双特异性单克隆抗体介导的单核—巨噬细胞抗肝癌作用

研究双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用。方法采用化学交联法，用异型化学交联剂Ｎ－琥珀酰亚氨基－３－，将具有高亲和性的抗肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ２与抗单核－巨噬细胞的单抗ＭＡｂ７Ｆ２联结双特异性单抗ＨＡｂ１８Ｆ２－Ｍａｂ７Ｆ２，经ＦＰＬＣ Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００纯化。     

双特异抗体介导的人单核—巨噬细胞对荷人肝癌裸鼠的抑制作用

观察双特异性单克隆抗体介导的人单核－巨噬细胞在裸鼠体内对肝癌生长的抑制作用。用化学交联法制备双特异性单克隆抗体ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ＇＿２，并将其与单核－巨噬细胞－同注入荷人肝癌裸鼠体内，观察肿瘤体积的变化。     

双特异单克隆抗体介导的人单核－巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用

目的：证实双特异性单克隆抗体在肝癌导向治疗，尤其是细胞免疫治疗方面的作用．方法：用化学交联剂ＳＰＤＰ将抗肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８与抗单核－巨噬细胞单克隆抗体ＭＡｂ７联结成双特异抗体ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７；用流式细胞仪证实其双特异性；软琼脂培养法证明其对肝癌细胞的导向杀伤作用．结果：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７具有特异性地结合肝癌细胞及单核－巨噬细胞的双重特性；软琼脂培养结果表明：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７实验组较对照组克隆形成率明显降低（Ｐ＜０．０１）．结论：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７可明显提高单核巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用．     

双特异单克隆抗体介导的人单核—巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用

证实双特异性单克隆抗体在肝癌导向治疗，尤其是细胞免疫治疗方面的作用。方法：用化学交联剂ＳＰＤＰ将抗肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８与抗单核－巨噬细胞单克隆抗体ＭＡｂ７联结成双特异抗体ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７，用流式细胞仪证实其双特异性；软琼脂培养法证明其对肝癌细胞的导向杀伤作用。结果ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７具有特异性地结合肝癌细胞及单核－巨噬细胞的双重特性。软琼脂培养结果表明：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７实验组较对照组克     

肝癌单克隆抗体F（ab‘）2段与葡萄球菌肠毒素A结合物的制备及 …

制备眼抗原葡萄球菌肠毒素与抗人肝细胞癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）２段的结合物，并对其活行鉴定。方法：提取ＭｃＡｂＨＡｂ１８并用木反蛋白酶切取其（ａｂ’）－ＳＥＡ结合物，     

131碘—肝癌单克隆抗体Fab片段偶合物体内放射免疫显像研究

目的研究１３１Ⅰ标记肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８Ｆａｂ片段体内放射免疫显像效果。方法以木瓜蛋白酶切割肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８制备ＨＡｂ１８Ｆａｂ,应用高效碘标记法将１３１Ⅰ标记于ＨＡｂ１８Ｆａｂ,再以１３１Ⅰ－ＨＡｂ１８Ｆａｂ偶合物进行荷肝癌裸鼠及肝癌病人体内放射免疫显像。结果１０只荷肝癌裸鼠全部明确显像,其中２只鼠４．５小时即出现瘤区放射性浓聚,８只鼠在８～１２小时清晰显像,对照组鼠瘤区未出现放射性浓聚。１３１Ⅰ－ＨＡｂ１８Ｆａｂ的瘤／肝比值２４小时为２１．０７±０．０５,明显高于１３１Ⅰ－ＨＡｂ１８组最佳显像１６８小时的５．８３±０．０５。肝癌病人１３１Ⅰ－ＨＡｂ１８Ｆａｂ的最佳显像时间为１６～２４小时。结论１３１Ⅰ－ＨＡｂ１８Ｆａｂ放免显像集中肝癌定位诊断、定性诊断和及时诊断三方面优点于一体,可能成为肝癌诊断的一项重要技术。     

EHF病毒在人肾细胞融合中的结构蛋白分子定位分析和人胚？…

用辣根过氧化物酶标记ＭｃＡｂＦ（ａｂ′）２，ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ，ＭｃＡｂ３Ｄ３８和ＭｃＡｂＡ３５，分别对２７例ＥＨＦ患者尿液中融合细胞（ＦＣ）进行免疫酶染色，结果ＭｃＡｂＦ（ａｂ′）２检出率为２７／２７（１００％）；ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ为１９／２７（７０．３７％），ＭｃＡｂ３Ｄ８为２０／２７（７４．０７％）；ＭｃＡｂＡ３５为２／２７（７．４１％），人胚肾细胞感染ＥＨＦ病毒后，在偏酸性（ｐＨ６．０）条     

单克隆抗体F（ab‘）2片段2种纯化方法的建立及比较

目的：建立纯化（ｍＡｂ）Ｆ（ａｂ‘）２片段的有效方法。方法：在ｐＨ５．５环境下，用ＤＴＴ激活木瓜酶，在没有ＤＴＴ存在下消化抗人肝癌ｍＡｂ ＨＡｂ１８ ＩｇＧ１，３７℃，反应８ｈ，然后分别用Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００（１ｃｍ×６５ｃｍ）凝胶过滤柱和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－ＦＦ（２ｃｍ×１８ｃｍ）阴离子交换柱纯化。结果：经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１００ｇ／Ｌ）电泳测定，２种方法纯化的Ｆ（ａｂ’）２     

木瓜蛋白酶制备抗人肝癌单抗F（ab‘）2及Fab片段

为了制备肝癌ＭｃＡｂ ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）２及Ｆａｂ片段。用激活的木瓜酶分别在偏酸性和偏碱性条件下消化１８ｈ和１ｈ，得到Ｆ（ａｂ’）２和Ｆａｂ片段，经ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＥＰＬＣ）上建立相应的纯化方法。该法制备Ｆ（ａｂ’）２得率为４３％－６２％，制备Ｆａｂ得率４２％，其活性用免疫荧光法测定均为１．３６×１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ。本法操作简单，     

单克隆抗体对活化腹腔巨噬细胞抗胰腺癌作用的影响

观察重组人白细胞介素２（γ－ＩＬ２）体外诱导的腹腔巨噬细胞，在ＹＰＣ３抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ｍＡｂ）介导下，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）机制对胰腺癌细胞的杀伤作用。４ｈ５１Ｃｒ释放实验表明，在ＹＰＣ３ｍＡｂ作用下，活化腹腔巨噬细胞对Ｃａｐａｎ－２人胰腺癌细胞的杀伤活力明显增强，比单用巨噬细胞杀伤活力约提高７０．０％，而对照１－Ｆ／７抗登革热病毒单抗无明显影响。γ－ＩＬ２作用的腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞具有类似的ＡＤＣＣ杀伤效应。结果提示，γ－ＩＬ２和ＹＰＣ３ｍＡｂ联合腹腔注射，可能为胰腺癌的局部治疗提供一个新方法。     

单克隆抗体MAb7及其相应抗原在单核—巨噬细胞系统及中性粒细…

建立一株抗人单核－巨噬细胞及中性粒细胞的杂交瘤ＭＡｂ７。用人肝癌组织细胞悬液免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，ＡＢＣ染色法筛选单克隆抗体，ＡＰＡＡＰ法鉴定骨细胞特征。ＭＡｂ７在研究单核－巨噬细胞的分化、免疫功能及病理分型等方面有一定的意义和价值。     

疏水作用FPLC一步法制备级纯化抗人肝癌单抗HAb18 F(ab')2片段

制备符合人用标准的肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）２片段,方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体,胃蛋白酶与抗体在ＰＨ３．５０．１ｍｏｌ．Ｌ＾－１柠檬酸条件下,经不同反应时间,收集样品,上ＦＰＬＣ（快速蛋白液相色谱）Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化并进行质检。结果按上述条件消化２ｈ,９５％ｃ ｈ ｒ ＩｇＧ裂解为Ｆ（ａｂ’）２片段,经Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化后Ｆ     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

抗人肝癌单克隆抗体和Fab片段在裸鼠体内分布及药物偶…

大鼠抗人肝癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ５（ＩｇＧ１）腹水经亲和层析柱纯化后，用木瓜蛋白酶消化得到Ｆａｂ片段，经ＥＬＩＳＡ检测均具有良好的免疫活性。将＾１２５Ｉ－Ｆａｂ和＾１２５Ｉ－３Ａ５注入移植人肝癌裸鼠体内Ｆａｂ片段分布在主要脏器的每克组织注射剂量百分比（ＩＤ％／ｇ）的持续时间和数值均低于完整ＭｃＡｂ，但肿瘤与非肿瘤组织（Ｔ／ＮＴ）的比值则高于完整ＭｃＡｂ，说明Ｆａｂ片段的分布对肿瘤组织具有较高     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

EHF病毒在人肾细胞融合中的结构蛋白分子定位分析和人胚肾细胞融合的电镜观察

用辣根过氧化物酶标记ＭｃＡｂＦ（ａｂ＇）_２、ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ、ＭｃＡｂ３Ｄ_８和ＭｃＡｂＡ_（３５），分别对２７例ＥＨＦ患者尿液中融合细胞（ＦＣ）进行免疫酶染色。结果ＭｃＡｂＦ（ａｂ＇）_２检出率为２７／２７（１００％）；ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ为１９／２７（７０．３７％）；ＭｃＡｂ３Ｄ_８为２０／２７（７４．０７％）；ＭｃＡｂＡ_（３５）为２／２７（７．４１％）。人胚肾细胞感染ＥＨＦ病毒后，在偏酸性（ｐＨ６．０）条件下可以产生特异性细胞融合现象，并经电镜证实了细胞之间膜的融合。此结果表明ＥＨＦ病毒可以导致人肾细胞融合，ＥＨＦ患者尿液中ＦＣ的形成可能与ＥＨＦ病毒膜蛋白在宿主细胞膜上的表达有关。     

抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２，ＡＩ３，ＡＩ４，ＡＩ５，ＡＩ６和ＡＩ７）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３，ＡＴ７，ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３，ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ铰链区。ＡＩ３，ＡＩ７，ＭｃＡｂ可识别ｘ和λ链。     

干扰素和卡介苗对肝癌大鼠单核巨噬细胞释放TNF的影响

目的：观察干扰素和卡介苗对肝癌大鼠单核巨噬细胞释放ＴＮＦ的影响，方法：以二乙基亚硝胺（ＤＥＭ）诱发大鼠肝癌，正常大鼠和肝癌大鼠分别腹腔注射干扰素（ＩＦＮα－２ｂ）、卡介苗（ＢＣＧ）或二者联用。从各组正常大鼠和肝癌大鼠体内分离出高纯度的血单核细胞、肺、脾和腹腔内的巨噬细胞，体外分别与人肝癌细胞联合培养，以ＥＬＩＳＡ酶联反应分别测定培养液中的ＴＮＦ含量。从未用免疫制剂的肝癌大鼠体内分离出高纯度的血单核     

单克隆抗体MAb7及其相应抗原在单核－巨噬细胞系统及中性粒细胞中的表达

目的：建立一株抗人单核－巨噬细胞及中性粒细胞的杂交瘤ＭＡｂ７．方法：用人肝癌组织细胞悬液免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，ＡＢＣ染色法筛选单克隆抗体，ＡＰＡＡＰ法鉴定髓细胞特征。结果：抗体亚类为小鼠ＩｇＧｌ，相应抗原经亲和层析纯化，Ｍｒ６００００．免疫组化染色，在石蜡切片的组织中和在血片及骨髓涂片中单核巨噬细胞和成熟的中性粒细胞阳性，单核细胞性白血病及中性粒细胞性白血病阳性，而上皮、内皮、网状组织细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞及其它粒细胞、淋巴细胞、红细胞均为阴性．结论：ＭＡｂ７在研究单核－巨噬细胞的分化、免疫功能及病理分型等方面有一定的意义和价值．     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体携带阿霉素在荷瘤鼠体内的分布

采用Ｄｅｘｔｒａｎ　Ｔ－４０桥联法将抗人脑胶质瘤单克隆抗体ＳＺ－３９与氚标记阿霉素（３Ｈ－ＡＤＲ）交联，制备成免疫交联物３Ｈ－ＡＤＲ－ＰＡＤ－ＭＡｂＳＺ－３９。在荷瘤鼠体内观察免疫交联物分布情况。结果显示，ＡＤＲ－ＭＡｂＳＺ－３９在相关肿瘤浓聚，发挥了单抗高选择性定位作用，其分布特异指数平均为３．７９，心脏为４，骨为２，有可能降低阿霉素的主要副作用──心脏损害及骨髓抑制。但其在肝、脾内摄入相对较多，临床应用时应予注意。