造血生长因子联合应用对骨髓粒—单系造血祖细胞体匀增殖的影响

目的：研究不同造血生长子联合应用对骨髓粒－单系造血祖细胞体外增殖的调节作用。方法：应用甲基纤维素体外半固体培养法，检测各种生长因子联合应用组，ＣＦＵ－ＧＭ集落的生物情况。结果：造血生长因子的联合应用不仅可增加ＣＦＵ－ＧＭ集落数，促进ＣＦＵ－ＧＭ集落的体外形成，而且，也能明显地增加ＣＦＵ－ＧＭ集落的体积，在型ＣＦＵ－ＧＭ集落数的比例在各联合应用组增加显著，其中以ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－     

再生障碍性贫血患者检测粒—单系祖细胞的临床意义

目的与方法:对116例再生障碍性贫血(再障)患者进行了粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的体外培养与临床关系的研究。结果:患者与正常对照的CFU—GM百分比,重症再障者为1.64±2.90％,远低于慢性再障的9.8±0.55％(P<0.001);CFU—GM百分比高者比CFU—GM百分比低疗效好(P<0.01),且CFU—GM百分比高者输血量低于CFU—GM百分比低者(P<0.001)。CFU—GM百分比与再障患者是否继发因素无关,而与外周血白细胞和中性粒细胞绝对值呈正相关(r均为0.24),结论:再障患者检测CFU—GM有显著的临床意义。     

枸杞多糖对小鼠骨髓造血干细胞、粒单系祖细胞增殖分化的影响

枸杞多糖(LBP)10mg·kg~(-1)·d~(-1)ip,连续3d,可促进正常小鼠骨髓造血干细胞(CFU-S)增殖,明显增加骨髓粒单系祖细胞(CFU-GM)数量,促进CFU-GM向粒系分化。     

皮肌炎患者骨髓造血干/祖细胞体外增殖分化功能的研究

目的：比较皮肌炎患与正常人的造血干/祖细胞体外增殖分化能力及从造血干/祖细胞水平探讨皮肌炎的发病机制。方法：用半固体甲基纤维素集落培养法观察22例皮肌炎患的粒-巨噬细胞系、红系、巨核细胞系的集落及丛落数。结果：皮肌炎患的粒-巨噬细胞系、红系、巨核细胞系的集落分别为119.4351.44、75.1236.26、9.183.76均明显低于正常对照组，丛落数分别为240.5392.11、60.6920.72、29.0113.54均高于正常对照组。结论：皮肌炎患的造血干/祖细胞集落数减少而丛落数不减少，提示皮肌炎患和造血干/祖细胞的增殖、分化功能异常，造血干/祖细胞的异常可能是皮肌炎的发病机制。     

乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周白细胞的影响

目的探讨乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周血WBC的影响。方法用不同剂量的乌贼墨灌胃正常小鼠、环磷酰胺(Cy)和辐射骨髓损伤模型小鼠,采用造血祖细胞体外培养方法和实验血液学技术,检测小鼠骨髓造血干细胞生成数(CFU-S)、粒-单系祖细胞集落生成数(CFU-GM)和外周血WBC数量。结果乌贼墨能够显著提高正常小鼠CFU-S,CFU-GM和外周血WBC数量,有效拮抗模型小鼠体内CFU-S,CFU-GM及外周WBC的降低,并显著促进模型小鼠上述各指标的恢复。结论乌贼墨具有显著的促进小鼠骨髓粒系造血作用。其作用机制可能通过调节机体的免疫机能,诱导机体产生粒/单核细胞集落刺激因子和多种细胞因子,促进造血细胞的增殖,并诱导造血细胞向粒单系细胞分化。     

人参二醇、三醇皂苷对小鼠骨髓造血干/祖细胞体外增殖的影响

人参总皂苷按单体皂苷皂苷元所含羟基量不同分为人参二醇皂苷(Panaxadiol Saponin;PDS)和人参三醇皂苷(Panaxtrol Saponin;PTS)两大类.有关人参总皂甙对造血方面的研究也已有不少报道[1～3],而PDS和PTS对造血祖细胞作用研究还未见报道.本文采用体外造血祖细胞集落形成技术,通过观察PDS和PTS对小鼠骨髓造血干/祖细胞增殖的作用影响,目的在于探讨人参总皂苷中不同的皂苷成分对造血祖细胞的作用,筛选人参中促造血有效成分,为开发利用天然植物资源提供实验依据.     

重组集落刺激因子对大鼠正常骨髓及其白血病细胞体外增殖的影响

通过体外半固体培养集落形成和液体培养测定分析了重组的人或小鼠集落刺激因子对大鼠正常骨髓及其白血病细胞生长的影响。实验结果表明，重组的人巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＭ－ＣｓＦ），粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）和重组的小鼠粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｍＧＭ－ＣＳＦ）能明显促进褐家（ｂｒｏｗｎＮｏｅｗａｙ）大鼠正常骨髓造血祖细胞的生长，在终浓度１０００ｋＵ·Ｌ－１时，它们的刺激指数分别为２８±ｓ１０，１２±ｓ４，２５±ｓ９。然而，ｒｈＧ－ＣＳＦ和ｒｍＧＭ－ＣＳＦ明显地抑制其白血病细胞集落形成，其ＩＣ５０分别为３５±ｓ８和１３４３±ｓ６３４ｋＵ·Ｌ－１也具有一定的抑制效应。同样，在液体培养中证实ｒｈＧ－ＣＳＦ和ｒｍＧＭ－ＣＳＦ明显地抑制ＬＴ１２白血病细胞ＤＮＡ合成及饱和生长密度（ＩＣ５０分别为１９１３和１８７ｋＵ·Ｌ－１）。重组的人粒－巨噬细胞集落刺激因子和小鼠多系集落刺激因子无论在半固体或液体培养中对大鼠正常骨髓造血祖细胞和白血病细胞的增殖均无明显影响。此外，还观察到大鼠急性白血病ＬＴ１２细胞经ｒｍＧＭ－ＣＳＰ（１０００ｋＵ·Ｌ－１）处理８ｄ后，６±ｓ１％的细胞显示具有还原硝基篮四氮唑的能力。     

基因重组干扰素γ体外对骨髓增生异常综合征患者治疗作用的研究

目的方法:用基因重组干扰素γ(IFN-γ)体外对41例骨髓增生异常综合征(MIDS)患者造血祖细胞的作用进行了观察,结果结论:①IFN-γ体外对正常对照组患者的CFU-E和CFU-GM无明显促增殖作用。而对MDS患者CFU-E和CFU-GM有明显促增殖作用。其作用为剂量依赖型,在1~U/ml时作用最小,100~U/ml时作用最强;②IFN-γ对MDS原CFU-E和CFU-GM增殖正常组加入IFN-γ后集落数增加最明显,而对增殖明显减低组集落效无明显增加;③IFN-γ对MDS不同FAB亚型患者CFU-E和CFU-GM作用不同,其中对RAEB-T型患者有效率较高。     

重症急性辐射损伤治疗新策略——造血因子早期干预治疗

无论是军事或恐怖行动的核爆炸还是民用核设施的事故性爆炸,均可致大规模人群受到不同程度的电离辐射照射,产生大量的重症急性辐射损伤（SARI）患者。过去二十多年,对SARI患者的救治大多采用造血干细胞移植,然而数十例辐射事故患者接受移植后的结果表明其治疗效果并不理想,至今无一长期活存。实验研究结果显示,7.0或10.0 Gy 60Coγ射线照射猴在照射后24 h内给予大剂量重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）或重组人血小板生成素（rhTPO）治疗可明显促进受照射动物造血恢复、缩短抗感染和抗出血治疗时间、增加照射动物活存率。对于受5.0～10.0Gy照射所致的SARI患者的临床治疗,尽早使用rhG-CSF或（和）rhTPO是目前首选的治疗策略。     

儿茶素对骨髓细胞周期及造血生长因子基因表达的作用儿茶素对骨髓细胞周期及造血生长因子基因表达的作用

目的探讨中药鸡血藤Spatholobus suberectus Dunn活性成分儿茶素对小鼠骨髓细胞增殖周期及其脾细胞内造血生长因子IL-6和GM-CSF mRNA表达的影响,以初步阐明其造血调控作用机理。方法用流式细胞仪检测技术观察儿茶素对正常及骨髓抑制小鼠骨髓细胞增殖周期的影响,同时采用RT-PCR技术,检测在儿茶素刺激条件下,小鼠脾细胞内IL-6和GM-CSF mRNA表达的变化。结果儿茶素可促使正常及骨髓抑制小鼠骨髓细胞G₀/G₁期细胞比例下降,S+G₂/M期细胞比例增加,并可使正常及骨髓抑制小鼠脾细胞内IL-6 mRNA和GM-CSF mRNA表达显著上调。结论儿茶素可通过诱导脾细胞内IL-6 mRNA和GM-CSF mRNA的表达,促进正常小鼠骨髓细胞进入增殖周期,并促使骨髓抑制小鼠的骨髓细胞跳出“G₁期阻滞”,进入细胞增殖周期,从而加速造血干/祖细胞的增殖和分化。     

Consensus on the use of neutrophil-stimulating hematopoietic growth factors in clinical practice: an international viewpoint

Hematopoietic growth factors (CSFs) are now available for use in patients with myelosuppression due to congenital, acquired and therapy-induced conditions. Variations in the use of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in different countries are due to differences in approved indications by national regulatory agencies, varying opinions on the importance of certain treatment outcomes, differences in the selection of published and unpublished evidence of efficacy and the impact of the cost of these agents in different health care systems. Through Medline searches and personal files, we have reviewed the published literature on the efficacy and cost of GM-CSF and G-CSF in patients with severe chronic neutropenia and those receiving standard dose chemotherapy or high-dose chemotherapy requiring bone marrow reconstitution. Guidelines were established with regard to (1) the relative merits of different types of clinical studies and (2) the relative importance of different clinical outcomes as reported in these studies. The cost implications of these agents as they apply to the different clinical settings are also reviewed. Recommendations for the use of G-CSF and/or GM-CSF include: (1) the prevention of recurrent, debilitating infections in patients with severe chronic neutropenia; and (2) the maintaining of dose-intensity of potentially curative, standard-dose chemotherapy. While G-CSF and/or GM-CSF have been shown to improve secondary outcomes in higher-than-standard dose-intensive therapy, further studies are needed to test whether such improvements also lead to significant improvements in survival and/or quality of life. These recommendations are based on the collective interpretation of the presented evidence by an international group of investigators in this area.     

造血干/祖细胞移行能力及影响因素的实验研究

目的：研究纯化脐血CD34^ 细胞移行穿越血管内皮细胞能力及影响因素。方法：免疫微磁珠阳性选择法（MACs)纯化脐血CD34^ 细胞，流式细胞仪测定基质细胞衍生因子（SDF－1α）受体（CXCR4）表达率；与干细胞因子（SCF）、白介素（IL）－6，IL－3及flt3配体（FL）共同孵育12小时，静脉内皮细胞株（ECV）接种于transwell滤膜上层，研究CD34^ 细胞在SDF－1α作用下移行穿越ECV的能力，transwell滤膜孔径为8μm，并观察阻断其表面粘附分子（CD62L、CD62E和VLA－4）后对迁移的影响。结果：CD34^ 细胞在自然状态下也能少量通过ECV细胞层，SDF－1α可显提高CD34^ 细胞移行能力，通过率与CD34^ 细胞表面CXCR4表达相关；CD34^ 细胞与SCF与IL－6共同孵育后，可明显提高其穿越ECV细胞的能力（P＜0．01）；单独或联合应用抗粘附分子抗体显减少CD34^ 细胞的穿内皮细胞移行（P＜0．01）。结论：CD34^ 细胞可穿过ECV内皮细胞层向SDF－1α浓度高的一侧移行，与IL－6和SCF共同培养后可增强CD34^ 细胞的移行能力，抗粘附分子单抗显减少CD34^ 细胞的移行。     

沙利度胺对子宫内膜异位症的内膜间质细胞体外表达VEGF的影响

目的:观察沙利度胺(ThD)对子宫内膜异位症病人内膜间质细胞的增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:刮取子宫内膜异位症病人的子宫内膜组织,经体外分离、培养,用波形蛋白单抗进行免疫组化染色鉴定,应用四唑盐(MTS)分析肿瘤坏死因子α(TNF-α)和ThD对间质细胞生长的影响,以实时荧光定量PCR、Western Blot和定量ELISA分析在存在外源TNF-α的情况下,不同浓度ThD对间质细胞表达VEGF的影响。结果:TNF-α能促进子宫内膜间质细胞的增殖和分泌VEGF,而ThD能剂量依赖性抑制内膜间质细胞的增殖,并逆转TNF-α对VEGF的上调作用。结论:ThD可抑制体外培养的子宫内膜异位症内膜间质细胞的增殖及其VEGF的表达和分泌,提示ThD对于治疗子宫内膜异位症可能具有一定的作用。     

人工合成成骨生长肽对正常小鼠造血的促进作用和体外造血活性测定

目的　通过观察sOGP在体内的促造血活性和体外促进造血祖细胞增殖的作用 ,初步探索sOGP促造血活性的作用环节及机制。方法　正常小鼠连续 14d皮下注射sOGP ,观察外周血象、骨髓有核细胞数及骨髓有核细胞分类计数的变化 ;又应用离体骨髓细胞培养方法观察sOGP对正常小鼠和人骨髓粒系祖细胞集落形成的影响。结果　sOGP能升高正常小鼠骨髓有核细胞数和外周血白细胞数分别为2 0 %和 40 % ,红细胞和血小板也有增加趋势 ,骨髓细胞增生较空白对照组活跃 ,粒系增生较明显。体外CFU G集落培养实验进一步证实了sOGP具有直接刺激小鼠和人骨髓粒系祖细胞增殖的作用 ,1× 10 -14 mol·L-1浓度时已有明显的效果 ,sOGP和阳性对照药rhG CSF在相近浓度时效果相接近。结论　sOGP可能具有促进小鼠骨髓全系细胞增生的作用 ,以促进粒系造血为主 ,其机制可能是直接作用于造血干 /祖细胞或改善造血微环境促进造血 ,提示sOGP在促进放 /化疗患者造血功能恢复等方面潜在的应用价值     

低氧培养环境对脐带间充质干细胞增殖及生物学特性的影响

目的 研究低氧环境对人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）增殖及生物学特性的影响。方法 分别在5% O₂和21% O₂环境下培养hUCMSCs,使用群体倍增时间（PDT）评价hUCMSCs的增殖情况;流式细胞术检测细胞表面标志CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR的表达;培养基诱导分化后,茜素红-S对含钙骨细胞染色检测成骨诱导分化,油红O对脂滴染色检测成脂诱导分化,阿尔新蓝8GX对蛋白多糖检测软骨诱导分化;羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法检测hUCMSCs对植物血凝素P（PHA-P）刺激的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制作用,并应用流式细胞术检测对CD8+T细胞的抑制作用;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子2（IGF-2）、转化生长因子β（TGF-β）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、基质细胞衍生生长因子1（SDF-1）、神经生长因子（NGF）mRNA表达;试剂盒法检测细胞培养上清中IGF-2浓度。结果 21% O₂和5% O₂环境培养的hUCMSCs表面标志CD73、CD90、CD105的表达均为阳性（＞95%）,CD34、CD45、HLA-DR的表达均为阴性（＜2%）,均具有成骨、成脂、成软骨三系分化的能力;5% O₂组的PDT均显著小于21% O₂组（P＜0.05）;PBMC经PHA-P刺激后观察到细胞增殖聚集,与hUCMSCs共培养后几乎没有聚集出现,与PBMC＋PHA-P组比较,PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs（21%或5% O₂）组子代细胞明显减少,PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs（5% O₂）组PBMC抑制率为（61.44±0.92）%,与PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs （21% O₂）抑制率（60.48±4.00）%相当,无统计学差异,且两组hUCMSCs对CD8+T细胞的抑制作用无统计学差异。与21% O₂组比较,5% O₂组hUCMSCs HIF-1α、IGF-2、SDF-1、HGF、VEGF、bFGF、NGF mRNA表达水平显著升高（P＜0.05、0.001）,TGF-β无明显变化; 5% O₂组hUCMSCs培养上清IGF-2水平显著高于21% O₂组（P＜0.001）。结论 5% O₂环境可使hUCMSCs的增殖能力和相关生长因子的表达增强,尤其是IGF-2,但依然保持着与21% O₂环境培养的hUCMSCs相似的表型、分化能力以及淋巴细胞增殖抑制能力。     

脂多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度脂多糖(LPS)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,采用免疫细胞化学法鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度LPS干预组,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察其增殖情况。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44阳性,CD34、CD45阴性。MTT检测结果显示,与对照组(0.190±0.037)相比,0.01、0.1及1μg/mlLPS干预组吸光度(A)值均增高,其中0.01μg/mlLPS干预组(0.253±0.030)增高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。而10、100μg/mlLPS干预组A值则较对照组下降,其中10μg/mlLPS干预组(0.159±0.042)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度LPS可以提高BMSCs的增殖能力,但随着LPS浓度的增大,BMSCs增殖能力反而下降。