κ-阿片受体与β1-肾上腺素受体交互作用抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的:观察选择性kappa阿片受体(kappaopioidreceptor,κOR)与β肾上腺素受体(βadrenergicreceptor,βAR)在心肌细胞肥大方面的交互作用。方法:以体外培养的乳鼠心肌细胞为模型,10μmol·L-1的异丙肾上腺素(β肾上腺素受体激动剂,βAR)诱导心肌肥大,观察1μmol·L-1的U50,488H(κOR激动剂,U50)对其作用。进一步探索在100nmol·L-1ICI118,551(β2AR阻断剂)存在情况下,κOR的激活对心肌肥大的作用。用Lowry’s法测心肌细胞的蛋白质含量;用消化分离法,并利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积;用[3H]leucine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成。结果:异丙肾上腺素使心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成明显增加;1μmol·L-1的U50,488H使ISO诱导的心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成减少,这种作用可被选择性κOR阻断剂norBNI(norbinaltorphimine)抑制。在ICI118,551存在的情况下,U50也能起到减弱ISO诱导心肌细胞肥大的作用。结论:U50,488H通过激活κOR与β1AR交互作用抑制ISO所诱导的心肌细胞肥大。     

腺苷A1受体激动抑制高糖诱导的心肌细胞肥大

目的研究腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenyl-isopropyl)adenosine(R-PIA)对高糖(HG)诱导心肌细胞肥大的作用及机制。方法大鼠乳鼠心肌细胞培养,以HG(25.5mmol·L-1)诱导心肌细胞肥大模型,观察1μmol.L-1R-PIA和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂U0126对心肌肥厚的作用。用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;Western blot法测心肌细胞p-ERK1/2的相对表达水平;Till图像测定系统测心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化。结果1μmol·L-1R-PIA和U0126可以相似程度地抑制HG诱导的心肌细胞蛋白含量增加、p-ERK1/2相对表达增加及[Ca2+]i瞬间增加。合用0.1μmol·L-1腺苷Al受体拮抗剂8-eyelo-pentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)抑制作用消失。结论腺苷通过激动A1受体抑制HG诱导的心肌肥厚,其机制与减少心肌细胞p-ERK1/2的相对表达和降低[Ca2+]i瞬间变化有关。     

Bosentan对培养乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的 :以内皮素 (ET 1)诱导培养的乳鼠心肌细胞肥大 ,观察内皮素受体拮抗剂bosentan对肥大心肌细胞的抑制作用。方法 :以胰酶消化法分离乳鼠心肌细胞 ,分 4组进行细胞培养。对照组常规培养 ,不加任何干预因素 ,其余 3组分别加入bosentan10 -8mol·L-1、ET 110 -10 mol·L-1、ET 110 -10 +bosentan10 -8mol·L-1,培养 72h后观察心肌细胞生长情况并用放免法测定培养液中ET 1和心钠素 (ANP)含量。结果 :各组ANP测定水平分别为 :对照组 6.4 6±0 .38μg·L-1,bosentan组 4 .87± 0 .5 6μg·L-1,ET 1组 13.60±1.12 μg·L-1,ET 1+bosentan组 9.4 2± 0 .5 8μg·L-1。镜下观察见ET 1刺激乳鼠心肌细胞肥大 ,加用bosentan能使心肌细胞肥大程度减轻。结论 :ET 1可刺激乳鼠心肌细胞肥大 ,bosentan可使心肌细胞分泌心钠素减少 ,抑制ET 1诱导的心肌细胞肥大作用。     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大的影响

目的　利用体外培养的乳鼠心肌细胞 ,观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的肥大心肌细胞的影响 ,进一步推测吡格列酮对糖尿病并发心肌肥大的可能作用及作用机制。方法　以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后 ,用Lowrys法测心肌细胞的蛋白质含量 ;用 [3 H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成 ;利用计算机图像分析系统测心肌细胞的体积 ;用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率。结果　 10 μmol·L-1浓度的吡格列酮在对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比维拉帕米更为明显 ;同时观察到吡格列酮同维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论　吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚的抑制作用

目的通过观察选择性κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50488H抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导乳大鼠心肌细胞肥厚的作用及其对细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)瞬变及钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响,研究κ-OR激动抑制Iso诱导的大鼠心肌细胞肥厚的信号传导机制。方法以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用β肾上腺素受体激动剂Iso10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并进一步探讨在CaMKⅡ特异性抑制剂KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及L-钙通道阻滞剂维拉帕米1μmol.L-1存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥厚的作用。用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白的合成;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化;用Western蛋白印迹法测定CaMKⅡδB表达。结果Iso10μmol.L-1使心肌细胞总蛋白含量、体积和蛋白合成明显增加,U50488H1μmol.L-1抑制Iso诱导的心肌肥大,且抑制程度与KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及维拉帕米1μmol.L-1相似,在KN93存在的情况下,U50488H抑制Iso诱导的心肌肥大作用增强;U50488H能降低Iso引起的心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化升高;Iso能明显增强心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,U50488H能降低其表达。结论κ-OR激动剂U50488H可能通过降低心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚。     

钙调磷酸酶信号通路参与κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的研究钙调磷酸酶(CaN)信号通路在κ-阿片受体(κ-OR)激动对异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大中的抑制作用。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并探讨在环孢素A(CsA)1μmol.L-1、cAMP三乙胺盐(Rp-cAMPS)及百日咳毒素(PTX)5 mg.L-1存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。用Lowry等法测定心肌细胞蛋白质含量;用消化分离法及计算机图像分析系统测定细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2 +]i瞬间变化,用Western印迹法测定CaN的表达。结果与正常对照组相比,Iso 10μmo.lL-1使心肌细胞蛋白质含量增加了42.1%,体积增大了86.7%,[Ca2 +]i瞬变增加了57.5%,CaN表达增加了101.7%;加入κ-OR激动剂U50488H1μmol.L-1后,与Iso模型组相比,心肌细胞总蛋白质含量和细胞体积分别降低了24.7%和46.7%,[Ca2 +]i瞬变降低了43.8%,CaN表达降低了48.8%;CsA和Rp-cAMPS对Iso诱导的上述指标的抑制程度与U50488H相似;PTX预处理的情况下U50488H对Iso诱导的上述指标的抑制作用消失。结论κ-OR激动通过降低胞内[Ca2 +]i瞬变和CaN表达抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥大。     

吡格列酮对过氧化氢诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的观察吡格列酮对乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能作用机制。方法采用培养的新生大鼠乳鼠心肌细胞制备H2O2200μmol·L-1氧化损伤模型。实验分为正常对照组、模型组、吡格列酮组(0.1,1及10μmol·L-1)、吡格列酮(10μmol.L-1)+GW9662(10μmol·L-1)组、维拉帕米1μmol.L-1组。MTT法测心肌细胞的活力;采用硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法分别测定心肌细胞中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化。结果H2O2200μmo.lL-1作用于心肌细胞12h能引起心肌细胞凋亡。吡格列酮浓度依赖性地增加受损心肌细胞的活力及SOD活性,降低MDA含量。吡格列酮10μmol·L-1抑制作用最明显,其与维拉帕米1μmol·L-1有相似的抑制作用,二者都可以减少心肌细胞的凋亡率,降低由H2O2诱导的升高的[Ca2+]i静息水平及频率。过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ受体特异性拮抗剂GW966210μmol.L-1能拮抗吡格列酮的部分抑制作用,但不影响吡格列酮对[Ca2+]i的瞬变作用。结论吡格列酮可以抑制H2O2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与其抗脂质氧化和减少细胞内钙超载有关,其抑制作用部分是通过PPARγ受体介导的。     

κ受体激动剂对异丙肾上腺素诱导大鼠乳鼠心肌肥厚的作用机制研究

目的：利用体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞,研究异丙肾上腺素（ISO）诱导肥大心肌细胞中κ阿片受体（κ-OR）的作用及其机制。方法：新生大鼠心肌细胞培养,Lowry’s法测心肌细胞的蛋白含量;用消化分离法,利用计算机图像分析系统测心肌细胞的体积;[3H]leucine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成,Western blot法测细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化水平。结果：在给予ISO诱导心肌肥大的情况下,ERK通路抑制剂U0126可减少肥大心肌细胞的蛋白质含量、体积、蛋白合成和ERK磷酸化程度;κ-OR激动剂U50,488H（U50）能够减少肥大心肌细胞的蛋白含量、体积和蛋白合成,但与U0126共同作用时（U0126先孵育30min）,其抑制心肌肥大作用一定程度上减小。结论：ISO激活引起ERK磷酸化增加,抑制ERK可以阻断ISO的致肥大作用;κ-OR激活能够抑制ISO所诱导的心肌细胞肥大,其作用机制与ERK相关。     

辛伐他汀对内皮素-1诱导氧活性物质介导心肌细胞肥大的抑制作用

目的　探讨辛伐他汀对内皮素 1 (endothelin 1 ,ET 1 )诱导的氧活性物质 (reactiveoxygenspecies,ROS)产生和心肌细胞肥大的抑制作用。方法　用原代培养的新生大鼠心肌细胞进行实验。细胞内荧光信号用荧光倒置显微镜检测。细胞内ROS水平用ROS敏感的荧光探针 2 ,7 dichlorofluo rescindictate(DCF DA)来反应 ,细胞内RNA含量用RNA敏感的荧光探针碘化丙啶 (propidiumiodide ,PI)来测定。用考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白含量。用图像分析软件 (Leica图像分析软件 )测细胞表面积。结果　①ET 1浓度依赖性地使心肌细胞内DCF DA的荧光信号增加和心肌细胞肥大。过氧化氢酶 (catalase ,CAT ,0 2U·L- 1 )抑制ET 1 (1× 1 0 - 8mol·L- 1 )诱导的心肌细胞内DCF DA的荧光信号的增加和心肌细胞肥大。②辛伐他汀对ET 1诱导的心肌细胞内DCF DA的荧光信号增强和心肌细胞肥大产生剂量依赖性的抑制作用。结论　ET 1能够使心肌细胞产生ROS和ROS依赖的心肌细胞肥大 ,辛伐他汀能抑制ET 1诱导的ROS依赖的心肌细胞肥大。     

吡格列酮对培养的心肌细胞肥大的抑制作用

目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与去甲肾上腺素共同诱导的肥大心肌细胞的影响,进一步推测吡格列酮对糖尿病性心肌肥大的可能作用及作用机制。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后,用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率;用Lowry’s法测心肌细胞的蛋白质含量;用[3H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成;利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积。结果吡格列酮在1～10μmol·L-1浓度对25.5mmol·L-1高糖与1μmol·L-1去甲肾上腺素联合诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比1μmol·L-1维拉帕米更为显著;同时观察到10μmol·L-1吡格列酮同1μmol·L-1维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论吡格列酮能有效抑制高糖与去甲肾上腺素联合诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

腺苷A1受体激活在钙调磷酸酶信号通路上对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的抑制作用

目的观察腺苷A1受体激活在钙调磷酸酶(CaN)通路上对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用及机制。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,以Iso 10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大,观察腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenylIsopropyl)adenosine(R-PIA)1μmol.L-1对其作用,进一步探讨钙调神经磷酸酶特异性抑制剂环孢菌素A(CSA)1μmol.L-1、PKA抑制剂cAMP三乙胺盐(RP-cAMPS)1μmol.L-1、百日咳毒素(PTX)5 mg.L-1存在时,腺苷A1受体的激活对心肌细胞肥大的影响。通过Lowry法测心肌细胞蛋白含量;RT-PCR法检测心肌细胞心钠素(ANP)的mRNA表达;Western blot法测心肌细胞CaN的相对表达水平;以Fluo-3/AM为荧光探针,共聚焦显微镜下测量心肌细胞[Ca2+]i瞬变。结果 10μmol.L-1 Iso可以诱导心肌细胞肥大,腺苷A1受体激动剂R-PIA可以使其蛋白含量降低、ANP的mRNA表达减少、CaN相对表达降低、[Ca2+]i荧光强度减小,CSA、RP-cAMPS有类似抑制作用,PTX预处理的情况下,R-PIA对Iso诱导的心肌肥大的抑制作用消失。结论腺苷A1受体可以通过钙调磷酸酶通路抑制Iso诱导的心肌肥大,其机制与降低细胞内[Ca2+]i浓度及CaN表达有关。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的作用

目的从细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)激活角度研究丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡ Asulfonate,STS)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌肥大反应中的作用。方法培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[3H]-亮氨酸参入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;用免疫荧光标记法和Western blot测定磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)表达。结果(1)AngⅡ(1μmol·L-1)处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率、蛋白含量明显增加,STS能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率、蛋白含量的增加;(2)AngⅡ刺激心肌细胞可见胞核内出现磷酸化ERK1/2荧光染色,丹参酮ⅡA可阻断AngⅡ引起的ERK1/2活化、入核过程;(3)用AngⅡ(1μmol·L-1)处理心肌细胞5min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)表达即开始增加,10min左右时最明显。以AngⅡ(1μmol·L-1)处理心肌细胞10min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)表达为标准,预先以STS(2,10,50μmol·L-1)处理心肌细胞30min,发现STS可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达;(4)预先以不同浓度STS处理心肌细胞30min,发现STS对AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达的抑制作用存在剂量依赖性。结论STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚,其机制与抑制磷酸化ERK1/2表达有关。     

激动α_(1B)-肾上腺素受体对DDT1 MF-2细胞生长的刺激作用及其途径

目的　研究激动α1B 肾上腺素受体 (α1B AR)对DDT1MF 2细胞生长的影响及其机制。方法　用3H-胸腺嘧啶参入法测定细胞的DNA合成速率 ;用流式细胞计测定细胞周期。结果　去甲肾上腺素 (NE ,0 1～ 1μmol·L-1)可刺激DDT1MF 2细胞DNA的合成。磷脂酶C抑制剂 (U7312 2 ,10 μmol·L-1)、Ca2 +/ATP酶抑制剂 (CPA ,10 μmol·L-1)、胞内Ca2 +络合剂 (BAPTA/AM ,10 μmol·L-1)、PKC抑制剂(RO 31 82 2 0 ,0 1μmol·L-1或calphostinC ,0 1μmol·L-1)、酪氨酸激酶抑制剂 (tyrphostinA2 5 ,10 μmol·L-1或genis tein ,10 μmol·L-1)、MEK1/ 2抑制剂 (PD 980 5 9,10 μmol·L-1)均可阻断NE刺激细胞DNA合成的作用。结论　激动α1B AR可刺激DDT1MF 2细胞增殖 ,其信号转导途径可能与PLC激活、Ca2 +释放、PKC、TK和ERKs的激活有关     

ATP敏感性钾通道在U50488H抑制去氧肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大中的作用

目的研究ATP敏感性钾通道(KATP)在κ-阿片受体激动剂U50488H抑制乳大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型,应用去氧肾上腺素(PE)10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大。细胞处理分为正常对照组、PE10μmol.L-1模型组、5-羟基癸酸(5-HD)100μmol.L-1组,格列本脲(Gli)50μmol.L-1组、PE10μmol.L-1+U50488H1μmol.L-1组、PE10μmol.L-1+Gli50μmo.lL-1+U50488H1μmo.lL-1组和PE10μmo.lL-1+5-HD100μmo.lL-1+U50488H1μmol.L-1组,细胞培养液中先加入Gli50μmol.L-1或者5-HD100μmol.L-1,30min后再加入U50448H1μmol.L-1,30min后最后加入PE10μmol.L-1,48h后进行指标检测,Lowry等法检测心肌细胞蛋白质含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;Western印迹法测定KATP通道Kir6.2亚基的表达。结果与正常对照组相比,PE10μmol.L-1模型组使心肌细胞总蛋白质含量比正常细胞增加了52.2%,细胞体积增加了95.0%,而Kir6.2的表达没有明显变化。与PE10μmol.L-1模型组相比,细胞加入U50488H1μmol.L-1后,心肌细胞总蛋白质含量和细胞体积分别降低了42.3%和47.9%,但是Kir6.2表达增加了39.2%。与PE10μmo.lL-1+U50488H1μmol.L-1组相比,在非选择性KATP通道阻滞剂Gli50μmol.L-1或线粒体KATP通道阻滞剂5-HD100μmol.L-1存在的情况下,Kir6.2表达分别减少了49.3%和52.1%,U50488H抑制PE诱导的心肌细胞肥大作用减弱,并且两组之间没有显著差异。结论 U50488H可能是通过开放KATP通道,主要是线粒体KATP通道来抑制PE诱导的乳大鼠心肌细胞肥大。     

乙胺噻嗪对培养乳鼠心肌细胞电生理特性的影响

目的　探讨乙胺噻嗪抗心律失常作用是否与抑制慢反应心肌细胞有关。方法　在体外培养大白鼠乳鼠心室肌细胞 ,采用显微镜直接观察和细胞内动作电位记录方法 ,研究乙胺噻嗪对这种慢反应心肌细胞的自律性、传导性和动作电位时程等电生理参数的影响。结果　 0 1～ 5 0 μmol·L-1剂量依赖性抑制细胞自发性搏动频率 ,最大抑制率为 5 2 % ,半效抑制浓度为 0 17μmol·L-1;乙胺噻嗪作用心肌细胞后15～ 30min ,对搏动频率的抑制作用开始达稳态 ;2 5 μmol·L-1乙胺噻嗪负性频率作用达稳态时 ,部分对抗了 2mmol·L-1氯化钙和 1μmol·L-1异丙肾上腺素的正性频率作用 ,完全对抗了 0 2mg·L-1乌头碱的正性频率作用 ;0 3、0 9、2 5μmol·L-1乙胺噻嗪剂量依赖性抑制细胞动作电位参数APA、OS、Vmax、SP4和MDP ,剂量依赖性延长动作电位周期长度SCL ,0 9、2 5 μmol·L-1略延长APD90 。结论　乙胺噻嗪对慢反应心肌细胞的自律性和传导有明显抑制作用、略延长动作电位时程 ,乙胺噻嗪对慢反应心肌细胞自律性的抑制可能与抑制Ca2 + 和Na+ ,特别是Na+ 的作用有关     

血管紧张素Ⅱ对乳大鼠心肌细胞时钟基因表达的影响

目的　为研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致左心室肥厚是否与时钟机制有关。方法　分离纯化培养的7d龄乳大鼠心肌细胞,分别加入AngⅡ和(或)替米沙坦(Tel)处理,然后提取总RNA ,用RT PCR检测评价心肌细胞时钟基因(Bmal1,mPer2 ,Dbp)的转录水平。结果　与对照组心肌细胞相比,0 .1μmol·L- 1AngⅡ处理72h使心肌细胞时钟基因转录水平显著上调;0 .1μmol·L- 1Tel能拮抗0 .1μmol·L- 1AngⅡ对心肌细胞时钟基因转录上调的作用。结论在正常培养乳大鼠心肌细胞中,时钟基因以日周期节律方式振荡表达,AngⅡ诱导其表达增强,Tel从受体水平拮抗AngⅡ的诱导作用。     

吗啡对血清饥饿致培养乳大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制

目的利用体外原代培养的乳大鼠心肌细胞,研究吗啡对血清饥饿诱导心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法体外原代培养乳大鼠心肌细胞,各组分别给药作用48h后,用MTT法测心肌细胞的活力;用Annexin V-FITC/PI双标记法测心肌细胞的凋亡率;用流式细胞仪分析心肌细胞周期;用Westernblot法测PKC和Caspase-3蛋白的表达。结果体外原代培养的乳大鼠心肌细胞经无血清饥饿作用48h后,心肌细胞可出现明显的凋亡现象;给予1μmol·L-1吗啡作用于心肌细胞后,心肌细胞的这种凋亡现象可明显被抑制,表现为:心肌细胞凋亡率降低、Caspase-3蛋白表达减少;但吗啡的这种抑制心肌细胞凋亡作用可被10μmol·L-1 naloxone完全阻断;并且给予10μmol·L-1GF109203X或1μmol·L-1Staurosporine与吗啡共同作用时,吗啡抑制心肌细胞凋亡的作用亦在一定程度上降低,表现为:心肌细胞凋亡率增加、Caspase-3蛋白表达增加、PKC蛋白表达减少。结论吗啡可激活心肌细胞膜上的阿片受体,通过PKC途径对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用。     

甲状旁腺素对大鼠心肌细胞内游离钙和细胞凋亡的影响

目的　研究甲状旁腺素 (PTH)对心肌细胞内游离钙以及细胞肥大和凋亡的影响。方法　利用培养的新生大鼠心肌细胞 ,以Fluo 3/AM负载 ,通过激光共聚焦显微镜(LSCM)测定细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ] i) ;以细胞面积和细胞蛋白含量作为心肌细胞肥大指标 ;采用电镜和流式细胞术观察细胞凋亡的变化。结果　PTH1～ 34 0 0 1和 0 1 μmol·L- 1 刺激 7d后 ,心肌细胞内钙荧光强度以及心肌细胞面积和蛋白含量、细胞凋亡率较对照组显著增加。而 0 1 μmol·L- 1 PTH1～ 34 刺激的同时分别加入 1、1 0 μmol·L- 1 硝苯地平 ,上述指标改善 ,但未能达正常。结论　PTH1～ 34 可显著增加心肌细胞 [Ca2 + ] i,诱导细胞肥大和凋亡 ,并呈浓度依赖性 ,电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流增加为其机制之一     

U50,488H抗大鼠缺血/再灌注损伤心律失常作用与抑制钠通道电流有关

目的观察κ阿片受体选择性激动剂(U50,488H)对大鼠心脏缺血/再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)室性心律失常的影响并探讨其可能的机制。方法观察U50,488H对大鼠I/R整体动物模型血浆肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平的影响;分离正常大鼠心脏,采用Langen-dorff离体心脏灌流方法,预先给予U50,488H(5mmol·L-1)和NE(100μmol·L-1),测定其对血流动力学指标和对心律失常的影响;常规酶解法分离成年大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术观察U50,488H对钠电流的作用。结果①U50+I/R组血浆中CK和LDH的含量较I/R组明显降低(P<0.01)。②与I/R组相比,给予U50,488H后,心率明显下降(P<0.05)。③对照组偶发早搏,I/R组心律失常发生频率明显增加,与I/R组相比较,I/R+NE组心律失常评分明显增高(P<0.01);如果提前给予U50,488H,发现不仅可以明显降低I/R组缺血和再灌注期间室速和室颤的发生率(P<0.01)及降低I/R组心律失常的评分,而且明显降低I/R+NE组心律失常的评分(P<0.01)。④U50,488H(100μmol·L-1)可以明显降低心室肌细胞的钠电流(P<0.01)。结论κ阿片受体激动剂U50,488H对I/R时的心律失常有拮抗作用,其作用可能是通过抑制心肌细胞的钠电流而实现的。     

腺苷对肿瘤坏死因子-α诱导乳鼠心肌细胞肥大及核因子-κB的影响

目的探讨腺苷对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac-tor,TNF-α)诱导心肌细胞肥大及核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用TNF-α100μg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度腺苷对心肌肥大的影响。用考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;RT-PCR检测心肌细胞心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白含量;ELISA法检测细胞外液白介素-1β(IL-1β)的含量。结果腺苷能够有效抑制TNF-α诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量减少,ANPmRNA表达降低,并且能抑制TNF-α诱导的NF-κB活化,表现为细胞内p65蛋白表达减少,IκBα蛋白表达增加和细胞外液IL-1β表达降低。结论腺苷对TNF-α诱导的心肌肥大有保护作用,可能与腺苷抑制心肌细胞NF-κB活化有关。