同源异型盒基因HOXB7在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

<正>目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,并且有发病年龄提早的趋向,因此研究促进乳腺癌发生的因素显得尤为重要。HOXB7是同源异型盒基因家族中新近发现的一种转录因子,它在生理状态下的表达对维持正常细胞的生长和分化有非常重要的作用,然而其异常表达时可能促进肿瘤形成。本实验探讨HOXB7在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法::收集正常乳腺组织20例、乳腺纤维瘤组织20例、癌组织60例,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测三种乳腺组织中HOXB7 mR-NA的表达;应用Western Blotting法检测三种乳腺组织中HOXB7蛋白的表达水平     

远端同源异型盒2和叉头盒O3a在大鼠脑皮质发育过程中的分布与表达

目的 了目的 探讨远端同源异型盒2（Dlx2）和叉头盒O3a（FoxO3a）在SD大鼠脑皮质发育过程中的表达特点。 方法 应用Real-time PCR法检测Dlx2 mRNA和FoxO3a mRNA分别在受孕11d（E11）、E13、E15、E17、E19及生后1d（P1）的表达情况;应用免疫组织化学技术显示Dlx2和FoxO3a在E11、E13、E15、E17、E19及P1蛋白的表达情况。 结果 FoxO3a与Dlx2 mRNA在E11～P1均有表达,而FoxO3a mRNA表达高峰明显早于Dlx2 mRNA;Dlx2 mRNA表达在E15～E17时大幅度上升,而在此之后始终保持这一高水平的表达;Dlx2 mRNA与FoxO3a mRNA的表达在E15～P1呈现出一致的变化趋势;Dlx2基因在E19时出现mRNA水平的高表达而未见蛋白表达。 结论 Dlx2和FoxO3a基因在胚胎后期鼠脑皮质中均有表达,且其表达趋势具有一定的一致性;两基因的分布随皮质分层而改变。     

宁夏大学生示指和环指指长比与同源盒A11基因位点多态性的关联性

目的 探讨宁夏大学生示指和环指指长比(2D∶4D)与同源盒(HOX)A11基因4个位点(rs6461992、rs6968828、rs7801581、rs17427875)多态性的关联性。方法 采用数码相机提取667名宁夏汉族大学生(男性348名,女性319名)手部正面照片,图像分析软件标记解剖点并测量双手示指及环指指长;多重PCR法检测HOXA11基因各位点多态性;统计学软件比较分析2D∶4D和基因多态性在不同性别间的差异及其关联。结果 宁夏汉族大学生女性左手和右手2D∶4D均显著高于男性(均P<0.05),右手-左手2D∶4D性别差异不显著;HOXA11基因rs7801581位点基因型、等位基因频率在不同性别间差异显著(均P<0.05),其他位点多态性在性别间的差异均无统计学意义;2D∶4D与HOXA11基因位点多态性关系中,仅女性左手2D∶4D与rs6461992位点基因型显著关联(P<0.05)。结论 宁夏汉族大学生2D∶4D性别间差异显著,HOXA11基因rs6461992位点多态性可能与女性2D∶4D的形成有关。     

乳腺癌血管内皮生长因子-(A、C、D)mRNA的表达及其预后意义

目的探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)-(A、C、D)mRNA表达在乳腺癌发生发展中的作用及其与预后的关系。方法用TaqMan real-time逆转录聚合酶链反应检测61例乳腺癌和29例乳腺良性病变中VEGF-(A、C、D)mRNA的表达,分析其表达与乳腺癌临床病理参数及生存状况间的关系。结果(1)乳腺癌中VEGF-(A、C)mRNA表达量(2．79±1．31、3．33±0．88)高于良性乳腺病变(1．59±1．35、2．76±0．55),差异有统计学意义(P=0．000,P=0．002)。乳腺癌中VEGF-D mRNA表达阳性率(73．77％)高于良性乳腺组织(51．72％,P=0．038),但表达量二者间无差异,P=0．683。(2)单因素和多因素分析均显示VEGF-D与VEGF-C mRNA比值在淋巴结转移阳性组低于阴性组,且与淋巴结转移有关(P单=0．046,P多=0．062)。(3)乳腺癌VEGF-(A、C)mRNA高表达患者无病生存率分别低于低表达组(P=0．030,P=0．044)。结论VEGF-(A、C、D)mRNA表达异常可能与乳腺癌发生发展有关。VEGF—D与VEGF-C mRNA表达比值改变可能与乳腺癌淋巴结转移有关,VEGF-(A、C)是乳腺癌预后重要的影响因子。     

乳腺癌中RRIG1 mRNA的表达及意义

目的探讨维甲酸受体诱导基因1(retinoic receptor-induced gene 1,RRIG1)在人乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理参数的关系。方法以GAPDH为内对照采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(real time quantitative reverse transcrip-tion polymerase chain reaction,RQ RT-PCR)检测76例新鲜乳腺浸润性导管癌组织5、例导管原位癌组织和20例乳腺良性增生组织中RRIG1 mRNA的表达水平,并分析其与患者临床病理参数的关系。结果乳腺导管原位癌、浸润性导管癌组织中RRIG1 mRNA相对表达水平(3.5±2.1、6.7±4.1)明显低于良性增生组织(10.2±6.5),差异具有统计学意义(P=0.004,P=0.036);乳腺浸润性导管癌中淋巴结转移组RRIG1 mRNA相对表达水平(5.2±3.1)明显低于无淋巴结转移组(7.48±4.5),两组之间差异具有统计学意义(P=0.023)。结论 RRIG1可能作为一种新的抑癌基因参与乳腺癌的发生、浸润和转移,对乳腺癌早期诊断和预后评估具有重要的参考价值。     

NR5A1基因变异致46, XY性发育异常1例患者的遗传学分析

目的分析1例性发育异常(DSD)患儿的临床特征, 探讨其遗传学病因。方法选取2019年7月29日因原发闭经就诊于临沂市人民医院遗传咨询门诊的1例DSD患儿作为研究对象, 收集其临床资料。应用染色体核型分析及实时荧光定量PCR检测Y染色体微缺失, 分析患儿染色体是否存在异常。利用高通量测序对患儿及父母进行基因检测, 对候选变异进行Sanger测序验证, 对变异位点进行致病性评估。结果患儿年龄为13岁, 社会性别女, 存在原发性闭经, 男性第二性征发育, 超声检查未探及子宫及明确卵巢结构, 可探及窄带样阴道低回声及弯曲阴茎海绵体样结构。患儿染色体核型为46, XY, Y染色体AZF区段不存在缺失。基因测序发现患儿存在母源的NR5A1:c.323delA(p.Q108Rfs*188)。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)遗传变异分类标准与指南, NR5A1:c.323delA变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP4)。结论 NR5A1:c.323delA变异考虑是该DSD患儿的致病原因, 为临床诊断和治疗提供遗传学依据。     

乳腺癌中印记基因SLC22A18/TSSC5/BWR1A启动子区甲基化及mRNA表达的研究

目的： 研究印记基因SLC22A18启动子区甲基化对乳腺侵润性导管癌组织中的SLC22A18 mRNA表达的影响，探讨其与临床病理特征之间的关系。方法：实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time quantitative RT-PCR）方法检测40例乳腺侵润性导管癌及其癌旁组织中SLC22A18 mRNA的表达，甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测SLC22A18基因启动子区的甲基化状态。检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-aza-dc）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）作用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231后，对SLC22A18基因启动子区DNA甲基化和mRNA表达的影响。结果：SLC22A18在40例乳腺侵润性导管癌中mRNA表达量低于癌旁组织（0.12±0.10 vs 0.69±1.05，P＜0.01）；40例乳腺侵润性导管癌及对应癌旁组织中，SLC22A18启动子区的甲基化发生率分别为75％和37.5%，差异有统计学意义（P＜0.01）；在40例乳腺侵润性导管癌组织中，甲基化组SLC22A18 mRNA表达量低于非甲基化组（0.11±0.08 vs 0.24±0.18，P＜0.01）。5-aza-dc和5-aza-dc/TSA能不同程度逆转乳腺癌细胞株MDA-MB-231中SLC22A18基因的甲基化状态，并上调SLC22A18基因表达。结论：SLC22A18基因甲基化与乳腺癌发生有一定的关联，SLC22A18基因表达下调与其启动子区CpG岛异常甲基化相关。     

RASSF1基因转录本A和C的表达与卵巢癌关系的研究

目的探讨RASSF1基因转录本A和C在多个卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中所起的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和激光捕获显微切割技术检测3个卵巢癌细胞系和80例人原发卵巢上皮性恶性肿瘤组织中RASSF1A和RASSF1CmRNA的表达。结果RASSF1A mRNA在卵巢癌SK OV3细胞中表达缺失;RASSF1A和RASSF1C在人卵巢癌组织中的表达率分别为40.0%(32/80)和91.3%(73/80)。RASSF1AmRNA的表达在浆液性癌、黏液性癌和内膜样癌组织中分别是41.2%(20/48),38.1%(8/21)和36.4%(4/11),P>0.05;临床Ⅰ期和Ⅱ期分别为71.4%和75.0%(10/14,9/12),明显高于临床Ⅲ期和Ⅳ期(26.7%、12/45和14.1%,1/9),P<0.05;高和中分化组分别为58.6%和50.0%(17/29,10/20),明显高于低分化组(16.1%,5/31),P<0.05。结论卵巢癌细胞和人原发卵巢癌组织中存在RASSF1AmRNA表达的缺失,RASSF1A的表达与卵巢癌的临床分期和组织学分级有关,可能作为一种新的抑癌基因在卵巢癌的发生和发展过程中起重要作用,RASSF1AmRNA的缺失提示预后不良。     

胃癌组织中Cyr61和核因子-κB的表达与转移及预后的关系

目的 检测胃癌组织中富含半胱氨酸肝素结合蛋白61(Cyr61)和核因子-κB(NF-κB)的表达及其与临床病理特征及预后的关系.方法 应用逆转录聚合酶链反应技术验证和检测53例胃癌组织与11例非肿瘤胃黏膜中Cyr61基因的表达,并用免疫组织化学方法 (SP法)检测99例胃癌组织与25例非肿瘤胃黏膜中cyr61与NF-κB蛋白的表达情况.结果 胃癌原发灶和转移灶中Cyr61mRNA的阳性表达率分别为84.6%(22/26)、88.9%(24/27),明显高于非肿瘤胃黏膜组5/11(P值均＜0.05).非肿瘤胃黏膜、原发癌与转移癌组的基因表达量(2-△Ct)分别为(2.76±5.50)×10-5、(14.61±20.64)×10-5、(18.46±26.38)×10-5.胃癌原发灶、转移灶Cyr61 mRNA均高于非肿瘤胃黏膜(P值均＜0.05),转移灶与原发灶比较,差异无统计学意义(P＞0.05).99例胃癌中Cyr61及NF-κB蛋白的高表达率分别为56.6%(56/99)和55.6%(55/99),其表达水平与肿瘤浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移、远处转移及TNM分期呈正相关(P值均＜0.05),NF-κB还与肿瘤大小呈正相关(P＜0.05);Cyr61蛋白的表达水平与NF-κB呈正相关(P＜0.05);Cyr61与NF-κB蛋白高表达的病例平均生存时间和5年生存率明显低于低表达的病例(P值均＜0.05).结论 Cyr61和NF-κB阳性表达与胃癌的侵袭、转移密切相关,检测Cyr61和NF-κB的表达可作为判断胃癌生物学行为的重要参考指标.     

宫颈透明细胞癌中人乳头瘤病毒的检测

目的 探讨宫颈透明细胞癌中高危型HPV感染情况.方法 提取1例37岁宫颈透明细胞癌患者手术切除组织蜡块中的DNA,通过巢式PCR方法检测其中HPV感染情况.结果 该患者肿瘤切除组织高危型HPV18型阳性.结论 利用巢式PCR方法分型检测宫颈透明细胞癌中的高危型HPV型别,其准确性及敏感性均较高.     

Sonic hedgehog mRNA及其蛋白在大肠癌的表达及其临床意义

目的 探讨大肠癌中Hedgehog信号通路相关基因Sonic hedgehog(SHH)的表达及其临床意义.方法 应用RT-PCR及免疫组织化学法(Envison二步法)检测本院2008年12月至2009年4月收集的43例大肠癌组织和距离癌10 cm以上的癌旁组织的SHHmRNA及蛋白的表达情况,并与20例非肠癌患者的正常大肠组织对照,分析其与大肠癌患者临床和病理各变量的相关性.结果 凝胶成像分析显示阳性表达的样本SHH mRNA片段大小为280 bp,与理论值相符,未表达的样本则未见相应条带.大肠癌组织SHHmRNA表达阳性率为27.9%(12/43),与癌旁组织的18.6%(8/43)差异无统计学意义(P＞0.05),但均显著高于正常大肠黏膜的0%(0/20)(均P＜0.05).SHH mRNA在大肠癌组织的表达强度显著高于癌旁组织(P＜0.05),在正常大肠黏膜则未见其表达.免疫组织化学显示SHH蛋白在大肠癌组织和癌旁组织均有阳性表达,细胞膜及胞质内出现棕黄褐色颗粒,背景不着色;正常大肠黏膜阴性表达.SHH蛋白在大肠癌组织的表达阳性率显著高于正常大肠黏膜[25.6%(11/43)比0%(0/20),P＜0.05],在大肠癌组织与癌旁组织、癌旁组织与正常大肠黏膜的表达阳性率差异则无统计学意义(均P＞0.05).SHH蛋白的表达强度大肠癌组织＞癌旁组织＞正常大肠黏膜(均P＜0.05).大肠癌组织中的SHH mRNA和蛋白表达强度与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、病理分型等变量均无明显关系(均P＞0.05).结论 SHH mRNA和蛋白在大肠癌组织中表达显著增强,但与临床和病理各变量无关联.     

MTA1基因过表达与直肠癌浸润和转移的关系

目的：研究MTA1基因mRNA在直肠癌中的表达,阐明该基因可能是直肠癌浸润和转移的分子机制之一。方法：建立测定MTA1基因mRNA表达的逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）最适条件,在半定量水平测定42 例直肠癌标本癌组织和癌旁正常粘膜组织MTA1基因mRNA表达的相对水平,探讨与临床和病理组织学特征的关系。结果：42例直肠癌中有17例MTA1基因mRNA过度表达（癌组织与癌旁正常粘膜组织MTA1基因mRNA表达半定量之比≥2）,过度表达MTA1基因mRNA的直肠癌浸润层次深,淋巴结转移率高,与剩余病例组比较有显著差异（P<0.05）。结论：MTA1基因过度表达与直肠癌浸润和转移相关。     

胃癌组织活化白细胞黏附分子的表达及其与临床病理的相关性

目的 观察活化白细胞黏附分子(ALCAM)在胃癌组织中的表达水平及其与临床病理的关系.方法 采用实时定量PCR和免疫组织化学方法分别检测33例胃癌及正常胃组织中ALCAM的mRNA和蛋白表达水平,分析其表达情况与临床病理资料的相关性.结果 胃癌ALCAM的mRNA表达水平[0.008 7(0.005 8～0.0167)]高于正常胃组织[0.0011(0.000 1～0.063 5),P＜0.05],尤其是低分化癌[0.012 8(0.008 2～0.0167)]及伴淋巴结转移者[0.0174(0.008 6～0.0307)]ALCAM的mRNA表达水平明显升高.免疫组织化学检测显示,无论胞质阳性染色或胞膜阳性染色,胃癌组织中ALCAM蛋白表达水平明显高于正常胃组织,有淋巴结转移的胃癌组织胞质ALCAM阳性比例[(100%(21/21)]明显高于无转移的胃癌组织[66.7%(8/21),P＜0.05].结论 胃癌组织中ALCAM高表达,且与胃癌淋巴结转移有关.     

滑膜肉瘤的融合基因检测分析

目的：基于存在染色体易位所致特异的SYT－SSX融合基因,证实可在滑膜肉瘤组织石蜡切片上检测出并探讨其在诊断中的价值。方法：采用逆转录－聚合酶链反应,检测并分析20例滑膜肉瘤（组织学亚型15例单相,5例双相）的SYT－SSX转录物,并对照相应病理学所见,结果：所检20例滑膜肉瘤中,有19例（95％）出现特异SYT－SSX逆转录聚酶链反应产物,其中13例具有SYT－SSX2融合基因的肿瘤有10例呈组织学单相分化。结论：SYT－SSX融合基因转录物可在石蜡切片和组织块中获得满意结果。具有较好的灵敏性,是滑膜肉瘤所特有的诊断标志物,它的亚类分型（SYT－SSX1和SYT－SSX2）,可能成为预后推测指征。     

促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的临床病理学研究

目的探讨促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤（DSRCT）的细胞学和组织学形态、免疫学表型以及在石蜡包埋组织中检测EWS-WT1融合基因的可行性。方法回顾性复习15例DSRCT的临床资料、1例细胞学形态、14例组织学形态和15例免疫学表型,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测1例石蜡包埋组织中的EWS-WT1融合性mRNA,经测序证实并确定融合类型。结果13例为男性,2例为女性,年龄范围12～38岁,平均23．8岁。临床上多表现为腹部不适、腹胀、腹痛和腹部包块,伴有呕心、便秘和体重减轻等症状。体检显示,多数病例于中下腹可触及质硬肿块,境界不清,活动度差。影像学检查显示腹腔或盆腔内多个或单个结节状肿块,直径为3—25cm,平均8．6cm。细胞学涂片显示,在出血性的背景中可见散在、成簇的小圆细胞,核染色深,核仁不清,核分裂象易见,胞质稀少。组织学上,肿瘤由深染的小圆细胞、卵圆形细胞及短梭形细胞组成,呈大小不一、外形不规则的巢状排列,大的瘤巢中央可见坏死,瘤巢之间为大量增生的纤维结缔组织,可伴有玻璃样变性。所有病例均弥漫强阳性表达AE1／AE3、波形蛋白、结蛋白和神经特异性烯醇化酶,部分病例尚表达CAM5．2、上皮膜抗原、CD57、嗜铬粒素A、突触素和WT1,不表达肌生成素、CK5／6、CD117、钙（视）网膜蛋白和CD99。RT-PCR检测出EWS-WT1融合性mRNA,测序结果显示由EWS基因的7号外显子与WT1基因的8号外显子融合所产生,融合性基因含有KTS序列。结论（1）DSRCT是一种好发于青少年男性腹腔和盆腔内、具有多向性分化的高度恶性小圆细胞肿瘤。（2）瘤细胞特征性的波形蛋白和结蛋白核旁点状染色,在DSRCT的诊断和鉴别诊断中具有十分重要的价值。（3）在石蜡包埋的DSRCT组织中能检测出EWS-WT1融合基因的转录产物,RT-PCR可作为DSRCT一项实用的分子遗传学诊断手段。     

原位检测新基因SNC66在胃癌组织与正常胃粘膜中的表达

目的: 观察新基因SNC66在胃癌组织中的表达水平,分析SNC66表达水平与胃癌发生的相关性。 方法:以β-actin为对照,对20例胃癌组织及其配对正常胃粘膜的石蜡切片,进行原位cRNA/mRNA分子杂交和原位RT-PCR扩增。 结果:两种检测方法表明,SNC66在正常胃粘膜组织中都呈强阳性表达。而在胃癌组织中,原位分子杂交检测表明,20例标本SNC66不表达和弱阳性表达各8例,强阳性表达4例。原位RT-PCR检测表明,当循环数为10时,此20例胃癌标本中不表达、弱阳性和呈强阳性表达数分别为6,9和5;而当循环数为25时,则4例不表达,16例呈强阳性表达。 结论:SNC66基因在胃癌组织中存在明显的表达降低和表达缺陷。SNC66可以作为一个胃癌负相关基因加以进一步研究。