人胆管癌相关基因CCR-L2/FXYD6大片段克隆与鉴定

目的 建立胆管癌差异显示cDNA片段L2与人类基因组序列间联系，克隆人类胆管癌相关基因CCR-L2／FXYD6，测序、鉴定以供进一步研究。方法 通过同源性比较获取覆盖L-2cDNA的基因组序列。经序列分析设计可能目的基因的扩增引物1对。提取手术切除新鲜胆管癌组织总RNA，利用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)技术扩增人cDNA，克隆于载体pGEM—T，酶切、测序鉴定。结果从胆管癌组织中得到人CCR—L2／FXYD6基因大片段克隆(540bp)，经测序与人基因组序列吻合，证实该基因在胆管癌组织表达明显，在正常胆管组织中低表达。结论 克隆出人CCR—L2／FXYD6基因的大片段，该基因在胆管肿瘤与正常组织表达存在明显差异，为进一步研究该基因的功能奠定基础。     

人前列腺干细胞抗原在前列腺组织中的表达

目的：克隆人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因，并利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)对其组织表达谱进行分析。方法：从人前列腺癌组织提取总RNA，利用RT—PCR技术扩增出人PSCA基因编码区序列，并通过半定量RT—PCR方法检测6例人新鲜正常前列腺组织、16例前列腺增生组织及11例前列腺肿瘤组织中PSCA基因表达水平。结果：序列测定表明，克隆获得的369bp片段与文献报道的人PSCA基因编码区cDNA序列一致，PSCA为前列腺组织特异表达，在前列腺癌组织中的表达明显高于前列腺增生及前列腺正常组织。结论：PSCA是一种新的前列腺肿瘤标记物。     

肾癌抑制性消减杂交文库的构建及意义

目的　应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织间差异表达的cDNA组成的消减文库。　方法　分别从肾癌组织和正常肾组织提取polyA RNA ,合成双链cDNA ,经RsaI酶切后将肾癌cDNA分为两组并加上不同的DNA接头 ,再与过量正常肾组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌构建成cDNA消减文库 ,文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析。　结果　文库共包含 4 14个阳性克隆 ,随机挑取 2 6 5个阳性克隆提取质粒并酶切分析 ,其中 2 4 6个克隆有插入片段。将其中 4 0个克隆进行测序 ,表明 1个克隆为新基因片段 ,其余 39个源于 35个已知基因。　结论　该消减杂交文库质量可靠 ,它的成功构建为进一步筛选、克隆肾癌差异表达基因提供了依据     

肝细胞癌组织中CT9基因mRNA表达的初步研究

目的 探讨肿瘤-睾丸抗原9（CT9）基因mRNA在肝细胞癌中的表达情况。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法对45例肝细胞癌患者癌组织和相应癌旁组织中CT9基因mRNA的表达情况进行检测，并对其中3例RT—PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。结果 45例肝细胞癌患者中，23例表达CT9mRNA，表达阳性率为51．1％，相应的癌旁组织中则均为阴性；3例DNA测序结果表明RT—PCR产物确为CT9 cDNA。CT9 mRNA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、HBV和HCV感染无相关性（P〉0．05）。结论 CT9 mRNA在肝细胞癌中呈高比例、特异性表达，可望成为肝细胞癌免疫治疗的理想靶位。     

膀胱逼尿肌中肾上腺素能β2受体基因克隆与反义真核表达载体的构建

目的　克隆人膀胱逼尿肌中肾上腺素能 β2 受体基因全长 ,构建其反义真核表达载体。　方法　采用RT PCR法从人膀胱逼尿肌中扩增出 β2 AR的全长cDNA序列 ,上游引物 5′端加有BamHⅠ及ClaⅠ酶切位点 ,下游引物加有HindⅢ酶切位点 ,将该片段插入pUC19载体中 ,用ClaI和HindⅢ切下目的基因 ,然后将目的片段反向插入逆转录病毒表达载体pLNCX上。对重组子进行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定。　结果　所克隆的目的基因约为 1.2kb ,并成功连接到逆转录病毒载体pLNCX上 ,测序证明 ,插入的目的片段碱基序列与Genebank报道的完全一致 ,且插入载体方向正确。　结论　成功克隆了人逼尿肌中肾上腺素能 β2 受体基因的全长cDNA序列 ,构建了反义真核表达载体 ,为研究 β2 AR亚型的功能及进一步研究膀胱功能障碍的药物治疗提供了实验依据。     

一个低丰度表达胃癌下调新基因的克隆及意义

目的从成功建立的用于筛选胃癌下调新基因的抑制消减杂交cDNA文库中克隆新基因片段,并行马拉松末端扩增;检测新基因在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达,分析该基因与胃癌的相关性。方法随机挑选860个阳性克隆测序,寻找新基因片段。RACEcDNA马拉松末端快速扩增。新基因行Northern印记杂交,并在25例胃癌黏膜与正常胃黏膜RNA进行新基因半定量RT-PCR。新基因行生物信息的分析。结果筛选到一233bp的新基因片段(拷贝数1/860),经cDNA末端快速扩增,得到了长度802bp的新基因。命名为GDDM,被国际GenBank收录,收录号:AF494508。它在胃癌中的表达明显下调(GDDM/!-actin36.919±6.290vs4.496±0.637,P<0.01)。染色体定位4q31.1。结论克隆到一胃癌下调低丰度表达新基因GDDM,它可能参与胃癌的发生发展。     

肾癌差异表达基因GYLZ-RCC18的全长克隆及意义

目的 克隆并鉴定肾癌与下沉肾组织之间差异表达的基因。为研究肾癌发生发展机制提供新的突破口。方法 应用抑制性消减杂交技术,构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的ｃＤＮＡ消减文库,并从中克隆鉴定出肾癌特异表达的基因。结果：构建成功高消减效率的人肾癌组织ｃＤＮＡ消减文库,对其中１０个克隆的插入ｃＤＮＡ片段进行测序后,经基因库检索表明１０个片段均为未知新序列,其中ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因为５个拷贝,这提示以上１０个ｃＤＮＡ片段可能来自６个新基因。差异分析显示ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８的肾癌组织中有明显表达,而在正常肾组织中无表达,应用ＳＭＡＲＴ ＲＡＣＥ技术获得ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因的全长,并证明ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８是一个５′端有Ｄ３种不同剪切方式亚型的基因家族。结论 ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因是肾癌特异表达的新基因。人肾癌ｃ     

人胃动素受体基因表达载体的构建

目的 构建人胃动素受体基因的原核表达载体。方法 通过巢式PCR扩增人基因组DNA，获得人胃动素受体基因的658bp的靶片段，将其粘端克隆，然后应用限制性酶切、半巢式PCR扩增及测序鉴定。结果 成功克隆了人胃动素受体基因表达片段，测序证实读框正确。结论 人胃动素受体表达片段获得成功克隆。     

白细胞介素-1受体拮抗蛋白和白细胞介素-10联合基因转染人骨关节炎软骨细胞的研究

目的探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白（hIL-1Ra）和白细胞介素-10（hlL-10）联合基因转染在人骨关节炎（OA）关节软骨细胞中稳定表达的可行性。方法构建含目的基因的表达载体PLXRN-IL-1Ra和PLXRN—IL-10，经酶切及测序鉴定正确后单个或联合转染人OA软骨细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内目的基因的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中hlL-1Ra和hlL-10蛋白表达量的水平。结果酶切和测序表明获得了与预期结果一致的PLXRN—IL—IRa和PLXRN—IL-10真核表达载体。稳定转染软骨细胞后，RT-PCR检测到了细胞内hIL-1Ra和hIL-10mRNA片段。ELISA检测发现基因转染组均有相应的一定量的hlL．1Ra和hIL-10表达，单个基因转染组中分别为（60．47±15．13）和（19．73±4．10）ng／L；联合基因转染组为（67．15±11．47）和（16．76±9．96）ng／L。未转染组及PLXRN空质粒转染组均无hIL—IRa和hlL-10表达，基因转染组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），而单个基因转染组和联合基因转染组组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论逆转录病毒载体PLXRN介导的hlL-1Ra和hlL-10联合基因可有效地感染人OA关节软骨细胞并获得稳定表达，为将表达hIL-IRa和hlL-10目的基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了依据。     

胞嘧啶脱氨酶基因修饰的结肠癌细胞瘤苗抗肿瘤研究

目的 研究胞嘧啶脱氨酶（EC—CD）自杀基因修饰的结肠癌细胞瘤苗的抗肿瘤作用。方法 用含EC-CD基因的逆转录病毒质粒pLCDSN将人EC—CD基因转导入鼠结肠癌细胞株CT26，用G418进行筛选，得到抗性克隆CT26／CD，比较CT26／CD与野生型CT26的成瘤性，评价CT26／CD对野生型CT26细胞肝转移模型的治疗作用。结果 CT26／CD能在含0．6g／LG418的培养液中稳定生长；RT—PCR证实EC—CD基因在CT26／CD中表达；CT26／CD细胞对5-氟胞嘧啶（5-FC）的敏感性明显增加（P=0．000），且具有良好的旁观者效应；CT26／CD的成瘤性与野生型CT26相似（P=0．892）；CT26／CD联合5-FC对野生型CT26的肝转移有明显抑制作用，明显延长了荷瘤小鼠存活期（P=0．000）。结论 EC—CD基因修饰的结肠癌细胞瘤苗有一定的抗肿瘤作用。     

cDNA微阵列和抑制消减杂交技术筛选胃癌下调功能基因组的研究

目的 筛选胃癌下调基因组，发现新的胃癌下调基因。方法 采用cDNA微阵列技术，检测5例胃癌与相对应正常胃粘膜间mRNA表达差异基因，筛选胃癌下调基因组。采用抑制消减杂交技术，建立5人份正常胃粘膜mRNA抑制消减杂交胃癌mRNA的差异表达文库，用聚合酶链反应及差异表达克隆菌转膜反向杂交判定其消减效率。随机挑选阳性克隆测序，寻找胃癌下调新基因，并经逆转录-聚合酶链反应证实。结果 筛选到60个胃癌下调基因，其中包括抑癌基因，凋亡相关基因，DNA复制、转录、翻译相关基因，细胞周期相关基因，细胞迁移相关基因等。克隆到两个胃癌下调的新基因片段。结论 得到60个胃癌下调基因，它们共同作用与胃癌的发生、发展、转移密切相关。成功建立了用于筛选胃癌下调新基因的抑制消减杂交cDNA文库，发现了两个新的胃癌下调基因片段．     

癌组织K-ras基因突变和血清CEA的联合检测预测结直肠癌肝转移的意义

目的 观察结直肠癌组织中K-ras瑚基因突变,检测患者外周血清CEA水平,探讨两者与结直肠癌肝转移的关系.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法和基因测序技术检测100例结直肠癌组织中K-ras基因1号外显子12、13密码子突变,化学发光法检测患者血清CEA水平,结合其临床资料分析.结果 100例结直肠癌组织中K-ras基因突变者39例(39.0%),其中12号密码子突变31例,13号密码子突变8例.36例肝转移组中K-ras基因突变23例(23/36,63.9%);64例无肝转移组中K-ras基因突变16例(16/64,25.0%).36例有肝转移患者外周血清CEA水平为(66.79±127.46)μg/L,其中25例(25/36,69.4%)出现不同程度CEA升高;64例无肝转移患者外周血清CEA水平为(4.93±4.62)μg/L,其中24例(24/64,37.5%)CEA升高.两个指标联合检测,肝转移组的阳性率(22/36,61.1%)明显高于无肝转移组的阳性率(5/64,7.8%),P<0.01.其预测结直肠癌肝转移的敏感性及特异性分别为61.1%和92.2%.结论 K-ras基因突变、血清CEA水平与结直肠癌肝脏转移有密切相关,联合检测癌组织K-ras基因突变和血清CEA水平可预测结直肠癌肝转移.     

细胞黏附分子与胃癌发生及转移关系的实验研究

目的探讨细胞黏附分子在胃癌发生和转移中的作用.方法运用cDNA基因芯片和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测25例胃癌标本神经细胞黏附分子(NCAM)、细胞间黏附分子(ICAM)、血管细胞黏附分子(VCAM)的表达.结果 NCAM、ICAM及VCAM基因在25例胃癌患者中表达显著增高(Cy5/Cy3＞2.0),胃癌转移组明显高于无转移组(P＜0.05)和正常对照组(P＜0.05),RT-PCR与基因芯片检测结果相同.结论基因芯片能够为胃癌的相关基因分析提供特异和可靠的数据,胃癌的发生和转移可能与胃组织中NCAM、ICAM、VCAM基因表达升高有关.     

牛磺酸上调基因1和微小RNA-145在胃癌中的表达关系研究

目的检测牛磺酸上调基因1（TUG1）和微小RNA-145（miR-145）在胃癌中的表达情况,探讨两者在胃癌发病中的作用及关系。 方法选取2016年2月至2017年2月于海南省肿瘤医院行根治性胃切除术的局部进展期胃癌患者110例,采用实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测胃癌组织和癌旁正常组织中TUG1、miR-145的相对表达量,分析TUG1、miR-145表达相关性及其与临床病理资料、术后生存的关系。 结果与正常组织相比,胃癌组织中TUG1的表达明显升高（P<0.05）,miR-145的表达明显降低（P<0.05）。胃癌组织中TUG1、miR-145的相对表达量呈明显负相关关系（P<0.05）。TUG1的表达水平与胃癌患者的淋巴结转移、肿瘤分化程度、临床分期有关（P<0.05）,miR-145的表达水平与胃癌患者的淋巴结转移、临床分期有关（P<0.05）。TUG1低表达的胃癌患者总生存率明显高于TUG1高表达者（P=0.010）,miR-145高表达胃癌患者总生存率明显高于miR-145低表达者（P<0.001）。 结论在胃癌组织中,TUG1明显高表达,miR-145明显低表达,且两者呈负相关关系,具有判断胃癌预后的价值。     

c-Met在有、无肝转移结直肠癌组织中的表达差异

目的：探讨肝细胞生长因子受体（c-Met）在有、无肝转移结直肠癌组织中的表达及其临床意义。 方法：用real-time PCR法和Western-blot法分别对48例肝转移结直肠癌组织和48例无肝转移结直肠癌组织c-Met基因和蛋白表达进行检测,并分析c-Met的表达与各临床病理因素间的关系。 结果：肝转移结直肠癌组织中c-Met表达在mRNA和蛋白水平均明显高于无肝转移结直肠癌组织,差异均有统计学意义（均P<0.05）;c-Met的mRNA水平和蛋白水平均与临床分期、淋巴结转移密切相关（均P<0.05）,而与性别、年龄、组织分化程度及肿瘤部位无关（均P>0.05）。 结论：c-Met的高表达与结直肠癌肝转移有关,检测c-Met的表达对预测结直肠癌肝转移可能具有重要价值。     

S100A6对胃癌细胞侵袭转移的调控机制研究

目的探讨S100A6过表达对胃癌细胞侵袭转移的调控机制。方法收集1995年1月至2001年12月间经病理确诊的166例胃癌标本及其对应的癌旁组织、肝转移组织和淋巴结转移组织标本,采用免疫组织化学染色法检测标本中S100A6蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系：通过ChIP—Chip方法检测胃癌细胞株KAT03中S100A6可能调控的下游因子;将S100A6基因转染入胃癌细胞株AGS,通过细胞侵袭实验、RTQ—PCR方法分别检测转染组、阴性对照组和空白对照组中细胞的侵袭能力和侵袭转移相关因子CDK5和FLJ12438的mRNA表达。结果S100A6蛋白在癌旁组织细胞质中偶有低表达;而在胃癌、肝及淋巴结转移灶组织的肿瘤细胞质和（或）细胞核中均有高表达,且在侵袭边缘的肿瘤细胞的细胞核中表达较高,其高表达率为分别为67．5％（112／166）、92．9％（26／28）和100％（30／30）。S100A6表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、脉管癌栓、远处转移及TNM分期有关（均P〈0．05）。S100A6可能作用于26个细胞侵袭转移有关基因的启动子部位。SIOOA6转染组的过膜细胞数为31．3±5．5,多于阴性对照组的7．7±1．5和空白对照组的9.3±2．1,差异有统计学意义（均P〈0．05）。CDK5mRNA在转染组中的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（均P〈0．05）,而FLJ1243mRNA在转染组中的表达水平与另外两组的差异则无统计学意义（均P〉0．05）。结论S100A6可能通过调控下游侵袭相关因子如CDK5的表达,进而影响胃癌细胞的侵袭转移等恶性生物学行为。     

Down-regulation of the human PRL-3 gene is associated with the metastasis of primary non-small cell lung cancer.

BACKGROUND: Phosphatase of the regenerating liver (PRL)-3 protein tyrosine phosphatase gene is expressed in colon cancer metastasis. To investigate the role of this gene in metastatic lung cancer, we compared PRL-3 gene expression between primary cancers, metastatic lung cancer, and normal lung tissue. MATERIALS AND METHODS: Five metastatic tumor and normal samples from non-small cell lung cancer patients were obtained at the National Hospital Organization Kumamoto Medical Center (Kumamoto, Japan). For a quantitative evaluation of RNA expression by PCR, we used Taqman PCR methods. RESULTS: Although PRL-3 gene expression levels in the primary lesions were slightly decreased compared with those in the normal tissues, those in the metastatic lesions were extremely down-regulated in the synchronous metastatic case. In 2 of these 3 cases, the metastatic tumors showed down-regulated PRL-3 gene expression at 10 times less than that of the normal tissue, and the other tumor showed a slightly weaker expression. CONCLUSION: These data suggest that a down-regulation of the PRL-3 gene is important in lung cancer metastasis and provide a new hypothesis of lung cancer metastases.     

CD9 expression in gastric cancer and its significance

BACKGROUND: The tetraspanin transmembrane protein CD9 is known to be involved in cell adhesion, proliferation, and cell motility. Previous studies have reported that reduced expression of CD9 is related to aggressive behavior of cancer cells. However, the cause-and-effect relationship between the CD9 expression level and the state of malignancy remains unclear. Here, we investigated the connection between the CD9 expression level and the state of malignancy in gastric cancers. MATERIALS AND METHODS: The expression of CD9 was examined in primary and metastatic gastric carcinoma tissues. In total, specimens from 78 patients were used for immunohistological staining and specimens from 57 patients were subjected to Northern blotting. Paired samples of tumor/normal tissues obtained from five cases of gastric cancer were used for Western blotting. RESULTS: CD9 expression was observed at both the message level and the protein level in primary gastric carcinoma tissues, lymph node metastatic tissues, and peritoneal dissemination tissues. Contrary to previous reports for other cancers, CD9 expression was intensified in cancerous areas of gastric cancers in comparison with noncancerous areas in the same patient. When analyzed by the malignancy status based on the clinicopathological diagnosis, there was a tendency that CD9 expression was observed in severe vessel invasion, active lymph node metastasis, and advanced stage. CONCLUSIONS: CD9 expression was rather intensified in gastric cancer tissue in comparison with normal tissues. CD9 expression was more prominent in advanced gastric cancer.     

gastrokine1在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系

目的 探讨gastrokine 1在胃癌的发生、发展过程中的作用.方法 应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测52例诊断明确的胃癌患者的癌组织及癌旁组织中gastrokine 1的表达,并分析其与胃癌患者临床病理学特征的关系.结果 gastrokine 1基因和蛋白在胃癌组织中的表达均低于癌旁组织(基因△Ct值:9.07±5.06比0.85±3.79;蛋白表达阳性率:5.8％ (3/52)比86.5％ (45/52)],差异均有统计学意义(P＜0.01).胃癌组织中gastrokine 1基因的表达与肿瘤的位置、浸润深度、分化程度、淋巴结转移及分期,患者的性别和年龄以及术前外周血CEA及CA19-9水平均无关(P＞0.05),而幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)阳性胃癌患者的癌组织中gastrokine 1基因表达低于HP阴性者(△Ct值分别为11.14±5.19和7.67±4.18,P＜0.05).结论 gastrokine 1在胃癌组织中的表达显著降低,它作为一种保护性基因在胃癌的发生和发展中扮演着重要角色,它的保护作用可能因HP感染而减弱.     

TNIK在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子-2和Nck相互作用蛋白激酶(Traf-2 and Nck-interacting protein kinase,TNIK)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法回顾性收集2014年7月至2017年12月期间在郑州大学附属洛阳中心医院普通外科行手术切除并经病理科确诊的胃癌组织及其癌旁组织标本78份,以及同期胃溃疡组织标本42份。采用免疫组织化学染色法及Western blot法检测上述3种组织中TNIK蛋白的表达情况,并探索TNIK蛋白表达与胃癌临床病理学特征及预后的关系。结果免疫组织化学染色结果显示,胃癌组中,TNIK蛋白的阳性表达率为66.67%(52/78),癌旁组织组为11.54%(9/78),胃溃疡组为21.43%(9/42)。胃癌组的TNIK蛋白阳性表达率高于癌旁组织组和胃溃疡组(P<0.05),但癌旁组织组和胃溃疡组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,在胃癌组中,TNIK蛋白的表达水平高于胃溃疡组及癌旁组织组,差异均有统计学意义(P<0.05);但癌旁组织组与胃溃疡组比较差异无统计学意义(P=0.772)。TNIK蛋白的表达与胃癌患者的性别、CEA值、肿瘤直径及病理学类型均无关(P>0.05),但与胃癌患者的年龄、TNM分期、分化程度、远处转移及淋巴结转移相关(P<0.05);TNIK蛋白阳性表达患者的预后差于阴性表达者(P<0.001)。结论TNIK蛋白在胃癌组织中高表达,且与胃癌预后不良因素及较差的预后相关,可能是潜在的胃癌诊治靶点。