大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡

目的 检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells，HRCEC)的直接影响。方法 HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol／L或25mmol／L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果 HRCEC细胞在25mmol／L葡萄糖中培养6d，细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定，凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论 大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡，这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。     

迷迭香酸对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用

目的探讨迷迭香酸对高糖诱导下人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用。方法将人视网膜血管内皮细胞按培养方案分为对照组、迷迭香酸组、高糖组、联合组。Transwell法观察各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA检测各组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blotting法与qRT-PCR技术检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF)与凋亡相关蛋白Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(BAX)的表达水平。结果迷迭香酸组与对照组各项指标差异均无显著性(P＞0.05)。与对照组比较,高糖组人视网膜血管内皮细胞迁移能力及细胞凋亡水平显著增加,炎症指标IL-6、IL-8与TNF-α的含量增加,VEGF、Caspase-3、BAX蛋白及mRNA水平增加,Bcl-2蛋白及mRNA水平降低(P＜0.05)。与高糖组比较,联合组迁移细胞数量、细胞凋亡水平、IL-6、IL-8与TNF-α的含量、VEGF、Caspase-3与BAX的蛋白及mRNA水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA水平增加(P＜0.05)。结论迷迭香酸可抑制高糖环境下人视网膜血管内皮细胞的迁移及凋亡状态,其机制可能与调控VEGF有关。     

巨细胞病毒诱导体外人血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨HCMV感染对体外培养人血管内皮细胞凋亡的影响。方法建立HCMV-AD169株感染体外培养人脐静脉血管内皮细胞模型,应用AV/PI双染法检测HCMV感染后ECs的凋亡变化。结果体外情况下HCMV感染后不同时相点(12、24、48、72h),ECs的凋亡率分别为(10.6±4.6)%,(23.8±6.9)%,(39.4±8.9)%,(31.4±7.8)%,明显高于对照组细胞。结论HCMV感染诱导ECs凋亡的异常改变可能参与了动脉粥样硬化的发生发展。     

百草枯诱导大鼠肺微血管内皮细胞凋亡实验研究

目的探讨百草枯（PQ）对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）的直接毒性和能否诱导大鼠PMVECs的凋亡。方法雄性SD大鼠PMVECs的原代培养和鉴定。培养的大鼠PMVECs在不同浓度PQ的培养基中培养不同时间,通过MTT法、琼脂糖凝胶电泳、DAPI染色、流式细胞术来检测PQ对人鼠PMVECs的毒性和凋亡的影响。结果成功地培养出大鼠PMVECs。MTT法测试发现PQ对大鼠PMVECs的增殖代谢活性具有剂量和时间依赖性的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳显示凋亡的DNA阶梯;通过形态学观察,发现细胞凋亡的特征如核固缩、核碎裂;流式细胞术揭示凋亡峰出现。结论PQ在体外对大鼠PMVECs的增殖具有抑制作用并能诱导其凋亡;PMVECs凋亡可能是PQ所致的急性肺损伤的机制之一。     

葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响

目的：观察高浓度葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响。方法：用不同浓度葡萄糖（Glu）作用体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECS）24h、48h、72h，绘制细胞增殖曲线，用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化。结果：高浓度Glu(20mmol/L、40mmol/L)对内皮细胞的生长增殖有明显抑制作用，使G0/G1期细胞比例增加，S和G2/M期细胞比例下降，同时诱导了内皮细胞的凋亡，并随作用浓度增加、时间延长更为明显。结论：高糖使培养的HUVECS凋亡加速，同时抑制细胞增殖。细胞可能被阻滞在G1/S转变期。     

地塞米松诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：观察地塞米松对人脐带静脉血管内皮细胞( ECV304)增殖的影响。方法：采用细胞凋亡的荧光检测法（Heochst 33342）检测地塞米松对脐静脉血管内皮细胞（ECV304）的形态学改变, MTT 法观察地塞米松对ECV304增殖的抑制作用,流式细胞仪术检测地塞米松引起的ECV304凋亡率改变。结果：较高剂量（100umol/L）地塞米松对脐静脉血管内皮细胞增殖起抑制作用,并诱导其凋亡。结论：地塞米松具有比较明显的抑制血管内皮细胞增殖的作用。地塞米松抗血管生成的机制可能与其抑制血管内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导人内皮细胞凋亡

为探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能否诱导人内皮细胞凋亡,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度AngⅡ培养不同时间,用TUNEL和ELISA检测细胞凋亡,并检验Caspase-3酶活性变化.用RT-PCR检测AngⅡ受体AT1和AT2的mRNA表达.发现AngⅡ可以诱导出典型的凋亡,凋亡细胞阳性率极显著高于对照组,凋亡强度与AngⅡ呈现剂量依赖关系.Caspase-3酶活性在AngⅡ作用后有极显著的增加.内皮细胞同时表达AT1和AT2的mR-NA.结果表明AngⅡ经AT1或(和)AT2可以诱导人内皮细胞凋亡,并且是Caspase-3依赖性的.这一结果有助于阐明AngⅡ的致病机制.     

糖尿病视网膜病变细胞凋亡的研究进展

糖尿病视网膜病变 (糖网病 ,ＤＲ)是糖尿病最为常见和严重的微血管并发症 ,已成为四大主要致盲因素之一。目前 ,糖尿病的发病率急剧上升 ,其严重性也日趋明显。糖尿病视网膜病变的防治成为糖尿病与眼底病领域的重要研究课题。因此 ,研究ＤＲ的发病机制对防治该病具有重要的意义。最近 ,由于细胞凋亡研究的兴起和深入 ,人们将注意力集中于毛细血管周细胞的丧失的性质是否由凋亡引起 ,内皮细胞和视网膜神经细胞是否也存在凋亡 ,凋亡能否得到抑制等问题上。1　细胞凋亡概念细胞凋亡又称“程序性死亡”是一种特殊类型的细胞死亡。这种细胞死亡与…     

藏红花素对糖基化终产物诱导视网膜微血管内皮细胞凋亡的影响

目的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)中糖基化终产物(advanced glycosylation end products,AGE)可引起细胞内产生过氧化物和炎症因子,导致视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cell,RMEC)凋亡,视功能破坏。文中观察藏红花素对在AGE作用下RMEC活性、凋亡比例、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产物、细胞内和上清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量的干预,探讨藏红花素对AGE引起RMEC凋亡的保护机制。方法采用免疫磁珠法分离培养RMEC,浓度为10、50和100μmol/L藏红花素培养液作用于RMEC,观察4d内细胞增生变化并记录生长曲线。不同浓度藏红花素溶液作用于AGE处理的RMEC 12 h,锥虫蓝染色计数活细胞率,流式细胞术检测凋亡细胞比例,荧光光度计测定细胞内ROS含量,采用蛋白电泳和ELISA测定RMEC内和上清中TNF-α含量。结果 RMEC在10、50μmol/L藏红花素的培养液中可以继续增生。培养至3 d和4 d时,100μmol/L藏红花素可使细胞增生受到抑制。与对照组相比,100 mg/L AGE处理12 h和24 h后RMEC活细胞比例明显下降。10、50和100μmol/L藏红花素可不同程度保护AGE处理后RMEC活细胞比例。与对照组相比,100 mg/L AGE处理12 h后凋亡细胞比例明显升高。10、50和100μmol/L藏红花素处理12h后凋亡细胞比例均有下降。AGE处理12h后RMEC内ROS水平明显升高。10、50和100μmol/L藏红花素可不同程度抑制AGE处理后RMEC内ROS水平。AGE处理后RMEC内和上清液中TNF-α水平明显升高。10、50和100μmol/L藏红花素可明显抑制AGE处理后RMEC内和上清液中TNF-α水平。结论藏红花素可能通过抑制AGE诱导RMEC中ROS产生并减少TNF-α合成途径,防止细胞凋亡。     

红参对糖尿病大鼠视网膜血管内皮细胞生长因子表达及神经节细胞凋亡的影响

目的:通过观察糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡及血管内皮细胞生长因子(VEGF)在视网膜表达的变化.探讨红参对RGCs凋亡及VEGF表达的影响以及后两者之间的关系.方法:链脲佐菌素诱导实验性DM大鼠模型.造模成功的DM大鼠随机分为模型组(n=10)和治疗组(n=10),并与末造模的正常组大鼠进行比较.治疗组以红参粉末灌胃给药,1次/d.TUNEL法检测RGCs凋亡并计数RGCs凋亡数量.LSAB法检测VEGF在视网膜的表达.图像分析仪检测免疫组化的显色强度,定量分析.结果:与正常组相比,DM大鼠RGCs凋亡数量显著增加(P<0.01);与模型组相比,治疗组RGCs凋亡数量显著减少(P<0.05).与正常组相比,DM大鼠视网膜VEGF的表达增强:与模型组相比,LSAB法标记染色的VEGF在治疗组表达减弱.结论:红参能抑制DM大鼠视网膜VEGF的表达,减少DM大鼠RGCs的凋亡,DM大鼠RGCs凋亡数量与VEGF在视网膜表达呈正相关.     

Caspase-dependent retinal ganglion cell apoptosis in the rat model of acute diabetes

Background Neural apoptosis is generally believed to be mediated by two distinct pathways, caspase-dependant and caspase-independent pathways. This study investigated the apoptotic pathways involved in retinal ganglion cells in acute diabetes in rats. Methods Diabetes was induced in male Wistar rats by a peritoneal injection of streptozotocin （STZ）. Expression and localization of caspase-3 and apoptosis-inducing factor （AIF） proteins in the retina of diabetic rats was examined by Western blotting and immunohistochemistry analyses. Terminal transferase dUTP nick end labeling （TUNEL） assay and immunofluorescent staining specific for caspase-3 and AIF were applied to analyze for apoptosis of retinal ganglion cells. In addition, a caspase-3 inhibitor DEVD-CHO was injected intravitreally to further determine the apoptotic pathways of retinal ganglion cells triggered in acute diabetes. Results Two weeks after induction of diabetes, a significant increase in caspase-3 protein expression and localization occurred in the nerve fiber layer, ganglion cell layer, and inner plexiform layer of the retina. Four weeks after the onset of diabetes, the increase in caspase-3 expression was profound eight weeks postinduction of diabetes （P 〈0.05）. Meanwhile, no AIF protein expression was detected in this study. In addition, intravitreal administration of the caspase-3 inhibitor DEVD-CHO reduced apoptosis of retinal ganglion cells by its direct inhibitory action on caspase-3. Conclusion Caspase-dependent apoptotic pathways may be the main stimulant of STZ-induced retinal ganglion cell apoptosis in acute diabetes.     

原花青素对高糖环境下人视网膜内皮细胞增殖及VEGF表达的影响

探索原花青素(PC)对体外高糖环境下培养的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖及其VEGF表达的影响。利用MTT比色法检测HRCECs增殖;蛋白质免疫印迹法测定VEGF表达。结果显示:与低糖组比较,高糖组HRCECs数量明显增多,表达量升高;不同浓度原花青素(200,400,600,800 μg/mL)可抑制高糖组HRCECs的增殖,高糖组VEGF表达并存在浓度和时间依赖性。与低糖组比较,高糖组HRCECs VEGF。结果表明,原花青素可抑制高糖诱导的体外培养的HRCECs增殖。     

高糖抑制PI3K/AKT通路诱导人冠状动脉内皮细胞凋亡的研究

目的探讨高糖对人冠状动脉内皮细胞凋亡及微颗粒释放的影响及机制。方法根据细胞培养基中葡萄糖浓度不同分为3组：正常对照组（5．5mmol/L）,中糖组（17．6mmo/L）,高糖组（33．3mmol/L）,另设甘露醇对照组（20．0mmol/L）。通过Hoechst 33258荧光染色观察凋亡形态学变化,应用流式细胞术检测内皮微颗粒细胞凋亡率及微颗粒,ELISA法检测人冠状动脉内皮细胞的凋亡相关蛋白Bad、Bax的表达以及PBK、p-Akt蛋白的表达。结果随着葡萄糖浓度增加,人冠状动脉内皮细胞微颗粒的释放及细胞凋亡率逐渐增加,高糖组最高（P〈0．01）;人冠状动脉内皮细胞分泌Bad、Bax逐渐增多,高糖组最高（P〈0．01）;人冠状动脉内皮细胞分泌PBK、p-Akt逐渐减少,高糖组减少最明显（P〈0．01）。与甘露醇对照组比较,正常对照组微颗粒的释放,细胞凋亡率,分泌Bad、Bax、P13K、p-Akt差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖可以促进人冠状动脉内皮细胞凋亡及微颗粒的释放．其机制可能同PDK／AKT途径相关。     

金雀异黄素诱导培养人视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 :探讨金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)的促凋亡作用 .方法 :将不同浓度的金雀异黄素作用于培养人视网膜色素上皮细胞 ,通过TUNEL染色和光、电镜的形态学观察 ,观察金雀异黄素对培养hRPE凋亡的诱导作用 .结果 :不同浓度的金雀异黄素可以诱导RPE凋亡 ,5 0mg·L-1 金雀异黄素作用 2 4h即有TUNEL阳性的凋亡细胞出现 ,作用时间在 2 4 ,4 8和 72h ,其凋亡细胞百分数的中位数分别为 7.6 % ,9.8%和 1 3.7% ;当金雀异黄素浓度为 75和1 0 0mg·L-1 时 ,以上 3个时间点凋亡细胞百分数的中位数分别为 1 0 .3% ,1 6 .4 %和 2 3.4 % ;1 5 .4 % ,2 1 .2 %和 35 .8% .透射电镜观察 ,5 0mg·L-1 浓度作用于细胞 ,胞核内染色体出现边集 ,表现凋亡的早期征象 ;75mg·L-1 作用呈现典型的凋亡特征 ;1 0 0mg·L-1 作用于细胞 ,除凋亡细胞外 ,部分细胞出现胞质的进行性溶解 ,有胞膜破坏现象 ,坏死细胞比例增多 .结论 :金雀异黄素可诱导RPE凋亡的发生 ,并有剂量和时间效应关系 .1 0 0mg·L-1 金雀异黄素使RPE坏死     

ApoAI对原代培养人Muller细胞生长的影响

目的：研究ApoAI对原代培养人Muller细胞生长的影响。方法：原代培养人的视网膜Muller细胞后用不同浓度的ApoAI刺激Muller细胞24 h,采用流式细胞术检测ApoAI作用24 h后Muller细胞的细胞周期,比较各组细胞的细胞周期;采用流式细胞术和荧光照相法检测各组Muller细胞细胞凋亡水平,采用单因素方差分析方法比较各组间不同细胞周期间不同细胞数的变化以及各组细胞的凋亡数。结果与结论：流式细胞术结果显示,ApoAI可以抑制人Muller细胞的增殖,且随ApoAI浓度的增加抑制作用增强（P＜0．05）;ApoAI对细胞的凋亡无明显作用（ P＞0．05）。     

重组人内皮抑素诱导人脐带静脉血管内皮细胞凋亡

目的观察人内皮抑素重组蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞增殖的影响。方法采用细胞凋亡的荧光检测法检测对内皮细胞凋亡的影响。MTT法观察不同浓度的重组人内皮抑素对人脐带静脉血管内皮细胞（ECV304）增殖的抑制作用。结果重组人内皮抑素具有明显的抑制内皮细胞增殖的作用，ED50=550ng／ml，随重组蛋白浓度的增加抑制作用更为明显。结论重组人内皮抑素对细胞增殖的抑制与其浓度呈正相关，存在剂量效应关系；内皮抑素抗血管生成的机制与其抑制内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。     

ApoAI对原代培养人Müller细胞生长的影响

目的：研究ApoAI对原代培养人Müller细胞生长的影响。方法：原代培养人的视网膜Müller细胞后用不同浓度的ApoAI刺激Müller细胞24 h,采用流式细胞术检测ApoAI作用24 h后Müller细胞的细胞周期,比较各组细胞的细胞周期;采用流式细胞术和荧光照相法检测各组Müller细胞细胞凋亡水平,采用单因素方差分析方法比较各组间不同细胞周期间不同细胞数的变化以及各组细胞的凋亡数。结果与结论：流式细胞术结果显示,ApoAI可以抑制人Müller细胞的增殖,且随ApoAI浓度的增加抑制作用增强（P＜0．05）;ApoAI对细胞的凋亡无明显作用（ P＞0．05）。     

蜕皮甾酮对亚砷酸钠致内皮细胞凋亡的保护作用

目的研究昆虫变态激素蜕皮甾酮(EDS)是否能抑制内皮细胞的凋亡。方法采用亚砷酸钠(Ars)致培养内皮细胞凋亡的模型,流式细胞术测定内皮细胞的凋亡细胞数、细胞间粘附因子-1及氧化状态,观察EDS对内皮凋亡的影响。结果40、80、160 mmol/L剂量的Ars均可引起培养内皮细胞凋亡数目增加,以160 mmol/L剂量的Ars的作用最强。EDS可影响Ars诱导的内皮细胞凋亡:50、200 mg/L EDS减少Ars诱导的内皮细胞凋亡,而800 mg/L EDS却增加内皮细胞凋亡。EDS(50、200 mg/L)还可减少Ars所致的细胞间粘附分子增加,但不能显著升高Ars所致的内皮细胞氧化状态降低(P>0.05)。结论Ars可剂量依赖地诱导内皮细胞凋亡;EDS能剂量依赖地影响Ars诱导的内皮细胞凋亡;EDS(50、200 mg/L)能减少内皮细胞的凋亡细胞数和细胞间粘附分子表达量,从而表现出对内皮细胞凋亡的保护作用。