健康供者外周血造血干细胞动员后采集的最佳时机

背景:外周血干细胞移植的首要条件是造血干细胞有效动员和采集,并能较快持久地重建造血.近年国内外不少单位已开展了此项工作,但平均每例供者采集次数较多,且造血干细胞的产率高低差别较大. 目的:探讨健康供者外周血造血干细胞动员后采集的最佳时机.方法:2003-01/2008-12海口市人民医院进行异基因外周血造血干细胞采集的健康捐赠者16例,随机分为2组,单纯动员组6例,皮下注射粒细胞集落刺激因子5.0～10.0 μg/(kg·d),共5 d;联合组10例,在单纯动员组基础上,静脉推注地塞米松10 mg.每例供者均采集2次外周血造血干细胞,单纯动员组与联合组又各分为2 h,4 h两个亚组,即若在第4天动员后2 h采集,则第5天在动员后4 h采集;若在第4天动员后4 h采集,则第5天在动员后2 h采集.16例供者采集量为4.0～5.0 mL,推赶量3.0～5.0 mL,总循环血量6.7～10.1 L.结果与结论:单纯动员组、联合组采集的单个核细胞数均达到(4.0～8.0)×10~8 kg~(-1).与2 h亚组比较,两组4 h亚组采集物的单个核细胞数均明显增加(P < 0.05).提示粒细胞集落刺激因子动员后第4,5天进行采集,4 h采集物的细胞浓度明显高于2 h;供者采集时循环血量是其自身循环血量的1.8～2.2倍时已能一次采集足够量的细胞数,有较合理的采集时间-价值-效益的关系.     

低剂量rhG-CSF对56例非血缘供者外周造血干细胞动员

本研究观察低剂量人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对非血缘健康供者的影响,探讨用于中华造血干细胞捐赠者资料库提供的非血缘健康供者外周造血干细胞动员方案。56例非血缘健康供者接受rhG-CSF 5μg/(kg.d)皮下注射,在动员第4、5两天或第5、6两天采集干细胞,观察动员效果及不良反应,检测动员前后血常规指标、CD3+、CD4+、CD8+和CD20+细胞比例;对采集物进行单个核细胞(MNC)和CD34+细胞计数;对所有供者随访至2006年5月31日。结果显示:在rhG-CSF动员过程中出现1级毒副作用(按WHO分级标准):腰背酸痛17.9%(10/56)、焦虑失眠8.9%(5/56)、疲乏4.5%(3/56)等,无需特殊处理,无需终止动员。第4、5两天采集和第5、6两天采集所得的MNC分别是(5.95±1.52)×108/kg和(7.19±2.12)×108/kg;CD34+细胞分别是(3.03±1.09)×106/kg和(7.92±2.50)×106/kg。血红蛋白水平、血小板量、CD3、CD4、CD8、CD20百分比动员前后无变化。结论:5μg/(kg.d)rhG-CSF用于非血缘健康供者的动员是安全而有效的。     

rhG-CSF动员正常人外周血干细胞过程中对T淋巴细胞增殖的影响

目的　探讨rhG CSF体内对T淋巴细胞增殖影响的作用机制。方法　取行异基因造血干细胞移植的HLA相合的同胞供者应用rhG CSF前后的静脉血和单采物 ,用MTT法测定去除单核细胞前、后的外周血单个核细胞 (MNC)对PHA增殖反应的改变。用流式细胞术检测单核细胞绝对数的改变、抗原呈递细胞 (包括单核细胞和B淋巴细胞 )协同刺激因子CD80 (B7 1 )、CD86(B7 2 )的表达以及贴壁前、后CD1 4+细胞比例。结果　rhG CSF体内作用后 ,外周血中单核细胞绝对数升高了 (4.2 0± 1 .74)倍 ,T细胞在去除单核细胞后增殖能力部分恢复 ,但仍较G CSF作用前平均降低 2 0 .58%。单核细胞表达共刺激信号CD86下降了 (66 .96± 1 3 .87) % ,相对平均荧光强度降低了 (31 .31± 1 2 .91 ) % ,B淋巴细胞中表达CD80 降低了 (45 .77± 2 6 .58) %。结论　G CSF体内作用后 ,单核细胞数量的改变抑制T淋巴细胞增殖 ,但它并不能完全解释T淋巴细胞的反应低下 ,而单核细胞和B淋巴细胞表达低水平的B7分子 ,提示这些抗原提呈细胞功能的改变可能参与T淋巴细胞增殖改变     

异基因造血干细胞移植健康供者外周血干细胞二次采集时机探讨

目的 探讨健康供者体内应用rhG-CSF初次采集造血于细胞以后二次外周血造血干细胞采集的时机.方法 38例二次采集外周血干细胞的健康供者皮下注射rhG-CSF 5 μg·kg-1·d-1,连用5 d,在第5、6天采集外周血移植物(A组);A组供者初次采集时的资料作为对照(B组);A组供者依据初次和二次采集的75%间隔时间分为C组(≤9个月,n=30)和D组(>9个月,n=8).应用流式细胞术检测各组供者外周血采集物中的淋巴细胞,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD14+、CD34+细胞以及CD3+CD4-CD8-T细胞的数量.结果 A组供者外周血采集物中淋巴细胞CD3+CD8+(25.51×108)和CD34+细胞(0.51×108)的中位含量显著低于B组(31.55×108和0.70×108,P<0.05);C组供者CD3+CD8+(23.42×108)和CD34+细胞(0.42×108)的中位含量显著低于B组(P<0.05);D组供者淋巴细胞,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD14+、CD34+细胞以及CD3+CD4-CD8-T细胞的中位含量与B组的差异无统计学意义(P>0.05).A、C和D三组采集物中CD4+与CD8+细胞的比值、单核细胞与CD3+细胞的比值以及CD3+CD4-CD8-T细胞与CD3+细胞的比值与B组的差异均无统计学意义(P>0.05).38名健康供者初次和二次采集的间隔时间与二次采集物中的CD34+细胞存在显著的相关性(r=0.357,P=0.028).结论 健康供者二次采集外周血造血干细胞的时机以初次采集的9个月后为宜,9个月内采集应适当增加循环血量以保证移植物中的免疫和造血组分能满足临床需要.     

树突状细胞与造血干细胞移植的研究进展

80年代以来,接受造血干细胞移植的血液病患者日益增多,它是治疗恶性血液病最有效的方法之一。造血干细胞移植的主要并发症移植物抗宿主病(ＧＶＨＤ)、移植后复发和感染等严重威胁患者的生存质量,如何预防和治疗ＧＶＨＤ是当代医学界亟待解决的课题。Ｔ细胞在移植免疫中起核心作用,而树突状细胞(ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ,ＤＣ)是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞(ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ,ＡＰＣ),也是唯一能激活初始Ｔ细胞的ＡＰＣ。调控或干扰ＤＣ致敏途径,有可能降低ＧＶＨＤ的发生率,延长移植物存活时间。　…     

rhG-CSF动员对异基因造血干细胞移植供者外周血CD4~+ T细胞S1P_1表达的影响

CD4+ T细胞主要通过其表面的S1P1受体与外界的第一信使1磷酸鞘氨醇(S1P)相互作用调节免疫功能。本研究旨在探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)供者外周血CD4+ T细胞S1P1表达的影响。17例allo-HSCT供者于rhG-CSF动员前及动员后第4天采集外周血,使用磁珠分选法纯化CD4+ T细胞,提取微量RNA,用实时定量PCR法检测S1P1的表达。结果显示,rhG-CSF动员前后CD4+ T细胞均表达S1P1,且动员后S1P1在CD4+ T细胞中的表达明显低于动员前。结论:rhG-CSF动员使allo-HSCT供者外周血CD4+ T细胞S1P1的表达明显下调。     

异基因造血干细胞移植后供者外周血造血干细胞输注预防高危白血病复发

目的评估重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的供者外周血造血干细胞输注 (GPBSCI)作为一种早期过继性免疫治疗方法的有效性和安全性。方法 12例高危白血病患者同胞配型相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后接受了G-CSF动员的预防性GPBSCI。allo-HSCT前患者的诊断包括2例Ph 急性淋巴细胞白血病首次完全缓解(ALL-CR1),1例ALL-CR2,1例ALL合并顽固中枢神经系统白血病(CNSL),1例急性髓系白血病(AML)复发,1例AML合并CNSL,1例 AML-CR3,4例进展期慢性粒细胞白血病(CML)及1例骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴幼稚细胞增多型(MDS-RAEB)。结果 12例患者共接受了16次GPBSCI,其中移植后90天( 90天)前接受 GPBSCI 5次,输注的单个核细胞(MNC)及CD3 细胞中位数分别为1．00(0．95-1．24)×108/kg和 0．53(0．39-0．63)×108/kg。 90天后接受GPBSCI 11次,输注两类细胞中位数分别为2．27(1．00- 4．30)×108/kg和1．15(0．55-2．10)×108/kg。输注后4例患者发生了Ⅰ或Ⅱ度急性移植物抗宿主病(GVHD),1例患者发生Ⅲ度急性GVHD。7例患者发生了慢性GVHD,其中4例为广泛型。2例患者未发生输注相关GVHD。未观察到GPBSCI相关的全血细胞减少。中位随访563(415-728)d,12 例高危白血病患者中有10例无病存活,2例死于白血病复发。结论预防性GPBSCI可以增强移植物抗白血病作用,相关不良反应小,可能成为改善高危白血病allo-HSCT预后的安全有效的手段。     

rhG-CSF对健康供者外周血和骨髓免疫特性影响的比较

本研究探讨rhG—CSF对健康供者外周血采集物（G—PB）和骨髓采集物（G—BM）免疫学特性影响的异同。用MTT法和夹心酶联免疫复合物（ELISA）法检测G—PB和G—BM中T淋巴细胞增殖能力和IL-4、IFN-7的分泌，并用流式细胞术测定两种移植物的T细胞亚群、树突状细胞（DC）亚群、单核细胞及共刺激分子CD28的表达。结果表明：G—PB中淋巴细胞，CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞，DC1、DC2以及单核细胞的含量，CD4／CD8的比值高于G—BM（P〈0，001）。G—PB的T淋巴细胞增殖能力高于G—BM（P〈0．05）；每微升G—PB移植物中T淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ,IL-4的量均明显高于G—BM，且G—PB中IL-4／IFN-γ比值小于G-BM（P〈0．001），DC2与T淋巴细胞的比值也低于G—BM（P〈0．01）；而G-PB中CD4^＋、CD8^＋细胞上CD28表达的百分比和总体表达均高于G—BM（P〈0．001）。结论：rhG—CSF体内应用诱导G—PB和G—BM产生的T细胞免疫低反应性是有差异的，而两者之间的差异是G—PB和G—BM移植后移植物抗宿主病（GVHD）发生率和程度不同的免疫学基础。     

rhG-CSF对健康供者的影响

目的 :探讨人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对健康供者的影响。方法 :1998年 1月至 2 0 0 3年6月年间 2 2例接受rhG CSF 10 μg·kg-1·d-1动员的健康供者 ,观察动员及分离过程的不良反应 ,检测动员前后血常规、CD3、CD4、CD8细胞比例 ;采集物进行单个核 (MNC)、CD3 4+细胞计数 ;所有供者随访至 2 0 0 3年 10月 3 0日。结果 :2 2例供者在rhG CSF动员过程中出现 1～ 2级 (按WHO急性毒副作用分级标准 )肌肉或骨痛 ( 4 5 5 % )、头痛( 2 2 7% )、食欲减退 ( 5 0 % )等副作用 ,无需终止动员。动员后白细胞较动员前显著升高 ,停止动员后 7d基本恢复至动员前水平。血红蛋白及血小板、CD3 +、CD4+、CD 8+和CD 4/CD8比值于动员前、动员第 4天及停止动员后 7d的变化无统计学意义。结论 :绝大多数健康供者可耐受rhG CSF剂量为 10 μg·kg-1·d-1的短程动员和PBSC采集过程 ;rhG CSF对健康供者的T淋巴细胞亚群分布无影响。     

rhG-CSF对外周血T淋巴细胞影响的实验研究

临床实践表明 ,重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的异基因外周血干细胞移植输入的成熟T淋巴细胞是骨髓移植的 10倍以上 ,但急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的发生率和严重程度并未明显增加[1 4 ] ,aGVHD是由于成熟供体T淋巴细胞识别受体抗原被激活产生的免疫病理反应。我们对体内和体外应用G CSF后T淋巴细胞是否发生了数量和质量的改变进行了探讨。材料和方法1　G CSF动员后的供者外周血单个核细胞 (PBMNC)分离　标本来自 2 0 0 1年 1月至 12月 2 1名HLA配型相合的同胞健康供者 (男 10名 ,女 11名 ,年龄在 13～ 6 4岁 ,平均…     

rhG-CSF在动员外周血造血干/祖细胞过程中对T细胞的影响及机制

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)对人体具有广泛的免疫调节作用．．在动员外周血造血干／祖细胞过程中给予的rhG—CSF可以使外周血T淋巴细胞数量和功能发生改变，并影响移植后GVHD的发生。rhG—CSF主要通过对单核细胞和树突状细胞的作用而间接影响T细胞，其中单核细胞分泌的大量IL—10对调节T细胞的细胞因子分泌、增殖和细胞毒效应具有重要作用IL—10作用于T细胞后引起的SOCS3表达显著增高可能在相关的信号转导机制中具有重要作用、本综述重点阐述rhG—CSF在动员过程中对T细胞的影响及相关机制     

G-CSF联合普乐沙福动员异基因造血干细胞移植亲缘健康供者外周血造血干细胞的单中心分析

目的:研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合普乐沙福对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的亲缘健康供者外周血造血干细胞动员的效果及安全性。方法:回顾性分析2019年4月至2021年4月在河北燕达陆道培医院采用G-CSF联合普乐沙福动员方案的亲缘健康供者33例(观察组),应用G-CSF细胞动员d 4采集骨髓,d 5采集外周血造血干细胞(PBSC),d 5晚加用普乐沙福,并于d 6再次采集PBSC。随机选取历史同期采用单独G-CSF方案动员的亲缘健康供者46例作为对照组,分析2组供者d 5和d 6 PBSC采集物中CD34⁺细胞计数。以调查问卷的方式观察供者普乐沙福给药后的不良反应。分析接受"G-CSF+普乐沙福"动员方案的allo-HSCT患者和仅接受"G-CSF"动员方案的造血干细胞移植患者在移植后100天总a GVHD、Ⅲ-Ⅳ度a GVHD、CMV血症和EBV血症的发生方面的差异。结果:观察组在d 5和d 6 PBSC采集物中CD34⁺细胞数(M±Q)分别为(1.71±1.02)×10⁶/kg和(4.23±2...     

中剂量rhG-CSF对正常供者外周血CD34+细胞动员效果

本研究探讨中等剂量600μg/d粒细胞集落刺激因子(GCSF)对正常供者CD34 细胞的动员效果及动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化。对2002-2004年我科31例健康供者给予rhGCSF600μg/d,在动员的第4天开始采集外周血干细胞(PBSC),并检测动员前后白细胞总数、动员后的有核细胞(NC)数、单个核细胞(MNC)数、CD34 细胞数及粒巨噬细胞集落形成单位(CFUGM),同时观察动员及采集过程中的不良反应。对12例供者GCSF动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化进行了观察。结果显示:600μg/d组与既往使用的300μg/d组相比,rhGCSF动员后的外周血细胞中NC、MNC和CD34 细胞及CFUGM显著增加(P<0.05),受者造血重建时间缩短(P<0.05),动员和采集过程中的不良反应发生率无明显上升(P>0.05),无严重不良反应发生。动员后CD3 细胞在PBMNC中的比例较动员前下降(15.05±3.3)%,(P<0.05)。动员前后CD4 /CD8 淋巴细胞的比值无明显变化(P>0.05)。结论:600μg/d的GCSF对正常供者的动员效果好,受者造血重建快,无严重不良反应发生。动员后PBMNC中CD3 细胞的下降及CD4 /CD8 淋巴细胞比值无明显变化,从而使得移植后急性GVHD的发生率无明显上升。     

rhG-CSF对健康供者T细胞CCR5表达的不同调控及其与急性移植物抗宿主病的相关性研究

探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对健康供者T细胞趋化因子受体CCR5表达的影响及其与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的相关性,从而了解rhG-CSF动员在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后诱导免疫耐受的机制。选取68名亲缘allo-HSCT健康供者及相应的68例受者为研究对象,应用流式细胞技术测定健康供者rhG-CSF动员前后外周血CD4+和/CD8+T细胞表面CCR5的表达,比较其变化。根据动员前后供者外周血CD4+/CD8+T细胞表面CCR5的表达变化情况,将其中可供分析的62例供者分为表达下调组和未下调组,比较两组受者II-IV度aGVHD的累计发生率。结果表明,与动员前外周血相比,rhG-CSF动员后的外周血中CD4+和CD8+T细胞表面CCR5表达均值无明显变化,但在不同个体之间表现出明显的不一致性。34例(50%)供者CD4+细胞CCR5表达下调,50%表达不变或上调,而42例(61.8%)供者CD8+T细胞CCR5表达下调,26例(38.3%)供者CCR5表达不变或上调。分析可供评价的62例移植患者表明,供者CD4+T细胞CCR5下调组受者II-IV度aGVHD发生率较未下调组明显降低(16.6%vs 43.3%,P=0.032),而CD8+T细胞CCR5下调组受者II-IV度aGVHD的累计发生率较未下调组呈现增高趋势(37.8%vs 16.0%,P=0.065)。结论:rhG-CSF动员影响T细胞表面CCR5的表达,而这些作用可能影响T细胞体内迁移行为,减少T细胞向GVHD靶器官聚集,从而降低allo-HSCT后aGVHD的发生率。     

rhG-CSF对供者骨髓和外周血采集物中Th17细胞的影响

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）供者体内应用对骨髓采集物（GBM）和外周血采集物（GPB）中Th17细胞的影响。对25名亲缘供者皮下注射rhG-CSF5μg/（kg.d）,连用5天,于第4、5天分别采集骨髓和外周血,注射前留取部分供者稳态骨髓（steady state bone mavrow,SSBM）和稳态外周血（steady state peripheral blood,SSPB）。采用流式细胞术测定动员前后供者骨髓和外周血中T细胞分泌IL-17的变化。结果显示：rhG-CSF体内应用后供者骨髓中CD4＋T细胞和CD8＋T细胞分泌Il-17的能力较稳态骨髓明显下降（GBM vs SSBM Th17/CD4＋T,0.74%±0.27%vs1.78%±1.19%,p〈0.05;Tc17/CD8＋T,0.19%±0.16% vs 0.36%±0.37%,p〈0.05）,外周血中的变化与骨髓相同（GPBvsSSPBTh17/CD4＋ T,1.82%±0.91%vs3.26%±1.89%,p〈0.01;Tc17/CD8＋T,0.21%±0.17%vs0.44%±0.28%,p〈0.01）。25例供者GBM与GPB相比,GPB中Th17/CD4＋ T和Tc17/CD8＋ T的比值均高于GBM（p〈0.05,p〈0.01）。结论：体内应用rhG-CSF能够抑制供者骨髓及外周血采集物中Th17细胞的产生,它可能是GPB和/或GBM混合移植对GVHD的发生率没有增加的部分原因。     

rhG-CSF动员的外周血采集物与稳态骨髓中CD4^＋CD8^＋初始及记忆T细胞亚群的比较

本研究探讨重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员的外周血采集物（G—PB）与稳态骨髓（SS—BM）中CD4^＋、CD8^＋初始、记忆T细胞亚群的差异。依据细胞表面CIM5RA和CD62L的表达将CD4^＋、CD8^＋T细胞划分为初始T细胞（naive，CIM5RA^＋CD62L^＋）、中心记忆T细胞（centralmemory，TCM，CIM5RA—CD62L^＋）、效应记忆T细胞（effeetor memory，TEM，CIM5RA^-CD62L^-）、终末分化效应记忆T细胞（terminally difierentiated effeetor memory，TTTp，CIM5RA^＋CD62L^-）。用流式细胞仪测定G—PB与SS—BM中CD4^＋、CD8^＋初始和记忆T细胞的比例组成，并计算每微升采集物中各细胞亚群的绝对数量。结果表明：G—PB中CD4^＋、CD8^＋T细胞的比例组成及CD4^＋／CD8^＋比值均高于SS—BM（P〈0．05）；G—PB中CD4^＋初始T细胞的比例显著低于SS—BM（P〈0．001），而CD4^＋TEM比例显著高于SS—BM（P〈0．001）；G—PB中CD8^＋初始和记忆T细胞亚群的比例与SS—BM无显著差异（P〉0．05）；与SS—BM相比，G—PB中CD4^＋CD62L^＋T细胞的比例明显降低（P=0．001），每微升G—PB移植物中的各淋巴细胞亚群均明显高于SS—BM（P〈0.001）。结论：G—PB与SS—BM中CD4^＋、CD8^＋初始和记忆T细胞亚群在相对和绝对数量方面存在明显的差异，这种差异可能影响G—PB和SS—BM移植后急性、慢性移植物抗宿主病发生率及其程度的异同。     

体外诱导人脐血树突状细胞介导T细胞抗白血病的细胞毒性效应研究

为了研究脐血淋巴细胞能否在体外培养成为特异性杀伤白血病细胞的杀伤性T细胞(CTL),联合细胞因子体外诱导脐血单个核细胞分化为树突状细胞(DC),再吞噬凋亡白血病细胞并将其抗原呈递给相同脐血的T淋巴细胞,得到杀伤性T细胞。用形态学及流式细胞术检测DC。CTL细胞的杀伤功能用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定。结果表明:12份脐血标本均可培养出形态典型的DC,DC的表面标志CD1a 、HLA DR 、CD86 、CD83 表达水平显著升高(P<0.05)。CTL可以杀伤未经培养的白血病细胞(效∶靶=50∶1对AML细胞的平均杀伤率为44.76±17.42%,对ALL细胞的平均杀伤率为8.50±4.25%),对相同患者缓解期的骨髓细胞杀伤率极低。结论: 在外体应用多种细胞因子刺激可诱导脐血单个核细胞分化成典型的DC;负载有白血病抗原的DC可诱导同一脐血的淋巴细胞生成白血病特异的杀伤性T细胞(CTL),所得CTL可特异性杀伤未经培养的白血病细胞而不严重伤害相同患者缓解期的骨髓细胞。