实验性急性肺损伤大鼠脑组织中Gq/11蛋白的动态变化

目的 观察急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠脑组织中Gq/11蛋白的动态改变,从分子水平研究油酸(OA)性ALI导致脑损伤以及ALI导致多器官功能障碍综合征的可能机制,为ALI和多器官功能障碍综合征的发病机制提供实验和理论依据.方法 用尾静脉注射OA法复制ALI大鼠模型,将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C组)和实验组(OA组),OA组又根据不同时限将其分为30 min、60 min、90 min和120 min 4个亚组.观察检测各组大鼠血气(pH、PaO2、PaCO2)、平均动脉压(MABP)、血浆及脑组织乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA).免疫印迹法检测各组大鼠脑组织中的Gq/11蛋白含量.结果 Gq/11蛋白含量:除OA30 min组外,其余OA各组随着时间延长较C组分别增加至(141.85±33.82)%、(165.84±30.27)%、(174.31±32.52)%(P<0.01).除OA 30 min组外,其余OA各组血浆MDA含量均较c组升高(P<0.01);OA 30 min组和OA 60 min组脑组织MDA含量与C组比较差异无统计学意义,OA 90 min组和OA 120 min组脑组织MDA含量较C组升高(P<0.01).OA各组血浆LDH活性均较C组升高(P<0.01);除OA 30 min组外,其余OA各组脑组织LDH活性均较C组升高(P<0.01).脑组织CK活性在60 min时达到峰值(P<0.01),以后呈下降趋势.结论 ALI可导致远隔器官脑的损伤,引起细胞信号转导功能异常和脑代谢及形态的变化,Gq/11蛋白的高表达变化可能参与了ALl过程及脑损害的病理性信号转导.     

缺血预处理对局灶性脑缺血-再灌注大鼠乳酸脱氢酶和肌酸激酶的影响

目的探讨缺血预处理对缺血-再灌注大鼠血清及脑组织乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的影响。方法SD大鼠63只,随机分为预处理组、模型组和假手术组,每组21只大鼠。阻塞大脑中动脉制备脑缺血模型,预处理组在脑缺血-再灌注前3 d接受15 m in的缺血预处理,缺血2 h再灌注22 h;模型组未做缺血预处理。分别比较各组的神经功能缺损评分,血清和脑匀浆中的LDH和CK值。结果①预处理组与模型组神经功能缺损评分比较,差异有统计学意义(P<0.01);②预处理组、模型组及假手术组血清LDH分别为(8227±395)、(9019±370)、(6894±172)U/L;脑匀浆LDH值为(9151±701)、(8762±140)、(10498±434)U/g(蛋白),预处理组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3组血清CK分别为(1240±1250)、(2140±610)、(790±763)U/L;脑匀浆CK为(603±86)、(699±220)、(764±235)U/g(蛋白),差异无统计学意义(P>0.05)。血清LDH与脑匀浆LDH呈负相关(r=-0.786,Y=15688.052-0.793X,P<0.05;X为血清LDH值);血清CK与脑匀浆CK无相关性。结论缺血预处理对缺血再灌注大鼠神经细胞具有保护作用。     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化脂质过氧化相关蛋白表达的动态变化及一贯煎的干预效应

目的 探讨四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化脂质过氧化相关蛋白表达的动态变化及一贯煎的干预效应.方法 Wistar雄性大鼠57只,其中模型组39只,正常组18只.模型大鼠腹腔注射50％的CCl4橄榄油溶液(1ml/lg),每周2次,共9周.造模3、6周后,随机抽取正常及模型大鼠各6只,处死作动态观察.其余模型大鼠随机分为模型组15只及干预组12只,模型组大鼠在8周时处死4只观察成模情况.第7周开始,继续造模的同时,干预组用一贯煎(2.682 g/kg)蒸馏水稀释灌胃,1次/d,共计3周.用药3周结束后,处死大鼠,检测肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽(GSH)活性,以及热休克蛋白70 (HSP70)、血红素加氧酶-1(HO-1)、转铁蛋白(Transferrin)、过氧化还原酶(Prxd)6、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)等的表达.计量资料采用单因素方差分析,计数资料采用Ridit分析. 结果 (1)与对照组比较,模型组大鼠6、9周时肝组织MDA含量显著升高[(4.23±0.45) nmol/mg比(2.22±0.59)nmol/mg; (6.29±1.23) nmol/mg比(2.22±0.59) nmol/mg,F值分别为60.13、66.99,P值均＜ 0.05];SOD活性显著降低[(196.94±39.20) U/mg比(264.50±30.44)U/mg,F=11.12,P＜ 0.05; (152.21±51.65) U/mg比(264.50±30.44) U/mg,F=23.11,P＜0.01];GSH含量显著降低[(48.47±7.27) nmol/mg比(60.74±9.04) nmol/mg,F=6.71,P＜0.05;(37.89±9.01) nmol/mg比(60.74±9.04)nmol/mg,F=24.06,P＜0.01];与9周模型组比较,干预组MDA显著降低[(4.25±0.86) nmol/mg比(6.29±1.23) nmol/mg,F=19.52,P＜ 0.01],SOD显著升高[(198.35±46.48) U/mg比(152.21±51.65) U/mg,F=4.65,P＜0.05],GSH显著升高[(53.73±7.54) nmol/mg比(37.89±9.01) nmol/mg,F=19.23,P＜0.01];(2)与正常组比较,9周时模型组大鼠HSP70蛋白表达量升高(1.21±0.06比0.58±0.07,F=166.87,P＜0.0l),HO-1蛋白表达量也升高(1.11±0.06比0.58±0.06,F=123.96,P＜ 0.01),Prdx6蛋白表达量降低(0.04±0.05比1.49±0.05,F=1215.85,P＜0.01),L-FABP表达量降低(0.24±0.02比1.44±0.14,F=219.05,P＜0.01),Transferrin蛋白表达量降低(0.67±0.03比1.67±0.04,F=301.35,P＜0.01).9周时,干预组HSP70和HO-1蛋白表达量分别为0.82±0.04、0.90±0.04,与9周时模型组比较,F值分别为92.31、26.89,P值均＜0.01,差异有统计学意义;9周时,干预组Prdx6、L-FABP和Transferrin蛋白表达分别为0.88±0.11、1.36±0.13、1.04±0.12,与9周时模型组比较,F值分别为150.17、237.19、27.53,P值均＜0.01,差异有统计学意义. 结论 一贯煎具有促进机体抗氧化物质生成、减轻脂质过氧化损伤的作用.     

黄芪及其活性成分对离体豚鼠心脏的作用

目的 探讨黄芪及其活性成分黄芪总黄酮、黄芪总皂苷、黄芪多糖对豚鼠离体心脏心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 将36只豚鼠的离体心脏分为正常对照组(对照组)、缺血再灌注组(模型组)、黄芪组(AST组)、黄芪总黄酮组(TFA组)、黄芪总皂苷组(TSA组)和黄芪多糖组(APS组)6组.检测豚鼠离体心脏的心率、冠状动脉流量、心肌梗死面积、灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性、心肌组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性等.结果 再灌注期各时间点模型组心率均较对照组相应的时间点低(P ＜0.05或0.01),AST组和TFA组则均较模型组高(P ＜0.05或0.01),TSA组和APS组心率没有明显改善.再灌注5、10、15、20、25、30、40、50、60 min时模型组冠状动脉流量均较对照组相应时间点低(P均＜0.01).再灌注期AST组冠状动脉流量均高于模型组(P＜0.05或0.01).再灌注5、10、25、30、40 min时TFA组冠状动脉流量均高于模型组(P ＜0.05或0.01).TSA组和APS组冠状动脉流量没有明显改善.再灌注15、25、40、60 min时模型组灌流液中LDH活力均高于对照组(P均＜0.01).再灌注15、25、40、60 min时AST组灌流液中LDH活力均低于模型组(P均＜0.01).再灌注5、15、25、40、60 min时TFA组灌流液中LDH活力均低于模型组(P＜0.05或0.01).再灌注5 min时APS组灌流液中LDH活力显著低于模型组(P＜0.05).再灌注后各时间点TSA组灌流液中LDH活力与模型组比较差异均无统计学意义.再灌注15、60 min时模型组灌流液中CK活力均高于对照组(P均＜0.01).再灌注15 min时AST组和TFA组灌流液中CK活性均低于模型组(P均＜0.01).再灌注60 min时模型组灌流液中CK活力显著高于对照组(P＜0.01).AST组与TFA组灌流液中CK活力分别均低于模型组(P值分别为0.008和0.015).模型组缺血再灌注心肌组织中MDA含量为(5.95±0.91) μmol/g蛋白高于对照组的(3.62±0.58) μmol/g蛋白(P＜0.01).AST组和TFA组心肌组织中MDA含量分别为(4.52 ±0.47)和(4.47±0.78)μmol/g蛋白,均低于模型组(P分别＜0.01和0.05).模型组缺血再灌注心肌组织中SOD活力为(98.64±12.49) U/mg蛋白低于对照组的(153.55±13.25) U/mg蛋白(P＜0.01).AST组和TFA组心肌组织中SOD活力分别为(130.73 ±14.85)和(124.38±13.35) U/mg蛋白,均高于模型组(P均＜0.01).模型组心肌梗死面积百分比为(18.9±2.27)％高于对照组的(1.60±0.33)％(P＜0.01).AST组和TFA组心肌梗死面积百分比分别为(11.9±2.03)％和(13.31±1.17)％,均低于模型组(P均＜0.01).结论 黄芪及其有效成分黄芪总黄酮对豚鼠离体心脏心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关.     

细胞穿透肽PEP-1介导人铜,锌-超氧化物歧化酶转导入大鼠离体心脏及其对缺血再灌注损伤的保护作用

目的 采用离体心脏灌注模型,研究细胞穿透肽PEP-1介导入铜,锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD,SOD1)穿透心肌组织能力及其对心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建的原核表达载体pET15b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化大肠杆菌,表达和纯化SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.采用Langendorff灌流系统,大鼠离体心脏停灌30 min后复灌60 min建立缺血再灌注损伤模型.大鼠随机分为对照组,100μmol/L SOD1蛋白预处理组,25、50、100μmol/L PEP-1-SOD1蛋白预处理组.免疫荧光及Western blot检测PEP-1-SOD1的转导效果,超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测转导的目的 蛋白的SOD活性.测定心肌组织丙二醛(MDA)含量和复灌后15 min内冠状动脉流出液肌酸激酶(CK)活性.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,复灌60 min时红四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积.结果 免疫荧光及Western blot检测均显示PEP-1-SOD1以剂量依赖性方式转导入离体灌注的心肌组织内,SOD1蛋白预处理组心肌组织内未见到目的 蛋白.对照组,SOD1组和25、50、100 μmol/L PEP-1-SOD1处理组的SOD活性分别为(10.06±0.77),(10.59±0.71)和(32.29±1.42)、(43.16±1.16)、(55.14±1.59)U/mg蛋白,MDA含量分别为(1.48±0.19),(1.39±0.11)和(1.01±0.14)、(0.73±0.13)、(0.50±0.06)nmol/mg蛋白,CK活性分别为(1.73±0.58),(1.68±0.14)和(1.40±0.28)、(0.97±0.39)、(0.61±0.56)U/mg蛋白,心肌细胞凋亡率(AI)分别为(17.25±0.75)%,(16.63±1.07)%和(11.50±0.57)%、(6.50±0.63)%、(4.13±0.52)%,心肌梗死面积百分比分别为(55.13±2.18)%,(52.13±2.59)%和(33.88±2.06)%、(25.50±2.16)%、(15.38±1.14)%.与对照组和SOD1组比较,PEP-1-SOD13种剂量组的SOD活性、MDA含量、CK活性、心肌细胞凋亡率及心肌梗死面积百分比指标差异均有统计学意义(均P<0.01).说明PEP-1-SOD1蛋白预处理组SOD活性以剂量依赖性方式显著高于SOD1组,MDA含量、CK活性及心肌细胞凋亡率均明显低于SOD1组,心肌梗死面积小于SOD1组.结论 PEP-1肽介导SOD1蛋白能直接以天然活性的形式高效穿透进入离体心肌组织,转导的PEP-1-SOD1融合蛋白对心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用.     

葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌缺血/再灌注细胞凋亡的影响及机制

目的:观察葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及可能机制。方法:将48只大鼠等分为对照组、I/R组、葡萄糖酸镁组。实验1:每组取8只大鼠,对照组用改良的K-H液持续灌注110min;I/R组用改良的K-H液灌流20min后,停灌30min,再灌注60min;葡萄糖酸镁组在改良的K-H液中加入葡萄糖酸镁2.4mmol/L,余同I/R组。检测心肌灌流液中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)含量,心肌组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量。实验2:每组8只大鼠,实验过程基本与实验1相同,仅将再灌注时间改为120min,检测心肌细胞凋亡指数(AI)。观察实验1、2合组再灌注心律失常发生情况。结果:葡萄糖酸镁组与I/R组相比,室性心律失常发生率显著下降(VT:43.8%对100.0%,VF:12.5%对75.0%,P<0.01);再灌流出液中CK、LDH含量显著降低[CK:(121.76±0.75)U/L对(132.33±1.73)U/L,LDH:(51.94±1.93)U/L对(62.73±2.18)U/L,P<0.01];心肌组织T-SOD活性显著升高[(49.12±0.54)NU/mg对(40.09±1.64)NU/mg,P<0.01];MDA含量、细胞凋亡指数显著降低[MDA:(3.05±0.19)μmol/g对(3.94±0.16)μmol/g,AI:(27.79±1.59)%对(33.61±2.10)%,P<0.01]。结论:葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌I/R损伤具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、抗细胞凋亡有关。     

间歇运动对老龄小鼠骨骼肌组织自由基代谢的影响

目的 观察间歇游泳训练对老龄小鼠骨骼肌组织自由基代谢的影响.方法 40只健康雌性昆明种小白鼠分为成年对照组、老龄对照组、老龄无负荷间歇运动组、老龄递增负荷间歇运动组、老龄无负荷运动与递增负荷间歇运动交替组.10 w训练结束后48 h在安静状态下处死,行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的测定.结果 老龄无负荷运动组和交替运动组MDA含量[(1.39±0.03),(1.36±0.05) nmol/mgprot]较老龄对照组MDA含量[(1.49±0.08) nmol/mgprot]下降(P＜0.05),无负荷运动组SOD活性[(5.33±0.08) U/mgprot]较老年对照组[(5.23±0.05) U/mgprot]高(P＜0.05),交替运动组SOD活性[(5.39±0.07) U/mgprot]较老年对照组显著增高(P＜0.01).无负荷运动组和交替运动组CAT活性[(1.59±0.06),(1.71±0.07) U/mgprot]较老年对照组[(1.44±0.03) U/mgprot]显著增高(P＜0.01);无负荷运动组CAT活性较负荷运动组高(P＜0.05).负荷运动组GPX活性[(67.93±1.67) U/mgprot]较老年对照组[(66.03±0.58) U/mgprot]高(P＜0.05);无负荷运动组和交替运动组GSH-Px活性[(72.03±2.53),(75.54±4.22) U/mgprot]较老年对照组显著增高(P＜0.01).结论 间歇运动能延缓骨骼肌衰老,但不同形式的间歇运动引起骨骼肌组织自由基代谢的变化不同.     

阿托伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的:探讨阿托伐他汀预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用。方法:将20周龄的Wistar大鼠175只随机分为三组:假手术组(n=55)、缺血再灌注组(n=60)、阿托伐他汀组(n=60)。在连续空腹灌胃7d后构建大鼠MIRI模型,测量比较三组大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超敏C反应蛋白(hsCRP)水平的差异,再连续灌胃28d后测量比较三组大鼠左、右心室重量及室间隔厚度的差异。结果:与假手术组比较,缺血再灌注180min后缺血再灌注组、阿托伐他汀组LDH[(583.15±73.16)U/L比(1537.67±280.73)U/L比(1035.07±137.92)U/L]、CK[(932.72±62.82)U/L比(2872.45±136.3)U/L比(2434.07±192.81)U/L]、hsCRP[(20.98±1.86)mg/L比(48.39±1.31)mg/L比(40.29±2.33)mg/L]水平显著升高,但阿托伐他汀组的显著低于缺血再灌注组(P0.05或0.01)。与假手术组比较,缺血再灌注28d后缺血再灌注组、阿托伐他汀组左室相对重量[(1.21±0.17)mg/g比(1.94±0.33)mg/g比(1.53±0.35)mg/g]、右室相对重量[(0.16±0.12)mg/g比(0.39±1.21)mg/g比(0.27±0.07)mg/g]、室间隔厚度[(1.26±0.35)mm比(2.03±0.38)mm比(1.65±0.38)mm]显著增加,但阿托伐他汀组的显著低于缺血再灌注组(P均0.01)。结论:阿托伐他汀预处理能够显著减轻心肌缺血再灌注损伤,改善心室重构。     

葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌缺血／再灌注细胞凋亡的影响及机制

目的:观察葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及可能机制.方法:将48只大鼠等分为对照组、I/R组、葡萄糖酸镁组.实验1:每组取8只大鼠,对照组用改良的K-H液持续灌注110 min;I/R组用改良的K-H液灌流20 min后,停灌30 min,再灌注60 min;葡萄糖酸镁组在改良的K-H液中加入葡萄糖酸镁2.4 mmol/L,余同I/R组.检测心肌灌流液中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)含量,心肌组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量.实验2:每组8只大鼠,实验过程基本与实验1相同,仅将再灌注时间改为120 min,检测心肌细胞凋亡指数(AI).观察实验1、2合组再灌注心律失常发生情况.结果:葡萄糖酸镁组与I/R组相比,室性心律失常发生率显著下降(VT:43.8%对100.0%,VF:12.5 %对75.0%,P<0.01);再灌流出液中CK、LDH含量显著降低[CK:(121.76±0.75)U/L对(132.33±1.73)U/L,LDH:(51.94±1.93)U/L对(62.73±2.18)U/L,P<0.01];心肌组织T-SOD活性显著升高[(49.12±0.54)NU/mg对(40.09±1.64)NU/mg,P<0.01];MDA含量、细胞凋亡指数显著降低[MDA:(3.05±0.19)μmol/g对(3.94±0.16)μmol/g,AI:(27.79±1.59)%对(33.61±2.10)%,P<0.01].结论:葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌I/R损伤具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、抗细胞凋亡有关.     

燃煤型氟中毒对大鼠脑组织NO含量及NOS mRNA和蛋白表达的影响

目的观察燃煤型氟中毒对大鼠脑组织NO含量及NOS mRNA和蛋白表达的影响。方法健康SD大鼠24只,体质量100～120 g,按体质量随机分为3组,每组8只。对照组饲以常规饲料,低氟组和高氟组以氟病区燃煤烘烤的玉米为主要饲料(含氟量分别为11.30、104.20 mg/kg),来复制氟中毒大鼠模型,染氟时间为3个月。用氟离子选择电极法检测动物尿氟、骨氟、脑氟含量,观察大鼠海马CA1区神经元病理变化,用Biomias 2000图像分析系统测试大鼠海马CA1区神经元胞体平均面积、周长及平均灰度值,比色法测定脑组织NOS活性,硝酸还原酶法测定脑组织NO含量,蛋白印迹方法测定NOS蛋白水平;实时荧光定量PCR方法测定NOS mRNA水平。结果低、高氟组大鼠尿氟为(2.61±0.11)(4.39±0.13) mg/L,骨氟(2 734±137)(4 323±203) mg/kg,脑氟(1.00±0.08)(1.14±0.02) mg/kg;与对照组尿氟(1.59±0.10) mg/L、骨氟(1 399±152) mg/kg、脑氟(0.41±0.06) mg/kg比较,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);尼氏染色显示,与对照组大鼠神经元平均灰度值(119.0±9.7)比较,染氟组大鼠均明显增加[低氟(153.0±8.9),高氟(159.4±2.9)];低氟组、高氟组大鼠脑组织总NOS活性[(8.57±2.40)、(11.49±3.10) kU/g]较对照组(16.80±3.20) kU/g显著性下降(P0.05),高氟组大鼠脑组织NO含量(2.05±0.25)μmol/L较对照组(4.68±1.78)μmol/L显著性降低(P0.05)。低氟组、高氟组大鼠脑组织NOS蛋白表达水平[(0.53±0.24),(0.82±0.28)]较对照组(0.17±0.02)显著增加(P0.05/0.01),低氟组、高氟组大鼠脑组织NOS mRNA水平[(1.37±0.07),(1.38±0.08)]均较对照组(1.53±0.17)显著下降(P0.05)。结论低剂量氟具有一定神经毒性,表现为食用燃煤型氟中毒病区燃煤烘烤的粮食低剂量、早期可导致动物脑氟含量增高,使大鼠海马CA1区神经元蛋白合成功能下降,脑组织NOS活性、NO含量、NOS蛋白及mRNA表达改变。     

过氧化还原蛋白6对细菌脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤氧化应激的保护作用

目的探讨过氧化还原蛋白Peroxiredoxin(Prdx)6对细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤氧化应激的作用及机制。方法应用PCR法对Prdx6基因敲除小鼠行基因型鉴定并应用免疫组织化学法测定Prdx6蛋白在肺脏的表达。将雄性Prdx6基因敲除型小鼠（18只）按随机数字表法分入Prdx6敲除型对照组（9只）、Prdx6敲除型LPS 24 h组（9只）;将雄性野生型C57BL/6J小鼠（18只）按随机数字表法分入野生型对照组（9只）、野生型LPS 24 h组（9只）。各LPS组小鼠气管滴注LPS(5 mg/kg)制备急性肺损伤模型,于给药后24 h分别行肺脏病理检测,BCA法测定BALF内蛋白浓度,比色法测定肺脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和过氧化氢、羰基化蛋白和总抗氧化能力(TAOC),TBA法测定丙二醛的表达。结果Prdx6基因敲除小鼠肺组织免疫组织化学法未检测到Prdx6蛋白表达。两种属小鼠LPS组肺脏病理可见炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚及肺泡内出血,Prdx6敲除型较野生型小鼠病理损伤更重。LPS刺激后,野生型LPS 24 h组BALF内的蛋白浓度为(441±54) mg/L,高于野生型对照组的(168±20) mg/L(t=-4.71,P＜0.01);Prdx6敲除型LPS 24 h组为(770±66)mg/L,高于野生型LPS 24 h组（t=-3.69,P＜0.01）。野生型LPS 24 h组T-SOD为(16.0±1.2) U/mg,低于野生型对照组的(26.5±3.9) U/mg(t=-6.22,P＜0.01);Prdx6敲除型LPS24 h组为(14.5±5.3)U/mg,与野生型LPS 24 h组差异无统计学意义（t=-0.56,P=0.60）。野生型LPS 24 h组肺脏过氧化氢和丙二醛[分别为(52.3±7.8)nmol/g和(3.3±0.5)nmol/mg]高于野生型对照组[分别为(29.5±3.2)nmok/g和(1.6±0.8)nmol/mg],差异有统计学意义（t值分别为-4.25和-5.94,均P＜0.01）,Prdx6敲除型LPS 24 h组[分别为(73.5±12.4)nmol/g和(5.9±0.9)nmol/mg],均高于野生型LPS24 h组（t值分别为-3.01和-6.01,均P＜0.05）。野生型LPS24 h组肺脏蛋白羰基为(6.9±1.2)nmol/mg,与野生型对照组的(6.1±0.9)nmol/mg差异无统计学意义(t=-1.62,P=0.15);Prdx6敲除型LPS 24 h组为(8.9±0.9)nmol/mg,高于野生型LPS 24 h组(t=-2.76,P＜0.05)。野生型LPS 24 h组肺脏TAOC为(4.7±0.6) U/mg,低于野生型对照组的(6.5±0.4) U/mg(t =3.35,P＜0.01);Prdx6敲除型LPS 24 h组为(3.9 ±0.4) U/mg,低于野生型LPS24 h组(t =2.44,P=0.04)。Prdx6敲除型对照组与其野生型对照组以上参数表达差异无统计学意义。结论在LPS诱导的肺损伤中,Prdx6基因缺失增加了活性氧的产生,加重了氧化应激反应,从而使肺损伤恶化。     

过氧化物酶增殖体激活受体-γ激动剂对急性肺损伤大鼠的保护作用及机制

目的 观察过氧化物酶增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂对急性肺损伤大鼠的保护作用及其机制.方法 将72只Wistar大鼠按随机数字表法分为脂多糖组(32只)、曲格列酮干预组(32只)和对照组(8只).脂多糖组和曲格列酮干预组根据检测时间的不同再分为脂多糖及曲格列酮干预1、2、4、8 h组,每组各8只.脂多糖组静脉给予脂多糖(5 mg/kg),曲格列酮干预组在静脉注射脂多糖15 min后静脉给予曲格列酮(3 mg/kg).观察各组大鼠PaO2、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、肺组织病理;采用RT-PCR法检测肺组织PPAR-γ、肿瘤坏死因子-γ(TNF-γ)mRNA表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-γ蛋白变化及用免疫组织化学观察肺组织PPAR-γ的改变;采用Western blot法测定肺组织核因子-γB(NF-γB)P65活性.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析,各组间均数比较采用方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 曲格列酮1、2、4、8 h组PaO2分别为(85±10)、(80±10)、(81±10)、(82±13)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),脂多糖组1、2.4、8 h组分别为(75±11)、(69±12)、(63±11)、(71±13)mm Hg,两组比较差异有统计学意义(F=4.32,P＜0.05);脂多糖2.4、8 h组MPO活性分别为(10.6±1.2)、(14.1±2.1)、(11.1±1.8)U/g,曲格列酮2、4、8 h组分别为(8.2±0.8)、(9.2±0.9)、(8.8±0.7)U/g,两组比较差异有统计学意义(F=14.99,P＜0.05);脂多糖1、2 h组肺组织TNF-γmRNA吸光度(A)值分别为0.68±0.07、0.92 ±0.05,曲格列酮1、2 h组分别为0.39±0.07、0.50±0.09,两组比较差异有统计学意义(q值分别为3.09、3.99,P＜0.05);脂多糖1、2 h组肺组织匀浆及血浆中TNF-?水平分别为(340±33)、(757±47)、(12.3±1.8)及(54.7±6.6)ng/L,曲格列酮1、2 h组为(306±30)、(685±47)、(10.0±1.7)及(46.8±5.9)ng/L,两组比较差异有统计学意义(q值分别为3.92、4.71、4.81、5.17,均P＜0.05);脂多糖1、2、4 h组肺组织PPAR-? mRNA表达(A值)分别为0.36±0.05、0.25±0.04、0.30±0.05,曲格列酮1、2.4 h干预组分别为0.39±0.02、0.44±0.05、0.46±0.04,两组比较差异有统计学意义(q值分别为6.13、5.69、3.72,均P＜0.05);脂多糖1、8 h组NF-?B P65由胞质向胞核移位(A值分别为0.81±0.14、1.91±0.16、0.33±0.06及2.01±0.18),曲格列酮1、8 h组分别为1.14±0.15、1.06±0.21、0.81±0.14、1.03±0.18,两组比较差异有统计学意义(q值分别为3.29、6.25、5.59、6.81,均P＜0.05).结论 在脂多糖诱发的大鼠急性肺损伤模型中,曲格列酮通过上调PPAR-γ表达来抑制NF-γB活性,使NF-γB调控的炎症介质表达下调,炎性细胞浸润和活化减少,从而保护肺组织.     

波动性高糖与持续性高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响

目的比较不同浓度波动性高糖与持续性高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞,取生长良好的对数期细胞用于实验,换用不同条件培养液,分7组进行试验。（1）5．5mmol／L葡萄糖对照组（N组）;（2）25mmol／L持续高糖组（H．组）;（3）33mmol／L持续高糖组（H2组）;（4）5．5／25mmol／L波动葡萄糖组（F．组）;（5）5．5／33mmol／L波动葡萄糖组（F2组）;（6）25mmol／L渗透压对照组（P,组）;（7）33mmol／L渗透压对照组（P2组）。培养72h后以分光光度比色法检测总过氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量。采用单因素方差分析法进行统计学分析。结果（1）SOD活性：与N组[（32．1±5．0）mU／L1比较,H1、H2组和F1、F2组作用于人视网膜色素上皮细胞72h后降低,分别为（19．9±2．4）、（20．5±1．7）、（12．8±2．5）、（10．9±1．7）mU／L,差异有统计学意义（F=31．56,均P〈0．01）,且以F1、F2组下降幅度更为显著;（2）GSH含量：与N组[（135±18）mg／L]比较,H1、H2组和F1、F2组降低,分别为（97±6）、（92±7）、（70±7）、（71±7）mg／L,差异有统计学意义（F=36．368,均P〈0．01）,且以F1、F2组下降幅度更为显著;（3）MDA含量：与N组[（3．3±0．9）mmol／L]比较,H1、H2组和F1、F2组升高,分别为（13．0±2．0）、（11．2±3．3）、（17．0±1．4）、（19．5±0．5）mmol／L,差异有统计学意义（F=75．642,均P〈0．01）,且以F1、F2组升高幅度更为显著;（4）波动性高糖组与持续性高糖组相比,SOD活性降低,GSH表达量下降,MDA含量均升高,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论波动性高糖较持续性高糖对人视网膜色素上皮细胞有更强的氧化损伤效应。     

亚慢性氟中毒对大鼠骨组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 动态观察亚慢性氟中毒大鼠骨组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化,分析亚慢性氟中毒骨组织中一氧化氮(NO)自由基损伤机制.方法 将雄性Wistar大鼠按体质量随机分成两组.氟化钠组每日饮用含氟150mg/L的水溶液,对照组饮用自来水,共饲养24周,每4周处死一批动物,测定大鼠血清及骨组织中的含氟量,Griess Reagent法检血清NO,RT-PCR法和免疫组化法检测骨组织中iNOSmRNA及蛋白表达.结果 氟化钠组血清NO波动较大,第8周时[(19.94±3.04)nmol/L]明显高于对照组[(9.11±1.21)nmol/L].差异有统计学意义(t=9.36,P＜0.01),而第20、24周时[(11.55±3.54)、(20.83±2.49)nmol/L]明显低于对照组[(31.13±3.93)、(33.10±7.37)nmol/L],两组比较差异均有统计学意义(t值分别为10.47、4.46,P＜0.01):第4、8、12、16、20、24周时氟化钠组[(1.87±0.11)、(1.87±0.78)、(1.90±0.29)、(1.93±0.67)、(1.88±0.38)、(1.84±0.03)]骨组织iNOS mRNA表达均明显高于对照组[(0.41±0.25)、(0.30±0.17)、(0.18±0.06)、(0.63±0.15)、(0.66±0.04)、(0.65±0.55)],两组比较差异均有统计学意义(t值分别为13.09、4.82、14.23、4.64、7.82、5.29.P＜0.01).iNOS蛋白主要表达在干骺端肥大区软骨细胞、关节软骨的深层软骨细胞、成骨细胞和韧带细胞中.结论 高剂量氟可以持续诱导iNOS表达,催化NO合成,通过局部调节成骨细胞和破骨细胞活性参与氟中毒骨转换过程.     

硒对氟致大鼠肾脏损伤保护作用的实验观察

目的 观察硒对氟致大鼠肾脏损伤的保护作用,探讨硒的最佳作用剂量及作用靶点.方法 断乳SD雄性大鼠80只,按体质量随机分8组,每组10只.对照组饮用自来水;染氟组饮用50 mg/L的氟化钠溶液;低、中、高硒组分别饮用0.375、0.750、1.500 mg/L的亚硒酸钠溶液;氟+低、中、高硒组分别饮用50 mg/L的氟化钠和0.375、0.750、1.500 mg/L的亚硒酸钠两两组合的溶液.染毒6个月后,测大鼠肾脏组织的氧化水平和核因子κB(NF-κB)的表达量.结果 染氟组大鼠体质量[(695.95±55.89)g]低于对照组[(782.69±56.12)g,P＜0.01],染氟组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性[(55.86±5.09)U/mgprot]与对照组[(68.66±4.52)U/mgprot]比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但有降低的趋势.染氟组大鼠总抗氧化能力(T-AOC)水平[(7.54±1.35)U/mgprot]低于对照组[(9.03±0.37)U/mgprot,P＜0.05],染氟组丙二醛(MDA)水平[(3.86±0.31)nmol/mgprot]高于对照组[(3.14±0.32)nmol/mgprot,P＜0.05].氟+高硒组GSH-Px活性[(74.99±8.41)U/mgprot]高于染氟组[(55.86±5.09)U/mgprot,P＜0.05],MDA水平[(3.17±0.20)nmol/mgprot]低于染氟组[(3.86±0.31)nmol/mgprot,P＜0.05].染氟组、高硒组和氟+低硒组的NF-κB的表达水平(0.360±0.015,0.367±0.007,0.376±0.006)高于对照组(0.312±0.022,P均＜0.05),氟+高硒组(0.312±0.005)低于染氟组(0.360±0.015,P＜0.05).结论 1.500 mg/L硒是本实验条件下硒对慢性氟中毒致大鼠肾脏损伤的最佳保护作用剂量,NF-κB可能是硒拮抗氟中毒的药物靶点.

Abstract：

Objective To explore the protective effect of selenium, an antioxidant, on fluoride-induced renal injury in rats and find out the optimal level of selenium against fluoride toxicity and its valid molecular target.Methods All 80 male weanling SD rats were randomly divided into 8 groups by body weight as follows: normal control group(drinking tap water), fluoride exposed group (drinking water containing 50 mg/L of NaF), low, middle,high selenium exposed groups(drinking water containing 0.375, 0.750, 1.500 mg/L of Na2SeO3) and low, middle,high Se-fluoride groups (drinking water containing both 50 mg/L NaF and three doses of Na2SeO3 as abovementioned, respectively). After 6 months, the rats were killed then the oxidation level and nuclear factor κB(NF-κB)expression level in kidney were measured. Results The weight of the fluoride exposed group[(695.95 ± 55.89 )g]was significantly deceased than the controls[(782.69 ± 56.12)g, P ＜ 0.01]. Glutathione peroxidase(GSH-Px)activity of fluoride exposed group[(55.86 ± 5.09)U/mgprot] was not significantly different but decreased. Tatal antioxidant capacity (T-AOC) activity in fluoride exposed group [(7.54 ± 1.35)U/mgprot] significantly decreased than the controls[(9.03 ± 0.37 )U/mgprot, P ＜ 0.05]. In addition, a significant increase of malondialdehyde ( MDA )in fluoride exposed group[(3.86 ± 0.31 )mnol/mgprot, P ＜ 0.05] was observed than the controls[(3.14 ± 0.32)nmol/mgprot, P ＜ 0.05]. GSH-Px activity of high Se-fluoride group[(74.99 ± 8.41 )U/mgprot] was significantly higher than the fluoride exposed group[(55.86 ± 5.09)U/mgprot, P ＜ 0.05] and its MDA level[(3.17 ± 0.20)nmol/mgprot] was lower than the fluoride exposed group[(3.86 ± 0.31 ) nmol/mgprot, P ＜ 0.05]. NF-κB expression levels of fluoride group, high selenium group and low Se-fluoride group(0.360 ± 0.015,0.367 ± 0.007,0.376 ± 0.006,respecyively) were obviously increased compared with the controls(0.312 ± 0.022, P ＜ 0.05); it was significantly lower in high Se-fluoride group(0.312 ± 0.005) than in fluoride exposed group(0.360 ± 0.015, P ＜ 0.05). Conclusions Na2SeO3 of 1.5 mg/L is the optimal dose against chronic fluorosis on kidney injury under this experimental condition.NF-κB is likely to be a target molecule of the selenium as an antagonist on fluorosis.     

过氧化物酶体增殖物激活受体α活化对急性心肌缺血性损伤的保护作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)活化对异丙肾上腺素(Iso)所致大鼠急性心.肌缺血性损伤的保护作用及作用机制.方法 健康纯系雄性Wistar大鼠30只,体质量160～180 g.将大鼠按体质量随机分为3组.每组10只:①对照组;②Iso损伤组,采用腹腔内注射Iso复制急性心肌缺血损伤的动物模型;③非诺贝特(FF)保护组,在预先给予FF的基础上复制Iso致急性心肌缺血损伤的动物模型.比色法测定大鼠血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性以及心肌组织中髓过氧化物酶(MPO)活性;Western blot法测定大鼠心肌组织中PPARα的蛋白表达水平.结果 大鼠血清CK活性:对照组、Iso损伤组、FF保护组分别为(62.41±9.47)、(101.71±11.05)、(75.64±11.73)kU/L,组问比较差异有统计学意义(F=34.34,P<0.01);Iso损伤组和FF保护组高于对照组(P<0.01或<0.05);FF保护组低于Iso损伤组(P<0.01).大鼠血清LDH活性:对照组、Iso损伤组、FF保护组分别为(5912.20±204.44)、(6365.78±137.10)、(6089.76±169.60)U/L,组间比较差异有统计学意义(F=17.54,P<0.01);Iso损伤组和FF保护组高于对照组(P<0.01或<0.05);FF保护组低于Iso损伤组(P<0.01).心肌组织中MPO活性:对照组、Iso损伤组、FF保护组分别为(1.95±0.10)、(3.89±0.17)、(2.49±0.19)U/g,组间比较差异有统计学意义(F=391.68,P<0.01);Iso损伤组和FF保护组高于对照组(P<0.01),FF保护组低于Iso损伤组(P<0.01).心肌组织中PPARα蛋白表达:对照组、Iso损伤组、FF保护组分别为251.57±10.95、191.97±10.74、215.08±9.61,组间比较差异有统计学意义(F=82.69,P<0.01):Iso损伤组和FF保护组低于对照组(P<0.01).FF保护组高于Iso损伤组(P<0.01).结论 PPARα被其配体FF活化后.对Iso所致大鼠急性心肌缺血性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制炎症因子的产生,减轻炎症反应有关.     

氟致体外培养人脐静脉血管内皮细胞损伤的实验观察

目的 观察不同剂量的氟对体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的影响.方法 在HUVEC培养液中加入不同剂量的氟化钠(NaF),分别为0(对照)100、400、700、1000、2000 μmol/L,每组设6个复孔,连续培养48 h,收集细胞培养液与细胞.瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,吖啶橙荧光染色测定细胞凋亡,四唑氮蓝(MT T)比色法检测细胞活性;分光光度法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性;RT-PCR法检测细胞iNOS mRNA和eNOS mRNA表达水平;双抗体夹心ELISA法检测细胞培养液中细胞黏附因子(ICAM-1)、血管黏附因子(VCAM-1)水平.结果 随染氟剂量增加,HUVEC细胞数量减少,结构改变;400～2000μmol/L NaF组SOD活性[(6.627±0.213)、(6.668±0.152)、(5.935±0.122)、(4.755±0.182)kU/L]较对照组[(7.457±0.398)kU/L]降低(P＜0.05或＜0.01),GSH-Px活性[(481.284±43.785)、(492.223±16.474)、(382.762±25.167)、(293.687±24.881)kU/L]较对照组[(585.078±47.323)kU/L]降低(P＜0.05或＜0.01),MDA水平[(0.609±0.011)、(0.646±0.016)、(0.852±0.013)、(1.188±0.045)nmol/L]较对照组[(0.512±0.027)nmol/L]升高(P＜0.05或＜0.01);iNOS活性[(3.604±0.115)、(3.615±0.075)、(3.848±0.103)、(4.275±0.079)kU/L]较对照组[(2.798±0.136)kU/L]增强(P均＜0.01),iNOS mRNA表达增强,eNOS活性[(5.539±0.079)、(5.503±0.064)、(5.226±0.142)、(4.809±0.107)kU/L]较对照组[(5.996±0.155)kU/L]减弱(P＜0.05或＜0.01),eNOSmRNA表达减弱;ICAM-1水平[(0.852±0.102)、(0.886±0.061)、(0.961±0.158)、(1.418±0.167)μg/L]较对照组[(0.687±0.046)μg/L]升高(P＜0.05或＜0.01),VCAM-1水平[(2.719±0.197)、(2.946±0.167)、(3.173±0.225)、(3.613±0.153)μg/L]较对照组[(2.375±0.067)μg/L]升高(P均＜0.01).结论 高剂量氟降低抗氧化酶活性,使一氧化氮代谢紊乱,细胞因子异常表达,以此抑制血管内皮细胞生长、结构改变并致细胞凋亡,为高氟致血管内皮损伤的重要因素.

Abstract：

Objective To study the effect of different concentrations of fluoride on cultured human umbilical vein vascular endothelial cells(HUVEC). Methods Different doses of sodium fluoride (NaF) were added to HUVEC culture medium, fluoride concentrations were 0(control), 100,400,700,1000,2000 μmol/L, respectively,6 re-set hole in each group. After continuous culture for 48 h, cells and culture medium were collected. Cell morphology was studied by Wright-Giemsa staining; cells apoptosis was determined by acridine orange fluorescence staining; cell activity was measured by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay; superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase(GSH-Px) activity, malonaldehyde(MDA) content, induced nitricoxide synthase(iNOS), and endothelia nitricoxide synthase(eNOS) activity in cell culture medium were determined by spectrophotometry; cell iNOS mRNA and eNOS mRNA expression were detected by RT-PCR; intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1)and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) levels were detected by double antibody sandwich ELISA method.Results With increased dose of fluoride, HUVEC cells decreased, the structure changed. In 400 - 2000 μmol/L group, the SOD activity[(6.627 ± 0.213), (6.668 ± 0.152), (5.935 ± 0.122), (4.755 ± 0.182)kU/L] was lower than those of the control group[(7.457 ± 0.398)kU/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], GSH-Px activity[(481.284 ± 43.785),(492.223 ± 16.474), (382.762 ± 25.167), (293.687 ± 24.881 )kU/L] was also lower than those of the control group [(585.078 ± 47.323)kU/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], MDA level[(0.609 ± 0.011 ), (0.646 ± 0.016), (0.852 ± 0.013),(1.188 ± 0.045)nmol/L] was higher than those of the control group[(0.512 ± 0.027)nmol/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01];iNOS activity[(3.604 ± 0.115), (3.615 ± 0.075), (3.848 ± 0.103), (4.275 ± 0.079)kU/L] also was higher than those of the control group[(2.798 ± 0. 136)kU/L, all P ＜ 0.01], iNOS mRNA expression increased, eNOS activity [(5.539 ± 0.079), (5.503 ± 0.064), (5.226 ± 0.142), (4.809 ± 0. 107)kU/L] decreased compared to those of control group[(5.996 ± 0.155)kU/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], eNOS mRNA expression decreased; ICAM-1 levels [(0.852 ± 0. 102), (0.886 ± 0.061 ), (0.961 ± 0.158), (1.418 ± 0. 167)μg/L] increased compared to those of the control group[(0.687 ± 0.046)μg/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], VCAM-1 levels[(2.719 ± 0.197), (2.946 ± 0.167),(3.173 ± 0.225 ), (3.613 ± 0. 153 ) μg/L] was higher than those of the control group [(2.375 ± 0.067 ) μg/L, all P ＜0.01]. Conclusions High concentrations of fluoride reduce the activity of antioxidant enzymes, which leads to metabolic disorders of nitric oxide and abnormal cytokines expression, thereby inhibiting vascular endothelial cell growth, structural change and induced apoptosis. This is an important factor in high fluoride-induced vascular endothelial injury.     

短期铁缺乏对大鼠甲状腺功能的影响

目的 研究短期铁缺乏对大鼠甲状腺功能的影响,并探讨其机制,为碘缺乏病的防治工作提供新的线索和思路.方法 选择健康SPF/VAF级初断乳SD雄性大鼠22只,按体质量随机分为对照组(饲料含铁量为65 mg/kg)和铁缺乏组(饲料含铁量为15 mg/kg),每组11只.喂养4周后,测定大鼠体质量和甲状腺质量,并计算甲状腺相对质量.取大鼠全血并分离血清,采用生化法检测血红蛋白、血清铁水平和总铁结合力;化学发光法检测血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺激素(TSH)水平.甲状腺常规固定包埋切片后,免疫组化染色观察甲状腺过氧化物酶(TPO)蛋白表达情况.结果 铁缺乏组大鼠体质量[(214.3±18.1)g]比对照组[(243.8±16.4)g]减轻(t=4.002,P＜0.01),甲状腺绝对质量[(11.9±1.6)mg]比对照组[(13.4±1.3)mg]降低(t=2.369,P＜0.01),但甲状腺相对质量[(0.055±0.004)g/kg]与对照组[(0.055±0.006)g/kg]比较未见明显变化(t=0.162,P＞0.05).铁缺乏组大鼠血红蛋白水平[(100.4±8.9)g/L]和血清铁水平[(7.0±0.8)μmol/L]比对照组[(146.5±16.3)g/L、(26.1±5.1)μmol/L]降低(t值分别为8.233、12.277,P均＜0.01),总铁结合力[(124.8±6.3)μmol/L]比对照组[(74.0±4.6)μmol/L]升高(t=21.531,P＜0.01).铁缺乏组大鼠血清FT3、FT4和FT3/FT4[(4.71±0.53)、(29.69±2.63)pmol/L、0.16±0.02]均较对照组[(5.69±0.61)、(31.98±2.49)pmol/L、0.18±0.01]降低(t值分别为4.044、2.096、3.255,P＜0.01或＜0.05).铁缺乏组大鼠TPO蛋白表达强度较对照组减弱.结论 铁缺乏可导致甲状腺功能低下,可能与铁缺乏状态下TPO活性降低有关,碘铁联合补充可能会改善铁缺乏地区碘缺乏病防治的效果.

Abstract：

Objective To explore the effect of short-term iron deficiency on thyroid function of rat and its mechanism, and to provide new clues and ideas for prevention and control of iodine deficiency disorders. Methods Twenty-two healthy SPF/VAF level weaning male SD rats were randomly divided into control group(iron content in diet was 65 mg/kg) and iron deficiency group(iron content in diet was 15 mg/kg) by body weight, and 11 in each group respectively. After 4 weeks feeding, body weight and thyroid glands weight were measured, and the relative weight of thyroid gland was calculated. Rat whole blood was collected and serum was separated. Hemoglobin, serum iron levels and total iron binding capacity were tested using biochemical assay;serum free iodine thyroid three original acid (FT3), free thyroxine (FT4) and thyroid stimulating hormone (TSH) levels were detected by chemiluminescence;after thyroid were fixed in formalin, embedded with paraffin and sectioned regularly, and immunohistochemical stained, the protein expression of thyroid peroxidase(TPO) was observed. Results Compared with control group [(243.8 ± 16.4)g], iron deficiency group of animals had less body weight[(214.3 ± 18.1 )g, t = 4.002, P ＜ 0.01];there was a lower absolute thyroid weight in iron deficiency group[(11.9 ± 1.6)mg]than in control group[(13.4 ±1.3)mg, t = 2.369, P ＜ 0.01], but no significant changes of the relative weight of thyroid gland between the two groups[(0.055 ± 0.004),(0.055 ± 0.006)g/kg, t = 0.162, P ＞ 0.05]. Hemoglobin and serum iron in iron deficiency group were ( 100.4 ± 8.9)g/L and (7.0 ± 0.8)μmol/L, which were less than that in control group[( 146.5 ±16.3)g/L, (26.1 ± 5.1 )μmol/L, t = 8.233,12.277, all P ＜ 0.01]. Total iron binding capacity in control group was (74.0 ± 4.6)μ mol/L and that in iron deficiency group[(124.8 ± 6.3)μmol/L], and the difference was significant (t = 21.531, P＜ 0.01). At the same time, their serum hormones FT3, FT4 and FT3/FT4[(4.71 ± 0.53), (29.69 ±2.63)pmol/L, 0.16 ± 0.02]were lower than that in control group[(5.69 ± 0.61),(31.98 ± 2.49)pmol/L, 0.18 ±0.01, t = 4.044,2.096,3.255, P ＜ 0.01 or ＜ 0.05]. The expression of TPO protein decreased in iron deficiency group than in control group. Conclusions Iron deficiency reduces thyroid function, which perhaps is due to the reduction of TPO activity. Combined supplementation of iodine and iron will possibly improve the prevention effect on iodine deficiency disorder in iron deficiency areas.     

慢性氟中毒大鼠脑组织细胞外调节蛋白激酶表达及大鼠学习记忆能力的变化

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导系统细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)的表达与活性,及其与学习记忆能力改变之间的关系,从而进一步探讨氟中毒神经系统损害的发病机制.方法 72只SD大鼠按性别和体质量随机分为3组.每组24只.对照组:自由饮用自来水,含氟量低于0.5 mg/L;低剂量染氟组:饮水含氟量为5.0 mg/L;高剂量染氟组:饮水含氟量为50.0 mg/L.实验6个月后.取大鼠脑组织,用蛋白印迹方法检测细胞外ERK1/2的蛋白表达与活性;用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)方法测定ERK1/2的mRNA水平;用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力改变.结果 对照组、低、高剂量染氟组的ERK1/2蛋白水平分别为0.94±0.10、1.25±0.02、1.95±0.07,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);对照组、低、高剂量染氟组的phospho-ERK1/2蛋白水平分别为0.73±0.08、0.77±0.07、1.28±0.11,任意两组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);低、高剂量染氟组的ERK1/2活化率[(68.4±3.8)%、(64.1±3.2)%]低于对照组[(82.3±10.7)%],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);在第2、3、5、6天,低剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期[(46.0±8.0)、(24.0±2.7)、(8.9±5.3)、(7.4±4.1)s]长于对照组[(39.3±6.9)、(19.1±9.1)、(8.3±3.4)、(4.8±2.7)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),高剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期[(36.9±16.8)、(37.7±12.9)、(19.7±7.6)、(12.2±5.7)s]也长于对照组(P＜0.05),第3、5、6天,高剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期长于低剂量染氟组(P＜0.05);低剂量组、高剂量染氟组的大鼠第1次穿越平台位置时间[(1.17±0.75),(4.18±1.10)s]长干对照组[(5.89±0.56)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),低、高剂量染氟组的大鼠在原平台所在象限逗留时间[(17.05±4.25)、(18.20±4.57)s]短于对照组[(25.37±5.65)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);大鼠脑组织中ERK1/2的活化率与空间探索实验第1次到达平台区域时间呈正相关(r=0.364,P＜0.05).与第6天定向航行实验找到平台时间呈正相关(r=0.497,P＜0.05).结论 慢性氟中毒导致大鼠脑组织中ERK1/2蛋白表达水平及活性改变,与慢性氟中毒大鼠学习记忆能力的降低有一定关系.