酶联免疫吸附试验测定尿中性肽内切酶浓度

目的建立尿中性肽内切酶(NEP)检测的ELISA法,明确用ELISA法检测尿NEP在诊断肾小管损伤中的意义.方法建立尿NEP检测的ELISA法,并与荧光法比较;分别用两法检测患者组和对照组尿NEP.结果 ELISA法检测NEP,浓度在20～200 μg/L时,浓度的对数与吸光度间有良好的线性关系(r>0.99,P<0.01).取10次标准曲线,计算线性范围内各浓度的变异系数(CV)为2.06%～4.17%,平均2.98%.所有标准曲线相关系数(r)均>0.99(P<0.001).ELISA法回收率为93.6%～107.3%,平均为101.7%.该法批内CV为4.15%、5.46%,批间CV为6.24%、6.39%.检测限值为2.20 μg/L.患者组两法测得尿NEP均低于正常对照组(P<0.01).各组两法结果无差异(P均>0.05).结论检测尿NEP可以帮助判断近端肾小管损伤.ELISA法与传统荧光法相比更简便,不需特殊仪器,却有良好的精确度和重复性,可以作为评价肾小管损伤的较好方法.     

尿中性肽链内切酶:一种新的肾小管损伤指标

建立尿中性肽链内切酶(NEP)检测方法，并应用于肾小管损伤的判断。方法：应用三明治ELISA法和荧光法检测尿NEP，对两种方法的检测效果予以评价．并比较两种方法在帮助诊断肾小管疾病中的符合率及差异性。对各种肾脏疾病患与正常对照组尿NEP进行比较，并在各组内对尿NEP与其他代表肾小管损伤的指标进行比较。结果：两符合率大致相等．在各组中两种方法检测结果的差异无显性。在急性肾小管损伤组中，尿NEP明显高于正常对照组；在慢性肾小管损伤组、马兜铃酸肾病组、慢性肾功能衰竭组，尿NEP均明显低于正常对照组，且尿NEP与尿微量蛋白呈不同程度的负相关；在单纯肾小球疾病组，尿NEP与正常对照组差异无显性，与尿微量蛋白不相关。结论：尿NEP在肾脏疾病的不同病程中出现双向的变化，当结合其他尿微量蛋白检测时，可以帮助判断肾小管损伤处于急性期还是慢性期，从而有助于选择治疗方案和评估预后。     

酶偶联放大法测定血清总胆汁酸

目的　建立简便的酶偶联放大法 ,直接检测血清总胆汁酸 (TBA)。方法　基于脱氢酶 辅酶体系的原理 ,用丙酮酸钠作乳酸脱氢酶 (LDH)的阻止剂 ,在Tris HCl缓冲溶液中 ,由NAD -NBT -Brij 98组成酶偶联放大系统。用自动生化分析仪测定血清TBA。结果　线性范围 :0～ 180 μmol/L ;精密度 :批内CV <2 .7% ,日间CV <4 .3% ,总CV <5 .4 %。与日本ENZABILE .AUTO(X)比较 :r =0 .990 ,Y =1.114X - 2 .137,与朗道BILEACIDS(Z)比较 :r =0 .997,Y =1.0 32Z 0 .90 6。LDH <3kU/L ,乳酸 <2 0mmol/L ,维生素C <0 .5mmol/L ,胆红素 <30 0 μmol/L ,血红蛋白 <5g/L时 ,对结果无显著干扰。 结论　该法简便、灵敏 ,试剂稳定 ,适用于血清TBA的常规和自动分析     

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物检测方法的建立和初步临床应用

目的　建立纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的检测方法。方法　从血浆中纯化PAP作为免疫原制备单克隆抗体 (单抗 ) ,建立双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,并对该法进行评价。结果　获取了特异针对PAP新抗原的单抗LW 3C10 ,和针对PAP及纤溶酶原 (Plg)的单抗LW 2B9。对PAP的亲和常数分别为 4 6 9× 10 10 mol/L、5 6 2× 10 9mol/L。以它们建立的夹心ELISA检测PAP在 0～ 15 0 μg/L范围内线性良好 ,批内、批间CV分别为 4 0 %～ 5 2 %、11 2 %～ 13 6 % ,回收率为 85%～ 10 5 % ,加入α2 抗纤溶酶 (α2 AP)及纤溶酶 α2 巨球蛋白复合物 (P α2 M)不干扰测定 ,与美国ADI公司PAP试剂盒相关良好 (r=0 96 2 9)。急性髓细胞白血病组、急性心肌梗死组、肝病组、健康老年人组的血浆PAP水平显著高于正常对照组 (P <0 0 0 1)。结论　该法可用于评估纤溶系统激活。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

目的　建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法　用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果　所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论　建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。     

尿微量蛋白联合尿酶诊断糖尿病早期肾损害

目的探讨糖尿病早期肾损害诊断指标。方法对 5 0例正常对照组和 5 0例糖尿病患者采用终点法测定尿N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG) ,ELISA方法检测尿视黄醇结合蛋白 (RBP)、微量白蛋白 (mALB)和尿转铁蛋白 (TRF) ,比色法测尿肌酐。结果正常对照组尿NAG/Cr为 (0 .5 2± 0 .4 6 )U/mmol,RBP/Cr为 (7.4 6± 5 .0 2 ) μg/mmol,mALB为(3.6 1± 2 .4 6 )mg/L ,TRF/Cr为(0 .0 5± 0 .0 3)mg/mmol;糖尿病患者尿NAG/Cr、RBP/Cr、mALB及TRF/Cr值较正常对照组增高 (P <0 .0 1) ;两项指标联合检测 ,其阳性率分别为 :NAG +mALB 86 % ,NAG +TRF 88% ,NAG +RBP 90 %。结论联合检测尿NAG与RBP是诊断糖尿病早期肾损害的最灵敏与可靠的实验室指标。     

急性肾炎恢复期尿微量蛋白与尿酶检测的临床意义

目的　探讨急性肾炎在临床治愈期尿微量蛋白联合尿酶检测的临床价值。方法　对 5 0例正常对照组和 30例急性肾炎组治愈期者采用酶联免疫吸附法检测尿微量白蛋白 (mALB)、视黄醇结合蛋白(RBP)、尿转铁蛋白 (TRF)和α1 微球蛋白 (α1 M ) ;终点法测尿N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG) ;比色法测尿肌酐 (Cr)。结果　正常对照组尿mALB为 (3.6 1± 2 .4 6 )mg/L,RBP/Cr为 (7.4 6± 5 .0 2 ) μg/mmol,TRF/Cr为 (0 .0 5± 0 .0 3)mg/mmol,α1 M /Cr为 (0 .78± 0 .5 1)mg/mmol,NAG/Cr为(0 .5 2± 0 .4 6 )U/mmol,急性肾炎治愈期患者尿mALB为 (5 .12± 3.4 4 )mg/L ,RBP/Cr为 (8.87± 4 .4 5 ) μg/mmol,TRF/Cr为(0 .38± 0 .32 )mg/mmol,NAG/Cr为 (2 .13± 2 .0 2 )U/mmol,α1 M /Cr为 (0 .88± 0 .4 2 )mg/mmol;其检测的阳性率分别为 :mALB 4 0 % ,NAG 30 % ,RBP 13.3% ,TRF 2 0 % ,α1 M 3.3% ,NAG与mALB两项指标联合检测其阳性率为 4 6 .7%。结论　联合检测尿NAG与mALB在急性肾炎临床治愈期是判定肾脏损害及恢复情况的最灵敏与可靠的实验室指标。     

全自动酶偶联法测定腺苷脱氨酶

目的　建立全自动测定腺苷脱氨酶 (ADA)的酶偶联分光光度法。方法　用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究。用该法测定了 90例健康者的血清样本及 99例胸腹水的ADA活性。结果　该法最低检出限为1.7U/L ,线性范围可达 2 2 0U/L(r=0 .9989) ,批内CV为 2 9%～ 5 .4 % ,批间CV为 4 .7%～ 6 4 % ,回收率为 99.7%。胆红素 <136 .8μmol/L ,血红蛋白 <3.5g/L ,抗坏血酸 <2 84 μmol/L和三酰甘油 <9.0 3mmol/L的情况下 ,对测定结果无显著性影响。 结论　本法灵敏度高 ,线性、精密度好 ,结果准确 ,干扰少 ,且操作简便快速 ,适用于全自动生化分析仪分析。     

尿NGAL与CKD肾小管间质损伤的相关性研究

目的探讨尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)与慢性肾脏病(CKD)肾小管间质损伤的相关性。方法测定124例行肾穿刺的CKD患者及30名健康体检者(正常对照组)血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)、尿NGAL、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)水平,对尿NGAL与血清Cys C、尿RBP、尿β2-MG进行相关性分析。依据肾穿刺活检结果将肾小管间质损伤程度分为轻度损伤、轻-中度损伤、中度损伤、中-重度损伤4组,采用Spearman等级相关分析尿NGAL与肾小管间质损伤程度的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价尿NGAL诊断CKD肾小管间质损伤的性能。结果 CKD各组尿NGAL均明显高于正常对照组(P均=0.000),随着肾小管间质损伤程度的加重,尿NGAL水平逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(P均0.05)。尿NGAL与尿RBP、尿β2-MG和血清Cys C均呈正相关(r=0.784、0.692、0.759,P均0.01)。尿NGAL水平与肾小管间质损伤程度呈正相关(r=0.762,P0.01)。尿NGAL诊断CKD肾小管间质损伤的ROC曲线下面积为0.855;当最佳临界点为45.35 ng/m L时,敏感性为77.2%,特异性为84.6%。结论尿NGAL可以作为反映CKD肾小管间质损伤的标志物,对于CKD诊断、治疗和预后具有一定的临床意义。     

尿Ⅳ型胶原酶免疫测定法的建立及其在糖尿病肾病中的应用

目的　通过建立一种简便、灵敏的双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)检测尿Ⅳ型胶原 (ⅣC) ,探讨糖尿病 (DM )患者肾小球基底膜代谢状况以及尿ⅣC对糖尿病肾病 (DN)的诊断价值。方法　检测 5 0名正常人和 12 7例DM患者的血清ⅣC及尿ⅣC。并将 12 7例DM患者根据其 2 4h尿白蛋白 (Alb)排泄率 (UAE)分成 3组 :UAE <30mg/ 2 4h(A组 )、30mg/ 2 4h 30 0mg/ 2 4h(C组 )。 结果　双抗体夹心ELISA检测尿ⅣC ,灵敏度为 1.2ng/ml;批内变异系数 (CV)为 5 .4 %～ 10 .6 % ,批间CV为 7.8%～18.5 %。在 3组DM患者中 ,A组患者血清、尿ⅣC的阳性率分别为 2 8.3%、31.7% ,明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;C组 19例DM患者中有 18例已发展为DN ,尿ⅣC的阳性率 (6 3.2 % )显著高于A组 (2 8.3% ) (P <0 .0 1) ,C组血清ⅣC的阳性率 (36 .8% )与A组 (31.7% )比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　本研究建立了一种简便、灵敏的检测尿ⅣC的ELISA方法 ,该法对DN的诊断具有较高的敏感性和特异性。     

Absence of increased urinary excretion of adenosine-deaminase-binding protein by patients with chronic renal tubular malfunction

The urinary excretion of adenosine-deaminase-binding protein, a constituent of the brush border of proximal renal tubule cells, has been investigated in 39 patients with disorders associated with malfunction of the renal tubules, and its excretion has been compared with that of two low molecular mass plasma proteins and an enzyme derived from renal tubular cells.

None of the 36 patients with disorders associated with chronic renal tubular malfunction were found to be excreting significantly increased quantities of adenosine-deaminase-binding protein but 30 had increased excretion of retinol-binding protein, ₁-microglobulin, or N-acetyl-β-D-glucosaminidase.

Measurement of urinary adenosine-deaminase-binding protein may be useful in the assessment of acute renal tubular injuries but it is not of value in the detection of chronic renal tubular disorders.     

Distal renal tubular dysfunction: a common feature in calcium stone formers

Abstract. Distal renal tubular acidosis has been reported as an uncommon cause of urinary calcium stone disease. However, this defect appears to be more frequent when appropriate tests are performed systematically. Twenty-nine patients with recurrent calcium stones have been separated into three groups: normocalciuric (group A), renal hypercalciuric (group B) and absorptive hypercalciuric (group C). Distal tubular functions were investigated by the (urine-blood) pCO₂ gradient and by an ammonium chloride test. (Urine–blood) pCO₂ gradient was (mean pL SEM), 3·33 pL 0·59 in group A, 2·95 pL 0·34 in group B and 3·31 pL 0·58 kPa in group C. All these values differ significantly from those observed in controls (4·11 pL 0·28 kPa; P < 0·05). After 3 days of ammonium chloride loading, ammonium excretion averaged 54·7 pL 4·2 in group A, 54·4 pL 4·3 in group B and 64·3 pL 5·5 μmol min^-1 in group C. Values obtained in the first two groups were significantly lower than that achieved by control subjects (76·4 pL 14·9 μmol min^-1). It is concluded that tubular dysfunctions defined as impairments in hydrogen ion secretion and ammonium excretion after an acid challenge are a common feature of the urinary calcium stone disease and play a contributory role in its pathogenesis.     

小儿肾小管性酸中毒的超声表现分析

目的增加对此病的认知度，提高此病的检测率，延长患儿生命。方法采用仪器为Diasonic Gatway和Sequoia 512型彩色多普勒超声诊断仪，探头频率3．5～6MHz。对32例患此病患儿肾脏的大小、形态、结构、病灶的分布、回声以及血供情况进行检测。结果病变均为双侧，患肾有正常的肾轮廓，肾包膜完整。Ⅰ型患儿的肾髓质回声显著增高，高回声的锥体围绕肾窦呈放射状排例，内部为光亮的细点状回声，后方淡声影或无声影。早期肾血供无明显改变，晚期段动脉、叶间动脉可受压变细，弓形动脉以下血供减少。Ⅱ型患儿几乎无肾钙沉着。结论超声对Ⅰ型肾小管性酸中毒有很高的诊断价值，对临床确诊的病例，超声可作为鉴别Ⅰ型或Ⅱ型病变的重要手段之一。     

肾移植术后并发急性肾小管坏死的观察与护理

目的 探讨肾移植术后急性肾小管坏死的护理。方法 急性肾小管坏死是肾移植术后较严重而常见的并发症。本文对26例同种异体尸体肾移植术后并发急性肾小管坏死的护理体会进行总结。结果 全部病例均控制病情，无肾移植失败。结论 认为细致的心理护理，严密的病情观察，及时合理的医护措施，是处理该并发症的重要措施。     

Hypokalaemic coma

A 55-year-old woman with renal tubular acidosis and urinary potassium wasting became comatose and subsequently fitted when her plasma potassium level fell to 0.9 mmol/l. Her neurological state resolved with potassium therapy. She had no other recognised cause for her coma. It appears that coma represents the extreme of the spectrum of neurological change that may occur in association with hypokalaemia.     

尿微量蛋白测定在新生儿窒息中的意义

目的探讨尿微量蛋白测定在新生儿窒息中的意义.方法运用散射比浊法测定31例足月窒息和38例正常新生儿的尿IgG、TRF、Alb、β2-MG、α1-MG,把1minApgar评分8～10分的38例分为A组(无宫内缺氧史,n=20)和B组(有宫内缺氧史,n=18);把31例窒息儿分为C组(1minApgar评分4～7分,n=14)和D组(1minApgar评分0～3分,n=17);E组(5minApgar评分≥6分,n=19)和F组(5minApgar评分＜6,n=12).结果B组尿β2-MG、α1-MG较A组明显升高(P＜0.01);D组尿IgG、TRF、Alb、β2-MG、α1-MG均较C组明显升高(P＜0.005);F组尿IgG、TRF、Alb、β2-MG、α1-MG均较E组升高(P＜0.01).结论宫内缺氧可造成新生儿肾小管功能障碍;新生儿窒息后,不仅有肾小管功能障碍,而且也有肾小球功能障碍;窒息越重,时间越长,肾小球和肾小管的损伤越严重.尿微量蛋白测定可以监测窒息后新生儿肾功能变化.     

Hyperchloremic metabolic acidosis in the kidney transplant patient

Hyperchloremic metabolic acidosis of renal origin results from a defect in renal tubular acidification mechanism, and this tubular dysfunction can consist of an altered tubular proton secretion or bicarbonate reabsorption capability. Studies have documented that all forms of renal tubular acidosis (RTA), type I to IV, are documented in kidney transplant patients. Among RTA pathophysiologic mechanisms have been described the renal mass reduction, hyperkalemia, hyperparathyroidism, graft rejection, immunologic diseases, and some drugs such as renin-angiotensin-aldosterone blockers, and calcineurin inhibitors. RTA can lead to serious complications as is the case of muscle protein catabolism, muscle protein synthesis inhibition, renal osteodystrophy, renal damage progression, and anemia promotion. RTA should be treated by suppressing its etiologic factor (if it is possible), avoiding hyperkalemia, and/or supplying bicarbonate or a precursor (citrate). In conclusion: Hyperchloremic metabolic acidosis of renal origin is a relatively frequent complication in kidney transplantation patients, which can be harmful, and should be adequately treated in order to avoid its renal and systemic adverse effects.     

原发性高血压病对早期肾功能的影响

目的 探讨原发性高血压病对早期肾功能影响的临床意义.方法 通过肾动脉造影、内生肌酐清除率排除肾性高血压,检测入选的原发性高血压病患者的肾小球滤过功能指标和肾小管功能指标.结果 高血压1、2、3组尿β2-微球蛋白(β2-MG)/肌酐(Cr)均高于对照组(P＜0.05),尿N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)/Cr在高血压2、3组明显增高(P＜0.01).高血压1、2、3组尿渗透压均低于对照组(P＜0.01).在3 h尿微量白蛋白检测中,高血压3组高于对照组(P＜0.01).结论 原发性高血压病在对早期肾功能的影响中,肾小管近端重吸收功能、远端浓缩功能较肾小球滤过功能更易受损.     

小儿肾小管酸中毒的超声表现

目的探讨小儿肾小管酸中毒的超声表现．方法对经临床确诊的16例肾小管酸中毒患的超声资料进行回顾性分析。结果16例中4例表现为双肾锥体钙盐沉积症．6例表现为髓质和肾盂散在性微小结石，二共计10例，占62．5%。其它表现有双肾径线缩小2例．皮质回声增强2例。双肾声像图正常2例。结论双肾锥体钙盐沉积或髓质和肾盂散在性微小结石对肾小管酸中毒的诊断有很高的价值。