凝血酶敏感蛋白-1对人肝癌细胞株HCCLM3生长增殖的作用

目的:研究凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)及受体CD36、CD47对人肝癌细胞株HCCLM3生长及细胞周期的作用,初步探讨TSP-1可能的作用途径.方法:根据处理因素将细胞株分为:TSP-1组(加入TSP-1蛋白,40 mg/L)、空白对照组、CD36阻断组、CD47阻断组.阻断组细胞接种后先加入5 mg/L对应的单抗,待单抗与细胞充分结合后再加入40 mg/L TSP-1.用四唑盐比色法(MTT)、流式细胞术和ELISA法分别观察TSP-1及CD36、CD47单抗对细胞生长、细胞周期、增殖指数(PI)及TGF-β1分泌的影响.结果:TSP-1组、CD36阻断组、CD47阻断组细胞生长受抑,且CD36阻断组的细胞生长抑制率低于CD7阻断组.TSP-1组G0/G1期细胞数增加,S期和G2/M期细胞数减少,与对照组和CD36阻断组相比差异有统计学意义.对照组、TSP-1组、CD36阻断组及CD47阻断组PI分别为:(42.70±2.09)%、(27.85±0.71)%、(38.04±1.35)%和(31.78±0.43)%,各组之间两两比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).各组TGF-β1的含量差异无统计学意义.结论:TSP-1主要通过与受体CD36的结合对人肝癌细胞株HCCLM3的生长增殖有抑制作用.TSP-1对HCCLM3的抑制可能不是通过调节TGF-β1的分泌而发挥作用.     

廿烷五烯酸对人肺癌A-549细胞株的凋亡作用及细胞周期的影响

[目的]观察廿烷五烯酸诱导人肺癌A-549细胞株的凋亡作用及其对A-549细胞周期的影响.[方法]用人肺癌A-549进行体外培养,分为对照组和小、中、大剂量廿烷五烯酸组,分别给予蒸馏水及15,30,60 mg/L廿烷五烯酸,培养48h,观察细胞变化.对照组加入培养液500μL,实验步骤相同.应用FCM进行定量检测细胞凋亡并作细胞周期分析.[结果]对照组细胞培养48 h,凋亡率仅为0.14%±0.05%,未见亚二倍体峰;用15,30,60 mg/L廿烷五烯酸处理48 h时,细胞出现凋亡峰,凋亡率分别为10.50%±0.56%.19.87%±1.34%,30.12%±1.78%,不同质量浓度凋亡率间差异有统计学意义,廿烷五烯酸质量浓度在15～60 mg/L时,G0/G1期和G2/M期细胞百分比下降,S期细胞百分比上升,阻滞周期于S期.[结论]体外实验中,廿烷五烯酸通过干扰细胞周期抑制人肺癌A-549细胞的生长,主要阻滞干S期;抑制肿瘤细胞增殖可能是廿烷五烯酸抗肺癌作用的机制之一.     

RNA干扰PLK1基因诱导人前列腺癌细胞PC-3的凋亡研究

目的探讨质粒表达载体介导的RNA干扰抑制PLK1基因表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响。方法构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒（psh—PLK1）。将该干扰质粒转染到人前列腺癌细胞PC-3中，应用RT—PCR技术分析RNA干扰后各组细胞PLK1基因mRNA表达水平的变化。采用MTT法和细胞形态学分析检测PLK1基因表达受到抑制后PC-3细胞的增殖情况的变化，通过流式细胞分析技术以及PI染色技术进行对各组细胞进行细胞凋亡检测。结果RT—PCR结果显示，转染RNA干扰表达质粒（psh-PLK1）24h和48h后，实验组PC-3细胞较对照组的PLK1基因mRNA表达分别降低了74．6％和91．2％；转染了psh-PLK的PC-3细胞与对照组相比生长受到明显抑制（P〈0．05），而各对照组之间差异无显著性（P〉0．05）；流式细胞仪检测发现转染了psh-PLK1的PC-3细胞较对照组细胞产生了更强的细胞凋亡（39．2％），PI荧光染色可见实验组细胞呈现出典型的细胞凋亡形态学变化。结论RNA干扰PLK1基因能够有效地抑制PC-3细胞中PLK1基因的表达，从而抑制PC-3细胞的生长与增殖，并诱导PC-3细胞产生凋亡。     

1,25(OH)_2D_3联合顺铂对卵巢癌细胞株HO8910增殖及Skp_2/P27蛋白表达的影响

的 探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]与顺铂联合对人卵巢癌细胞株HO8910的增殖抑制情况,并测定二者作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)及肿瘤抑制基因p27的蛋白表达情况,进一步探讨它们的作用机制.方法 用四唑盐(MTT)比色法测定1,25(OH)2D3、顺铂及二者联合对HO8910细胞株作用后细胞增殖情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,免疫细胞化学染色检测Skp2及P27蛋白表达情况.结果 与对照组(未用药)相比,1,25(OH)2D3和顺铂作用下细胞吸光度(OD)减少,细胞增殖受到抑制(P<0.01),二者联用时此作用增强,二者作用下G0/G1期细胞增多,Skp2表达减少、P27蛋白表达增多(P<0.01).结论 1,25(OH)2D3有加强顺铂抑制肿瘤细胞增殖的作用,二者均可能通过下调Skpz表达、上调P27蛋白表达,从而抑制癌细胞增殖.     

亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3活性的影响。方法采用细胞培养技术,以肝癌细胞系SMMC7721为靶细胞,以不同浓度的药物处理细胞72h后,利用WST-8法测定亚砷酸对细胞增殖的影响;利用荧光染料Hoechst33258染色,荧光显微镜观察细胞核碎片;以流式细胞仪分析细胞周期的变化;采用CaspasebE色法检测Caspase-3活性。结果亚砷酸（10umol／L）对SMMC7721细胞有明显抑制作用,可诱导SMMC7721细胞凋亡,并能增强Caspase-3基因的活性。结论亚砷酸能够诱导SMMC7721细胞凋亡,其机制与Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关。     

姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡以及对c-myc、caspase-3表达的影响

目的 探讨姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其对c-myc、Caspase-3表达的影响。方法 姜黄素处理A375细胞,MTT法检测细胞的生长活性,应用倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察,采用AnnexinV/PI双染法和DAN片段化分析检测细胞凋亡,SABC免疫组化法和原位杂交检测细胞内c-myc、Caspase-3表达水平。结果 姜黄素能抑制A375细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性。经30 μmol/L姜黄素处理A375细胞48h,细胞呈现凋亡形态学改变;DAN片段化分析可见到明显的DNA梯带形成;流式细胞仪定量检测出20 μmol/L以上浓度姜黄素诱导细胞凋亡的发生率较对照组有显著性差异。c-myc表达水平减少,而Caspase-3表达增加。结论 姜黄素能抑制A375细胞增殖和诱导其凋亡,c-myc和Caspase-3基因可能参与凋亡过程。     

SCE诱导人结肠癌细胞凋亡及其机制研究

【目的】观察鲨鱼软骨提取物(SCE)对人结肠癌细胞(THC-8908)凋亡的诱导作用,并进一步研究在此过程中Bcl-2和Caspase-3的表达。【方法】将不同浓度的SCE作用于THC-8908细胞,观察其作用的时间效应及剂量效应;在光镜和电镜下观察其形态变化;用免疫细胞化学法观察Bcl-2和Caspase-3的表达。【结果】SCE能抑制THC-8908细胞生长,在一定剂量和时间范围内引起细胞凋亡,并显示剂量和时间效应,在此过程中Bcl-2蛋白表达减弱,Caspase-3表达增强。【结论】SCE能明显抑制THC-8908细胞体外生长,并可诱导其细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达并上调Caspase-3的表达有关。     

洛铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊敏感,洛泊对卵巢癌细胞的杀伤作用是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

低氧条件下三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡作用

目的：探讨低氧条件下三氧化二砷（As2O3）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法：分别在常氧和低氧（CoCl2 200μmol/L）条件下以2、4、8μmol／LAs2O3作用人肝癌Hep岛细胞,24、48、72小时后以MTr法检测细胞增殖抑制率,以AnnexinV／PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡,分析两种条件下As2O3对细胞增殖抑制率和凋亡率的影响。结果：常氧及低氧条件下细胞增殖抑制率,细胞早期凋亡率均随As2O3浓度增加及作用时间延长而升高（P〈0．05）。相同浓度As2O3相同作用时间,低氧条件下细胞增殖抑制率及凋亡率升高更为明显。结论：在低氧条件下As2O3促进细胞凋亡,抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用显著增强。     

人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导细胞凋亡的影响及其机制.方法 利用中国仓鼠卵巢瘤细胞系(CHO)采用MTY方法筛选人参皂苷Rgl抗Aβ细胞毒性的有效浓度.通过转染突变型(M146L)PS1基因的CHO细胞(PS1M146L),利用免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹方法,探讨人参皂苷Rg1对PS1M146L细胞中Aβ42和凋亡效应基因半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-3)活性蛋白表达的影响,通过脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测,观察人参皂苷Rg1对Aβ促细胞凋亡的影响.结果 加用25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1的CHO细胞活性明显高于未加用组(均P＜0.05).在转染突变型PS1M146L的CHO细胞中,加用人参皂苷Rg1作用24 h后早期细胞凋亡数(10.11.11±0.76)较未加用组(15.01±1.46)少,差异有统计学意义(P＜0.05);同时Aβ42和caspase-3活性片段的蛋白质表达量较未加用组细胞亦不同程度降低(均P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1可能通过降低Aβ42生成和降低caspase-3蛋白质表达抑制Aβ诱导的细胞凋亡.     

Apoptosis of drug-resistant human ovarian carcinoma cell line COC1/DDP induced by survivin antisense oligonucleotides

Currently, surgery-oriented treatment plays a major role in the treatment of ovarian cancer patients. But 5-year survival rate of patients is still around 30%. One of the main reasons for the Iow survival rate is the drug resistance of tumor cells against chemotherapy.1,2 The function of antiapoptosis in the course of initiation and progress of cancer has a close relationship with drug resistance of tumor cells. Survivin is a new discovered anti-apoptosis gene, its expression levels correlating with more aggressive disease and poor clinical outcome in many of these tumors. It has been reported that survivin is expressed during fetal development and in cancer tissues.3 Furthermore,survivin overexpression, by disrupting the balance between cell proliferation/differentiation and apoptosis, may relate with the resistance to a variety of apoptotic stimuli, including chemotherapy.4,5 We designed antisense oligonucleotides of survivin to treat the drug-resistant human ovarian carcinoma cell line COC1/DDP, and studied its effects on inducing COC1/DDP apoptosis. The purpose of this study was to find a novel approach to improve the sensitivity of ovarian carcinoma chemotherapy.     

PPARγ基因沉默抑制HCCLM3细胞侵袭与转移

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因沉默对HCCLM3细胞侵袭与转移的影响及可能机制.方法:应用Tanswell小室建立肿瘤细胞侵袭模型,PPARγ shRNA(pshPPARγ组)和pBi-hU6-DNA质粒(pshPPARγ-N组)转染HCCLM3细胞,并以未转染细胞为阴性对照(对照组),观察3组HCCLM3细胞黏附、迁移、侵袭和移动能力:RT-PCR法检测HCCLM3细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)2和整合素β1 mRNA表达.结果:pshPPARγ组PPARγmRNA表达下调80.5%;pshPPARγ组跨过半透膜的细胞数为(68±7)个,透过滤膜的细胞数为(17±3)个,黏附的细胞数为(49±9)个,细胞越过划痕的时间为(6.40±1.14)天,与其他两组比较P均<0.01.pshPPARγ组MMP2、整合素β1表达下调,TIMP2表达上调.结论:PPARγ基因沉默能降低HCCLM3细胞的侵袭和转移能力;其可能经由整合素信号通路调节MMP2/TIMP2平衡而起作用.     

熊果酸诱导前列腺癌细胞株PC-3凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人前列腺癌细胞株PC-3细胞周期、凋亡的影响及其作用机制.方法:人前列腺癌细胞株PC-3以不同浓度的UA作用不同的时间后,分别使用四甲基偶氮唑蓝比色法(4 methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT),免疫组织化学SP法,流式细胞术(Flow cytometry,FCM),Western blot等实验方法检测PC-3细胞的增殖抑制情况,细胞周期和凋亡率的变化,以及细胞内bcl-2、bax 2个重要的细胞凋亡相关基因和细胞凋亡相关特殊蛋白cox-2、caspase 3表达的变化.结果:UA对PC-3细胞有增殖抑制作用,其作用随着药物浓度和作用时间的增加而增强.24、48 h和72 h 3个时间段UA分别作用于PC-3细胞后的IC_(50)分别为50.87、37.91 μmol/L和27.86μmol/L;熊果酸作用后PC-3细胞周期的主要特点是大量细胞累积于G_1期,进入S期的细胞减少.UA能够诱导PC-3细胞凋亡,经过24、48 h和72h 3个时间段UA浓度50μmol/L作用后,细胞凋亡率为6.21%、7.81%和13.31%;细胞内bcl-2和cox-2的表达随着药物浓度增加逐渐减少;bax和caspase 3蛋白的表达随着药物浓度增加逐渐增加.结论:UA能够抑制PC-3细胞的增殖,并使细胞大量累积于G_1期,进入s期的细胞减少.可能通过使bcl-2和cox-2的表达减少、bax和caspase 3蛋白的表达增加来诱导细胞凋亡.