天花粉蛋白与重组干扰素α—2b联用对荷人胃腺癌SGC—7901裸小鼠 …

目的：探索天花粉蛋白（ＴＣＳ）和重组干扰素α－２ｂ（ｒＩＦＮ－α－２ｂ）习用对人体胃癌的抑制作用。方法：取１２只荷瘤裸小鼠，分组用ＴＣＳ、ｒＩＦＮ、ＴＣＳ＋ｒＩＦＮα－２ｂ、ＭＭＣ阳性和ＮＳ阴生对照组处理。结果：ＴＣＳ（０．２ｍｇ／ｋｇ）单用抑瘤率为７．０％，与阴性对照组相比无显著抑瘤作用（Ｐ〉０．０５）。该剂量ＴＣＳ与ｒＩＦＮα－２ｂ １０ＩＵ／ｋｇ（后者单用时抑瘤率为３３．１％）联用抑瘤率为４     

IFN—α及其联合GM—CSF对CML患者骨髓细胞凋亡相关基因？…

目的：探讨ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－α联合ＧＭ－ＣＳＦ调节慢性期慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ－ＣＰ）患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣｓ）ｂｃｒ－ａｂｌ,ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法：淋巴细胞分离液离心富集１４例ＣＭＬ－ＣＰ患者骨髓ＭＮＣｓ,经干扰素－α（ＩＦＮ－α）及ＩＦＮ－α联合粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）培养２４ｈ后,采用相对定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及扩增片段光密     

基因工程干扰素（IFNα2a）的抗疱疹病毒效应

采用微量细胞病变抑制法在Ｖｅｒｏ细胞上研究了ＩＦＮα２ａ抗ＨＳＶ－１型和ＨＳＶ－Ⅱ型疱疹病毒的作用。结果表明：万兴ＩＦＮα２ａ和罗扰素ＩＦＮαａ在Ｖｅｒｏ细胞上５００ＩＵ／ｍｌ可以抗１０００ＴＣＩＤ５０，５０ＩＵ／ｍｌ可以抗１００ＴＣＩＤ５０，５ＩＵ／ｍｌ可以抗０１ＴＣＩＤ５０的ＨＳＶ－１型和ＨＳＶ－Ⅱ型疱疹病毒感染细胞，提示万兴ＩＦＮα２ａ和罗扰素均显示明显的抗病毒效应，且两者无明显差别。     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

三种细胞因子对恶性肿瘤多药耐受影响的实验研究

通过体外转染多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）基因和化疗药物ＶＰ－１６、５－Ｆｕ诱导的方法分别建立了膀胱癌多药耐受（ＭＤＲ）细胞亚系ＥＪ／ＭＲＰ和鼻咽癌ＭＤＲ亚系ＬＣＥ／ＶＰ、ＣＬＥ／Ｆｕ,并观察了细胞因子ｒｈＧ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α１ｂ和ＩＬ－２对这些亚系ＭＤＲ水平的影响。结果发现ＩＦＮα１ｂ和ＩＬ－２可以一定程度地逆转３种ＭＤＲ细胞对ＶＰ－１６需受程度,逆转倍数在３．４与５．２之间,可以增加柔红霉素Ｄａ     

细胞因子和泌乳素对体外培养的人球后成纤维细胞表面ICAM-1表达的影响

目的：通过研究细胞因子和泌乳素（ＰＲＬ）对球后成纤维细胞（ＲＦｓ）表面细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响,进一步了解甲状腺相关眼病（ＴＡＯ）的发病机理,以探索新的防治途径。方法：将体外培养的正常人ＲＦｓ与ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α和ＰＲＬ孵育７２ｈ,利用直接免疫荧光技术和流式细胞仪检测其表面ＩＣＡＭ－１表达的情况。结果：正常人ＲＦｓ中只有极少数细胞自发并较弱地表达ＩＣＡＭ－１,基础状态下的阳性百分数为（３．４９±１．９９）,平均荧光强度为（４４．８４±２０．５９）;而ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α能以剂量依赖方式显著增强ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）。ＰＲＬ不仅可以直接刺激ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）,其剂量相关曲线呈双相型,还能拮抗或协同ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）、ＩＦＮ－α（１０００ｕ／ｍｌ）或ＩＬ－４（２．５ｎｇ／ｍｌ）的诱导作用。结论：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦ－α和ＰＲＬ对正常人ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达有明显的调节作用,它们可能是启动或加重ＴＡＯ自身免疫反应的重要因素。     

用斑眯免疫结合法测定登革病毒单克隆抗体亲和力

建立斑点免疫结合法（ＤＩＡ）测定抗体相对亲和力，用此法测定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白ＮＳ１四株单克隆抗体（ＭｃＡｂａ）的相对亲和力，４株ＭｃＡｂｓ对ＮＳ１的亲和力各不相同，按５０％最大结合浓度分析，抗体株６－１／Ｃ为０．０５μｇ／ｍｌ。１－７／Ｆμｇ／ｍｌ，５Ｄ为２５．００μｇ／ｍｌ。３－１１／Ｃ为５７．０μｇ／ｍｌ。以上结果为应用单克隆抗体提供了依据。同时，说明用ＤＬＡ法测定ＭｃＡｂ相对亲和力的可     

生物免疫刺激剂对大鼠外周血淋巴细胞和肝大颗粒淋巴细胞生物活性的影响

正常大鼠在体内应用干扰素（ＩＦＮα—２ｂ），卡介苗（ＢＣＧ）或二者联用后，检测外周血淋巴细胞转化率和酸性非特异性酯酶（ＡＮＡＥ）阳性淋巴细胞数量的变化。同时从正常大鼠肝内分离出大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ），体外分别受ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ或二者联合作用后，以３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验测定生物免疫刺激剂（ＢＩＳ）对ＬＧＬ抗肝癌细胞作用的影响。结果：（１）单用ＩＦＮα－２ｂ对大鼠淋巴细胞母细胞化有一定的抑制作用，抑制率为２１．７％；单用ＢＣＧ使大鼠淋巴细胞转化率提高了２７．９％，二者联用则可消除ＩＦＮα－２ｂ对大鼠淋巴细胞母细胞化的抑制作用。（２）ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ或二者联用均使大鼠外周血ＡＮＡＥ阳性淋巴细胞显著增多，其中ＢＣＧ作用强于ＩＦＮα－２ｂ（Ｐ＜０．０１），以ＩＦＮα－２ｂ和ＢＣＧ二者联用的效果最强。（３）ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ均可显著增强大鼠肝ＬＧＬ的抑肝癌细胞增殖作用，ＢＣＧ作用较ＩＦＮα－２ｂ强，二者分别使肝ＬＧＬ抑肝癌细胞增殖作用提高了５０％和２２．４％，ＩＦＮα－２ｂ和ＢＣＧ协同作用的效果最强，使肝ＬＧＬ的抑肝癌细胞作用提高了６３％。实验结果为肝癌免疫治疗的最佳选择提供了充分的科学依据。     

原代小鼠骨骼肌细胞和C 2C 12细胞转人凝血因子IX基因后高效表达及分泌功能

目的：研究骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞,其合成、加工和分泌外源性蛋白质的功能。方法：应用骨骼肌细胞特异性和非特异性表达载体（ｐｄ Ｌ Ｍｅ４ｂ ＡｈⅨｍ 和 ＬⅨ Ｓ Ｎ）转染联合免疫缺陷（ Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ）小鼠原代成肌细胞（ Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ Ｍ Ｂ）和 Ｃ２ Ｃ１２ 成肌细胞系,观察这两种细胞在合成、加工和分泌人凝血因子Ⅸ（ ＦⅨ）蛋白质方面的异同。结果：在 Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ Ｍ Ｂ中,ｐｄ Ｌ Ｍｅ４ｂ ＡｈⅨｍ可表达的 ＦⅨ 达２ ０００ ｎｇ·１０－ ６ ·（２４ ｈ）－ １ ,凝血活性达 ９５％ ～１０３％ 。比较细胞内和培养上清液中的 ＦⅨ蛋白及细胞内 ＦⅨｍ Ｒ Ｎ Ａ 丰度变化表明, Ｃ２ Ｃ１２ 细胞分泌 ＦⅨ的功能不如 Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ Ｍ Ｂ,而合成、加工 ＦⅨ的能力与 Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ Ｍ Ｂ相似。结论：原代小鼠骨骼肌细胞可高效表达、加工和分泌外源性基因产物;在以骨骼肌细胞作为靶细胞进行基因治疗研究时,应尽量应用原代细胞。本研究为临床应用骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞奠定了实验基础。     

α2a或α2b基因工程干扰素对CD4^＋／CD8^＋的比值和NK活？…

目的 研究不同品牌ＩＦＮα２ａ或ＩＦＮα２ｂ的免疫调节作用。方法 采用ＭＴＴ法进行ＮＫ细胞的细胞毒试验和用流式细胞仪测定淋巴细胞ＣＤ抗原表达。结果 ２００ＩＵ／ｍｌ不同品牌的ＩＦＮα２ａ或ＩＦＮα２ｂ能促进ＮＫ细胞杀伤Ｋ５６２细胞,其杀伤效率可达３５％左右,比不加干扰素对照组ＮＫ细胞杀伤效率约１４％均提高了近２．５倍（Ｐ〈０．０５）,可使ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋的比值升高（Ｐ〈０．０５）。结论 进品     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的促增殖作用，为防治以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒（ｆｐＧｖ１－ＭＴ－ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＮ－ｒａｓ１）转染于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照，观察其对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。结果反义Ｎ－ｒａｓ１细胞数为（１６．８±１．３）×１０４（细胞／ｍｌ），空载质粒对照细胞为（３０．１±１．２）×１０４，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．００１）；反义Ｎ－ｒａｓ１细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率为７６４３±６７２（ｃｐｍ），空载质粒对照细胞为１５１３１±１３８（ｃｐｍ），两者差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１），同时应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因的细胞ＲａｓｍＲＮＡ表达水平明显降低，其表达蛋白ｐ２１也明显降低。结论反义Ｎ－ｒａｓ１基因对ＶＳＭＣ及ｂＦＧＦ诱导ＶＳＭＣ增殖有抑制作用。     

体外高热联合α—IFN或As2O3对白血病骨髓净化的实验研究

目的 研究体外高联合α－ＩＦＮ或Ａｓ２Ｏ３对白血病骨髓的净化。方法 １２例白血病人及１０例正常对照骨髓：（１）在高热４２℃ｈ、α－ＩＦＮ３００Ｕ／ｍｌ条件下,测定持续高是歇高热对ＣＦＵ＿ＧＭ和ＣＦＵ－Ｌ产率的（２）在３７℃、４２℃条件下,不同Ａｓ２Ｏ３浓度对ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ＿Ｌ抑制率的影响。结果 间歇高热联合α－ＩＦＮ与持续高热联合α－ＩＦＮ相比,前者对ＣＦＵ－ＧＭ具有保护作用,两者对ＣＦＵ－     

细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原MG7Ag表达的调节

探讨细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达的调节作用。用基因重组干扰素α（ＩＦＮ－α），干扰素γ（ＩＦＮ－γ），白细胞介素２（ＩＬ－２）和肿瘤坏死因子γ（ＴＮＦ－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达。ＩＦＮ－α和ＩＦＮ－γ对胃癌细胞ＭＧ７Ａｇ有促表达作用。ＩＬ－２对三株细胞ＭＧ７Ａｇ无调节作用；ＴＦＮ－α对细胞ＭＧ７Ａｇ表达调节是随     

用斑点免疫结合法测定登革病毒单克隆抗体亲和力

建立斑点免疫结合法（ＤＩＡ）测定抗体相对亲和力。用此法出定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白ＮＳ１四株单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的相对亲和力，４株ＭｃＡｂｓ对ＮＳ１的亲和力各不相同。按５０％最大结合浓度分析，抗体株６─１／Ｃ为０．０５μｇ／ｍｌ．１─７／Ｆ为０．６７μｇ／ｍｌ．５Ｄ为２５．００μｇ／ｍｌ，３─１１／Ｃ为５７．００μｇ／ｍｌ。以上结果为应用这些单克隆抗体提供了依据。同时，说明用ＤＩＡ法测定ＭｃＡｂ相对亲和力的可行性。     

长期骨髓培养,白细胞介素2,干扰素α2a体外净化慢性粒细？…

用长期骨髓培养的白细胞介素２（ＩＬ－２,０００Ｕ／ｍｌ）,干扰素α２ａ（ＩＦＮ－α２ａ,１０００Ｕ／ｍｌ）不同的组合方案,对１０例慢性粒细胞白血病骨髓进行体外净休培养２周,结果发现：（１）单用ＬＴＢＭＣ体系其次化效果差;（２）加入ＩＬ－２后,对ＣＭＬ的ＣＦＵ－ＧＭ以及ｐｈ’（＋）细胞有明显的杀伤作用,对正常的ＣＦＵ－ＧＭ则无影响;（３０ＩＦＵ－α２ａ在ＬＴＢＭＣ体系中抑制ｐｈ‘（＋）细胞生长而影响     

HCV基因型与IFN—α2b抗病毒疗效的关系

目的；研究丙肝病毒基因型与丙肝患者使用ＩＦＮ－α２ｂ治疗效果的关系。方法；采用ＨＣＶ基因组ＮＳ５区ＰＣＲ产物酶切分型方法，对７９例丙肝患者做ＨＣＶ基因分型。所有病例均按预定方案应用ＩＦＮ－α２ｂ治疗，根据ＡＬＴ的变化情况和判断疗效。首先考察应用１ＭＵ和３ＭＵ ＩＦＮ－α２ｂ两种剂量在治疗效果上的差异性；然后研究ＨＣＶ基因型对ＩＦＮ－α２ｂ治疗效果的影响。     

慢性粒细胞白血病反义核酸基因治疗的实验研究

目的单独应用ｂｃｒ－ａｂｌ反义硫代磷酸寡聚脱氧核糖核酸（ＡＳＰＯ）或ｃ－ｍｙｂＡＳＰＯ作用于慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）细胞的研究已有报道，但抑制的不彻底性是个主要问题。由于ＣＭＬ的发生是多癌基因协同作用及相互影响的结果，为进一步提高ＡＳ－ＰＯ对ＣＭＬ细胞的作用效果，用互补于两种类型（ｂ２ａ２及ｂ３ａ２）的ｂｃｒ－ａｂｌ基因融合位点两侧各１３个核苷酸的ＡＳＰＯ（ｂ２ＡＳＰＯ和ｂ３ＡＳＰＯ）及ｃ－ｍｙｂ基因起始密码子２－７互补的ＡＳＰＯ（ｍＡＳＰＯ）联合作用于Ｋ５６２细胞株和原代ＣＭＬ细胞。方法硫代磷酸寡核基酸（ＰＳ－ＯＤＮ）的合成由３９２－０５型ＤＮＡ－ＲＮＡ合成仪自动合成，经ＯＰＣ柱纯化；细胞与ＰＳ－ＯＤＮ共培养后２４，４８，９６，１２０ｈ倒置显微镜下活体观察，０．４％台盼蓝拒染法进行死活细胞计数；ＣＦＵ－Ｋ５６２、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ采用０．８％甲基纤维素半固体培养法；采用两对引物ＲＴ－ＰＣＲ半定量法检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ表达；通过流式细胞仪检测及电镜观察细胞凋亡情况。结果（１）ＡＳＰＯ能够特异性抑制ｂｃｒ－ａｂｌ基因表达；经ＲＴ－ＰＣＲ的检测发现１０μｍｏｌＡＳＰＯ作用４８ｈ，两种反义     

SMU1对正常人体外PBMNC功能效应的影响

目的：研究ＳＭＵ１（自制抗ＣＤ３）对正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）的体外功能效应,方法：（地）以ＳＭＵ１６种不同浓度、ＩＬ－２、ＭＣＤ３（丝裂性抗ＣＤ３）孵育ＰＢＭＮＣ,观察细胞密度和形态变化,ＭＴＴ法测定细胞增殖力;（２）分别用ＳＭＵ１０．５ｍｇ／Ｌｆ、５ｍｇ／Ｌ、ＩＬ－２２００ｋＵ／Ｌ培养ＰＢＭＮＣ３ｄ,ＥＬＩＳＡ法测定上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α及Ｇ－ＣＳＦ水平。结     

rIL—2体外激活骨髓细胞的抗肿瘤作用及机理

目的：探讨ｒＩＬ－２体外激活骨髓细胞产生细胞毒活性的作用机制。方法：取人新鲜骨髓中单个核细胞，体外与ｒＩＬ－２孵育２４ｈ及４８ｈ，即激活骨髓（ＡＢＭ），同时设不加ｒＩＬ－２组（ＮＢＭ）为对照，分别检测了ＡＢＭ，ＮＢＭ的细胞毒活性，膜表面标志（ｍＴＮＦ－α，ＣＤ１１ｂ）及培养液中ＴＮＦ－α水平，并进行比较观察和相关性分析。结果：ＡＢＭ对ＨＬ－６０细胞的细胞毒活性较ＮＢＭ明显增强，ｍＴＮＦ－α，ＣＤ１     

天花粉蛋白与重组干扰素α-2b联用对荷人胃腺癌SGC-7901裸小鼠的抑癌作用

目的：探索天花粉蛋白（ＴＣＳ）和重组干扰素α－２ｂ（ｒＩＦＮα－２ｂ）联用对人体胃癌的抑制作用。方法：取１２只荷瘤裸小鼠，分组用ＴＣＳ、ｒＩＦＮ、ＴＣＳ＋ｒＩＦＮα－２ｂ、ＭＭＣ阳性和ＮＳ阴性对照组处理。结果：ＴＣＳ（０．２ｍｇ／ｋｇ）单用抑瘤率为７．０％，与阴性对照组相比无显著抑瘤作用（Ｐ＞０．０５）。该剂量ＴＣＳ与ｒＩＦＮα－２ｂ１０ＩＵ／ｋｇ（后者单用时抑瘤率为３３．１％）联用抑瘤率为４６．８％，大于两药单用时的抑瘤率之和。结论：两药联用对荷瘤小鼠显示了显著的协同抑瘤作用（Ｐ＜０．００１）。病理研究也得到同样结果，两药联用组移植瘤生长受阻，肿瘤细胞内见较多固缩细胞核，与肾实质分界清晰，且未见肿瘤组织浸润至肾包膜。