单克隆抗体治疗的过去、现在和未来

单克隆抗体不仅在基础研究和临床诊断中发挥着重要作用,单克隆抗体药物也在经历了鼠抗体的异源性和全抗体的大分子蛋白进入人体后引起免疫排斥和难于渗透组织的困顿之后,目前正以其"高度特异性"在临床显示出无可替代的优势.对抗体异源性的改造经历了人--鼠嵌合抗体、人源化抗体和基因文库技术使人型抗体的生产走向可能.Fab片段有效解决了全抗体的大分子问题.单纯抗体和"生物导弹"已进入临床,分别通过中和或封闭靶分子与通过抗体的靶向作用使其携带的药物,细胞毒素,凋亡诱导剂或放射性核素等"生物导弹"定向于靶,发挥低毒高效的杀伤作用.     

真核表达系统的抗体库技术研究进展

单克隆抗体(mAb)药物研制经历了鼠源性、人鼠嵌合、人源化改造以及全人源这4个阶段,其中全人源抗体因其免疫原性最低而得到相对广泛的应用。全人源抗体的制备主要包括转基因鼠技术和抗体库技术,在抗体库技术中主要包括基于原核表达系统的噬菌体技术和基于真核表达系统的核糖体技术、酵母技术以及哺乳动物细胞技术。本文主要综述了近些年来基于真核表达系统的抗体库技术的研究发展。     

基因工程抗体一从实验室构想到临床实践

被动的抗体治疗始于１００多年前，经历了异种抗血清、同种异体多克隆免疫球蛋白、单克隆抗体、工程化抗体等多个阶段。但直到基因工程抗体技术的出现，才真正使抗体治疗成熟起来。抗体治疗机制主要为：①中和作用，主要用于感染性疾病，使病原体或其产生的毒素丧失致病力；②示踪或导向作用，使与其相连的功能性分子特异性地激活或封闭、破坏靶细胞或靶分子；③竞争性抑制作用，抗体与体内产生或体外进入的物质结合，阻止其与靶分子作用产生毒性损害；④通过内影像作用模拟抗原，使疫苗更具安全性及广泛性。 近年来，抗体治疗应用已成为抗…     

产生人抗体的转基因和转染色体动物研究进展

鼠单克隆抗体应用于临床的弊端是它具有免疫原性 ,可行的办法是将鼠单克隆抗体人源化。抗体人源化的过程已由鼠嵌合抗体发展到了转基因动物表达完全人抗体阶段 ,表达完全人抗体的转基因动物有鼠、牛等。文中介绍了这些转基因动物的构建特点及这两种动物表达的人单克隆抗体和人多隆抗体的应用意义     

适合于人体治疗的人源化单克隆抗体

应用基因工程技术对鼠单克隆抗体进行改造,使其人源化,即将鼠单克隆抗体的CDRs 区插到人抗体V 区框架中。其目的在于降低鼠单克隆抗体对人体的抗原性,以适合于人体治疗。实验证明:这种人源化的单克隆抗体的抗原性大大降低,而其抗体活性仍存在,有的人源化抗体甚至出现了原抗体不曾具有的ADCC 效应,将人源化单克隆抗体用于人体治疗,获得满意的疗效,本文将对此进行综述。     

抗破伤风类毒素人单克隆抗体的制备

现在已有多种鼠源性单克隆抗体用于临床诊断,还有几种正处于初步临床试验阶段。然而,人源性单克隆抗体是否一定优于目前临床用的鼠单克隆抗体,这点尚需验证,如果人单克隆抗体引起的变态反应性并发证及形成的抗原抗体复合物较少,倘若它能提高放射图象的分辨率,那么,人单克隆抗体无疑优于鼠单克隆抗体。但现有用于体细胞杂交技术来延续产     

抗甲肝病毒人源基因工程全抗体分子在杆状病毒中的表达

目的 探讨人源抗甲型肝炎病毒全抗体分子在杆状病毒中的表达。方法 将获得的人源抗甲肝病毒中和性抗体Fab段基因克隆入含信号肽及Fc的杆状病毒表达载体中并在杆状病毒细胞中表达。结果 获得了中和性人源抗甲肝病毒全抗体分子的表达产物并进行了纯化，轻重链表达产物位置大小正确，HAFc16抗体能与具有中和活性的鼠抗甲肝病毒单克隆抗体产生竞争抑制反应，并能在体外中和甲肝病毒，另一株HAFc78抗体同样具有体外中和甲肝病毒的活性，但系抗不同位点的抗体。结论 获得的人源抗甲肝病毒全抗体分子表达产物具有很好的体外中和甲肝病毒的活性，且为抗不同位点的抗体，为这些抗体的进一步开发及应用打下了基础，为防止甲型肝炎暴发流行提供应急措施。     

DNA重组技术对单克隆抗体杂交瘤技术有何用途?

答:DNA重组技术为产生新的“第二代”单克隆抗体开辟了新的途径。目前制备的大多数是鼠/鼠单克隆抗体,该种抗体长期应用于人体可以导致过敏反应或产生中和抗体而降低单克隆抗体的效价。目前研制人/人     

人源化抗体研制策略分析及应用研究

鼠源性单克隆抗体由于可引起免疫反应而逐渐被人源化抗体所替代，人源化抗体开辟了抗体治疗临床应用的新时代。本文介绍并比较分析了几种制备人源化抗体的策略和抗体表达系统，并对其临床应用进行了展望。     

基因工程抗体的研究进展及应用前景

自从70年代德国学者Kohler和英国学者Milstein利用细胞融合技术首次成功地制备出单克隆抗体以来，其在诊断、治疗、预防和蛋白质提纯等方面日益显示出重要作用和广阔的应用前景。针对鼠源性单抗对人体存在着免疫原性的问题。于80年代初期，开始了基因工程抗体的研究，科学家们采用基因工程技术对鼠单抗进行结构改造，构建单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体等。本文介绍90年代以来基因工程抗体的研究进展，特别是抗体组合文库技术的突破性进展，被誉为单克隆抗体发展史上的里程碑”’一、基国工程抗体的理化及生物学性质1·功能抗体片段（Fun…     

治疗性单抗的免疫原性研究进展

治疗性单克隆抗体(Tberapeutic mAb)已经成为药物工业发展最快的领域之一,2003年到2004年之间其种类增长了48.1%.到目前为止,有26个治疗性单抗被美国食品药品管理局(FDA)批准应用于临床,超过150个抗体正在进行临床实验,其中包括8个鼠源性单克隆抗体、6个嵌合型单克隆抗体、11个人源化单克隆抗体和1个全人型单克隆抗体.这些抗体在临床上均取得了很好的效果,但是都不同程度地遇到了过敏反应和抗.     

人源化抗体研制策略分析及应用研究

鼠源性单克隆抗体由于可引起免疫反应而逐渐被人源化抗体所替代 ,人源化抗体开辟了抗体治疗临床应用的新时代。本文介绍并比较分析了几种制备人源化抗体的策略和抗体表达系统 ,并对其临床应用进行了展望。     

Phage Display技术在抗体库中的应用现状

Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而将外源蛋白表达于噬菌体颗粒的表面。该技术已被应用于噬菌体抗体库中，为单克隆抗体的制备及鼠单抗的人源化提供了一条有效的途径。它可以使人们在体外模拟体内抗体产生的过程，构建总抗体库，不经细胞融合，甚至不经免疫制备针对任何抗原的单克隆抗体。本文综述了该技术近年来在抗体库中的应用进展。     

Phage Display技术在抗体库中的应用现状

PhageDisplay技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而将外源蛋白表达于噬菌体颗粒的表面。该技术已被应用于噬菌体抗体库中，为单克隆抗体的制备及鼠单抗的人源化提供了一条有效的途径。它可以使人们在体外模拟体内抗体产生的过程，构建总抗体库，不经细胞融合，甚至不经免疫制备针对任何抗原的单克隆抗体。本文综述了该技术近年来在抗体库中的应用进展。     

人治疗性抗体的研究进展

抗体研究已有百余年的历史, 自从 20世纪 70年代德国学者K nler和英国学者Milstein利用细胞融合技术成功地制备了杂交瘤单克隆抗体 (mAb)以来, 抗体的生产技术才实现革命性的突破, 其在诊断、治疗、预防和蛋白提纯方面显示了重要的作用和非常广阔的应用前景。10多年来, 抗体被认为是理想的癌症和传染病的治疗分子。然而, 鼠源mAb作为异源性蛋白在人体内应用受到了限制: 如 ( 1 )可诱发鼠抗人抗体的生成(HAMA)[1]; (2)鼠源性Fc段不能有效地发挥人源性Fc段的功能; ( 3 )鼠源性抗体的生物半衰期很短 [2]。这严重影响了鼠mAb的治疗效…     

抗体基因工程——重组抗体

七十年代中杂交瘤单克隆抗体问世以来,在医学和生物学的研究及临床应用中,单克隆抗体己越来越显示它的重要性。但是,目前能应用的单克隆抗体(McAb)大多是鼠-鼠杂交瘤,抗体是属鼠的免疫球蛋白(Ig),在进入人体后能激发抗异种蛋白的反应。为此,人们试着获得人型免疫球蛋白(Ig)的McAb。目前除了人-人杂交瘤外,用抗体基因工程方     

抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体基因的真核载体构建和表达

目的 通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽(Aβ)人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增鼠源性抗体全长基因,并通过Blast对其序列进行分析;利用重组PCR技术拼接重轻链可变区及人IgG1的恒定区基因,并对重链Fc段进行定点突变以降低排斥反应;分别构建人-鼠嵌合基因重轻链表达载体,用脂质体法将其同时导入COS-7细胞中表达,并利用ELISA和免疫组织化学(SP法)对分泌的抗体功能和性质进行初步鉴定.结果 Blast比对分析结果显示克隆的基因序列符合小鼠抗体基因序列,将可变区基因与人IgG1的恒定区基因拼接以及Fc定点突变后,成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达;ELISA和免疫组织化学方法证实了所分泌抗体的人源性和与Aβ的结合特异性.结论成功地构建和表达了抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体,为其在阿尔茨海默病的临床诊治中应用和进一步改造奠定了基础.     

人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性。结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础。     

人-鼠嵌合抗体——新一代的抗体

<正> 美国和加拿大的研究组将人抗体基因的恒定区与小鼠抗体基因的可变区拼接,创造出具有全部人和鼠单克隆抗体最佳特性的杂交分子。这项技术能使任何小鼠单克隆抗体改变成期望的大部分近似人的单克隆抗体,使免疫原性更低,而作用效果更好。理论上,所有人单克隆抗体应能不激发人体免疫应答,但长期来,在对人杂交瘤方面所做的工作收效甚微。人-鼠嵌合抗体将有助于解决这一问题。     

人源抗体研制及应用进展

单克隆抗体(mAb)技术问世已25年,但由于人mAb制备的困难和鼠mAb的异源性,使mAb在人体内治疗方面的应用进展缓慢.近来由于人源化mAb研制的进展及突破,治疗用抗体的开发呈现了强烈的上升势头,在生物高技术领域中成为一个热点.目前mAb市场正以20%速度递增,预计2002年达11亿美元,占重组药物的9%.10年后市场上的治疗性mAb将从现在的几个增加到100个以上,预计销售额超过500亿美元.我国人源治疗性抗体的研制开发尚处于起步阶段,应当有所加强.