应用原位免疫聚合酶链反应检测活性巨细胞病毒感染

目的 建立一种新的诊断活动性巨细胞病毒感染的方法。方法 应用原位免疫聚合酶链反应（PCR）技术检测早、中、晚期孕妇宫颈脱落细胞中巨细胞病毒抗原。结果 119例受检标本中16例出现人巨细胞病毒（HCMV）抗原阳性，孕早、中、晚期孕妇活动性HCMV感染率分别为：9．37％、11．90％、17．77％；检出的HCMV抗原阳性细胞数为2－38／5万宫颈脱落细胞，平均8．5／5万细胞。常规ABC法平行检测，原位免疫PCR法检测敏感性高于ABC法。结论 原位免疫PCR方法敏感性高、特异性强，可检出测量HCMV抗原，为临床诊断活动性HCMV感染提供一种新方法。     

习惯性流产孕妇巨细胞病毒pp65抗原检测的临床意义

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染与习惯性流产(RPL)的关系。方法:采集习惯性流产孕妇和正常产前体检孕妇外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)和血浆,分别用免疫荧光法和实时定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV-DNA,并比较2种方法的一致性。结果:46例RPL患者HCMV pp65抗原有14例阳性,阳性率30.4%,50例正常体检孕妇HCMV pp65抗原有4例阳性,阳性率8%,2组孕妇HCMV活动性感染率有显著性差异(2χ=6.76,P<0.01)。孕妇HC-MV pp65抗原阳性率升高,孕妇流产几率增加(2χ=6.39,P<0.01)。免疫荧光法和实时定量PCR有较好的一致性(93.5%)。结论:习惯性流产孕妇HCMV活动性感染率显著高于正常孕妇,HCMV pp65抗原检测可作为RPL早期诊断指标之一。     

合成肽检测巨细胞病毒酶联免疫方法的建立及应用

目的：应用合成肽建立检测人巨细胞病毒（HCMV）特异敏感的酶联免疫方法，并用于临床检测患者血清中HCMV－IgM。方法：根据人巨细胞病毒PP150氨基酸序列，利用计算机辅助设计。决定含HCMV PP150国强抗原决定簇的单链多肽序列，合成肽作抗原，建立检测抗HCMV－IgM的酶联免疫吸附试验（ELISA）法，并用聚合酶链反应（PCR）方法检测全血中HCMV DNA，比较ELISA与PCR两种方法的相关性。结果：本实验所建立的检测抗HCMV－IgM的ELISA方法具有较好的特异性，正常孕妇血清中抗HCMV－IgM阳性率与HCMV DNA存在相关性。结论：本研究所建立的以合成多肽作抗原检测巨细胞病毒酶联免疫方法具有较好的特异性，简单，快速，适用与临床标本的检测。     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测及其应用

目的:建立一种快速简便诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法:运用免疫组织化学的催化信号扩增法检测外周血白细胞中的人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65,巨细胞病毒信使核糖核酸(pp67-mRNA)检.测法作比较.结果:检测105例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性45例,pp67-mRNA检测阳性40例,pp65抗原阳性细胞数为(70±43)个/2×105个WBC,而有症状的CMV病25例,抗原阳性细胞指数为(85±44)个/2×105个WBC.对照组100名健康人,pp65抗原检测全为阴性.pp65的敏感性、特异性分别是100%、88.9%.结论i该法敏感,简便,可作为肾移植术后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

FQ—PCR法对孕前及孕中进行HCMV检测的临床意义

目的运用荧光定量PCR（FQ—PCR）技术对孕前及孕中进行人巨细胞病毒（HCMV）检测,探讨受检者孕前及孕时感染HCMV的临床意义。方法对302例孕前妇女和620例产前孕妇均做HCMV检测,取宫颈分泌物标本用FQ—PCR法做HCMV—DNA检测,取血清标本用ELISA法做HCMV—IgM检测。结果302例孕前妇女宫颈分泌物标本HCMV—DNA阳性96例,血清标本HCMV—DNA阳性5例;620例产前孕妇宫颈分泌物标本HCMV—DNA阳性94例,血清标本HCMV—DNA阳性7例。可见用FQ—PCR法检测HCMV—DNA的阳性率远高于用ELISA法检测HCMV—IgM,ELISA法检测HCMV感染阳性率明显偏低,说明FQ—PCR法敏感性显著高于ELISA法。结论宫颈分泌物组和血清组有明显差异,运用FQ—PCR技术对孕前及孕时进行HCMV检测具有重要的临床意义。     

先天性巨细胞病毒感染与胎儿畸形

青岛医学院微生物教研室邵济钧等用间接ELISA法同时检测青岛地区孕妇血清中巨细胞病毒(HCMV)—IgM和IgA两种抗体,自1002份孕妇血清中共检出HCMV—IgM阳性149份(14.87%);HCMV—IgA阳性169份(16.87%)。若以其中一项阳性者即为阳性,则孕妇活动性HCMV总感染率为20.95%。自372份新生儿脐血血清中共检出HCMV—IgM阳性16份(4.30%),HCMV—IgA血清30份(8.06%),本地     

孕妇巨细胞病毒感染及其母婴垂直传播

目的探讨孕妇巨细胞病毒（HCMV）感染及其母婴垂直传播状况。方法应用酶联免疫吸附法（ELISA）筛查11859例孕妇HCMV的特异性抗体（IgG及IgM），同时应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术检测其中248例具有活动性HCMV感染孕妇的羊水或胎儿脐血或产后直接抽脐血检测HCMV-DNA。结果孕妇HCMV感染率为95，3％（11306／11859），孕妇活动性HCMV感染率为3．5％（417／11859），孕中期羊水的HCMV-DNA阳性率为12．1％（12／99）；孕晚期脐血或产后直接抽脐血HCMV-DNA阳性率为6．0％（9／149），羊水的HCMV-DNA阳性率与分娩期脐血及及新生儿血相比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论孕产妇孕前绝大多数已感染过HCMV，测定孕中期羊水的HCMV-DNA，对早期诊断先天性HCMV感染具有重要意义。     

US3基因检测在新生儿晚期黄疸巨细胞病毒感染诊断中的应用

目的探讨US3基因检测在新生儿晚期黄疸巨细胞病毒(human cytomegalovirus ,HCMV)感染诊断中的应用。方法应用巢式PCR法检测2012年1月-2012年12月在新生儿科就诊的新生儿晚期黄疸标本US3基因,并通过与HCMV-IgM、HCMV-DNA荧光定量PCR、HCMV-pp65抗原检测结果做比较,分析US3基因检测在诊断新生儿晚期黄疸HCMV感染的符合程度。结果① 145例新生儿晚期黄疸血清HCMV-IgM检测阳性1例,HCMV荧光定量PCR检测阳性24例,HCMV-pp65抗原阳性25例,US3基因扩增阳性24例;② US3基因检测与HCMV-DNA荧光定量PCR两种检测方法结果差异无统计学意义（P = 1.000）,一致率为97.2%,κ值为0.900;US3基因检测与与HCMV-pp65抗原检测两种检测方法结果差异无统计学意义(P =1.000）,一致率为95.2%,κ值为0.828;③ US3基因检测用于诊断新生儿晚期黄疸HCMV感染的灵敏度为85.2%,特异度为99.2%,Youden指数为84.4;阳性预测值和阴性预测值分别为0.958和0.967;④ US3基因检测用于诊断新生儿晚期黄疸HCMV活动性感染的灵敏度为84.0%,特异度为97.5%,Youden指数为81.5;阳性预测值和阴性预测值分别为0.875和0.967。结论US3基因检测适用于临床新生儿晚期黄疸HCMV感染的诊断。     

套式聚合酶链反应及限制酶分析对孕妇巨细胞病毒感染及其母婴传播研究

用套式聚合酶链反应(nPCR)及限制酶分析,病毒分离和特异性抗体测定检测孕妇外周血,脐带血及死胎组织巨细胞病毒(HCMV)。结果367名孕妇中,孕早、中、晚期HCMV阳性率分别为8.6％、1.6％及7.0％。nPCR检出率(4.9％)高于病毒分离(3.0％,P<0.025)。6份nPCR阳性母血中,3份配对脐血nPCR也阳性,母—脐传播率为50％(3/6)。28例死胎组织中,发现一死胎肺组织nPCR DNA阳性。提示:nPCR能提高诊断HCMV的特异性与敏感性,对孕妇及胎儿/新生儿HCMV感染的研究有重要意义。     

贫困山区妊娠妇女HCMV感染与血清IL-8的关系

目的 研究贫困山区孕期人巨细胞病毒感染状况,探讨苓与白细胞介素8 (Interleukin-8,IL-8)的关系.方法 用ELISA和PCR方法 检测贫困山区323例正常孕妇外周血特异性 HCMV IgM、IgG抗体及HCMV DNA,对其中27例孕期HCMV 活动性感染者及48例孕期无HCMV活动性感染者进行随访,检测产后乳汁及新生儿尿液HCMV DNA;并采用双抗体夹心ELISA法检测孕妇及乳母外周血中IL-8水平.结果 孕妇HCMV活动性感染率为8.36%,宫内传播率为25.93%,孕期CMV活动性感染者及宫内传播者其外周血IL-8水平显著高于未感染者(P<0.05),乳汁排毒者和未排毒者间血清IL-8水平没有明显变化.结论 近年来贫困山区孕期HCMV活动性感染率有所下降,但较国内外报道仍高;IL-8在孕期活动性HCMV感染及宫内感染中可能起着重要的免疫调节作用.     

孕妇围生期HCMV感染与婴儿先天性疾病关系

目的探讨孕妇人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染对婴儿的近期影响。方法采用ELISA和PCR相结合的方法，采集74例HCMV活动性感染孕妇及50例无HCMV活动性感染孕妇的婴儿血进行HCMV—IgM及HCMV—DNA检测．并对感染婴儿定期随访至生后6个月，追踪其近期预后。结果孕期HCMV活动性感染组的婴儿先天性感染率为36．49％，围产期感染率为45．95％，显著高于孕期无HCMV活动性感染组（P〈0．005）；HCMV活动性感染孕妇的婴儿中，先天性感染组症状性感染发病率高于围生期感染组（P〈0．025）；神经系统异常、先天畸形及全身性感染发病例数多于围生期感染组（P〈0．05）；先天性感染组中，症状性感染婴儿治疗后肝功能恢复、HCMVHCMV—IgM和／或HCMV—DNA转阴率及近期预后比围生期感染组差（P〈0．05）。结论孕期HCMV活动性感染与婴儿先天性感染及围生期感染显著相关。孕期HCMV活动性感染引起的先天性感染较围生期感染严重，预后差．故应重视孕期HCMV感染的检测，预防和阻断HCMV先天性感染的发生。     

孕期干预减少宫内感染所致出生缺陷的临床意义

目的　探讨孕期干预减少人巨细胞病毒 (HCMV)和弓形虫 (TO)宫内感染所致出生缺陷的效果。方法　采用前瞻性随机对照临床研究方法 ,检测 3 0 95例有异常孕产史的孕妇外周血中的 HCMV和 TO特异性抗体 Ig G和 Ig M,对 HCMV Ig M阳性者再检测 HCMV晚期 m RNA。对 119例 HCMV Ig M和 HCMV m RNA均阳性者服用中药金叶败毒颗粒 ,12 9例作为对照 ;给 13 1例 TO Ig M阳性者服用西药螺旋霉素 ,13 9例作为对照。结果　中药金叶败毒颗粒可使孕妇 HCMV Ig M和 HCMV m RNA转阴率从自然状态下的 42 .64 % (5 5 / 12 9)提高到 71.43 % (85 / 119) (χ2=2 0 .87,P=0 .0 0 1) ,宫内传播率从自然状态下的 47.5 0 % (19/ 40 )下降到 2 0 .0 0 % (15 / 75 ) (χ2 =9.47,P=0 .0 0 1) ,并大大减少了流产、死胎、先天畸形等子代生长发育异常。西药螺旋霉素可使孕妇 TO Ig M转阴率从 3 5 .2 5 % (49/13 9)提高到 72 .5 2 % (95 / 13 1) (χ2 =3 7.63 ,P=0 .0 0 1) ,宫内传播率从自然状态下的 2 4.2 4% (8/ 3 3 )下降到 7.3 5 %(5 / 68) (χ2 =5 .65 ,P=0 .0 0 2 )。结论　筛选孕期 HCMV Ig M和 HCMV m RNA阳性以及 TO Ig M阳性的妇女 ,分别给予金叶败毒颗粒和螺旋霉素可减少因因宫内感染所致的出生缺陷     

早孕妇女活动性巨细胞病毒感染的调查及其宫内感染检测方法的研究

本文对北京、青岛及沈阳三市的1202名早孕妇女进行了原发性HCMV感染的临床调查,血清中特异性HCMV—IgM和IgA抗体的酶联免疫吸附法检测;分析了患病的风险因素;并采用辣根过氧化物酶复合物(PAP)免疫组化技术检测其胚胎绒毛中的HCMV,以便建立一种宫内感染诊断的方法。利用透射电镜和聚合酶链反应(PCR)技术来验证此方法的可靠性,结果显示PAP法的阳性及阴性率与电镜观察的符合率为100％,与PCR法的符合率分别为97.0％与86.6％,实为一种敏感、经济、易行的宫内诊断方法。     

产前诊断先天性人巨细胞病毒感染安全性和可靠性分析

目的:探究宫内取材进行先天性人巨细胞病毒(HCMV)感染产前诊断的安全性和可靠性。方法:联合应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、巢式PCR(N-PCR)和逆转录PCR(RT-PCR)分析武汉、上海和沈阳三地6723例育龄妇女和孕妇HCMV感染状况及妊娠结局。结果:育龄妇女活动性HCMVIgM检出率为6·11%,其中孕妇和非孕妇间无显著性差异。活动性感染孕妇绒毛、脐血HCMV感染率分别为51·52%、66·18%,明显高于对照组。先天性感染儿发生异常妊娠结局的危险性明显高于非感染儿。宫内取材所致妊娠丢失率均无显著增加,其检查结果与出生后的诊断一致。结论:宫内采集绒毛、羊水、脐血进行产前诊断,安全性和可靠性良好,可为胎儿的取舍提供依据。     

hTERC基因异常与HPV感染在宫颈疾病中的关系

目的:应用荧光原位杂交技术(FISH)分析宫颈病变中宫颈脱落细胞的3号染色体hTERC基因异常情况,及其与HPV感染在宫颈癌中的关系。方法:对120例宫颈疾病患者,采用宫颈疾病三阶梯诊断方法,对正常宫颈(20例)、CIN、宫颈鳞癌、腺癌进行诊断,全面了解宫颈细胞形态学、组织病理学及HPV感染情况,并进行分型、分期,以病理检查为金标准;第2部分采用荧光原位杂交技术对其宫颈脱落细胞进行同步分析,了解3号染色体上hTERC基因扩增情况。第2部分采用反向杂交法检测HPV感染情况,对100例宫颈癌及癌前病变患者的宫颈脱落细胞进行HPVDNA的检测。结果:①100例中宫颈鳞癌30例、腺癌6例、CIN64例,FISH检测宫颈癌及癌前病变的hTERC基因在3号染色体长臂26.3区域高频扩增,发生率分别为100.0%、100.0%、76.1%。②100例宫颈疾病患者的HPV总阳性率71.0%。在75例hTERC基因扩增阳性的患者中,HPV阳性所占的比例为89.3%(67/75),而HPV阴性所占比例仅为10.6%(8/75)。结论:3号染色体上hTERC基因在宫颈癌和癌前病变患者的宫颈脱落细胞中有不同程度的扩增。     

秦巴山区孕产期HCMV感染状况调查

目的研究贫困山区人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况以及导致HCMV感染的危险因素。方法选择陕南贫困地区4个县434名中、晚期妊娠妇女,对其进行一般情况及孕期情况的问卷调查,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）及PCR技术检测孕妇外周血抗HCMV—IgG、IgM抗体及HCMVDNA片段。随访至其生产后（所有随访者均为足月生产）,分别于产后2周内、3～14周内对随访产妇采集其乳汁及所生婴儿的尿液,继续进行HCMV的相关检查,区分先天性感染和围生期感染,并结合问卷分析HCMV感染的危险因素。结果①贫困山区妊娠妇女HCMV感染率为85．48％（371／434）,活动性感染率为8．06％（35／434）;总宫内传播率为4．58％（17／371）,其中活动性感染者宫内感染率为31．43％（11／35）,潜伏性感染者为1．79％（6／336）,两组间宫内传播率有显著性差异（χ2=63．704,P〈0．05）;②产妇乳汁HCMV阳性率11．86％（44／371）,其中活动性感染者乳汁排毒率为85．71％（30／35）,潜伏性感染者乳汁排毒率为4．17％（14／336）,两组间有显著性差异（确切概率0．000,P〈0．05）。乳汁排毒组中继续母乳喂养者中有14．28％（1／7）发生围生期感染,乳汁无排毒组中无围产期感染,两组间围生期感染率有显著性差异（确切概率0．021,P〈0．05）;⑧年龄、文化程度、家庭经济状况在活动性、潜伏性感染与正常对照组间均无显著性差异（χ2值分别为4．088、5．610、5．380,均P〉0．05）。孕产次、分娩方式在活动性、潜伏性感染与正常对照组问均有显著性差异（χ2值分别为9．383、17．746,均P〈0．05）。结论秦巴山区妊娠妇女HcMV活动性感染率、宫内传播率较课题组之前的研究有所下降,但仍高于其他地区感染水平。妊娠期HCMV活动性感染是导致宫内传播和产后乳汁排毒的重要因素。产后乳汁排毒可造成围生期HCMv感染。     

产妇及其新生儿人巨细胞病毒感染状况研究

本文采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）分析了沈阳地区产妇及其新生儿血清中人巨细胞病毒（HCMV）的感染情况。结果发现，231例产妇血清中HCMVIgG阳性率为100％，IgM阳性率达15．58％（36／231），产妇妊娠期间HCMV感染均为激活感染。231例新生儿先天性感染率为1．73％（4／231）。产妇与其新生儿HCMV-IgM检出情况密切相关的（ra＝0．706），胎儿可以从其HCMV-IgM阳性的母亲获得先天性感染（8．33％）。此外，HCMV-IgM阳性的产妇其新生儿Apgar评分低于正常产妇的新生儿，二者之间有显著性差异（t＝3．02，P＜0．05）。     

孕早期胎盘HBV感染的危险因素分析

目的:观察孕早期HBsAg阳性孕妇流产胎盘组织(乙型肝炎病毒)HBV感染情况,分析可能的危险因素,为进一步探讨HBV宫内感染机制提供线索,并为预防措施的制订提供初步的理论依据。方法:采用巢式病例对照研究,对355例自愿流产孕妇中外周血HBsAg阳性者按统一的调查表进行调查,并对其流产胎盘进行免疫组化和HBVDNA原位杂交检测,运用SPSS10.0统计软件对资料和结果进行统计处理和分析。结果:孕妇HBsAg携带率为7%;早期发育的胎盘HBV感染率为32%;孕妇外周血HBVDNA的高浓度(OR=22.5,P=0.004)和HBeAg阳性(OR=12.5,P=0.008),是孕早期胎盘感染的主要危险因素。结论:HBV可感染早期发育的胎盘,感染率为32%;血HBVDNA的高浓度和HBeAg阳性的孕妇,其孕早期胎盘感染HBV的可能性较大。     

应用PCR技术监测孕妇巨细胞病毒感染的研究

作者应用聚合酶链反应技术对广东江门，鹤山，新会三市７４６例孕妇进行巨细胞病毒感染情况监测。结果显示孕妇巨细胞病毒新近感染率为０．９４％，血，尿标本的检出率无显著差异，提示 尿液代替血液标本进行监测，为预防巨细胞病毒所致的感染性出生缺陷，作者提出了产前监测方案。