小鼠颌下腺组织培养上清液促进粒—单系和巨核系造血的实验研究

目的 证实颌下腺是否合成影响造血的细胞因子,并探讨其对粒－单系和巨核系造血细胞增殖分化有何影响,为重新认识颌下腺的生理功能提供实验证据。方法 采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测CD13膜抗原及细胞周期,研究小鼠颌下腺组织培养上清液（SGCM）对小鼠粒－单系和巨核系造血发生的影响。结果 SGCM对粒－单系祖细胞（CFU－GM）集落生长有明显促进作用,能明显促进巨核系造血祖细胞（CFU－M eg）集落生成,而且雄性SGCM刺激活性高于雄性SGCM,IL－3与雌性SGCM有叠加作用,贫血雄性SGCM对CFUGM和CFU－Meg的刺激活性高于正常小鼠,SGCM能促进小鼠骨髓细胞进入增殖活跃期（S／G2）。结论 颌下腺能合成与粒－单系、巨核系造血相关的造血因子。提示颌下腺与造血调控可能有关。     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类,进一步研究颌下腺对血发生的调控,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示,小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）在体外培养中,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用,实验组集落数远远高于阴性对照组（Ｐ〈０．０５）;晚期红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雄性组（Ｐ〈０．０５）,早期红系祖 细胞（ＢＦＵ－Ｅ）培养体系没有明显差异（Ｐ〉０．０５）,贫血模型小鼠颌下腺促进ＢＦＵ－Ｅ和ＣＰＵ－Ｅ增殖和分化的活性高于正常小鼠（Ｐ〈０．０５）,ＩＬ－３与ＳＧＣＭ有协同刺激作用,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子,雄性小鼠颌下腺促进ＣＦＵ－Ｅ增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本     

黄芪注射液对贫血小鼠巨核系造血的作用及其机理的研究

目的　研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠巨核系造血的影响及其作用机制。方法　制备贫血小鼠模型 ,随机分为给药组和对照组 ,分别腹腔注射 AMI〔2 0 m g/ (ml· 2 0 g)〕或等量生理盐水 q.d× 6 ,于给药后第8、11、14天常规方法检测外周血血小板数、骨髓有核细胞数 ,同时用体外巨核系祖细胞 (CFU- Meg)培养方法检测CFU- Meg,采集血清作巨核细胞系集落刺激活性 (Meg- CSA)测定。结果　贫血小鼠给药组和对照组比较 ,血清Meg- CSA明显升高 ,给药后第 11天所测各项指标均恢复正常 ,恢复时间明显缩短。结论　 AMI能够升高血清Meg- CSA,加速骨髓抑制后巨核系造血功能的恢复     

当归多糖对骨髓巨噬细胞的影响及其与造血调控的关系

目的研究当归多糖(APS)对骨髓巨噬细胞(BMMФ)生物活性的影响及其与造血调控的关系，从而阐明当归的活血机制。方法采用骨髓造血祖细胞和巨噬细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测，免疫细胞化学，核酸探针原位杂交等技术。结果经APS诱导的BMMФ的培养上清液可提高髓系造血祖细胞的集落产率；经APS诱导后，BMMФ表达促红细胞生成素(EPO)、粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白水平有不同程度的提高；EPO mRNA和GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高。结论APS可以直接和(或)间接地刺激造血诱导微环境中的BMM中，从基因水平和蛋白水平上促进造血调控因子的合成和分泌，进而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、晚期红系祖细胞(CFU-E)、粒单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化。     

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增     

神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响.方法 采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射 腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响.并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系.结果 在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF (rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率.注射NGF[7.5 μg/(kg·d)或10 μg/(kg·d)]持续7 d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高.结论 NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成.NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一.     

三七总皂甙对粒单系造血祖细胞增殖调控机理的研究

采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术,研究三七总皂甙（ＴＳＰＮ）,对小鼠粒单系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）增殖凋控的影响及其机理。结果表明：在有粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）存在的条件下,ＴＳＰＮ能促进正常或贫血小鼠ＣＦＵ－ＧＭ的集落形成;经ＴＳＰＮ诱导制备的肌条件培养液,Ｌ细胞条件培养液和脾细胞条件培养液能显著提高ＣＦＵ一ＧＭ的集落产率。研究提示,ＴＳＰＮ可能通过诱导机体产生造血凋控因子或协同这些因子促进机体单系血发生。     

内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血的调控作用

目的　了解内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血功能的影响 ,为进一步研究血发生及其调控提供理论依据。方法　取剖腹产术后 12小时以内的人脐静脉内皮细胞 ,按 Jaffe法进行培养 ,建立内皮细胞体外培养模型。而后收集原代培养的内皮细胞上清液 ,应用造血祖细胞体外培养方法进行体外粒 -单系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - GM)、早期红系祖细胞克隆形成单位 ( BFU - E)、晚期红系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - E)和巨核系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - MK)半固体培养。结果　在有内皮细胞上清液存在的各培养体系中 ,集落形成良好。而在同样培养条件下 ,在无内皮细胞上清液存在的体系中 ,需加入外源性的 GM- CSF、EPO和 IL - 3才能表现出对粒系、红系和巨核系造血的刺激作用。结论　 1内皮细胞能够通过分泌造血生长因子 ,支持各系祖细胞的增殖与分化 ;2内皮细胞上清液可作为标准的生长因子来源 ,用于体外干细胞的扩增和某些血液病的治疗 ;3内皮细胞和造血干细胞 /祖细胞的相互作用在体内的造血调控中也可能起了重要作用 ;4在内皮细胞上清液中可能含有尚未能证明的其他造血生长因子。这些因子单独或协同地发挥作用 ,支持了各系祖细胞的增殖     

制首乌总多糖对贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响

目的观察制首乌总多糖(PPS)对放化疗所致骨髓抑制贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响。方法建立骨髓抑制贫血小鼠模型,采用造血祖细胞培养技术,观察PPS体内ip给药和细胞培养直接用药对造血祖细胞增殖和骨髓有核细胞(BMC)数目的影响。结果体内用药能显著增加BMC数目,提高BFU-E、CFU-E和CFU-Meg集落数产率(P<0.01),能增加CFU-GM集落数产率(P<0.05);在一定浓度下,体外直接用药,能增加CFU-Meg集落数产率(P<0.01)。结论PPS能通过间接作用促进红系和粒系祖细胞的增殖,能通过间接和直接作用刺激巨核系祖细胞的增殖。     

The murine submandibular gland conditioned medium induce the development of CFU-GM and CFU-meg]

OBJECTIVE: Our purpose is to determine whether murine submandibular gland produce hematopoietic growth factors or not and which hematopoietic growth factor are produced by murine submandibular gland. METHODS: By using the techniques of culture of hematopoietic progenitor cells(CFU-GM, CFU-Meg) ex vivo, flow-cytometry, the effects of murine submandibular gland conditioned medium(SGCM) on the development of CFU-GM and CFU-Meg in mice was studied. RESULTS: SGCM can stimulate the development of CFU-GM and CFU-Meg (without any exogeneous HGF), almost no colony in control (without any exogeneous HGF and SGCM); the promoting activity of male SGCM is higher than female SGCM's in augmenting colony formation of CFU-Meg (P < 0.05), there is no difference of CFU-GM(P > 0.05). The stimulating activity of anemic mice SGCM is higher normal mice SGCM's (P < 0.05). IL-3 can collaborate with female SGCM to stimulate proliferation of CFU-Meg. SGCM can promote bone morrow cell entiring the active proliferative phase(S/G2). CONCLUSION: Submandibular gland can stimulate the development of CFU-GM and CFU-Meg by secreting hematopoietic growth factor-like activities. Our study provide the experimental evidences for clarifying the relationship between submandibular gland and hematopoiesis.     

小鼠颌下腺组织培养上清液对造血干细胞和骨髓细胞增殖影响的实验研究

本实验采用脾集落形成法和流式细胞术等技术,研究了小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）对造血干细胞和骨髓细胞增殖的影响。结果表明：正常雄性和雌性ＳＧＣＭ对小鼠造血干细胞增殖和分化有明显促进作用：ＳＧＣＭ能能效促进小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）由相对静止期（Ｇ０／Ｇ１）进行增殖活跃期（Ｓ＋Ｇ２／Ｍ）,并能提高骨髓有核细胞数。研究提示,正常小鼠颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进小鼠造血干细胞增殖和全化并加     

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU-GM和HPP-CFC

利用大于 10kD组分的小鼠骨髓内皮细胞条件培养液 (mBMEC CM)作刺激物体外琼脂培养CFU GM ,与rmGM CSF合用培养HPP CFC获得成功。就培养CFU GM和HPP CFC而言 ,用细胞因子作刺激物与并用大于 10kD组分的mBMEC CM作刺激物相比较 ,以后者的CFU GM及HPP CFC产率最高     

多种细胞因子在CD34+细胞增殖分化中的作用

目的:探讨血小板生成素（TPO）等多种细胞因子在分离后的脐血造血干/祖细胞体外扩增中的作用。方法:在集落培养体系及体外液体扩增体系中,分别用含有和不含有TPO细胞因子组合实验,比较其结果。结果:含有TPO组其诱导红系爆式集落单位(BFU-E )和粒巨细胞集落形成单位(GFU-GM)集落形成倍数、细胞总数和CD34⁺细胞增殖倍数明显高于不含有TPO组。 结论：TPO与干细胞因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)等其他细胞因子协同可明显提高早期造血干/祖细胞扩增效率。     

Effects of Ligustrazine on Hematopoiesis in the Early Phase of Bone Marrow Transplantation Mice

the National NaturalScience Foundation(Serial No.3 9870 92 6)sacrificed on the1 st,3rd,5 th,7th,1 0 th,1 5 th,and 2 1 st day after BMT.The marrow from fe-murs was flushed into RPMI- 1 640 medium. BM-NCs from each femur were counted.1 .2 .7Carbon- Mold Preparation of Blood Vessels　　 A colloidal carbon solution( prepared Chineseink,0 .2 ml,2 0 mg/ml in saline) was injected1 -2 min before sacrifice on the1 st,3rd,5 th,7th,1 0 th,1 5 th,2 1 st day after BMT.One femur ofeach mouse was r…     

血虚证小鼠模型骨髓细胞红系祖细胞、粒单系祖细胞变化规律及中药复方对其的影响

目的：研究血虚证小鼠模型骨髓造血祖细胞体外增殖水平及变化规律,以及中药复方地甘口服液,红霖四物口服液对其的影响。方法：以Balb/c小鼠为实验对象,分别采用免疫介导法和综合放血法制作血虚证模型。采集其骨髓有核细胞进行培养;并分组灌服地甘口服液,红霖四物口服液,比较观察各组小鼠骨髓细胞体外培养CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成情况。结果：两种血虚证小鼠模型的CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落形成较空白对照组显下降,尤以前为甚;两种中药复方均可促进模型小鼠骨髓细胞的增殖,但对于免疫介导血虚证模型,两治疗组的效果存在一定差异。结论：血虚证小鼠模型骨髓造血干（红9系,粒单系）细胞的体外增殖较正常小鼠明显下降,而地甘口服液,红霖四物口服液可以促进骨髓CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成。     

无细胞胎肝液对大剂量化疗后小鼠骨髓造血细胞的影响

采用小鼠体内液体扩散盒及脾结节法观察了胎鼠和成年小鼠肝脏无细胞液对大剂量环磷酰胺化疗后小鼠骨髓造血细胞增殖与分化的影响。发现无细胞胎肝液能明显促进受抑制骨髓中多能造血干细胞(CFU—S)的集落形成率,但对扩散盒内粒系祖细胞(CFU—D)的增殖分化无促进作用。成年鼠肝无细胞液则对造血细胞的增殖无刺激活性,不能促进化疗后小鼠骨髓中造血干细胞恢复。认为无细胞胎肝液中存在的造血刺激因子能有效缓解细胞毒剂对骨髓多能造血干细胞的抑制。     

再生障碍性贫血发病机制及环孢菌素A干预的体外实验研究

目的：研究再生障碍性贫血（AA）发病机制及环孢菌素A（CsA)对AA患骨髓细胞体外培养的影响。方法：采用微量甲基纤维索法研究了18例AA患者骨髓粒一单系祖细胞（CFU－GM）集落形成及其骨髓细胞和血清对正常CFU－GM集落形成的影响,据此对AA按发病机制进行分组,同时加CsA与AA骨髓及正常骨髓共同培养。结果：干细胞缺陷组5例,微环境缺陷组4例,细胞抑制组7例,血清抑制组2例。AA骨髓CFU－GM集落产率明显低于正常对照组（P＜0．01）;CsA能显著增加AA集落,集族产率（P＜0．05）;8例AA骨髓CFU－GM集落产率明显低于正常对照组（P＜0．01）;CsA能显著增加AA集落,集族产率（P＜0．05）;8例AA骨髓对CsA敏感,其中细胞抑制组6例,干细胞缺陷组2例。结论：本研究可能为预测CsA治疗AA的临床疗效提供实验依据。