宫颈癌组织中HPV16 E7序列多态性分析

目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性.方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变.结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸.结论广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846.     

宫颈病变中HPV16/18感染与P16^INK4A蛋白表达的关系

目的通过检测宫颈癌及其癌前病变组织中HPVl6／18感染和P16^INK4A蛋白表达的情况，探讨两者之间的关系以及它们在病理诊断中的意义。方法应用荧光定量PCR技术对宫颈组织进行HPV DNA定性检测，采用Envision两步免疫组织化学染色方法检测P16^INK4A蛋白表达。结果268例宫颈组织中HPVl6／18的总检出率为53．73％（144／268），其检出率随CINI级、CINⅡ～Ⅲ级和宫颈鳞癌病变程度的加重而显著增高（P〈0．05）。P16^INK4A“蛋白表达的阳性率在慢性宫颈炎、CINI级、CINⅡ一Ⅲ级和宫颈鳞癌组织中两两比较均有显著性差异（P〈0．05）。HPVl6／18感染与P16^INK4A蛋白的表达呈正相关关系（r8=0．689，P〈0．01）。结论HPV16／18感染可能通过影响P16^INK4A“蛋白的过表达与宫颈癌及其癌前病变的发生发展密切相关，二者联合检测对宫颈癌的筛查和预防具有重要意义。     

宫颈癌组织中HPV16E7序列多态性分析

目的 探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性。方法 采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变。结果 50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例。33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸。结论 广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846。     

宫颈癌及其癌前病变组织中HPV16 E6蛋白的表达及意义

目的：探讨宫颈癌及其癌前病变组织中16型人乳头瘤病毒（HPV16）E6蛋白的表达及其意义.方法：用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别宫颈上皮内瘤变（LCIN）、11例高级别宫颈上皮内瘤变（HCIN）以及61例浸润性宫颈癌标本进行了HPV16 E6蛋白表达的检测.结果：HPV16 E6蛋白在正常宫颈上皮、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0（0/15）、7.14%（1/14）、36.36%（4/11）、59.02%（36/61）.高级别CIN和浸润性宫颈癌中HPV16 E6蛋白阳性率明显高于正常宫颈组织和低级别CIN（P〈0.05）,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌临床分期、组织分化和淋巴结转移无关（P〉0.05）.结论：HPV16 E6蛋白的检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.     

HPV16相关宫颈癌组织中MUC16和E6表达的关系

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)16相关宫颈癌组织中粘蛋白抗原16(MUC16)与E6表达的关系。方法:以HPV16 E6阳性和阴性的宫颈癌细胞系和宫颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织(184例)为研究对象,采用Western blot和免疫组化方法检测HPV16 E6和MUC16的表达。结果:Western blot结果显示:C-33A细胞中HPV16 E6无表达,Ca Ski细胞和Si Ha细胞中可见HPV16 E6表达;C-33A细胞中MUC16的表达低于Ca Ski细胞和Si Ha细胞(P<0.05),Ca Ski细胞和Si Ha细胞中MUC16的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示:HPV16E6阳性的宫颈鳞癌组织中MUC16的表达高于HPV16 E6阴性的宫颈鳞癌组织(χ2=43.670,P<0.001)。结论:宫颈癌细胞系和鳞癌组织中MUC16与E6表达可能有关。     

宫颈癌组织中HPV16E6、E7蛋白水平与患者临床病理特征及预后的关系

目的 探究宫颈癌组织中16型人乳头瘤病毒E6蛋白(human papilloma virus type 16 E6 protein, HPV16 E6)、16型人乳头瘤病毒E7蛋白(human papilloma virus type 16 E6 protein, HPV16 E7)水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取行宫颈癌根治术87例患者的肿瘤组织、癌旁组织、正常宫颈组织标本进行研究,采用免疫组织化学法检测组织中HPV16 E6、HPV16 E7蛋白表达情况,并结合患者临床病理特征进行分析,采用Kaplan-Meier生存曲线比较患者3年生存情况,采用COX回归分析各项因素对患者预后的影响。结果 免疫组化结果显示肿瘤组织中HPV16 E6、HPV16 E7阳性率高于癌旁组织和正常组织(P<0.05); HPV16 E6及HPV16 E7蛋白阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(P<0.05);多因素分析显示HPV16 E6、HPV16 E7阳性是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论 HPV16 E6、HPV16 E7蛋白在宫颈癌组织中...     

宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检测及其意义

目的：探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因的检测及其意义。方法：运用PCR方法扩增HPV16E6／E7基因，分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列，宫颈炎和宫颈癌的确诊依赖于病理学方法。结果宫颈癌组织中HPV16E6基因的检出率为45％，显著高于宫颈炎组织中5％的检出率，两者有统计学差异。HPV16E7基因的检出率在两者之间没有显著性差异。结论：HPV16E6基因在宫颈癌的发病中起到重要的作用。宫颈组织中HPV16E6基因的检测有望成为宫颈癌筛查的新手段。     

宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构变异及其意义

目的了解宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7基因的结构及其原核表达蛋白的免疫原性.方法运用PCR的方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列,ITPG诱导原核表达HPV16 E7蛋白,ECL Western blot的方法检测表达蛋白的免疫原性.结果宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构中存在两处点突变,分别是第43位密码子由标准株CAA变为TAA,第76位密码子由标准株CGT变为TGT.原核表达的HPV16 E7变异蛋白不能被HPV16 E7单克隆抗体识别.结论宫颈癌组织中HPV16 E7基因存在两个点突变,突变后的E7蛋白失去了免疫原性.将这种变异的HPV16 E7用于疫苗的研究开发,可能因其表达蛋白丧失恶性生物学行为而具有较高的安全性.     

宫颈癌组织HPV16 URR及E7基因突变和序列多态性分析

目的 分析山东省青岛地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)上游调控区(URR)和E7开放读码框(OFR)基因突变和基因序列多态性.方法 收集山东省青岛地区妇女宫颈癌标本共111例,提取DNA作为模板,应用通用引物和型特异引物经聚合酶链反应(PCR)筛选HPV16阳性标本,PCR结合测序检测HPV16阳性标本URR和E7基因全序列,经DNAStar 100软件和在线BLAST分析其变异情况.结果 宫颈癌组织中HPV和HPV16感染率分别为99.10%(110/111)和73.63%(81/110);核苷酸水平上HPV16 URR形成24种变异模式,同源性在98.02%～99.26%之间,nt7518 G→A和nt7861 A缺失变异率均为100%(26/26).HPV16 E7形成12种变异模式,同源性在99.23%～100%之间;nt647 A→G突变率58.54%(24/41),氨基酸由Asn→Ser(N29S)、nt666 G→A突变率24.39%(10/41),为同义突变.结论 山东省青岛地区妇女宫颈癌组织中HPV16 URR和E7基因均存在变异;HPV16 URR突变热点为nt7518和nt7861,HPV16 E7突变热点为nt647,且二者尚存在未见报道的变异位点.     

宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法的建立及意义

目的：建立宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法,分析宫颈癌发生各时期的HPV16早期基因E6相关转录的情况。方法：留取HPV16阳性的宫颈肿瘤组织63例,包括8例低度鳞状上皮内瘤变（LSIL）、38例高度鳞状上皮内瘤变（HSIL）和17例宫颈癌,提取RNA,利用含保守序列的RT引物将标本中的mRNA反转录成5’端含保守序列的cDNA,并利用HPV16E6特异性引物（P1）和保守序列（P0）进行PCR扩增,建立特异性扩增HPV16E6相关转录本的方法,检测标本中HPV16E6相关的转录本,通过E6特异性探针进行Southern杂交加以验证。结果：成功建立了HPV16E6相关转录模式分析的方法。经分析HPV16阳性的LSIL、HSIL及宫颈癌组织中E6转录模式结果发现,不同级别HPV16阳性的宫颈肿瘤组织的转录模式差异显著。随着LSIL向宫颈癌发展,肿瘤组织中HPV16E6转录本种类增多,且优势转录模式逐渐清晰。结论：成功建立HPV16E6相关转录模式分析的方法,并发现HPV16早期基因E6相关的转录模式与宫颈肿瘤癌变程度密切相关,其可能参与宫颈癌的发生和发展。     

HPV16E6和E7基因序列多态性与宫颈癌临床病理特征相关性

目的 探讨宫颈癌人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7转化基因序列多态性,及其与宫颈癌临床病理特征的相关性.方法 从77例宫颈癌组织中筛选出51例HPV16阳性标本,扩增E6及E7基因,PCR产物进行序列测定.应用DNAStar生物软件进行核苷酸和氨基酸序列的分析.结果 宫颈癌组织中HPV16 E6共测得6个突变位...     

组织芯片检测MCM2和HPV16在宫颈癌中的表达及意义

目的：探讨MCM2和HPV16在宫颈癌组织中的表达及相关性。方法：采用免疫组化ABC法检测MCM2和HPV16在不同病变宫颈组织芯片中的表达。结果：MCM2在宫颈癌中表达高于正常宫颈,有显著性差异（P〈0.05）,HPV16在宫颈癌和C IN中表达高于正常宫颈（P〈0.05和P〈0.01）。HPV16表达与病理类型有关,宫颈鳞癌中阳性表达显著高于宫颈腺癌,有显著性差异（P〈0.05）。HPV16与MCM2呈明显正相关（r=0.3608,P〈0.01）。结论：MCM2和HPV16在宫颈癌变过程中起协同促进作用。MCM2是一个敏感、可靠地反映宫颈上皮细胞增殖的指标,其结合HPV的检测对判断宫颈病变的性质及程度有参考价值。     

hTERT和HPV16/18E6蛋白表达与宫颈病变的关系及意义

目的：探讨人端粒酶逆转录酶（hTERT）和人乳头状瘤病毒16/18型E6蛋白（HPV16/18E6蛋白）表达与宫颈病变之间的关系及意义.方法：通过免疫组化SupervisionTM二步法检测宫颈病变中hTERT及HPV16/18E6蛋白的表达.结果：hTERT和HPV16/18E6蛋白表达均随宫颈病变严重程度增加而增加,且与病变级别呈正相关（r=0.475,r=0.416,均P＜0.05）;hTERT与HPV16/18E6蛋白表达呈正相关（r=0.372,P＜0.05）.结论：hTERT及HPV16/18E6蛋白参与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生,两者具有一定的相关性.     

宫颈癌组织中HPV和p53基因表达的检测

①目的 探讨人乳头瘤病毒（HPV）感染和p53基因异常在宫颈癌发生发展中的作用。②方法 用PCR技术检测12例宫颈原位癌、45例宫颈癌和20例正常宫颈组织中HPVl6／18DNA，RT-PCR检测HPV16／18阳性标本E6基因mRNA表达，聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测p53基因外显子5～8的突变，同时采用免疫组化技术检测P53蛋白的表达。③结果 宫颈原位癌、宫颈癌HPV16／18阳性率均为66．67％，明显高于正常宫颈组织（20．00％），差异有显著性（χ^2=5．12、12．09，P〈0．05、0．01）。宫颈癌组织中HPV16／18 E6基因mRNA阳性表达率明显高于正常宫颈组织，差异有显著性（P=0．039）。宫颈原位癌和正常宫颈组织间、宫颈原位癌和宫颈癌间HPV16／18 E6 mRNA阳性表达率差异均无显著性（P=0．141、0．272）。45例宫颈癌标本中测得exon5和exon7突变各1例，均发生在HPV阴性宫颈癌组织，未检测到exon6和exon8的突变。宫颈原位癌和正常宫颈组织中均未检测到p53基因突变。正常宫颈组织中未检测到P53蛋白表达，宫颈原位癌和宫颈癌组织中P53蛋白阳性表达率分别为25．00％和42．22％，明显高于正常宫颈组织（χ^2=10．81，P（0．01）。P53蛋白的表达与HPV16／18感染无明显相关性（P〉O．05）。④结论 HPV感染和p53基因异常与官颈癌的发生密切相关，官颈癌组织中p53基因的突变率较低，推测P53蛋白的异常累积可能并非p53基因突变所致。     

宫颈癌人乳头瘤病毒与人巨细胞病毒感染的病例对照研究

了解宫颈癌患者及对照患者宫颈组织中人乳头瘤病毒（HPV）与人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况。应用聚合酶链反应方法检测宫颈新鲜活检组织HPV与HCMV。36例宫颈癌及38例子宫肌瘤患者的宫颈组织中，HPV合并入HCMV感染检测阴性率分别为2．8％和31.6％，HPV单独感染的检出率分别为25.0％和15.8％（P＜0.05），OR＝18.0；HCMV单独感染的检出率分别为83％和289％（P＞0.05），OR＝3．27；HPV合并HCMV感染的检出率分别为63.9％和30.7％（P＜0．01），OR＝30.7。在β-球蛋白基因阳性的27例宫颈癌及30例子宫肌瘤患者的宫颈组织中，HPV合并HCMV感染检测阴性率分别为3.7％和36.7％，HCMV单独感染的检出率分别为11.1％和20.0％（P＜0.05），OR=5．50。结论：HPV感染和江西的宫颈癌密切相关。HCMV感染可能在宫颈癌发生过程中与PIPV感染发生相关作用。     

P16、P15在子宫颈癌中的表达及临床病理意义研究

目的 :研究P16、P15在子宫颈癌中的表达特点 ,并探讨其与临床分期、病理分级、淋巴结转移及预后的关系和意义。方法 :应用超敏S -P免疫组化方法检测 4 3例宫颈鳞癌及 10例正常宫颈组织、10例宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)中的P16、P15的表达情况 ,并结合临床分期、病理分级、淋巴结转移及预后情况进行分析。结果 :(1)在 4 3例宫颈癌中P16阳性细胞主要为胞浆染成棕黄色 ,少数标本中胞核也染成棕黄色 ;P15阳性细胞胞核、胞浆均为棕黄染色 ,但胞核染色比胞浆深。 (2 )P16和P15蛋白表达结果相比较无统计学意义 ,但二者在宫颈癌组织的表达明显低于在对照组正常宫颈中和CIN中的表达率。统计学分析有系统性线性趋势。 (3)P16和P15蛋白表达在I、II、III级中的差异均无显著性。 (4)P16、P15在宫颈癌I～IV期中的表达虽有下降趋势 ,但差异均无显著性。 (5 )P16 ,P15在淋巴结转移组中的阳性表达率明显低于在无淋巴结转移组的阳性表达率 ,(6 )子宫颈癌患者术后生存期≥ 5年者 ,P16和P15蛋白的表达阳性率显著高于生存期 <5年者。结论 :抑癌基因P16、P15的表达缺失在子宫颈癌中同时存在 ,二者的表达缺失积极参与了宫颈癌的发生、发展和转移 ,二者的联合表达缺失预示患者预后差。P16、P15蛋白的检测对评估子宫颈癌淋巴结转移     

外源性HPV16 E7癌基因表达对宫颈癌HeLa细胞Cyclin E表达的影响

目的研究重组腺病毒介导人乳头状瘤病毒（HPV）16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期蛋白E（Cyclin E）表达的影响,探讨HPV16 E7癌基因以及Cyclin E在宫颈癌发生发展中的作用。方法用含有HPV16 E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞。免疫荧光染色后激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）检测感染前后Cyclin E表达的差异。结果HPV16 E7感染后Cyclin E表达较感染前明显增加。结论HPV16 E7基因的表达促进Cyclin E的表达,对宫颈肿瘤细胞有增殖促进的作用。     

宫颈癌组织中PTEN、P16蛋白的表达及临床意义

①目的　探讨肿瘤抑制基因PTEN、P16与原发性宫颈癌的关系。②方法　应用免疫组化技术 ,检测2 0例正常宫颈组织和 71例原发性宫颈癌组织PTEN、P16蛋白表达水平。③结果　PTEN蛋白在宫颈癌组织中阴性表达率为 33.80 % ,PTEN的阴性表达与鳞癌关系密切 (χ2 =7.5 3,P <0 .0 5 ) ,与腺癌无明显关系。P16蛋白阴性表达率为 11.2 6 % ,P16蛋白的阴性表达与宫颈癌无明显关系 ;在宫颈鳞癌组织中P16蛋白过表达率为 5 6 .4 5 % ,两者关系密切 (χ2 =5 .99,P <0 .0 5 )。④结论　PTEN蛋白阴性表达在宫颈鳞癌中起重要作用 ,与腺癌关系不密切。在宫颈鳞癌中P16蛋白的过表达较阴性表达更重要 ,可能是宫颈癌中高危人乳头状病毒感染的一种表现。     

宫颈癌高危人群HPV16及18感染检测方法的建立

①目的　建立宫颈癌高危人群人乳头状瘤病毒 (HPV) 1 6及 1 8感染的检测方法。②方法　对HPV1 6及 1 8E6 /E7基因序列进行序列比较分析 ,根据二者的共享序列设计通用引物 ,进行外侧扩增 ;在通用引物扩增序列之间分别设计HPV1 6和 1 8的特异性引物 ,分别进行半套式PCR扩增 ,以检测并鉴定女性宫颈分泌物中HPV1 6及 1 8的感染。对该方法的敏感度和特异度进行了测定 ,并用该法对 31例宫颈癌病人和 1 1 3例对照组妇女宫颈分泌物进行了检测。③结果　PCR扩增后HPV1 6、HPV1 8分别有 341、4 30bp和 1 0 9、4 73bp的带产生。该反应体系最低可检测浓度为 3μg/L。用该方法对人类基因组DNA、人类巨细胞病毒 (HCMV)和大肠埃希菌DNA以及其他型别的HPV进行检测 ,均未见假阳性结果产生。宫颈癌病人HPV1 6的感染率为 6 7.7% ,HPV1 8的感染率为 1 9.4 % ,明显高于对照组 (χ2 =31 .5 2、6 .2 6 ,P <0 .0 1、0 .0 5 )。④结论　HPV1 6、HPV1 8感染与宫颈癌的发生密切相关。本研究建立的方法具有特异度和敏感度高、简便、快速等特点 ,可推广应用于临床检测。