过量氟对体外培养小鼠磨牙牙胚发育的影响

目的:建立小鼠牙胚发育的体外培养模型 ,初步研究过量氟对小鼠牙胚发育的影响。方法 :取胎龄 18dBAL B/ c小鼠牙胚 ,在 96孔培养板 BGJb半固体培养基标准环境下培养 5 d和 10 d,HE染色 ,观察牙胚发育形态 ,并初步研究 5 .0× 10 - 6 g/ L 氟对体外牙胚发育的影响。结果:牙胚在体外继续发育 ,牙尖形成明显 ,内釉上皮细胞和成牙本质细胞极化 ,分泌基质。氟干预组牙胚发育与对照组相似 ,但部分区域成牙本质细胞极化不明显 ,基质分泌明显少于对照组。 结论 :小鼠牙胚在 BGJb半固体培养基生长良好 ,为研究氟对牙胚损伤提供良好模型。     

体外器官培养人牙胚的实验观察

目的 建立人牙胚发育的体外器官培养模型。方法 将3.5个月胎龄人胚胎的乳牙牙胚置于微孔滤膜上利用BGJb培养基培养,常规组织学观察。结果 人乳牙牙胚在体外培养期间继续发育,牙齿形成细胞(成釉细胞和成牙本质细胞)分化程度进—步提高。结论 这种培养条件可以保持人牙胚的体外发育。     

人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论 :为体外研究人类牙齿正常发育及各种因素对牙齿发育的影响提供了一个实用的模型     

热疗联合阿霉素对K562细胞体外杀伤作用及Bcl-2表达的研究

目的观察热疗联合阿霉素增强对慢性髓系白血病细胞系K562的体外增殖抑制作用、凋亡及Bcl-2表达的影响。方法采用MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40℃、42℃,体外作用于K562。作用前及48h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率;MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2表达。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果作用48hIC50的药物浓度作为实验的工作浓度。单纯热疗60min对K562细胞系有抑制作用（P〈0.01）,抑制作用随温度增高而增强;热化疗组在40℃及42℃下,对K562均有显著的抑制作用（P〈0.01）,随着温度的增高而增强。热疗组、化疗组、热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间差异均有显著性（P〈0.01）;Bcl-2蛋白的表达则下降,各组之间差异也有显著性（P〈0.01）。结论热疗联合阿霉素能增强对K562细胞体外抑制作用,提高肿瘤细胞的凋亡率,下调Bcl-2蛋白的表达。     

凋亡抑制基因Bcl-2在肿瘤中的应用研究进展

Bcl-2基因家族是重要的细胞凋亡调节因子,其中包括抑制和促进细胞凋亡两类功能相反的基因。在人类许多肿瘤组织中,Bcl-2基因的表达水平通常会发生改变,它不但与肿瘤的发生、发展及预后有关,且与肿瘤细胞的多药耐药有关。近年来的研究表明,针对Bcl-2基因的反义治疗及Bcl-2的抑制剂对肿瘤细胞有所抑制,为寻找新的肿瘤化疗药物和提高肿瘤对药物的敏感性提供了新的思路。     

Bcl-2基因与细胞凋亡

细胞凋亡是机体细胞衰老与死亡过程的一种主要形式,它是一个生理性调节机制,在生物体的发育形成及功能维持中起重要作用。近年来研究发现Bcl-2及其相关蛋白在细胞凋亡的调控中起着很重要的作用。本文就Bcl—2分子生物学、生理功能、作用机制以及Bcl—2研究的应用展望等方面进行了讨论。     

凋亡相关基因Bcl-2和Bax在宫颈病变的变化

目的:探讨Bcl 2和Bax在宫颈癌发生发展中的变化。方法:采用SP免疫组织化学法,分别对36例宫颈上皮内瘤变CINⅠ、40例CINⅡ、48例CINⅢ及56例浸润性宫颈鳞癌(ISCC)组织中的Bcl 2和Bax蛋白进行了检测,并以40例正常宫颈鳞状上皮作对照。结果:Bcl 2蛋白在正常宫颈鳞状上皮,CINⅠ, CINⅡ,CINⅡ,和宫颈癌组织中表达率分别为15. 00 %, 22. 22%, 30. 00%, 58. 33%和53. 57 %。表达在正常与CIN和宫颈癌之间差异有显著性P<0. 05,且和组织分化程度有关。Bax在它们之间表达率分别为17. 5%, 83. 33 %,70. 00%, 52. 08%和53. 57 %, 表达在正常与CIN和宫颈癌之间差异有显著性(P<0. 01)。结论:宫颈鳞状上皮非典型性增生和鳞状上皮癌中均有Bcl 2Bax过表达,表明它们在鳞状上皮癌发生,发展中起作用,和宫颈癌早期发生有关,在ISCC阶段其调控作用可能已经紊乱。     

低剂量电离辐射对小鼠免疫器官Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :研究低剂量电离辐射对小鼠胸腺、脾和肠系膜淋巴结 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,以揭示辐射诱导细胞凋亡 J型曲线的分子机理。方法 :采用免疫组织化学及图像分析定量方法。结果 :假照组各免疫器官存在 Bcl- 2蛋白的基础表达 ;而照射组随着照射后时间的推移 ,Bcl- 2蛋白表达逐渐增高 ,2 4 h达峰值 ,且差异显著 ;72 h回复至假照水平。结论 :上述结果为揭示低剂量辐射免疫兴奋效应和辐射诱导细胞凋亡 J型曲线的分子机理提供了有意义的数据     

针刀治疗对退变兔腰椎间盘组织中凋亡调控基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的 观察针刀治疗对退变兔腰椎间盘组织中凋亡调控基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法 将24只雄性健康成年的新西兰大白兔随机分为空白组、假模型组、模型组和针刀治疗组4组,每组6只。模型组与针刀治疗组配戴轴向压力装置建立兔腰椎间盘退变模型。造模成功后1 d治疗组进行针刀手术,每隔1周进行1次治疗,共4次。治疗结束后,24只兔子全部处死,HE染色观察组织形态,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和BCL2关联X蛋白（Bax）的蛋白表达。结果 腰椎间盘组织退变程度为：空白组≈假手术组<针刀治疗组<模型组。各组Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义（ P>0.05）;模型组Bax蛋白表达水平显著高于空白组和假模型组（ P<0.01）,针刀治疗组Bax蛋白表达水平低于模型组（ P<0.05）;模型组Bcl-2和Bax蛋白表达的比例与空白组和假模型组相比显著降低（ P<0.01）,针刀治疗组Bcl-2和Bax蛋白表达的比例高于模型组（P <0.05）。结论 针刀干预兔腰椎间盘退变可影响椎体组织调节因子的表达,减少细...     

PP242对人晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响

目的探讨PP242对人晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响。方法采用不同浓度PP242处理培养传代的永生系人晶状体上皮细胞系SRA01/04。采用MTT法检测处理24、48 h后的细胞生长抑制率,采用实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测不同浓度PP242处理48 h后Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况。结果 100、250、500、750、1 000、1 500 nmol/L PP242对人晶状体上皮细胞SRA01/04作用24、48 h后,细胞生长抑制率24 h组分别为7.55%、9.43%、16.98%、22.64%、26.42%、30.19%,48 h组分别为11.11%、23.81%、36.51%、42.86%、49.21%、63.49%,与对照组(0 nmol/L)比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。免疫印迹法检测结果显示:在相同作用时间内,随着PP242药物浓度的增加,Bcl-2蛋白的表达水平逐步下降,与对照组(0 nmol/L)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实时定量RT-PCR检测结果显示:在相同作用时间内,随着PP242药物浓度的增加,Bcl-2 mRNA表达水平亦逐步下降;m RNA相对表达量分别为0.723±0.039,0.517±0.028,0.353±0.052,0.167±0.046,与对照组(0 nmol/L)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PP242能够抑制体外培养的人晶状体上皮细胞的生长,呈浓度和时间依赖性。人晶状体上皮细胞中存在Bcl-2的表达,PP242可下调其表达。     

p53、Bc1-2蛋白在人类肺癌组织中表达的研究

目的:探讨63例人类肺癌中p53、Bcl-2的表达。方法:采用免疫组织化学方法,以抗p53多抗标记p53蛋白,抗Bcl—2单抗标记Bcl-2蛋白。结果:所有肺癌组织中,p53突变率54％(34/63),Bcl-2蛋白表达率44.4％(28/63)。p53突变率与组织类型、临床分期、病人性别、年龄等临床参数无关;Bcl—2表达在Ⅰ、Ⅱ期(55.3％)明显高于Ⅲ、Ⅳ期(28％)(P<0.05),而与组织类型无关;Bcl—2蛋白表达与p53蛋白表达不相关。结论:人类肺癌的发生发展与p53、Bcl-2蛋白过度表达有关;Bcl-2蛋白表达可能为肺癌早期事件,可作为评定预后的生物学指标;p53蛋白表达与组织类型、临床分期等参数无关。     

人原始生殖细胞体外培养的初步研究

目的 :探讨人原始生殖细胞体外培养条件 ,初步建立人原始生殖细胞体外培养体系及鉴定其部分生物学特性。方法 :从受精后 4～ 12周的人胚中分离原始生殖嵴 /腺获得原始生殖细胞 ,以昆明种小白鼠胚胎成纤维细胞为饲养层 ,在多种细胞因子的共同作用下培养。结果 :获得大量的原始生殖细胞集落。传至 6代后 ,细胞集落呈典型的鸟巢状 ,碱性磷酸酶检测呈阳性 ,表达SSEA 1,SSEA 3,SSEA 4 ,TRA 1 6 0和TRA 1 81抗原 ,同时在体外能自发分化为多种细胞。结论 :初步建立人原始生殖细胞体外培养体系 ,成功的将人原始生殖细胞在体外传 6代 ,仍保持未分化集落的生物学特性     

氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度的氟化物对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响。方法:采用酶消化法分离乳鼠成骨细胞,经剂量分别为0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/L的氟化钠(NaF)作用后,采用免疫组织化学法和Western blot法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白表达水平。结果:免疫组织化学法结果显示0、2.5及5.0mg/L实验组成骨细胞中Ras均有较强阳性表达,其余实验组的为弱阳性表达;各染氟组阳性表达细胞数与0mg/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5、5.0mg/L染氟组大于0mg/L,其它染氟组均小于0mg/L,染氟组的蛋白相对表达量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。结论:氟作用于成骨细胞后可以影响Ras蛋白的表达,表现为双向作用,即低剂量的氟促进Ras的蛋白表达,高剂量抑制Ras的蛋白表达。     

骨器官体外培养的方法学研究

目的：探讨长骨器官体外培养的最佳条件。方法：游离受孕第16天小鼠胚胎尺骨在体外进行培养,观察培养基pH值、血清含量和通气方式等因素对尺骨生长发育的影响。结果：将尺骨置于pH为7.2－7.4、血清含量为10％－20％的BGJ(b）培养基,以连续通气或每24小时通气一次的方式进行体外培养,可保证培养尺骨正常生长。结论：本研究为探索有害物质（如氟等）对骨的损伤作用提供了较理想的方法和手段。     

佛波酯对体外培养大鼠前庭上皮PKC表达的影响

目的 观察体外培养条件下蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在佛波酯（phogrbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导下大鼠前庭上皮的表达和分布特点。方法 取新生大鼠椭圆囊，建立体外前庭器官培养模型，采用免疫组织细胞化学的方法，以PKCβ，γ抗体为标记物，检测PMA诱导后前庭上皮PKCβ，γ的表达变化和分布特点。结果 PKCβ，γ在正常培养新生大鼠前庭上皮细胞的细胞膜及细胞质中有弱表达。PMA作用后，其表达逐渐增多，PKCβ1主要位于细胞膜，在30min时表达最强，其后逐渐减少，45min仍高于正常（P＜0．01）。PKCβ2不但位于细胞膜，而且在纤毛亦明显表达；PKCγ在PMA诱导后胞质表达增加。在毛细胞层和支持细胞层均有，主要位于毛细胞层。结论 体外前庭器官培养在PMA诱导后，PKC各亚型激活的形式及程度不同。     

Bax，Bcl-2在非小细胞肺癌中的表达相关性研究

目的 研究Bax，Bel-2在人类非小细胞肺癌中的表达及其相关性。方法 应用免疫组织化学（S—P法）检测80例非小细胞肺癌组织标本和40例肺良性病变组织中Bax，Bcl-2的表达水平。结果 ①非小细胞肺癌组织中Bax，Bel-2表达水平分别为63．8％，51．2％，二者表达均与组织学类型无关；②Bax，Bel-2在非小细胞肺癌中表达呈负相关。结论 Bax，Bel-2共同参与细胞凋亡，促进非小细胞肺癌的发生发展。     

Bcl—2蛋白在肺癌组织中的表达

探讨凋亡相关基因Bcl- 2在肺癌发生发展中的作用 .采用鼠抗人Bcl- 2蛋白单克隆抗体 ,应用免疫组化方法检测 113例肺癌组织中抗凋亡基因Bcl- 2的表达情况 .结果 :113例肺癌Bcl - 2阳性率为 2 4 8%( 2 8/113 ) ,其中鳞癌 2 4 5 % ( 12 /4 9) ,腺癌 2 4 4 % ( 11/4 5 ) ,腺鳞癌 16 7% ( 1/6) ,大细胞癌 14 3 % ( 1/7) ,小细胞癌 5 0 0 % ( 3 /6) .小细胞肺癌阳性率明显高于非小细胞肺癌 (P <0 0 5 ) ,而鳞癌及腺癌之间无显著性差异(P >0 0 5 ) .Bcl- 2表达与病人的年龄、性别、淋巴结转移及组织的分化程度无关 (P >0 0 5 ) .结论 :肺癌组织中存在Bcl- 2蛋白的过表达 ,它参与调控肺癌的发生、发展过程 .     

脑室内注射胰岛素对大鼠全脑缺血后海马CA1区Bcl-2蛋白表达及神经元凋亡的影响

目的　观察胰岛素对全脑缺血后海马 CA1区神经元凋亡及 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,探讨胰岛素对全脑缺血后海马CA1区神经元产生中枢直接保护作用的机制 .方法　利用 4-VO法制作大鼠全脑缺血模型 .造成脑缺血 15 min后行再灌注 ,于再灌注后即刻经脑室注入 1U胰岛素 ,利用免疫组化及原位标记法分别于全脑缺血后 1和 3d观察海马 CA1区Bcl- 2蛋白表达及神经元凋亡的情况 .结果　全脑缺血后 1d,缺血组及胰岛素治疗组鼠海马 CA1区未见原位标记阳性细胞 .治疗组鼠海马 CA1区可见呈阳性表达的 Bcl- 2蛋白 ,而缺血组鼠海马 CA1区 Bcl- 2蛋白的表达则呈阴性 .全脑缺血后 3d,缺血组鼠海马 CA1区 Bcl- 2蛋白的表达仍呈阴性 ,海马 CA1区原位标记阳性细胞计数为 143.5± 11.6 .治疗组鼠海马 CA1区 Bcl- 2蛋白呈阳性表达 ,海马 CA1区原位标记阳性细胞计数为 75 .6± 6 .7.结论　全脑缺血后脑室内注入胰岛素可促进海马 CA1区 Bcl- 2蛋白表达 ,减少神经元的凋亡 ,这可能是其对全脑缺血后海马 CA1区神经元产生中枢直接保护作用的主要机制之一 .