pcD2/hVEGF对缺血皮瓣存活的影响

目的 观察并探讨pcD2/hVEGF对缺血皮瓣血循环重建和皮瓣存活率的影响.方法 SD大鼠24只,分2组,每组12只.在鼠背部制作蒂位于尾侧的缺血皮瓣(7cm×1cm).实验组皮下注射pcD2/hVEGF,对照组皮下注射生理盐水,术后7天观察皮瓣存活面积比、单位面积微血管计数和及VEGF基因表达水平.结果 2组中pcD2VEGF组皮瓣存活面积比、单位面积微血管密度与对照组有显著性差异.结论 pcD2VEGF能促进缺血皮瓣存活.     

重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165基因增强大鼠横形腹直肌肌皮瓣活力的研究

目的探讨重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165(adenovirusmediatedvascularendothelialgrowthfactor165,Ad-VEGF165)基因,增强大鼠横形腹直肌肌皮瓣(transverserectusabdominismusculocutaneousflap,TRAM)局部缺血区域活力的基因治疗。方法SD大鼠30只,制备30mm×80mm以下腹部血管作为血管蒂的右侧矩形TRAM皮瓣,随机平均分成5组,分别在大鼠TRAM皮瓣皮下、皮下+腹直肌及腹直肌局部注射Ad-VEGF165(1～3组:治疗组),同时在TRAM皮瓣皮下+腹直肌局部注射重组腺病毒载体介导的绿色荧光蛋白(adenovirusmediatedgreenfluorescentprotein,Ad-GFP,4组:重组腺病毒自身对照组)和DMEM培养液(5组:空白对照组),于注射后第7天手术,术后第7天检测各组大鼠TRAM皮瓣成活面积、CD34微血管密度(microvasculardensity,MVD)、VEGF免疫组织化学染色和原位杂交组织化学(insituhybridizationhistochemistry,ISHH)。结果11～3组TRAM皮瓣成活面积分别为14.19±2.77、15.18±2.18、8.30±1.28cm2,均较4、5组4.12±1.86、3.60±1.95cm2明显增加,且差异有统计学意义(P<0.05);21～3组TRAM皮瓣CD34MVD均高于4、5组,差异有统计学意义(P<0.05);31～3组VEGF免疫组织化学染色和ISHH呈阳性表达。结论重组腺病毒载体介导的VEGF165基因局部注射,能增加大鼠TRAM皮瓣局部缺血区域成活面积。     

pcDNA3.1(+)载体携带血管内皮生长因子治疗大鼠缺血皮瓣

目的 观察注射真核表达载体pcDNA3.1(+)携带血管内皮生长因子(VEGF)基因后对大鼠缺血皮瓣存活的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3.1(+)-VEGF,将SD大鼠随机分成3组,每组10只.pcDNA3.1(+)-VEGF组:于背部皮肤皮下多点注射pcDNA3.1(+)-VEGF 30 μg/100μl;VEGF组:多点注射VEGF蛋白100 ng/100μl;生理盐水(NS)组:注射生理盐水100μl,注射2d后在其背部形成7 cm×3 cm的全厚随意型皮瓣,48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合.术后10 d测量皮瓣的成活面积,计算成活面积百分比,并行免疫组织化学检测.结果 皮瓣成活面积百分比:pcDNA3.1(+)-VEGF组为(79.1±3.5)％,VEGF组为(62.2±2.7)％,NS组为(59.9±3.1)％,pcDNA3.1(+)-VEGF组皮瓣成活面积明显高于其他两组(P＜0.05).结论 皮下注射pcDNA3.1(+ )-VEGF可促进新生血管的形成,比单纯注射VEGF蛋白更能提高皮瓣的成活率.     

重组人生长激素对大鼠随意皮瓣成活的影响

目的探讨重组人生长激素(rhGH)对大鼠随意皮瓣成活的影响。方法将24只健康的Wistar大鼠随机分为两组,每组12只。在其背部制作随意皮瓣后,分别在皮瓣的皮下注射0.25ml(0.1IU/kg)的rhGH(实验组)和0.25ml的生理盐水(对照组),观察两组皮瓣的成活面积及成活率,并行免疫组化检查。结果实验组的皮瓣成活率及皮瓣的中段、远段的血管密度和VEGF的表达均较对照组高,实验组皮瓣血管的再生明显多于对照组。结论rhGH能直接或间接地促进皮瓣血管的生成,提高随意皮瓣成活的面积。     

早期反复短时缺血训练对皮瓣成活的影响及其机制研究

目的观察早期反复短时缺血训练对皮瓣成活面积、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及微血管密度(microvesseldensity,MVD)的影响。方法取日本大耳白兔72只,随机选取64只为实验组,在其背部两侧对称位置建立蒂在上端的皮瓣区,皮瓣范围为4cm×3cm。随机选一侧为训练皮瓣组(A组),另侧为对照皮瓣组(B组),其余8只背部两侧相同部位标记后不作处理,为空白对照组(C组)。术后即对A组皮瓣蒂部进行反复短时缺血训练。分别于术后1~8d每天随机取实验组8只断蒂,检测A、B组各时间点皮瓣成活面积;并于各时间点检测A、B组皮瓣和C组相应部位皮肤组织内的VEGF相关系数和MVD值。对A组皮瓣成活面积VEGF相关系数和MVD值行相关分折。结果术后动物全部成活,无感染、死亡,活动情况无明显变化。A组3~8d皮瓣成活面积较B组高,差异有统计学意义(P<0.05)。A、B组各时间点VEGF表达及MVD值均较C组高;A组1~6dVEGF表达高于B组,差异有统计学意义(P<0.01);且A组各时间点MVD值高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分折见A组皮瓣成活面积与MVD、MVD与VEGF成正相关,时间点对应关系为n与n-2;相关系数分别为0.850和0.801。结论早期反复短时缺血训练可提高皮瓣成活面积,利于早期断蒂,其机制可能为训练使VEGF表达增强,进而增加皮瓣微血管密度,加速皮瓣血供重建。     

重组人生长激素对大鼠随意皮瓣成活的影响

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对大鼠随意皮瓣成活的影响。方法将24只健康的Wistar大鼠随机分为两组，每组12只。在其背部制作随意皮瓣后，分别在皮瓣的皮下注射0．25ml（0．1IU／kg）的rhGH（实验组）和0．25ml的生理盐水（对照组），观察两组皮瓣的成活面积及成活率，并行免疫组化检查。结果实验组的皮瓣成活率及皮瓣的中段、远段的血管密度和VEGF的表达均较对照组高，实验组皮瓣血管的再生明显多于对照组。结论rhGH能直接或间接地促进皮瓣血管的生成。提高随意皮瓣成活的面积。     

腺病毒介导VEGF和HO-1联合治疗缺血随意皮瓣的实验研究

目的 探讨复制缺陷型腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF165)和血红素氧化酶(HO-1)联合应用,对提高大鼠超长随意皮瓣成活面积的影响和作用机制.方法 将25只健康纯种成年雌性SD大鼠的背部两侧各设计一6cm×1cm大小随意皮瓣.皮瓣远端皮下分别注射目的基因联合应用组 (Ad-VEGF165+Ad-HO-1)、基因对照组(Ad-VEGF165)、基因对照组(Ad-HO-1) 、绿色荧光蛋白基因对照组(Ad-11B-GFP)、病毒保存液(Ad-buffer)为空白对照组,共5组.术后7d,分别测量皮瓣的成活面积、HE染色及目的蛋白和CD31免疫组化表达情况及皮瓣新生微血管密度(MVD)检测等.结果 目的基因联合应用组皮瓣成活面积、目的蛋白表达及MVD与其他4组比较,其差异有显著统计学意义(P ＜0.01).结论 以复制缺陷型腺病毒为载体,联合应用VEGF和HO-1基因治疗能显著增加大鼠随意皮瓣的成活面积,促进皮瓣存活.     

皮瓣延迟与血管内皮细胞生长因子对大鼠背部皮瓣成活影响的比较

目的 将皮瓣延迟与采用血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）对皮瓣成活的影响进行对比研究。方法3月龄SD大鼠30只，随机分为生理盐水组、皮瓣延迟组及VEGF组，每组10只。应用背部超长、宽比随意皮瓣模型。皮瓣延迟组采用双蒂皮瓣延迟，延迟时间为7d，之后断头端蒂，形成蒂部位于尾端的单蒂皮瓣；VEGF组形成单蒂皮瓣，于皮瓣中、远段均匀分为4点，局部皮下注射含400ng VEGF溶液100μl；生理盐水组于局部皮下注射生理盐水100μl，余同VEGF组。单蒂皮瓣完全形成后5d，计算皮瓣成活率，切取皮瓣组织，进行微血管密度分析、微血管直径测量和微血管断面面积测量。结果VEGF组皮瓣成活率与皮瓣延迟组接近，差异无统计学意义（P〉0．05）。皮瓣延迟组内部微血管平均直径明显大于VEGF组和生理盐水组，VEGF组皮瓣内部微血管密度明显大于生理盐水组和皮瓣延迟组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。皮瓣延迟组和VEGF组相比，其微血管断面面积接近，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论皮瓣延迟后皮瓣内部主要表现为微血管扩张，应用VEGF后，皮瓣内部主要表现为微血管增生。二者均能有效增加皮瓣内部微血管断面面积，提高皮瓣成活率，但其作用途径不同。     

血管内皮生长因子促进跨区供血反流轴型皮瓣成活的实验研究

目的研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的局部皮下注射对大鼠背部跨区供血反流轴型皮瓣成活的影响及效果。方法取20只SD大鼠，制备8cm×2cm大鼠背部跨区供血反流轴型皮瓣模型，随机分成两组，每组10只。实验组：于皮瓣远端7．5cm及6．5cm处共选择4个对称位点，分别予100ng／100μlVEGF溶液50μl；对照组：每一位点予生理盐水50μl。术后1～7d行皮瓣大体观察，并于7d处死大鼠，切取皮瓣，行皮瓣成活率测定、组织学观察及血管密度检测。结果大体观察，实验组皮瓣成活面积明显大于对照组，实验组皮瓣成活面积15．55±0．27cm^2，对照组13．42±0．57cm^2，差异有统计学意义（P〈0.01）。组织学观察，实验组皮瓣血管密度34．40±3．75个／10倍光镜下视野，对照组21．00±3．16个／10倍光镜下视野，差异有统计学意义（P〈0.01）。镜下见实验组有大量新生肉芽组织形成，胶原纤维排列规则，成纤维细胞较多，炎性细胞浸润程度轻；对照组新生肉芽组织少，胶原纤维凝集成块，成纤维细胞少，炎性细胞浸润程度重。结论VEGF在皮瓣成活早期，通过促进缺血皮瓣新生血管形成，增加血管数量，改善缺血组织的血液供应，促进皮瓣成活；在皮瓣形成时局部、单次、足量应用VEGF是促进跨区供血反流轴型皮瓣远端成活的有效方法。     

电脉冲介导的血管内皮细胞生长因子基因治疗对大鼠随意型皮瓣成活的影响

目的探讨血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)质粒直接皮下注射,结合直流电脉冲刺激的基因治疗方案的血管生成效应及不同剂量质粒对皮瓣成活的影响。方法设计大鼠随意皮瓣模型,利用直流电脉冲将皮下注射的重组质粒PCMVMCSVEGFIRES2EGFP导入缺血皮瓣内。观察皮瓣成活的情况,利用苏木素伊红(HE)染色,观察VEGF基因的血管生成效应。结果皮下直接注射结合直流电脉冲成功地将重组质粒导入皮肤。基因转染后7d观察到明显的血管增生。基因治疗组皮瓣成活面积[80μg为(77.38±4.56)%,400μg为(82.57±5.21)%]显著大于对照组[(48.96±4.32)%]。但两基因治疗组皮瓣成活面积差异无统计学意义。结论VEGF质粒直接皮下注射结合直流电脉冲刺激能够高效转染大鼠皮肤,具有明显的血管生成效应,能够显著促进大鼠随意型皮瓣的成活。质粒的剂量对皮瓣成活的影响差异无统计学意义。     

转染血管内皮生长因子基因的小鼠NIH3T3细胞移植促进皮瓣早期血运重建的研究

目的探讨转染血管内皮生长因子（VEGF）基因的小鼠NIH3T3细胞移植对缺血皮瓣的血管新生和皮瓣存活率的影响。方法体外PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染小鼠NIH3T3细胞,免疫组化方法检测小鼠NIH3T3细胞体外表达VEGF的情况,CM-DiI标记小鼠NIH3T3细胞。将小鼠随机分为3组：A组[PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染的NIH3T3细胞移植]、B组（单纯NIH3T3细胞移植）、C组（单纯DMEM培养基注射）。每只小鼠背侧皮下按组分别注射细胞悬液和培养基,注射后酶联免疫吸附（ELISA）法连续检测大鼠血浆VEGF浓度,注射后第4天掀起一个蒂在尾侧的4．0cm×1．5cm的随意皮瓣。术后第7天分别观察皮瓣的存活率、血流灌注、皮瓣毛细血管密度、NIH3T3细胞在皮瓣内的分布和存活情况。结果转染VEGF165基因的小鼠NIH3T3细胞体外和体内检测均高表达VEGF165蛋白。A组的皮瓣存活率、毛细血管密度、血流灌注比值均显著高于另外两组（P〈0．05）。结论转染VEGF基因的小鼠NIH3T3细胞皮下移植可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率。     

ADSC-bFGF对大鼠腹壁成形术后TRAM皮瓣活性的影响

目的：研究脂肪来源间充质干细胞复合碱性成纤维细胞生长因子（ADSC-bFGF）对大鼠腹壁成形术后腹部横行腹直肌肌皮瓣（TRAMflap）活性的影响。方法：体外分离、培养、鉴定SD大鼠ADSC。建立大鼠腹壁成形术模型。分别给予A组（ADSC-bFGF）、B组（ADSC）、C组（纤维蛋白凝胶）及D组（生理盐水）。所有动物腹壁成形术后一个月建立TRAM皮瓣模型。术后7天测定皮瓣成活面积、组织学观察和微血管密度（MVD）。结果：A、B、C、D四组的皮瓣存活率分别为（69.40±2.81）%、（66.19±2.32）%、（46.69±2.41）%和（43.77±3.55）%;A、B、C、D四组的毛细血管密度（根/mm2）分别为：（65.30±2.19）根/mm2;（59.99±2.41）根/mm2;（44.71±2.21）根/mm2;（42.44±3.22）根/mm2。皮瓣成活率A组与B组差异有意义（P〈0.05）,且这两组明显高于C组及D组,差异有显著性意义（P〈0.01）。微血管密度A组与B组差异有显著性意义（P〈0.01）,且这两组明显高于C组及D组,差异有显著性意义（P〈0.01）。免疫组化显示实验组中有大量褐色抗原抗体复合物沉积在血管内皮细胞胞浆内。结论：ADSC-bFGF能刺激大鼠腹部横行腹直肌肌皮瓣的血管新生和增加血管数量,从而增加皮瓣的存活率。     

腺病毒载体介导人VEGF cDNA促进随意型皮瓣成活的实验研究

目的探讨以腺病毒载体局部应用血管内皮细胞生长因子基因对大鼠缺血随意型皮瓣成活的影响。方法30只SD大鼠随机分成3组,每组10只,于鼠背设计蒂在尾侧髂嵴水平的随意型皮瓣,面积为2cm×8cm,A组皮瓣远端23顺皮瓣长轴分10个点真皮下注入1012PFU的携带人血管内皮细胞生长因子基因的腺病毒(AdCMVVEGF),B组同法注入同剂量的携带β半乳糖苷酶基因的腺病毒(AdCMVGal),C组注入1ml的生理盐水,3d后掀起皮瓣并原位缝合,术后7d观察实验结果。结果每组皮瓣成活面积的百分比分别为A组(8591±254)%,B组为(5956±118)%,C组为(6148±109)%,A组成活率显著高于B组和C组,差异有非常显著性意义(P<001),B组与C组比较差异无显著性意义(P>005)。原位杂交、免疫组化显示,应用AdCMVVEGF治疗的成活皮瓣中,VEGF有表达,组织学切片显示,AdCMVVEGF治疗皮瓣中肉芽组织增生,新生血管大量形成。结论以腺病毒为载体局部应用VEGF基因能增加缺血皮瓣的成活面积,该法具有高效的特点。     

Improvement of skin paddle survival by application of vascular endothelial growth factor in a rat TRAM flap model

The effect of vascular endothelial growth factor (VEGF) on skin flap survival and its ability to induce a pharmacological delay by promoting angiogenesis in a flap was studied in a rat transverse rectus abdominis musculocutaneous flap, using a 3 x 8-cm skin paddle with the inferior epigastric vessels as its main vascular supply. Forty-three Sprague-Dawley rats were divided into four groups. In group 1, VEGF was injected into the femoral vein after the flap was elevated. In group 2, VEGF was injected intra-arterially into the flap through the superior epigastric artery after the flap was elevated. In group 3, VEGF was injected into the subcutaneous fascial layer in the area where the flap would be dissected, and the flap was then raised 7 days after injection. In group 4, the flap was dissected and replaced, using saline injection as the control. On postoperative day 5, the survival area of each skin paddle was measured and the flap was harvested for histological analysis. The results showed that the mean survival area +/- standard deviation for the skin paddle was 6.82 +/- 4.89 cm2 (28.4 +/- 20.4% of the whole skin paddle) in the control group, and 4.2 +/- 3.0 cm2 (17.5 +/- 12.5%) and 6.02 +/- 5.97 cm2 (25.1 +/- 24.9%) in the groups with VEGF systemic and intra-arterial administration respectively. The skin survival area in the group with preoperative subcutaneous administration of VEGF was 17.85 +/- 2.88 cm2 (74.4 +/- 12%), which was significantly higher than the other three groups (p < 0.01). Histological semiquantitative analysis showed increased neovascularization in the flap treated with VEGF preoperatively. The data demonstrate that preoperative treatment with VEGF can induce angiogenesis and enhance skin paddle survival in a musculocutaneous flap.     

皮下注射血管内皮生长因子基因提高大鼠背部随意皮瓣活力的实验研究

目的 探索基因治疗在组织移植方面的方法。应用 构建并体外扩增表达质粒pcDNA3.1/Zeo( )-VEGF165，以之直接皮下注射转染SD大鼠背部随意皮瓣模型。通过与对照组相比较，观察其对皮瓣活力的影响，并采集组织行免疫组化检查。结果 基因转染组在毛细血管周围及肌间隙可见VEGF的沉积，与对照组相比皮瓣的平均成活面积显著增加。结论 皮下注射的基因在组织中能够表达VEGF，增加皮瓣活力，是一种简单有效的基因治疗方法。     

Enhancement of vascular endothelial growth factor’s angiogenic capacity by the therapeutic modulation of notch signalling improves tram flap survival in rats submitted to nicotine

Background: Smoke of cigarettes, and specifically nicotine, has been shown to diminish pedicled transverse rectus abdominis musculocutaneous (TRAM) flap survival. Considering that Notch signalling through its ligand Delta-like 4 (Dll4) functions as anti-angiogenic factor by inhibiting the pro-angiogenic effects of vascular endothelial growth factor (VEGF), it is hypothesised that inhibition of the Notch would promote angiogenesis and increase TRAM flap survival in rats submitted to nicotine.

Methods: Twenty rats were treated with nicotine for 28 days preoperatively. Thereafter, a pedicled TRAM flap was created in all animals. The Notch inhibitor N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-1-alanyl]-S-phenylglycine-t-butyl-ester was administered in animals of the treatment group. Animals in the control group were given the same amount of solvent. Five days after the surgery, viable flap areas were determined. Skin samples were evaluated for VEGF and Dll4 mRNA levels. Immunohistochemical analysis was used for the assessment of endothelial Dll4 expression. Vascular density was determined histologically. Plasma levels of VEGF and Dll4 were measured.

Results: A significant improvement in TRAM flap surviving area was observed in the treatment group (53.50?±?14.25%) compared with the controls (32.20?±?9.15%). Immunohistochemical analysis revealed a significant increase in the number of Dll4 stained vessels in animals of the treatment group (9.2?±?1.6) in comparison with the controls (5.7?±?1.9). VEGF mRNA levels (0.22?±?0.08) in the treatment group were significantly lower than those in the control group (0.36?±?0.09).

Conclusion: Notch inhibition significantly improved TRAM flap survival in animals exposed to nicotine by promoting VEGF-induced angiogenesis.