半抗原3-苯氧基苄基-2,2-二甲基环丙烷-1,3-二羧酸单酯的合成

为了建立拟除虫菊酯类杀虫剂的免疫分析方法 ,由菊酸经过氯化、酯化和氧化作用合成了半抗原(3-苯氧基苄基 - 2 ,2 -二甲基环丙烷 - 1,3 -二羧酸单酯 ) ,产物的结构经IR ,1 HNMR及MS分析确定     

有机磷农药共性结构人工抗原的合成与鉴定

目的建立有机磷农药多残留的免疫分析方法。方法以O,O-二甲基硫代磷酰氯和4-羟基苯甲酸甲酯为原料,经两步化学反应合成了与有机磷农药化学结构相类似的一类半抗原O,O-二甲基-O-(4-羧基苯基)硫代磷酸酯(HP),并分别通过活泼酯法和混合酸酐法将HP与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)耦联制备了HP的免疫原(HP-BSA)和包被原(HP-OVA)。结果经质谱和紫外光谱表征,证明所合成的产物为目标半抗原HP,并且与载体蛋白耦联比可达到15.6∶1(HP-BSA)和16.2∶1(HP-OVA)。结论半抗原HP及人工抗原合成成功,可以用于制备该类半抗原的广谱特异性单克隆抗体。     

半抗原：N-甲基-N’-戊酸基-二吡啶-二溴化物的合成

为了建立除草剂一百草枯的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法，由4，4‘一二吡啶为原料，经过两步季氨化反应，而后水解，合成了半抗原：N-甲基一N’-戊酸基-二吡啶-二溴化物(1)产物结构经核磁共振氢谱确认。     

半抗原:N-甲基-N′-戊酸基-二吡啶-二溴化物的合成

为了建立除草剂—百草枯的酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法 ,由 4 ,4′ 二吡啶为原料 ,经过两步季氨化反应 ,而后水解 ,合成了半抗原 :N 甲基 N′ 戊酸基 二吡啶 二溴化物 ( 1)产物结构经核磁共振氢谱确认     

毒死蜱人工抗原的合成与分析

目的 制备毒死蜱人工抗原,为建立其酶联免疫吸附检测方法提供技术储备.方法 以毒死蜱为原料,在弱碱性条件下与3-巯基丙酸反应,合成半抗原O,O-二乙基-O-[3,5-二氯-6-(2-羧乙基)硫代-2-吡啶基]硫代磷酸酯之后,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)通过EDC方法合成人工抗原,前者为免疫原,后者为...     

对硫磷人工抗原合成及其鉴定

目的 制备对硫磷人工抗原和抗血清，为建立酶联免疫吸附法提供技术储备。方法 还原对硫磷硝基成为氨基，合成半抗原氨基对硫磷；重氮化偶联大分子载体牛血清白蛋白制备人工抗原；免疫新西兰白兔。进行多抗制备。结果 合成的半抗原核磁共振图谱鉴定结果为6：6．9～7(m，2H，CH2)6．4～6．5(m，2H，CH2)4．1～4．2(q，4H-CH2)3．4(s，2H，NH2)1．3～1．4(t，6H，CH3)；氨基对硫磷与牛血清白蛋白的结合比为35～36：1；抗血清经间接酶联免疫吸附法检测，效价达1：128000，双向免疫扩散实验测得抗血清与人工抗原形成沉淀；间接竞争酶联免疫吸附法测得抗血清对对硫磷最低抑制浓度为0．16ng／mL；经间接酶联免疫吸附法检测人工抗原与羊抗人血清、兔抗人血清、正常兔血清无交叉反应。结论 合成对硫磷半抗原及人工抗原纯度高、结合比高。具有较好的免疫原性。     

邻苯二甲酸二环己酯人工抗原的制备研究

目的合成邻苯二甲酸二环己酯半抗原衍生物和合格的人工全抗原,探讨其制备方法。方法通过保留环己基结构和在芳环上引入氨基取代基合成了一种邻苯二甲酸二环己酯半抗原衍生物4-氨基邻苯二甲酸二环己酯,产物经通过1HNMR、IR和UV确证了结构。半抗原衍生物再通过重氮化反应与BSA偶联。结果得到的半抗原衍生物4-硝基邻苯二甲酸二环己酯的2个紫外吸收峰分别为:λ1=214nm,λ2=256nm;4-氨基邻苯二甲酸二环己酯的2个紫外吸收峰分别为:λ1=226nm,λ2=288nm。人工全抗原4-氨基邻苯二甲酸二环己酯-BSA,经荧光光谱(λex=307nm,λem=468nm)、体系颜色变化和免疫实验确证偶联成功。抗原结合比为19∶1。人工全抗原通过免疫动物得到了效价高、特异性好、纯度也较高的抗体。结论通过保留环己基结构和在芳环上引入氨基的设计思路可以合成邻苯二甲酸二环己酯的人工全抗原。     

雌二醇完全抗原及多克隆抗体的制备

目的 改造雌二醇半抗原,合成雌二醇完全抗原,并经免疫家免得到抗雌二醇多克隆抗体,为建立雌二醇的酶联免疫吸附方法及其在动物性食品安全快速检测中的应用奠定基础.方法 改造雌二醇-3-羧甲基醚(E2-3-CME),碳二亚胺(EDC)法合成免疫原(E2-BSA)和包被原(E2-OVA),采用SDS-PAGE电泳和质谱(MS)对其鉴定,免疫家兔2只,制备多克隆抗体;间接ELISA测定效价、灵敏度和特异性.结果 成功合成雌二醇免疫原和包被原,6次免疫后E2-T1和E2-T2抗血清的效价分别达到1∶128000和1∶32000,E2-T1抗体和E2-T2抗体的半数抑制浓度(IC50)分别为44.00 ng/ml和45.59 ng/ml,与雌二醇类似物没有明显交叉反应.结论 合成的雌二醇完全抗原具有较好的免疫原性,产生的抗雌二醇多克隆抗体具有较好的特异性.     

杀虫脒衍生物的合成及其人工抗原的制备

本文以对硝基苯乙腈和对氯邻甲苯胺为主要原料，经五步反应合成了带苯胺基的杀虫脒衍生物（半抗原）。用ＩＲ、ＨＮＭＲ和ＭＳ证明了产物的结构。经重氮化－偶合反应，将半抗原与载体蛋白偶联制成抗原，为建立杀虫脒的免疫分析法打下了基础。     

百草枯完全抗原及多克隆抗体的制备

目的改造百草枯(Paraquat PQ)半抗原,制备百草枯完全抗原及多克隆抗体,为建立酶联免疫吸附方法及其在食品安全快速检测中的应用奠定基础。方法改造半抗原PQ-hap,混合酸酐法合成免疫原(PQ-BSA)和包被原(PQ-OVA),采用SDS-PAGE电泳和质谱对其鉴定,免疫家兔2只,制备多克隆抗体;间接ELISA对其进行效价、灵敏度和特异性检测。结果成功合成百草枯免疫原和包被原,6次免疫后2只家兔血清的效价分别达到1∶40 000和1∶160 000,抗体的半数抑制浓度(IC50)分别为281.6 ng/ml和98.4 ng/ml,与百草枯类似物没有明显交叉反应。结论合成的百草枯完全抗原具有较好的免疫原性,产生的抗百草枯多克隆抗体具有较好的灵敏度和特异性。     

基于不同载体免疫原制备河豚毒素抗体的研究

目的比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种载体蛋白合成的河豚毒素人工抗原的免疫原性,并对其制备的抗体进行研究。方法用曼尼希法将半抗原河豚毒素(TTX)分别与大分子载体BSA和KLH偶联合成人工抗原TTX-BSA及TTX-KLH,免疫6~8周龄Balb/c雌性小鼠,制备多抗;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白,同样用曼尼希法制备包被抗原TTX-OVA。TTX-KLH多抗血清同时采用TTX-OVA和TTX-BSA作包被抗原检测,抗血清经间接酶联免疫吸附法(iELISA)以及间接竞争酶联免疫吸附法icELISA)检测。结果经TTX-KLH免疫获得的多抗血清较TTX-BSA免疫获得的多抗血清特异性高。两种包被抗原的检测效价一致:均为1∶64000,而以TTX-OVA为包被原的检测值稍高,与TTX进行竞争酶联免疫检测,其IC50值波动范围为10~20ng/ml。结论TTX-KLH具有更好的免疫原性。     

磺胺类药物母核人工抗原的制备研究

目的合成磺胺类药物共有结构——对氨基苯磺酰胺的衍生物和人工抗原,探讨其制备方法。方法通过保留对氨基苯磺酰胺结构和在基团上引入羧酸基团,合成了一种对氨基苯磺酰胺的衍生物N-磺胺-4-氨基丁酸,产物经过1HNMR、13CNMR、IR和ESI-MS确证了结构。衍生物通过活泼酯化法与牛血清白蛋白(BSA)偶联。通过单因素和L9(33)正交试验研究了反应物起始摩尔比、半抗原活泼酯化时间和偶联时间等因素对偶联率的影响。最终确定活泼酯法最佳反应条件为:反应物起始摩尔比50∶1;活泼酯化时间6h;偶联时间4h。以最佳条件,制备N-磺胺-4-氨基丁酸人工抗原。免疫小鼠,间接ELISA法检测抗血清效价。结果N-磺胺-4-氨基丁酸的结构正确,经过紫外光谱检测和免疫动物实验确证人工抗原。结论N-磺胺-4-氨基丁酸人工抗原合成成功。     

增效胺应用于几种卫生害虫对某些杀虫剂的增效作用

本文就MGK 2C4应用于淡色库蚊、家蝇和德国小鳙对拟除虫菊酯类二氯苯醚菊酯、胺菊酯、右旋反式丙烯菊酯(EBT)、苄呋菊酯,氨基甲酸酯类残杀威以及有机磷类马拉硫磷等杀虫剂的增效作用进行了研究。结果表明,MGK 264和二氯笨醚菊酯(1:1)、苄呋菊酯(1:1)、马拉硫磷(10:1)混用时,对抗苄呋菊酯淡色库蚊幼虫的增效比分别为2.3、2.4和3.8:其与二氯苯醚菊酯(5:1)、胺菊酯(1:1)混用时,对抗苄呋菊酯淡色库蚊成虫的增效比为2.0和1.5;其与二氯苯醚菊酯(3:1)、胺菊酯(1:1)、残杀威(3:1)混用时,对德国小蠊的增效比分别为1.8.1.6和2.0;其与二氯苯醚菊酯等杀虫剂混用(1:1),对抗有机磷淡色库蚊幼虫无增效作用;其与EBT(3:1)混用,对家蝇的增效比为1.5。总的来看,MGK 264对残杀威杀灭德国小蠊效果尤佳。     

腹泻性贝毒软海绵酸单克隆抗体的制备和酶联免疫检测方法的建立

采用细胞融合技术制备抗赤潮毒素腹泻性贝毒软海绵酸的单克隆抗体,应用此抗体发展建立了软海绵酸的间接竞争酶联免疫检测方法。采用碳二亚胺法,将半抗原与载体蛋白偶联,得到免疫抗原和包被抗原。免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA方法筛选阳性克隆,经多次克隆化,获得了4株能稳定分泌抗软海绵酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过小鼠体内诱生腹水方法获得单克隆抗体,建立分析检测软海绵酸的间接竞争酶联免疫方法。最低检出限为31.2ng/ml,批内平均变异系数8.1%,回收率为87%~112%。     

杀虫剂残杀威人工抗原的制备及免疫效价检测

[目的]制备杀虫剂残杀威(propoxur)人工抗原以及免疫效价的检测。[方法]将杀虫剂残杀威,通过戊二醛法与载体鸡卵清蛋白OVA相偶联,所得的半抗原偶联物为免疫原,用紫外光谱、红外光谱扫描分析所制备的人工抗原,然后免疫小鼠检测效价。[结果]将制备的抗原免疫BALB/c小鼠,免疫后采血测其效价,即通过酶联免疫法(ELISA)检测免疫小鼠所产生的抗体,检测结果为阳性。[结论]小鼠产生独特型抗体。     

胸腺肽α1单克隆抗体的制备及其鉴定

目的:研制胸腺肽α1(Tα1)单克隆抗体，为Tα1作用机制的阐明奠定基础。方法:用戊二醛将Tα1和牛血清白蛋白进行交联，以其交联物为抗原，按常规淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体，并采用间接酶联免疫吸附(ELISA)法和Western免疫印迹来鉴定单克隆抗体的特异性。结果:建立了分泌抗Tα1抗体的杂交瘤细胞株，能特异性地与Tα1结合，但与单纯牛血清白蛋白、酵母抽提物和转染Tα1酵母未诱导表达产物无反应。其抗体效价为1：10240，Ig亚类为IgG2b。结论：本研究建立了针对Tα1高效价、高特异性单克隆抗体细胞株。     

毒死蜱单克隆抗体的制备及ELISA检测方法研究

为了探讨建立毒死蜱残留检测方法，研究人员以毒死蜱原药与3-巯基丙酸为起始原料，合成半抗原并对其进行结构鉴定。利用该半抗原与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联制备毒死蜱人工免疫抗原和包被抗原，再取已免疫的经过筛选的Balb／c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对2株细胞进行鉴定，并测定其与其它农药的交叉反应率。     

硫酸镍对小鼠睾丸间质细胞增殖及睾酮合成影响

目的研究硫酸镍对小鼠睾丸间质细胞(以下简称"TM3细胞")增殖及睾酮合成的影响。方法分别以质量浓度为13. 14、26. 28、78. 84、131. 40 mg/L硫酸镍染毒TM3细胞,对照组不予硫酸镍染毒处理,分别于处理后0、6、12、24、48 h采用CCK-8法检测TM3细胞的细胞存活率;采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中睾酮水平,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内类固醇激素合成急性调控蛋白(St AR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450SCC)、细胞色素P45017α-羟化酶(P45017α)、17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)蛋白的表达水平。结果经硫酸镍染毒后,TM3细胞存活率在染毒剂量和染毒时间主效应以及两者的交互效应上均有统计学意义(P 0. 01)。以剂量为78. 84、131. 40 mg/L硫酸镍染毒12 h后,与对照组比较,TM3细胞睾酮水平及St AR、P450SCC、P45017α、17β-HSD相对表达水平均降低(P 0. 01),且131. 40 mg/L组上述指标低于78. 84 mg/L组(P 0. 01)。结论硫酸镍可能通过影响细胞内St AR及部分睾酮合成关键酶的合成,从而抑制TM3细胞的增殖及睾酮的分泌。     

杀螨菊酯合成工艺的研究

杀螨菊酯 (alrinathrin) ,化学名称 (1R) 顺式 2 ,2 二甲基 3 [3 氧化 3 [2 ,2 ,2 三氟 1 (三氟甲基 )乙氧基 ] 1 (z) 丙烯基 ]环丙烷羟酸 (S) α 氰基 3 苯氧基苄基酯。该化合物是高效低毒拟除虫菊酯类杀螨杀虫剂 ,主要用于杀螨和其它农业、卫生害虫 ,由法国RousselUclaf公司 1990年投产。 2 0 0 2年我们对原料工艺合成进行研究 ,由 (1R ,Cis)二溴菊酸乙酯为起始原料 ,经交换、加成、氧化和缩合反应剂得杀螨菊酯成品 ,含量为 96 2 % ,总收率为 5 6%。1　合成路线BrBrCOOC2 H5BuLi COHOCOOC2 H5(Ⅰ )(CF3) 2 CHOH C…     

羧基化半抗原直接包被酶联免疫吸附实验法测定水中残留阿特拉津

目的探讨新型羧基化半抗原直接包被酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定水中残留阿特拉津的可行性。方法使用烷基化试剂3-氨基丙基三乙氧基甲硅烷(APTES)在聚苯乙烯表面构建活性的伯胺基,羧基化阿特拉津经活化后进攻伯胺基形成稳定的酰胺键从而完成羧基化半抗原直接偶联。羧基化半抗原直接包被ELISA法测定水中阿特拉津残留。结果该方法检出限为0.68 ng/mL。该抗体与西玛津交叉反应率为24%,其他类似物交叉反应率均小于0.1%,特异性较高。在实际样本分析中具有较高的准确度(添加回收率94.0%~112.0%)和稳定性(相对标准偏差2.72%~3.53%)。结论该方法用于检测水中残留阿特拉津,方法简便,结果可靠。