(RBDSQ)评分、RBD筛查问卷香港版(RBDQ-HK)评分、多导睡眠图(PSG)参数、24 h尿铜(24 h U-Cu)水平和游离铜(NCC)水平,观察不良反应。结果：最终完成试验病例60例,对照组和观察组各30例。治疗前,两组各项指标比较差异无统计学意义,资料具有可比性。与本组治疗前比较,两组患者中医证侯积分、RBDSQ和RBDQ-HK评分明显降低,24 h U-Cu水平明显增高,NCC水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与对照组比较,中医证侯积分、RBDSQ、RBDQ-HK评分和NCC水平观察组改善更优(P<0.05,P<0.01)。与本组治...     

肝豆汤改良方对Wilson's病模型TX乳鼠神经元内Cyt C/Caspase信号通路的分子调控机制

目的:探讨肝豆汤改良方调控TX乳鼠神经元内细胞色素C(Cyt C)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常组、模型组、肝豆汤改良方组、丁苯酞组,正常组为正常DL乳鼠神经元,用完全培养基培养,模型组为TX乳鼠神经元,用10%空白兔血清培养,肝豆汤改良方组为TX乳鼠神经元,加入含体积浓度(5%,10%,15%,20%)肝豆汤改良方兔血清的培养基继续培养,丁苯酞组为TX乳鼠神经元,用10%含丁苯酞兔血清培养。采用原子吸收分光光度法检测不同浓度含肝豆汤改良方兔血清作用24 h后,对TX乳鼠神经元内微量元素的影响;流式细胞仪检测经肝豆汤改良方兔血清作用后活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤改良方兔血清作用后Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内铜、铁含量,增加锌含量(P0.01)。流式细胞仪检测发现,含肝豆汤改良方兔血清较模型组可显著降低TX乳鼠神经元内ROS的释放量(P0.01)。Western blot检测结果显示与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:肝豆汤改良方可能是通过促进过量铜排出而抑制神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3表达,从而减轻高铜对神经元的损伤作用。肝豆汤改良方可通过减少脑内铜含量,进而调控Cyt C/Caspase信号通路达到减轻高铜诱导的神经元损伤的治疗效果。     

基于Cer通路探讨肝豆汤对Wilson病模型高铜诱导海马神经元细胞损伤的保护作用

目的:探讨肝豆汤调控海马神经元内神经酰胺(Cer)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验采用海马神经元HT-22细胞,分为正常组,模型组,10%,15%及20%肝豆汤组5个组,模型组为硫酸铜(CuSO_4)孵育HT-22细胞所得,正常组加入空白含药血清,10%,15%及20%肝豆汤组分别加含不同体积分数(10%,15%,20%)肝豆汤兔血清的培养基培养。噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量CuSO_4作用不同时间点对HT-22细胞生长和增殖的影响;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Cer信号通路相关蛋白表达情况。结果:MTT结果显示CuSO_4在一定时间和浓度范围内对HT-22细胞生长和增殖有明显抑制作用;流式细胞仪检测发现,与正常组比较,模型组ROS荧光强度显著增加(P 0. 01),肝豆汤组较模型组可显著降低细胞内ROS的释放量(P 0. 01)。Western blot检测结果显示与模型组比较,肝豆汤组可明显降低细胞内酸性鞘磷脂水解酶(ASM),Cer,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK),细胞色素C(Cyt C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01)。结论:高铜可诱导HT-22细胞内线粒体氧化应激并引起Cer信号通路失活,从而诱导海马神经元损伤的发生。肝豆汤可能通过促进过量铜排出而抑制细胞内ASM,Cer,p38 MAPK,Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达,从而减轻高铜对海马神经元的损伤作用。肝豆汤可通过减少脑内铜含量,进而调控Cer信号通路达到减轻高铜诱导海马神经元损伤的治疗效果。