四氢生物蝶呤对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用

目的：探讨四氢生物蝶呤(BH4)对肾缺血再灌注损伤(IR)模型的作用及其作用机制。方法：复制大鼠肾缺血再灌注模型，手术前1h喂饲BH4，动态检测其对肾组织NO含量、cNOS和iNOS活性的影响，并通过肾功能、MPO、MDA的变化来评价BH4对肾IR模型的作用。结果：BH4能够升高再灌注早期cNOS活性，增加内皮源性NO含量，减轻炎症反应，减弱再灌注后期对iNOS的诱导作用。结论：BH4可改善再灌注初期cNOS活性，保护肾功能。     

叶酸抑制大剂量甲氨蝶呤细胞毒性的试验研究

目的:研究叶酸抑制大剂量甲氨蝶呤(MTX)细胞毒性的作用。方法:通过体外Caco-2细胞的摄取试验方法结合高效液相联用双质谱技术,分别测定在1、10、100μmol.L-1叶酸存在下,Caco-2细胞与1μmol.L-1MTX共孵育30min后细胞所摄取MTX的量,并设立无叶酸对照组,以细胞中药物量/介质中药物量(C/M)的比值为指标。结果:共孵育30min后,无叶酸对照组C/M=5.13(n=4),而在1、10、100μmol.L-1叶酸存在条件下,C/M比值分别为4.91、4.22、3.74(n=4),与无叶酸对照组比较,100μmol.L-1叶酸存在条件下细胞摄取MTX的比例明显减少(P<0.05)。结论:当叶酸浓度为100μmol.L-1时有抑制大剂量MTX(1μmol.L-1)细胞毒性的作用,对细胞具有一定的保护作用。     

褪黑素对高糖条件下牛主动脉内皮细胞NOS活性和iNOS mRNA表达的影响

目的 观察褪黑素(Melatonin, Mel)对高糖条件下牛主动脉内皮细胞一氧化氮合酶(nitric oxidase,NOS)活性及表达诱生型一氧化氮合酶(iNOS)基因的影响,以探讨Mel的血管内皮保护作用.方法 原代培养牛胸主动脉内皮细胞,取3～5代用于实验.实验分5组:A组为低糖对照组,培养液中葡萄糖浓度为5.5mmol/L;B组为高糖(33mmol/L)对照组;C组为高糖(33mmol/L)、亚生理浓度Mel组(10-13mol/L):D组为高糖(33mmol/L)、生理浓度Mel(10-9mol/L)组;E组为高糖、药理浓度Mel(10-5mol/L)组.体外孵育24h后, 比色法检测培养液中NOS活性,逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测内皮细胞iNOS mRNA表达.结果 A组NOS活性及iNOS mRNA表达均显著低于B组(均P＜0.01);B组与C组比较两者均无显著性差异(均P＞0.05);D组、E组NOS活性均显著低于B组(均P＜0.05);D组、E组iNOS mRNA表达均显著低于B组(均P＜0.01).结论 生理及药理浓度Mel对高糖条件下牛主动脉内皮细胞有一定的保护作用.     

A771726对体外培养胶原性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响

目的:在体外培养环境中,研究来氟米特活性代谢产物A771726,对脂多糖(LPS)刺激的胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMФ)产生一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响及作用机制。方法:建立大鼠CIA模型,无菌制备CIA大鼠PMФ悬液,A771726体外给药,硝酸还原法测定A771726影响CIA大鼠PMФ分泌NO的量效和时效关系;MTT法检测A771726对CIA大鼠PMФ细胞活力的影响;RT-PCR法测定A771726对CIA大鼠PMФ中诱导型一氧化氮合酶(inducible NO synthase,iNOS)mRNA表达的影响;Western blot法检测A771726对CIA大鼠PMФ中iNOS蛋白表达的影响。结果:A771726体外用药,可有效降低CIA大鼠PMФ中NO的分泌,且抑制作用有明显的量效和时效关系;A771726在有效抑制NO分泌的浓度范围和作用时间内,对PMФ的细胞活力无明显作用;A771726(0.1、1、10μmol/L)能显著抑制CIA大鼠PMФiNOS mRNA和iNOS蛋白的表达。结论:A771726(0.1、1、10μmol/L)可能通过抑制CIA大鼠PMФiNOS mRNA的转录,进而影响i NOS蛋白的翻译,最终引起NO的分泌减少。该作用并非由A771726对PMФ的毒性引起。     

硫化氢下调大鼠主动脉L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路

目的观察H2S对血管L-精氨酸/一氧化氮(L-Arg/NO)通路的影响以探讨H2S和NO这两种气体信号分子间的相互作用。方法离体孵育大鼠主动脉薄片,加入H2S供体NaHS(10-7~10-4mol.L-1)孵育4 h,及50μmol.L-1NaHS分别孵育2、4和6 h。采用G re iss法测定血管亚硝酸盐含量;同位素示踪法检测血管组织一氧化氮合酶(NOS)活性及L-Arg转运,RT-PCR检测eNOS、CAT1基因表达。结果一次性给予50μmol.L-1NaHS,孵育2 h,孵育液中NO2-含量比对照组低62%,血管NOS活性下降48%,L-Arg转运减少50%(P<0.01);孵育6 h,NO2-含量比对照组低19%(P<0.05),而NOS活性和L-Arg转运已基本恢复(P>0.05)。NaHS(10-7~10-4mol.L-1),呈浓度依赖的抑制了L-Arg/NOS/NO通路,IC50分别为0.499、3.198及3.927μmol.L-1(P<0.01);而给予50μmol.L-1NaHS后,eNOS和CAT-1A的mRNA表达分别减少34.3%和55.1%(P<0.01)。结论H2S通过抑制血管组织L-Arg转运和NOS活性和基因表达,下调L-Arg/NOS/NO通路,从而减少血管NO生成。     

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉安对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的 观察S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺（SNAP）对RAW 264.7诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响,探讨NO在动脉粥样硬化（炎症）过程中的作用.方法 以RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组,采用不同浓度（30、100、300、400、500μmol/L）的SNAP对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW 264.7巨噬细胞iNOS mRNA的表达,采用Western blotting技术检测iNOS蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,不同浓度SNAP（30、100、300、400、500 μmol/L）组iNOS mRNA的表达比空白对照组均明显降低（P＜0.05）,不同浓度SNAP（30、100、300 μmol/L）组iNOS蛋白表达明显低于空白对照组（P＜0.05）.结论 NO可以抑制巨噬细胞自身iNOS mRNA基因转录,降低iNOS的合成而发挥负反馈作用.     

雷公藤氯内酯醇对小鼠肺泡巨噬细胞体外炎性反应的影响(英文)

目的:探讨雷公藤单体雷公藤氯内酯醇(tripcholorolide,T4)对肺泡巨噬细胞(AM)炎症反应的影响及机制.方法:小鼠AM受脂多糖(LPS)10mg/L刺激的同时,加入T4 500 μg/L或地塞米松 100μmol/L;ELISA法测定上清液中TNFα、IL-1β、IL-6及IL-10浓度:RT-PCR检测上述因子及iNOS基因mRNA的表达.结果:AM受10 mg/L LPS刺激24小时后,上清液中TNFα、IL-1β、IL-6、IL-10及NO释放均明显增加.T4 500 μg/L及地塞米松100μmol/L对上述介质均有不同程度的抑制作用.LPS刺激5小时后,AM中TNFα、IL-6、IL-10和iNOS的mRNA表达均明显增加.T4和地塞米松对上述介质的mRNA表达均有明显抑制作用.另外,T4对TNFα、IL-6、IL-10 mRNA的稳定性无明显影响.结论:T4具有抑制AM中促炎介质和抗炎介质表达的作用.     

甲氨蝶呤化疗的血药浓度监测及意义

目的 观察大剂量甲氨蝶呤(MTX)化疗在骨肉瘤治疗中血药浓度监测的意义.方法 30例骨肉瘤患者接受30例次大剂量MTX化疗,每次6～10 g/m<'2>,应用后6 h用亚叶酸钙(CF)解救.监测用药后MTX的血药浓度.结果 用药后0、24、48、72 h MTX的血药浓度分别为(388.84±101.06)μmol/L、(7.00±7.18)μmol/L、(0.98±1.17)μmol/L、(0.31±0.37)μmol/L.结论 MTX在体内处置个体差异大,监测血清MTX浓度,充分水化、碱化,适时CF解救,是保证大剂量使用MTX临床安全的关键因素.     

神经生长因子在培养的大鼠脑皮质神经细胞抑制谷氨酸引起的一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮释放(英文)

目的研究神经生长因子(NGF)对谷氨酸引起的原代培养的神经细胞一氧化氮(NO)释放和原生型一氧化氮合酶(cNOS)基因表达的影响。方法测定神经细胞的生存力来分析NGF的作用。用荧光分析法测定细胞上清液NO含量 ,用Northernblot杂交法观察cNOSmRNA表达。结果谷氨酸(0.5～2.0mmol/L)引起神经元大量死亡 ,NO过量释放。NOS抑制剂L_NAME(100μmol/L)及NGF(100μg/L)显著抑制谷氨酸引起NO释放及细胞死亡。NGF(50,100μg/L)显著降低谷氨酸引起的cNOSmRNA的高表达。结论NO介导了谷氨酸对皮质神经元的毒性 ,NGF通过抑制cNOS活性 ,降低NO释放来保护大脑皮质细胞对抗谷氨酸毒性     

甲醛诱导内皮细胞ADMA代谢紊乱及其机制

目的观察甲醛对内皮细胞不对称性二甲基精氨酸(ADMA)代谢的影响,分别从氧化损伤及DNA-蛋白质交联两个方面分析甲醛影响ADMA代谢的特征,研究甲醛对内皮细胞损伤的可能机制。方法利用甲醛与人脐静脉内皮细胞共培养建立细胞实验模型,采用DMEM(低糖)培养基培养人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12),取生长良好的3~6代细胞进行实验。分为实验组(分别加入终浓度为6.25、12.5、25、50、100、200和400μmol/L的甲醛)和对照组(加入等体积的PBS溶液),采用丙酮酸二硝基苯腙比色法、二硫代二硝基苯甲酸比色法、黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法、化学比色法、高效液相色谱法、KCL-SDS沉淀法、SigmaPlot8.0作图。结果(1)甲醛对内皮细胞的损伤,在本研究所用的剂量范围内,表现出2个特点:6.25~25.00μmol/L甲醛组使细胞上清液LDH漏出下降,50.00~400.00μmol/L甲醛组使细胞上清液LDH漏出升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);(2)甲醛诱导氧化损伤,低剂量(<12.50μmol/L)甲醛对细胞内GSH含量和SOD活力的影响与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);高剂量(>12.50μmol/L)甲醛能明显降低细胞内GSH含量和SOD活力,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);细胞上清液MDA的含量随着甲醛浓度的增加而升高,与对照组相相比差异有统计学意义(P<0.05);(3)甲醛对ADMA/eNOS的影响,甲醛呈浓度依赖性的诱导细胞上清液ADMA产生,并抑制细胞内DDAHⅡ活性,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低剂量(<12.50μmol/L)甲醛显著提升细胞内eNOS活性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);高剂量(>12.50μmol/L)甲醛呈浓度依赖性显著降低细胞内eNOS活性(P<0.05)。(4)甲醛诱导DNA-蛋白质交联,6.25~12.50μmol/L甲醛组诱导细胞内DPC交联率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);25.00~400.00μmol/L甲醛组促进细胞内DNA、蛋白质发生交联,DPC交联率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)甲醛诱导人脐静脉内皮细胞ADMA代谢紊乱,表现为呈浓度依赖性诱导内皮细胞ADMA产生。(2)甲醛诱导ADMA代谢紊乱可能与氧化损伤和(或)DNA-蛋白质交联所致DDAHⅡ活性降低有关。     

糖尿病心肌组织中NOS的改变与糖尿病心肌病关系探讨

目的探讨实验性糖尿病(DM)大鼠模型心肌组织中一氧化氮(NO)浓度和一氧化氮合酶(NOS)活性改变在DM心肌病发生和发展中的作用.方法SD大鼠一次注射链脲佐菌素(STZ)建立DM模型,成模后36只DM大鼠分批每两周检测空腹血糖和NO浓度,2、6、10周时进行心肌组织NOS活性检测.结果(1)DM大鼠血清中NO的浓度与对照组相比显著升高(P＜0.01),并随着血糖浓度的升高及时间的延长而升高.(2)DM组大鼠心肌组织NO浓度和NOS的活性均较对照组明显升高(P＜0.05).结论高血糖状态激活了心肌组织中的NOS,使心肌组织中NO过度增加,加上血液中过度升高的NO,损伤了心肌细胞的结构及其功能,可能是DM心肌病产生的重要机制之一.     

钌配合物用作一氧化氮调节剂的研究概况

概述钌配合物作为一氧化氮调节剂的特性和作用机制,简介若干具代表性的用作一氧化氮清除剂和释放剂的钌配合物及其生物学和药理学活性.钌与一氧化氮形成的配合物具有独特的化学性质,不同类型的钌配合物可在体内选择性地清除或释放一氧化氮,从而调节体内的一氧化氮浓度,用于治疗与一氧化氮有关的疾病.     

胃幽门螺杆菌与胃粘膜一氧化氮合酶表达的意义

目的探讨在胃癌发生过程中Hp感染与iNOS表达的关系及意义。方法采用快速尿素酶试验及Warthin-Starry银染色法检测入选病例的Hp,用免疫组织化学染色法检测iNOS。结果①在浅表性胃炎、胃溃疡、萎缩性胃炎及胃癌各组中Hp感染阳性率分别为55.2%、56.0%、43.5%、65.4%,各组间无显著性差异(P>0.05)。②iNOS表达在浅表性胃炎、胃溃疡、萎缩性胃炎和胃癌各组中阳性率分别为51.7%、52.0%、65.2%、80.8%,各组同浅表性胃炎比较:胃癌组有显著性差异(P<0.05),萎缩性胃炎组无显著性差异(P>0.05)。③Hp感染与iNOS表达的关系:各组慢性胃病中Hp感染阳性者iNOS表达率均显著高于非感染者(P<0.05)。④iNOS于胃癌中表达增强,在不同分化程度的胃癌中的表达无明显规律性。结论Hp可能参与慢性胃病的发生发展过程。iNOS高表达提示NO在炎症、溃疡乃至胃癌发生过程中有重要意义。     

赖诺普利与氯沙坦预防压力负荷性心肌肥厚的实验研究

目的 探讨大鼠心肌肥厚时心血管重构的结构、生化改变及赖诺普利与氯沙坦对心血管重构的预防作用。方法 膈下腹主动脉缩窄法建立大鼠心肌肥厚模型。假手术组、模型组、降压和非降压剂量赖诺普利与氯沙坦在术后第2天用药至30天后，检测平均动脉压(MAP)、心肌肥厚程度及局部心肌组织一氧化氮(N0)、一氧化氮合酶(NOS)和胶原蛋白含量。结果 (1)与假手术组相比，模型组MAP、左室重量(LVW)、左室重量指数(LVMI)、心肌细胞横径(TDM)、胶原蛋白分别提高28．6％、20．5％、26．9％、17．9％、54．4％(P＜0．01)；NO、NOS分别降低53．4％、51．2％(P＜0．01)。(2)降压剂量赖诺普利与氯沙坦和非降压剂量氯沙坦干预后，LVW、LVMI、TDM、NO、NOS、胶原蛋白含量与假手术组无明显差异。非降压剂量赖诺普利可使LVW、LVMI和TDM下降，但仍高于假手术组(P＜0．01)，NO、NOS改善不明显；(3)LVMI与MAP、胶原蛋白含量均呈正相关(分别为γ=0．7841，γ=0．8177，P＜0．01)，与NO显负相关(γ=-0．7730，P＜0．01)。结论 心血管重构与血压、心脏间质成分及NO有密切关系；赖诺普利预防心肌肥厚可能是血流动力学和非血流动力学因素共同作用的结果；氯沙坦可能主要依靠非血流动力学因素抗心肌肥厚。     

5/6肾切除对尿毒症心衰大鼠主动脉NO病理生理机制的影响研究

目的探讨5/6肾切除对尿毒症心衰大鼠一氧化氮(NO)病理生理机制的影响。方法将50只雄性SD大鼠随机分为肾切除(NX)组30只和假手术(Sham)组20只。2组常规检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)及24h尿蛋白定量,采用Griess法测定NO含量和一氧化氮合酶(NOS)活性,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)的基因表达。结果 NX组术后第6、8周血清BUN、肌酐Scr及24h尿蛋白定量均高于Sham组;eNOS活性低于Sham组;eNOSmRNA的表达水平低于Sham组,iNOSmRNA的表达水平高于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论主动脉(包括血管内皮细胞)被损伤后,iNOS增加,而eNOS减少,从而使主动脉的舒张度降低而最终导致心衰。对于5/6肾切除大鼠,受损的主动脉NO途径可能是尿毒症诱发心衰的机制之一。     

依普拉芬对去卵巢大鼠血清一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的探讨人工合成的植物雌激素依普拉芬对去卵巢大鼠血清一氧化氮及一氧化氮合酶合酶的影响。方法6个月龄雌性SD大鼠60只分为假手术组（10只SD大鼠）和去卵巢组（50只）;再将去卵巢大鼠分为阴性对照组,依普拉芬高、中、低剂量组和雌激素对照组（各10只）,分别给予基础饲料和不同剂量的依普拉芬,12周后测定血清NO及NOS。结果与假手术组相比,去卵巢大鼠阴性对照组血清NO及NOS明显降低,依普拉芬组高于阴性对照组,与假手术组比较差异无统计学意义。同时低于雌激素组。结论NO及NOS参与了骨质疏松的病理生理过程;依普拉芬可以通过提高去卵巢大鼠血清NO及NOS浓度达到防治绝经后骨质疏松症的作用。     

NOS阳性细胞在大鼠和小鼠睾丸内分布的比较研究

目的 研究一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞在大鼠和小鼠睾丸内分布的异同。方法 应用改进的NADPH-d黄递酶组织化学方法。结果 NOS阳性细胞分布于大鼠和小鼠的睾丸间质内,精曲小管壁各种细胞均呈NOS阴性反应,大鼠的NOS活性低于小鼠。结论NOS阳性细胞均分布于大鼠和小鼠的睾丸间质内,大鼠睾丸内NOS活性低于小鼠,提示大鼠睾丸内的NO促进生精力功能较弱。     

一氧化氮及一氧化氮合酶在成年与老年大鼠前列腺中的变化

目的:研究一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)在成年与老年大鼠前列腺中的变化,探讨在大鼠前列腺老年化过程中的临床意义。方法:取4月龄及20月龄SD雄性大鼠各6只,分别取前列腺组织匀浆,检测其NO与NOS活性。结果:老年组大鼠的NO与NOS活性明显低于成年组(P<0.05)。结论:老年大鼠前列腺组织中NO水平及NOS活性的降低可能与前列腺良性增生及功能减退有关。     

Antagonism of nitrous oxide-induced anxiolytic-like behavior in the mouse light/dark exploration procedure by pharmacologic disruption of endogenous nitric oxide function

Rationale. Previous studies have shown the anxiolytic-like effects of nitrous oxide (N₂O) to be sensitive to antagonism by non-specific inhibitors of nitric oxide synthase (NOS). Objectives. The present study was conducted to demonstrate further the involvement of nitric oxide (NO) and ascertain whether a specific isoform of NOS is involved in N₂O-induced behavior in mice. Methods. Male NIH Swiss mice were tested in the light/dark exploration test to determine how N₂O-induced behavior was affected by the following pretreatments: the NO scavenger hemoglobin (Hb); the selective nNOS-inhibitor S-methyl-l-thiocitrulline (SMTC); the selective eNOS-inhibitor N(5)-(1-iminoethyl)-l-ornithine (l-NIO); and the selective iNOS-inhibitor 2-amino-5,6-dihydro-6-methyl-4H-1,3-thiazine (AMT). Furthermore, NOS activity was assessed in the whole brain as well as five brain areas of N₂O- versus room air-exposed mice to determine the effects of N₂O on NOS activity. Results. The behavioral effects of N₂O in the light/dark exploration test were significantly attenuated following pretreatment with Hb (2.0 nmol, i.c.v.), SMTC (0.3 μg and 1.0 μg per mouse, i.c.v.) and the higher dose of l-NIO (30 mg/kg, s.c.). However, the N₂O-induced behavioral effect was unaltered by pretreatment with either the lower dose of l-NIO (10 mg/kg, s.c.) or AMT (1.0 mg/kg and 3.0 mg/kg, s.c.). Finally exposure to 50% N₂O for 15 min significantly increased NOS activity in the cerebellum and corpus striatum but not in other brain regions or whole brain. Conclusion. These findings provide further support for the hypothesis that NO is involved in N₂O-induced anxiolytic-like behavior and that this NO is the product of nNOS enzyme activity. Electronic Publication     

血浆高密度脂蛋白胆固醇及NOS NO水平与冠心病发病相关性研究

目的研究低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)血症与血浆一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)的相关性,探讨低HDL-C致动脉粥样硬化的可能机制。方法使用全自动生化分析仪测定血脂,选取79例低HDL-C患者和70名正常人群作为对照组,分别用化学比色法测定血浆NOS和用硝酸酶还原法测定血浆NO。结果低HDL-C组血浆NOS和血浆NO水平均显著低于健康对照组(P<0.05)。结论血浆低HDL-C可导致血浆NOS和NO水平显著降低,从而导致冠心病的发病率增高。