声损伤后基底乳头中DNA复制与细胞增殖

为探讨听觉上皮修复过程的细胞生物学特点，用剂量为１１５ｄＢ（Ａ）×７２小时的宽带噪声建立８～１４日龄鸡声损伤模型。于不同时间用ＤＮＡ合成示踪剂——氚标记胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）予以标记。取基底乳头连续培养并进行放射自显影观察。实验显示，首次标记４８小时后受损区可见标记阳性细胞（或前体细胞）。标记毛细胞出现于９６小时。５～６天时，标记毛细胞处于分化过程中。对照组未见标记毛细胞。结果表明，声损伤后听觉上皮存在着ＤＮＡ的复制与细胞增殖，３Ｈ－ＴｄＲ标记阳性细胞最终定位于基底乳头表层并分化为毛细胞。提示基底乳头局部组织中的某些支持细胞为再生毛细胞的前体，两者间具有同源关系     

哺乳动物毛细胞的再生机制

噪声、耳毒性药物和老化引起的毛细胞的变性、缺失是感音神经性聋的主要原因。毛细胞是位于内耳感觉上皮的终末分化细胞，以往的研究表明哺乳动物耳蜗毛细胞损伤后是不能再生的，所以由于毛细胞损伤所致的感音神经性聋是无法治愈的，临床上缺乏有效地治疗方法。长期以来人们为了探讨毛细胞再生的机制而在不懈的努力，刺激毛细胞的再生从而修复受损的听力一直是研究的重点。     

成年鼠耳蜗听觉细胞自然培养诱导毛细胞样细胞的产生

近年来的研究证实耳毒性药物损伤后的哺乳动物前庭上皮中可见有丝分裂活动以及不成熟毛细胞的出现，许多学者推断哺乳动物前庭中存在毛细胞的前体细胞。而在哺乳动物的耳蜗听觉上皮中是否也存在听觉毛细胞的前体细胞以及听觉毛细胞能否再生仍有争议。本研究对成年鼠耳蜗听觉上皮细胞进行体外培养，试图寻找听觉毛细胞的前体细胞，为治疗蜗性聋及进一步研究提供理论依据。     

成年鼠耳蜗听觉细胞自然培养诱导毛细胞样细胞的产生

近年来的研究证实耳毒性药物损伤后的哺乳动物前庭上皮中可见有丝分裂活动以及不成熟毛细胞的出现,许多学者推断哺乳动物前庭中存在毛细胞的前体细胞。而在哺乳动物的耳蜗听觉上皮中是否也存在听觉毛细胞的前体细胞以及听觉毛细胞能否再生仍有争议。本研究对成年鼠耳蜗听觉上皮细胞进行体外培养,试图寻找听觉毛细胞的前体     

干细胞内耳移植径路研究进展

内耳毛细胞和（或）螺旋神经元的损伤是引起感音神经性聋的主要原因,而在哺乳动物中以上损伤是不可再生和修复的,因此干细胞内耳移植替代受损的毛细胞和（或）螺旋神经元治疗由此引起的感音神经性聋已成为耳科学研究方面的重点和热点问题。其中移植径路的不同直接影响到移植细胞的迁移、增殖及分化效能。本文就干细胞内耳移植的手术径路做一综述。     

462内耳前庭毛细胞再生

研究证明鸟类出生后前庭系统有缓慢产生毛细胞的能力，鸟类和哺乳类前庭细胞受损后可以再生，推测支持细胞，神经上皮细胞是再生毛细胞的可能前体细胞，初步证明ＴＧＦ－α可能是一种细胞有比分裂因子。一此基因产的，生长因子及转录因子（如视黄酸和甲状腺素）可能参与调节内耳毛细胞的产生过程，为人类前庭上皮毛细胞再生提供了重要依据，为前庭平衡障碍展现可能获汉的前景，本重点论述了前庭毛细胞再生的机制。     

豚鼠内耳前庭毛细胞自发再生

近年的研究表明哺乳动物出生后前庭耳石器毛细胞可以再生。本项研究采用扫描电镜技术，以豚鼠为研究对象，首次证实豚鼠不仅耳石器毛细胞而且半规管壶腹嵴毛细胞也可以自发再生。再生毛细胞散在分布于前庭上皮内，而某些脊椎动物再生毛细胞聚积在生长区内。结果提示豚鼠所有的前庭器，包括耳石器和壶腹嵴都保持着自发的毛细胞再生。     

慢性庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮细胞的凋亡和再生观察

目的：观察慢性庆大霉素中毒后豚鼠前庭上皮的损伤和修复过程，探讨前庭毛细胞凋亡和再生的关系。方法：采用末脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terninal deoxyuncleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling，TUNEL）法，观察前庭感觉上皮细胞的凋亡，采用5′-溴-2-脱氧尿苷（bromodeoxyuridine，Brdu）免疫细胞化学法观察前庭上皮的再生过程。结果：对照组没有观察到TUNEL和Brdu阳性细胞。停止庆大霉素注射1天至3周均可观察到TUNEL阳性细胞，但1天组阳性细胞数量最多，3周仍有阳性细胞存在，阳性细胞主要位于毛细胞层。停止庆大霉素注射后1天组支持细胞层和毛细胞层均有Brdu标记阳性细胞，3d组支持细胞层阳性细胞显著增多，1周组毛细胞层也出现较多阳性细胞，2周组Brdu标记阳性细胞主要位于毛细胞层，3周仍可观察到Brdu标记阳性细胞。结论：慢性庆大霉素耳中毒后豚鼠前庭上皮细胞凋亡增加，凋亡与增殖伴随存在，前庭毛细胞的损伤可能是其增殖的触发因素。增殖过程表现为支持细胞增生向毛细胞增生移行的趋势，支持细胞增殖并转化成毛细胞可能是前庭上皮细胞损伤修复机理之一。     

听觉损伤后毛细胞再生与聋病基因治疗策略

听觉损伤可引起耳蜗毛细胞和听觉神经元的不可逆性损伤,从而导致永久性的感音神经性耳聋。虽然内耳所独具的结构是基因治疗非常独特和重要的靶器官,但能否实现损伤后毛细胞的再生是其前提条件。国内外研究者们做了大量的探索并取得重要突破,从非哺乳动物到哺乳动物毛细胞再生,从前庭毛细胞到耳蜗毛细胞再生,从未成熟期到成年期毛细胞再生,从离体培养毛细胞再生到在体毛细胞再生,整整经历了近半个世纪。但是毛细胞的再生并不等同于听力完全恢复。针对内耳基因治疗时间窗问题,我们根据听觉损伤后不同的病理状态,提出听觉损伤后毛细胞再生和基因治疗的基本策略：（1）毛细胞纤毛损伤阶段,是基因治疗的最好时机,通过完全修复或纤毛再生达到功能的完全或部分恢复;（2）内耳毛细胞虽有损伤但没有坏死,支持细胞和神经纤维基本正常,所以有恢复形态和功能的机会,这个阶段导入Math1基因应该有效,是基因治疗的最关键时机;（3）毛细胞严重损伤但支持细胞尚存,是毛细胞再生的抢救阶段,而且还可以争取在Corti器细胞构架没有塌陷之前进行干细胞导入,所以这个阶段内细胞移植可能有效地实现听力恢复;（4）Corti器完全失去构架,仅仅残留上皮层或瘢痕化,基因导入完全无效,即使干细胞导入也会面临困难,如何重塑Corti器构架是巨大挑战。为了实现耳聋基因治疗临床应用的可能性。我们还探索了最有效简便的外源基因内耳导入方式以及高效安全可靠的基因载体比如纳米载体的研发。毛细胞再生研究已经取得突破性进展,但还面临诸多挑战。通过不懈的努力,聋病基因治疗的最终临床应用一定会实现。     

459细胞凋亡与内耳毛细胞的损伤方式

细胞凋亡对细胞的增殖，器官的发生和功能维持起着重要作用，近期研究发现，细胞凋亡也是内耳感觉上皮毛细胞的一种重要的损伤方式，并可能与感觉上皮细胞的增殖过程有关，本综述了内耳感觉上皮毛细胞损伤方式和毛细胞的凋亡，探讨内耳毛细胞的损伤方式与感觉上皮修复的关系。     

内耳前庭毛细胞再生

研究证明鸟类出生后前庭系统有缓慢产生毛细胞的能力.鸟类和哺乳类前庭毛细胞受损后可以再生,推测支持细胞、神经上皮细胞是再生毛细胞的可能前体细胞.初步证明TGF-α可能是一种细胞有丝分裂因子.一些基因产物、生长因子及转录因子(如视黄酸和甲状腺素)可能参与调节内耳毛细胞的产生过程.为人类前庭上皮毛细胞再生提供了重要依据.为前庭平衡障碍者展现可能获治的前景.本文重点综述了前庭毛细胞再生的机制.     

支持细胞在内耳发育及耳蜗毛细胞损伤后的作用

耳蜗毛细胞损伤后如何再生及恢复其听功能是现今耳科学研究的热点问题之一。目前国内外的研究热点为调控参与内耳毛细胞调控的基因、干细胞移植、生长因子诱导、内耳前体细胞向毛细胞分化等。对于螺旋器中支持细胞在内耳发育、耳蜗毛细胞损伤后保持听觉上皮完整以及毛细胞再生中的作用关注较少。本文就支持细胞在内耳发育、毛细胞损伤后的作用等研究做一综述。     

鸡前庭感觉上皮细胞的再生能力与细胞增殖特点

目的：探讨鸟纲动物前庭感觉上皮细胞在生理和病理条件下的再生能力和细胞增殖活动特点。方法：庆大霉素60mg／kg(体重)给鸡大腿肌肉注射(庆大霉素中毒组)，每天1次，共10d；分别于庆大霉素注射后1、7d，经腹腔内注射5-溴脱氧尿核苷100mg／kg，6h后处死动物，取颞骨制备内耳石蜡切片，应用免疫组织化学染色方法，观察病理状态下前庭感觉上皮细胞增殖活动。生理条件组不接受庆大霉素注射，其余步骤均同庆大霉素中毒组，以观察生理条件下的细胞增殖状态。结果：生理状态下，鸡前庭器官，包括椭圆囊斑、球囊斑及壶腹嵴感觉上皮存在数量很少的标记支持细胞和标记毛细胞。而在庆大霉素中毒损伤后，被标记的阳性细胞，包括支持细胞和毛细胞数量显著增多。随庆大霉素中毒时间的延长，标记细胞向腔面迁徒的趋势明显，许多标记毛细胞与标记支持细胞成对出现，呈直线排列。结论：鸡前庭器官的细胞增殖活动是一个可动态调节的过程，生理状态下，细胞增殖的数量和速率呈低水平，但在庆大霉素损伤后，表现为上调，即细胞增殖活动显著活跃；支持细胞可能是再生毛细胞的前体细胞。     

豚鼠前庭感觉上皮损伤中细胞凋亡的观察

细胞凋亡对细胞增殖、器官发生和功能维持起着重要作用。一定剂量的庆大霉素连续注射，造成豚鼠前庭器官损伤。采用半薄切片，透射电镜（TEM）和TUNEL（TdT－modidedbiotin-dUTPNick-endlabeling，末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素标记）原位杂交技术，特异标记DNA片段3′－OH末端，原位显示凋亡细胞。在半薄切片和TEM观察中发现两种类型的细胞损伤方式：①毛细胞肿胀，胞浆空泡化，细胞体从顶端表面挤出；②毛细胞在上皮内变性，显示出细胞凋亡的形态特征，包括细胞核凝缩，核膜消失，成碎块状，并由支持细胞吞噬。原位杂交显示：细胞凋亡标记阳性细胞主要分布在上皮表层，较高水平标记主要发生于给药后第3到7天。提示细胞凋亡是内耳前庭感觉细胞损伤的一种重要方式，凋亡的主动发生可能是一种潜在的介入方式来减少氨基甙类抗生素对毛细胞造成的急性损伤，并与感觉上皮损伤后的修复过程有关。     

高强纯音声损伤鸡耳蜗后毛细胞再生研究

本文报告给2天日龄雏鸡每日1.5kHz120dBSPL高强纯音暴露8小时，共刺激6天；随后分0.1、2和3周处死动物，其耳蜗基底乳头（Bp)行扫描电镜（SEM）和光镜（LM）观察,结果发现1.5kHz强纯音仅造成鸡Bp基部至中部内侧较窄范围毛细胞损害，毛细胞消失率占30％左右，当恢复1周后，受损处毛细胞迅速再生，至恢复2周后Bp基本正常。证明高纯度纯音损害鸡内耳后受损区毛细胞有再生能力，再生毛细胞发育成熟而使Bp恢复正常形态。     

庆大霉素和窄带白噪声对鸡耳蜗损害后毛细胞再生形式研究

本文报告用庆大霉素（GM）和窄带白噪声（NB）联合作用对鸡耳蜗损害后观察毛细胞再生的组织形态。GM＋NB损害鸡内耳6天后，可见鸡耳蜗基底乳头（BP）基部至中上部有广泛的毛细胞消失，病理改变有三种形式：（1）空洞变形；（2）毛细胞崩溃消失；（3）支持细胞转化。损害后一周再生毛细胞发育成熟、数目增多；两周后再生毛细胞已生长旺盛，完全成熟，说明鸡耳蜗毛细胸有较强的再生能力。     

毛细胞的再生(摘译)

1内耳中的结构恢复许多研究证明鸟类内耳上皮因声过度刺激或耳毒性化学性质损伤后有再生毛细胞。鸟类前庭器官在生命过程中有低速度的新毛细胞进行性产生。在毛细胞缺失后,细胞分裂加快,前庭上皮中的新毛细胞产生、增加,最终前庭上皮恢复正常形状。鸟类的耳蜗,在正常状态上皮基本没有细胞分裂,在声创伤4天和耳毒性药作用后5天用’H胸腺喀淀核式标记,新毛细胞初始呈未成熟的特征,几天后才达到成熟状态。在声创伤,听神经末梢退变,损伤后3个月内,逐渐达正常的神经状态,至6个月,毛细胞神经支配才恢复。耳毒性药作用,不损伤盖膜,…     

速尿与硫酸卡那霉素联合用药对大鼠内耳毒性的实验观察

目的探讨速尿与硫酸卡那霉素联合用药对大鼠内耳的毒性作用,为大鼠药物性耳聋动物模型的制备和相关研究提供参考。方法大鼠静脉注射速尿后,立即肌肉注射硫酸卡那霉素,对照组不做处理。用药7天后行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值检测、耳蜗铺片免疫荧光染色和颞骨常规切片观察,并对耳蜗进行扫描电镜观察。结果联合注射速尿与硫酸卡那霉素后,大鼠ABR阈值明显提高;铺片和切片观察发现内、外毛细胞完全缺失的大鼠,耳蜗支持细胞大部分完整,前庭毛细胞未见损伤;电镜观察发现耳蜗毛细胞纤毛明显受损。结论速尿和硫酸卡那霉素联合用药可导致大鼠听力和耳蜗毛细胞严重受损,但对耳蜗支持细胞和前庭毛细胞损伤较轻,为耳蜗毛细胞损伤后再生等实验研究提供了一种简单、快速而有效的建立大鼠耳聋动物模型的方法。     

氧化应激反应与噪声性耳聋

<正>噪声性耳聋(Noise-Induced Hearing Loss,NIHL)是由强噪声刺激引起内耳毛细胞损伤后所产生的一种感音神经性耳聋。NIHL的听力学特征是4000Hz处听阈提高最明显[1]。病理学显示,NIHL病变主要局限于耳蜗底周(高频区),并在距前庭9mm-13mm处最明显,从9mm处外毛细胞开始消失,11mm处最严重,外毛细胞的损伤重于内毛细胞,内、外柱细胞及其它支持细胞的损伤与内毛细胞相似[2],病变部位     

鸡内耳感觉上皮细胞的自然增殖状态

为研究出生后鸟纲动物内耳感觉上皮细胞是否存在持续的细胞增殖，采用８天龄正常鸡１０只（２只做阴性对照），按１００ｍｇ／ｋｇ剂量腹腔注射ＤＮＡ合成的前体物质５－溴脱氧尿核苷（５－ｂｒｏｍｏｄ－ｅｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ），６小时后处死动物，取颞骨制备石蜡切片，结合免疫细胞化学技术，对鸡基底乳头和前庭器官中的细胞增殖活动进行观察。结果发现，鸡基底乳头切片中未见阳性标记细胞，而椭圆囊斑、球囊斑及壶腹嵴感觉上皮中存在着数量较少的标记支持细胞和标记毛细胞。结论：出生后的鸟纲动物前庭器官存在着较低水平的持续增殖。提示：出生后鸟纲动物前庭器官可能保持着潜在的对抗病理损伤的修复能力。