伤寒沙门菌fljB::lacZ变异株的制备

目的：为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fliB的表达调节机制,建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因（1acZ）插入变异株。方法：采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接茚nI和SalI的特异性引物,用PCR扩增获得舻基因的上、下游同源性DNA片段,并与用Kpn I和Sal I酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体（pSV-β-galactosidase vector）的片段定向连接,将连接片段克隆至自杀质粒pGMBl51,再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌,在含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果：经筛选获得阳性克隆,经PCR及序列分析证实,fljB基因中的763bp被3550bp的lacZ片段替代。结论：成功构建伤寒沙门菌flj∷lacZ突变株,为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。     

伤寒沙门菌fljB∷lacZ变异株的制备

目的：为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fliB的表达调节机制，建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因（1acZ）插入变异株。方法：采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接茚nI和SalI的特异性引物，用PCR扩增获得舻基因的上、下游同源性DNA片段，并与用Kpn I和Sal I酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体（pSV-β-galactosidase vector）的片段定向连接，将连接片段克隆至自杀质粒pGMBl51，再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌，在含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果：经筛选获得阳性克隆，经PCR及序列分析证实,fljB基因中的763bp被3550bp的lacZ片段替代。结论：成功构建伤寒沙门菌flj∷lacZ突变株，为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。     

伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株的制备

目的:为深入研究伤寒沙门菌调节因子phoP的功能,制备伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株.方法:根据伤寒沙门菌phoP基因序列,设计PCR特异性引物,并在5′末端加接酶Bgl Ⅱ位点,PCR扩增phoP基因上、下游片段后,用Bgl Ⅱ消化,再定向连接成phoP基因的缺损性同源性核苷酸片段.将此片段胶回收后并导入自杀质粒pGMB151的BamH Ⅰ位点,将阳性质粒用电转化导入伤寒沙门菌野生株,进行同源重组.用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为phoP基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定.结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的phoP基因缺失297个碱基.结论:成功构建伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能奠定了基础.     

伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株的制备

目的：为探讨z66鞭毛抗原阳性伤寒沙门菌的fljA样基因的功能,制备沙门菌fljA样基因缺陷变异株。方法：根据伤寒沙门菌fljA样基因序列,设计PCR特异性引物并在5末端加接酶BglII位点,扩增fljA样基因上、下游片段,用BglII消化后,定向连接成fljA样基因的缺损性同源性核苷酸片段,先克隆至pGEM—T质粒,再经BnmHI酶切后导入自杀质粒pGMB151,电转化入伤寒沙门菌(GIFU 10007),进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为fljA样基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果：PCR及序列分析证实,缺陷变异株的fljA样基因缺失231个碱基。结论：成功构建伤寒沙门菌flja样基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌鞭毛抗原表达的调控作用奠定了基础。     

鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株的制备

目的: 为进一步研究鼠伤寒沙门菌毒力基因spvC的功能,制备鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株。方法: 根据鼠伤寒沙门菌spvC基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvC基因缺陷性同源性核苷酸片段,导入自杀质粒pCVD442后再导入鼠伤寒沙门菌野生株,进行同源重组,用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为spvC基因的缺陷变异株,并通过核苷酸序列分析加以确定。结果： PCR及序列分析证实,缺陷变异株的spvC基因缺失711个碱基。结论： 成功构建鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株,为进一步研究其在鼠伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。     

伤寒沙门菌rpoE基因缺陷变异株的制备及其生存能力

目的为深入研究rpoE基因在伤寒沙门菌侵袭致病中的作用,制备rpoE基因缺陷变异株;观察rpoE基因缺陷变异株在应激条件下的生存能力。方法根据伤寒沙门菌rpoE基因序列,设计PCR特异性引物,制备rpoE基因缺陷性同源性核苷酸片段导入自杀质粒PGMB151后再导入伤寒沙门菌野生株,进行同源重组,用PCR观察重组现象;绘制生长曲线,对比rpoE基因缺陷变异株与野生株在应激条件下的生存情况。结果PCR及序列分析证实,缺陷变异株的rpoE基因缺失288个碱基;生长曲线提示rpoE基因缺陷变异株在氧、酸、高渗应激条件下生存能力明显低于野生株,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论成功构建了伤寒沙门菌rpoE基因缺陷株,并发现在氧、酸、高渗应激条件下其生存能力明显降低,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。     

伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株制备与分泌蛋白初析

目的观察伤寒沙门菌调节蛋白OmpR的调节作用,制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株,并比较分析野生株和OmpR缺陷变异株在不同渗透压环境培养下的分泌蛋白。方法用自杀质粒pGMB151介导同源性重组方法制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株,用PCR方法观察重组现象,变异株经测序和外膜蛋白的SDS—PAG电泳鉴定,用SDS—PAG电泳结合Western blot比较分析野生株和OmpR缺陷变异株在高、低渗透压环境培养下的SipC等分泌蛋白。结果成功制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株,并发现变异株中,包括SipC、鞭毛素蛋白在内的多种蛋白的表达分泌有明显差异。结论伤寒沙门菌OmpR在不同的渗透压下分别影响SipC、鞭毛素蛋白等多种蛋白的表达分泌。     

伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB：z66的克隆表达及其多克隆抗体的制备

目的: 克隆表达H:z66阳性伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB:z66,并纯化制备相应的多克隆抗体.方法: 利用PCR 技术从H:z66阳性伤寒沙门菌基因组DNA中得到鞭毛素基因fljB:z66,将该基因克隆到表达载体pET-28a(+)上并在大肠埃希菌JM109中进行表达;fljB:z66的表达产物经Ni柱纯化后作为抗原免疫兔以制备多克隆抗体.结果: 经PCR及序列分析证实,伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB:z66 被成功导入表达载体pET-28a(+),并在大肠埃希菌JM109中获得了高效表达,以此作为抗原成功制备了兔抗z66的多克隆抗体.结论: 成功克隆表达了H:z66阳性伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB:z66,并制备了相应的多克隆抗体,为今后深入研究H:z66阳性伤寒沙门菌的单向相变换机制奠定了基础.     

小儿鼠伤寒沙门菌感染

目的小儿鼠伤寒沙门菌感染临床表现不典型，常易导致误诊及病程迁延，本文简要综述小儿鼠伤寒沙门菌感染的流行病学、临床表现、治疗及预防。     

伤寒沙门菌fljA样基因表达载体的构建

目的：进一步明确二相伤寒沙门菌鞭毛抗原表达调节机制，系统分析伤寒沙门菌fljA样基因功能，构建含倒样基因的表达载体并验证其表达。方法：根据倒样基因两端序列设计引物，以z66抗原阳性伤寒沙门菌GIFU10007基因组为模板，通过PCR获得该基因，与表达载体pET22b连接后，重组体转化至大肠杆菌JM109中诱导培养，并通过RT-PCR观察傅4样基因表达情况。结果：基因克隆和序列分析结果显示伤寒沙门菌庳4样基因被成功导入载体pET22b，RT-PCR结果提示大肠杆菌JM109可利用此重组载体进行西4样基因表达。结论：成功获得能在大肠埃希菌中表达伤寒沙门菌西4样基因的载体。     

伤寒沙门菌生化特性分析

目的：了解现在的伤寒沙门菌可能发生的变异。方法：用纯化的伤寒沙门菌检测其抗原性、生化反应性等特性。结果：①与标准菌株的反应模式相比较,现在的菌株的Ｈ２Ｓ、ＭＲ反应、枸橼酸盐、肌醇、山梨醇、阿拉伯糖的反应性发生了改变,其中ＭＲ反应的变异有高度显著性差异（Ｐ〈０．００５）;②Ｈｄ抗原可消失而不丧失动力且很易发生变异（５２．００％）,Ｏ９抗原性亦可消失或减弱;③ＳＳ平板培养时,其菌落可发生侏儒型变异,变     

巢式聚合酶链反应扩增外周血吞噬细胞内外伤寒沙门菌Vi基因

目的：明确外周血吞噬细胞内外伤寒沙门菌Ｖｉ基因检测在伤寒诊断中的意义。方法：高速离心沉淀,低渗溶解红细胞法分离８５例临床拟诊伤寒患者外周血吞噬细胞（内）及吞噬细胞外（血清中）伤寒沙门菌,巢式聚合酶链反应扩增伤寒沙门菌Ｖｉ基因;并与单管套式聚合酶链反应扩增粒细胞内伤寒沙门菌Ｈ基因、巢式聚合酶链反应扩增单核细胞内伤寒沙门菌Ｖｉ基因、１次聚合酶链反应扩增血清中伤寒沙门菌Ｈ基因比较。结果：巢式聚合酶链反应     

伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株16SrRNA基因的检测与分析

目的 探讨伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株的菌种相关性或亲缘性.方法 分离提取伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株及其亲代细菌型的染色体DNA,采用16SrRNA基因引物进行PCR扩增,对扩增的16SrDNA产物进行琼脂糖凝胶电泳和碱基序列测定.结果 经PCR扩增后伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株及其亲代细菌型均获得了大小约230 bp的特异性片段,其产物经琼脂糖凝胶电泳可见在230 bp处出现与其亲代细菌型一致的DNA条带,碱基序列测定显示具有同其亲代细菌型一致的核苷酸序列.结论 伤寒沙门菌的细胞壁缺陷突变株虽然丧失了常规细菌学可检测的绝大多数表型特征,但检测16SrRNA基因能快速、灵敏地对其进行菌种相关性或亲缘性的分析与鉴定,并且也有利于对各种不能自发返祖的细菌稳定L型进行菌种相关性或亲缘性的分析与鉴定.     

伤寒沙门菌DNA旋转酶A亚单位基因(gyrA)序列分析

本文利用伤寒沙门菌２７５（临床敏感菌株）及其耐喹诺酮类自发变异株ＲＧ１,测定其ＤＮＡ旋转酶Ａ亚单位基因（ｇｙｒＡ）喹诺酮类耐药决定区（ＱＲＤＲ）碱基序列。分析药物与细胞相互作用关系。结果发现伤寒沙门菌２７５ｇｙｒＡ第１２８－４３４位碱基与大肠埃希菌ＫＬ－１６、鼠伤寒沙门菌ＮＣＴＣ７４及铜绿假单胞菌ＰＡＯ１相应碱基有９２．５１％、９７．２２％及７７．３５％同源性,推定氨基酸仅有３、２及１３处变异;伤     

半巢式PCR一步法扩增伤寒患者单核细胞中伤寒沙门菌DNA

建立适用于临床检测血中伤寒沙门菌ＤＮＡ扩增方法。分离患者单核细胞，加热裂解制板ＤＮＡ，半巢式ＰＣＲ一步法扩增Ｓ．ｔｙｐｈｉ鞭毛基因。     

关节液培养伤寒沙门菌1例

本文分离培养1例人工关节感染患者关节液标本病原菌。选用全自动细菌/分枝杆菌培养系统（BACT/ALERT）需氧、厌氧血培养瓶进行病原菌增菌培养,需氧、厌氧报告阳性再用血平板、麦康凯平板分离。采用形态学、Vitek2COMPACT（全自动细菌鉴定/药敏分析仪）、血清学分型试验进行细菌鉴定。从关节液中检出了伤寒沙门菌,伤寒沙门菌可引起人工关节感染。对人工关节感染的治疗,在关节液和关节假体周围组织培养出细菌并获得药敏结果是治疗的关键。     

伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株的生物学特性

目的探讨细胞壁缺陷对细菌生物学特性的影响。方法诱导获得伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株，采用电镜和玻片凝集试验，与亲代细菌型进行比较研究。结果伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株在营养琼脂平板上形成珊瑚红色的圆形、凸起、湿润、边缘整齐而不透明的菌落，低倍镜下菌落为圆球形细胞堆积的颗粒样，不被发酵糖类和沙门菌H或O抗血清凝集。结论细胞壁缺陷可导致细菌丧失部分代谢特性。     

鼠伤寒沙门菌L型变异对噬菌体敏感性的影响

目的：探讨鼠伤寒沙门菌的Ｌ型变异对噬菌体敏感性的影响。方法：用１２株鼠伤寒沙门菌分型噬菌体对３株体外诱导的鼠伤寒沙门菌Ｌ型及其原菌做噬菌体敏感性检测。结果：裂解原菌的噬菌体大多不能裂解其Ｌ型菌，只有少数噬菌体能同时裂解原菌及其Ｌ型菌。结论：鼠伤寒沙门菌的Ｌ型变异可引起噬菌体受体的丢失，从而导致对相应的噬菌体不再敏感。     

40例小儿鼠伤寒沙门菌临床分析

目的：对本地区鼠伤寒沙门菌感染患儿进行临床分析。方法：对我院2012年—2015年经粪便培养证实为鼠伤寒沙门菌感染患儿40例的临床表现、实验室检查、药敏及治疗和转归情况进行分析。结果：本组病例发病以婴幼儿多见,特别是6月-2岁多见;绝大部分病例出现腹泻及发热表现;全部病例炎症特异性指标并不能反应感染鼠伤寒沙门菌,或是提示感染了鼠伤寒沙门菌;药敏试验中亚胺培南敏感率 100%,哌拉西林／他唑巴坦敏感率85.74％、氨曲南敏感率78.57％,头孢他定敏感率为64.28％,对头孢曲松敏感率为57.14％,敏感度越高治疗效果越好。结论：粪便培养是确诊鼠伤寒肠炎的重要方法,结合药敏试验选用敏感抗生素可取得较好的治疗效果。