The dynamic balance of T-bet+VGATA-3+ and ROR-γt+ VFOXP3 + cells in rat liver allograft according to acute rejection severity

Objective To evaluate the dynamic balance of Th1, Th2, Th17 and iTreg cells in the process of acute rejection (AR) , orthotopic liver transplantation (OLT) was performed from LEW rats to BN rats. Methods OLT donated by male inbred LEW rats was performed on male inbred BN rats by Kamada' s two-cuff technique without liver arterial anastomosis, AR severity was graded using the Banff schema ,and the immunohistological method was applied to detect the expression of T-bet+, GATA-3+, RORγt+, and FOXP3+ cells in liver allografts. Results The number of T-bet+ cells (Control group: 19. 3±5. 1;Mild AR group: 63. 7±9. 7;Moderate AR group: 40. 9±13. 6;Severe AR group: 32. 3±3. 3) and RORγt + (Control group: 6. 5±1. 4;Mild AR group: 6.4±3. 1;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6±14. 1) was significantly increased in mild, moderate and severe AR groups as compared with control group (all P<0.01). The number of GATA-3+cells (Control group: 7. 1±1. 3;Mild AR group: 13. 5±4. 8;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6± 14. 1) showed no significant difference between mild AR group and control group (P>0. 05) , while it was significantly higher in moderate and severe AR group (P<0. 05 and P<0. 01). The number of FOXP3 + cells ( Control group;9.5±2.4;Mild AR group: 13. 5±4.8;Moderate AR group: 24.5 ±4.9;Severe AR group: 39.3±11.7) had no statistically significant difference (P>0. 05), but it was significantly decreased in moderate and severe AR group (all P<0.01). The ratio of T-bet + cells/GATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+ cells in the early stage. Conclusion There is dynamic change in T-het+,GATA-3+,RORγt+and FOXP3+cells in the liver allografts.The T-bet+,GATA-3,RORγt'and FOXP3+cells were involved in AR,and the ratio of T-bet+cell/sGATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+cells in the early stage.     

The dynamic balance of T-bet+VGATA-3+ and ROR-γt+ VFOXP3 + cells in rat liver allograft according to acute rejection severity

Objective To evaluate the dynamic balance of Th1, Th2, Th17 and iTreg cells in the process of acute rejection (AR) , orthotopic liver transplantation (OLT) was performed from LEW rats to BN rats. Methods OLT donated by male inbred LEW rats was performed on male inbred BN rats by Kamada' s two-cuff technique without liver arterial anastomosis, AR severity was graded using the Banff schema ,and the immunohistological method was applied to detect the expression of T-bet+, GATA-3+, RORγt+, and FOXP3+ cells in liver allografts. Results The number of T-bet+ cells (Control group: 19. 3±5. 1;Mild AR group: 63. 7±9. 7;Moderate AR group: 40. 9±13. 6;Severe AR group: 32. 3±3. 3) and RORγt + (Control group: 6. 5±1. 4;Mild AR group: 6.4±3. 1;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6±14. 1) was significantly increased in mild, moderate and severe AR groups as compared with control group (all P<0.01). The number of GATA-3+cells (Control group: 7. 1±1. 3;Mild AR group: 13. 5±4. 8;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6± 14. 1) showed no significant difference between mild AR group and control group (P>0. 05) , while it was significantly higher in moderate and severe AR group (P<0. 05 and P<0. 01). The number of FOXP3 + cells ( Control group;9.5±2.4;Mild AR group: 13. 5±4.8;Moderate AR group: 24.5 ±4.9;Severe AR group: 39.3±11.7) had no statistically significant difference (P>0. 05), but it was significantly decreased in moderate and severe AR group (all P<0.01). The ratio of T-bet + cells/GATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+ cells in the early stage. Conclusion There is dynamic change in T-het+,GATA-3+,RORγt+and FOXP3+cells in the liver allografts.The T-bet+,GATA-3,RORγt'and FOXP3+cells were involved in AR,and the ratio of T-bet+cell/sGATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+cells in the early stage.     

大鼠原位肝移植术后急性排斥反应中 Fractalkine的表达及意义

目的利用直视下套入式吻合肝动脉加袖套法吻合门静脉建立的大鼠全血供肝移植模型,研究同种异体大鼠肝移植术后早期急性排斥反应中Fractalkine（Fkn）的表达情况。方法制备SD-Wistar大鼠全血供肝移植模型,随机分为两组,每组20只。对照组：于移植术后第1天开始腹腔内注射生理盐水（3ml/kg）;实验组：于移植术后第1天开始腹腔内注射环孢素A（3mg/kg）。术后观察大鼠一般情况,并于第3、5及7天分别处死5只大鼠,取肝脏标本,观察移植肝组织排斥反应强度（rejection activity index,RAI）及Fkn表达情况;余大鼠观察生存时间。结果对照组存活18只,实验组存活19只。实验组较对照组术后一般情况好,存活时间为19.50±4.51d,与对照组7.60±1.60d比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。组织学观察：对照组移植肝小叶结构清楚,汇管区增大,大量淋巴细胞浸润;实验组移植肝组织RAI明显降低。术后第3、5及7天,对照组RAI为3.80±0.35、5.90±0.87及7.50±1.30,实验组为3.10±0.21、3.90±0.41及4.50±0.52。两组术后第7天RAI比较差异有统计学意义（P〈0.01）。免疫组织化学观察：两组移植肝组织中均见细胞浆或细胞膜有棕色颗粒的Fkn表达,但实验组表达较弱。术后第3、5及7天,对照组Fkn细胞数为8.20±0.57、21.30±3.30及25.70±4.91,实验组分别为8.30±0.56、10.30±0.67及11.70±1.23;两组第5、7天比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论Fkn参与了同种异体大鼠肝移植急性排斥反应,可作为诊断大鼠肝移植急性排斥反应发生的指标之一。环孢素A可以通过抑制Fkn表达来抑制排斥反应发生的强度。     

大鼠肝移植急性排斥反应中肿瘤坏死因子受体配体的表达及其意义

目的 观察肝移植排斥反应中移植肝脏内糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(GITRL)的表达.方法 采用Kamada's二袖套法建立从Lewis到Brown Norway(BN)大鼠的肝移植排斥模型为排斥组(n=5),从BN到BN的肝移植模型为耐受组(n=5).术后24h,抽取血液,取肝脏及分离库普弗(Kupffer)细胞,检测肝脏上GITRL及肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达,Kupffer细胞上GITRL的表达,检测血清及细胞上清液中TNF-α的表达.免疫组织化学染色强度采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件分析.结果 免疫耐受组和排斥组肝脏内的CITRL的平均染色强度分别为0.113±0.007和0.270±0.018(P＜0.05),TNF-α平均染色强度分别为0.114±0.004和0.141±0.005(P＜0.05),耐受组和排斥组的Kupffer细胞GITRL平均染色强度分别为0.206±0.017和0.337±0.018(P＜0.05),Kupffer细胞的培养上清液中,耐受组和排斥组TNF-α的值分别为(68.66±21.12)、(178.33±29.39)ng/L(P＜0.05).结论 在排斥的早期阶段肝脏及Kupffer细胞的GITRL表达增高,监测和干扰GITRL可能有益于肝移植急性排斥反应的早期诊断和处理.

Abstract：

Objective To investigate te changes of glucocorticoid induced tumor necrosis factor receptor ligand (GITRL) in hepatic allograft rejection. Methods Liver transplantation from Lewis rats (n = 5 ) to Brown Norway (BN) rats was performed by Kamada' s two-cuff technique as acute rejection group. Liver transplantation from BN to BN rats ( n = 5 ) was performed as tolerance group. Recipients were sacrificed at 24th h postoperation. Blood samples were collected and grafts were harvested, then Kupffer cells were isolated. GITRL and tumor necrosis factor (TNF)-α protein expression in the hver was tested by immunohistochemistry, and the GITRL expression in Kupffer cells by immunocytochemistry. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was employed to detect the changes of TNF-α protein in the serum and supernatant. The staining intensity was analyzed by Image-Pro Plus 6. 0 image analysis software. Results At 24th h postoperation, the liver GITRL expression levels in tolerance and rejection groups were 0. 113 ± 0. 007 and 0. 270 ±0. 018, respectively (P ＜0. 05). The TNF-α expression levels in the liver in tolerance and rejection groups were 0. 114 ± 0. 004 and 0. 141 ± 0. 005 respectively ( P ＜ 0.05 ). The GITRL expression levels in Kupffer cells in tolerance and rejection groups were 0. 206 ±0. 017 and 0. 337 ±0. 018 respectively (P ＜0. 05 ). As compared with tolerance group (68. 66 ±21.12) ng/L, TNF-α protein expression levels were up-regulated in the supernatant of rejection group ( 178.33 ± 29. 39 ) ng/L ( P ＜ 0. 05 ).Conclusion The expression of GITRL in the liver and Kupffer cells was increased in the early stage of rejection, and monitoring and interfering GITRL may be useful for the early diagnosis and management of an acute rejection in liver transplantation.     

胆汁白细胞介素6和干扰素γ基因表达在大鼠肝移植急性排斥反应诊断中的意义

目的　探讨肝移植术后急性排斥反应的早期诊断方法。方法　应用RT PCR技术检测大鼠肝移植术后胆汁中的IL 6和IFN γ基因表达 ,以组织病理学作为急性排斥反应的诊断标准 ,将肝移植大鼠分为急性排斥组 (Rt组 )和非急性排斥组 (Rf组 ) ,观察胆汁中IL 6和IFN γ基因表达与急性排斥反应的关系。结果　胆汁中IL 6基因表达在Rt组和Rf组无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而IFN γ基因表达在Rt组和Rf组有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　检测胆汁中IFN γ基因表达可能是早期诊断肝移植术后急性排斥反应的一个有效指标 ,而IL 6基因表达则无助于急性排斥反应的诊断。     

穿孔素mRNA表达与大鼠肝移植急性排斥反应的关系

目的 探讨大鼠肝脏移植术后外周血和胆汁中穿孔素mRNA表达水平与急性排斥反应的关系,寻求一种早期诊断急性排斥反应的非侵袭性方法.方法 建立大鼠原位肝移植模型及胆道引流模型,实验分为4组: 空白对照组(n=20),行单纯胆汁引流;同基因移植组(n=30);异基因移植+环孢素A(CsA)组(n=30);异基因移植组(n=30),术后未行免疫抑制剂治疗.应用RT-PCR方法分别检测各组术后第1、3、5、7和10天外周血和胆汁中穿孔素mRNA的表达水平,同时行肝脏病理组织学观察.结果 空白对照组、同基因移植组外周血中无穿孔素mRNA表达;异基因移植组外周血中穿孔素mRNA 在术后第3天开始表达,而后逐渐升高,术后第5天明显增高,术后第7～10天维持在较高水平.而异基因移植+CsA组外周血中穿孔素mRNA的表达持续呈低水平,各时间点表达与异基因移植组比较差异有统计学意义(P＜0.05).外周血穿孔素mRNA表达水平与Banff组织学诊断分级变化规律一致.各组胆汁中穿孔素mRNA表达均为阴性.结论 检测外周血中穿孔素mRNA表达可作为监测急性排斥反应较敏感的无创性方法.     

胆汁细胞学及细胞因子基因表达诊断大鼠肝移植急性排斥反应的实验研究

目的 为肝移植术后急性排斥反应寻找可靠而又无创作的诊断方法。方法 应用袖套技术建立大鼠原位肝移植模型。分为同种异体移植组,同基因移植组和免疫抑制组,依据病理学变化诊断肝移植术后急性排斥反应,光学显微镜定量胆汁细胞学检查,应用逆转录多聚酶链反应技术检测术后1、2、3、5、7d胆汁中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6基因表达。结果 同种异体移植组胆汁中细胞数持续升高,并出现淋巴母细胞和淋巴细胞,同种异体移植组检测到IL-2和IFN-γmRNA转录,其特异性分别为70%和67%（7/10和8/12）,敏感性分别为39%（7/18）和44%（8/18）,3组胆汁中均检测到IL-4、IL-6基因表达。结论 胆汁细胞学检查和细胞因子IL-2、IFNγ基因表达检测是急性排斥反应有效而又无创伤的辅助诊断方法。     

血管内皮生长因子在大鼠肝移植急性排斥反应时的表达

目的 研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在大鼠肝移植急性排斥反应(acute rejection reaction,ARR)中的表达水平,探讨VEGF在细胞介导的肝移植ARR时免疫炎症反应和血管新生的关键中介分子.方法 采用ELISA法及免疫组化EnVision法对VEGF在大鼠肝移植ARR时的表达及血浆中的水平进行了检测.结果 ELISA血清及免疫组化检测显示VEGF在急性排斥组被检测到的水平和表达均比在对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05),且以术后2天水平最高.结论 VEGF在移植排斥反应中起着重要作用,其表达水平和移植物存活时间有非常密切关系,并且它是一种早期就表达的作用因子.     

大鼠原位肝移植急性排斥反应模型的建立及技术改进

目的 建立大鼠原位肝脏移植的急性排斥模型并观察其排斥反应的特点.方法 选择近交系雄性DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,改良"二袖套"法建立肝移植模型48例,肝动脉重建采用"袖管式微血管缝合法"(microvascular sleeve anatomosis).受体随机分为两组,A组(非干预组,n=24):术后不用免疫抑制剂;B组(FK506处理组,n=24):术后每日用FKS06每日0.2 mg/kg体重灌胃.分别于术后3、5、7 d随机解剖受体大鼠6只,取材肝组织对移植肝进行病理学观察,同时静脉采血测定血清谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(Alb)和总胆红素(TBIL)浓度;每组各留6只观察其生存时间和死亡原因.结果 本方法建立模型的手术时间(包括供体手术)和重建动脉的时间明显缩短,手术成功率和肝动脉的通畅率均为100%.DA→Lewis组合的模型术后的血清生化指标、肝脏病理学改变、生存情况均符合肝移植急性排斥的特点,排斥反应于术后3～5 d出现,并逐渐增强,术后7 d迅速达到高峰并维持;该模型可以为抗排斥药物FKS06预防而达到长期存活.A、B两组中位生存时间分别为14、73 d;A、B两组的累积生存率曲线差异有统计学意义(Log-Rank取值为11.78,P《0.01).结论 .DA到Lewis大鼠品系组合可以建立稳定可靠的肝移植急性排斥模型;该模型具有研究周期短、病理改变典型、可重复性好等优点.     

MHC-Ⅱ类分子反式激活因子基因沉默对大鼠肝移植急性排斥反应的抑制作用

组织化学检测MHC-Ⅱ抗原表达水平,其余受体观察生存期.结果 NS组、对照组和shRNA组大鼠肝移植术后平均生存期分别为7.75、7.25和15.75 d,shRNA组大鼠生存期明显延长(P＜0.01);shRNA组大鼠的排斥反应病理分级明显减低(P＜0.01),CⅡTA和MHC-Ⅱ的mRNA表达水平及MHC-Ⅱ抗原表达水平均显著降低(P＜0.01).结论 沉默供体肝脏CⅡTA基因表达可以有效减轻大鼠肝移植急性排斥反应,其机制可能与干预免疫识别有关.     

CD4+CD25+T细胞联合CD154单抗抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

目的探讨CD4 CD25 T细胞联合应用CD154单抗在抑制大鼠肝移植急性排斥反应中的作用。方法分离Lewis大鼠脾脏CD4 _CD25 T细胞后与DA大鼠脾细胞单向混合淋巴细胞反应行体外激活。用"二袖套法"行DA到Lewis的原位肝移植48例。A组为对照组;B、C组单独术前回输体外激活的CD4 CD25 T细胞或术后腹腔注射抗CD154单抗;D组联合应用CD4 CD25 T细胞和CD154单抗。每组大鼠12对。术后7 d各组处死6只受体,检测移植肝内T细胞亚群和细胞因子水平。余大鼠观察生存情况,死亡大鼠观察移植肝病理变化。结果D组受体生存期(52.00±10.64)d明显长于B、C组(P<0.01);移植肝内CD4 CD25 T细胞比例(16.43±4.28)%明显高于B、C组(P<0.05、P<0.01),而淋巴细胞浸润数量[(3.47±1.21)%×106]和(CD8 T细胞百分比(14.19±3.02)%明显低于B、C组(P<0.05、P<0.01);移植肝内白细胞介素- 2(IL-2)水平(6.44±1.83)ng/L低于B、C组(P<0.05),IL-10(43.72±7.55)ng/L和转化生长因子-β1(TGF-β1)(270.06±46.91)ng/L明显高于B、C组(P<0.05、P<0.01)。结论联合应用CD154单抗能明显增强CD4 CD25 调节性T细胞对大鼠肝移植急性排斥反应的抑制作用。     

肝移植急性排斥反应的细胞及分子免疫学研究进展

目前，肝移植已经成为治疗各种终末期肝病的有效措施，而急性排斥反应（AR）则是肝移植术后最常见的并发症之一，其组织病理学表现主要是：汇管区混合炎症细胞浸润、胆管炎和血管内皮炎。肝移植后AR是一种以细胞免疫为主、体液免疫为辅的特异性免疫反应，但肝脏由于其自身解剖和生理学因素以及一些非实质细胞的影响，使其在发生AR时具有与其他移植器官不同的特点。     

大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素及白细胞介素10的表达及意义

目的 探讨大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素10(IL-10)的表达及意义.方法 采用改良的Kamada"二袖套法"制备大鼠原位肝移植模型,同系移植组供、受者均为SD大鼠;同种异体移植组的供者为Wistar大鼠,受者为SD大鼠;另设假手术组.术后7 d处死动物,观察移植肝脏的组织学变化,检测血清IFN-γ和IL-10的含量,以及移植肝脏内IFN-γ和IL-10 mRNA的表达.结果 同种异体移植组移植肝脏有较多坏死肝细胞,汇管区及中央静脉周围可见以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,胆管上皮细胞可见胞浆空泡变性、核固缩或碎裂,整个肝小叶结构紊乱.同系移植组肝脏组织结构仅有轻度缺血再灌注损伤表现,汇管区有较少炎症细胞浸润,胆管上皮细胞结构和肝小叶结构基本正常.同种异体移植组血清IFN-γ为(386.7±14.4)Pg/ml,明显高于同系移植组的(159.8±16.5)pg/ml(P<0.05);同种异体移植组血清IL-10为(126.3±13.1)pg/ml,明显低于同系移植组的(288.3±17.1)pg/ml(P<0.05).同种异体移植组移植肝组织内IF-γ mRNA表达水平明显高于同系移植组(P<0.05),而IL-10 rnRNA表达水平明显低于同系移植组(P<0.05).结论 大鼠肝移植排斥反应时IFN-γ表达明显升高,IL-10表达明显降低;T_H1/T_H2型细胞因子的动态平衡可能在大鼠肝移植排斥反应中起着重要作用.     

大鼠肝移植急性排斥反应的淋巴细胞蛋白质组学研究

目的 利用差异蛋白质学寻找肝移植急性免疫排斥反应相关功能蛋白.方法 选取SD大鼠与Wistar大鼠,建立大鼠同种异体肝移植的动物模型(急性排斥组)和大鼠同基因移植的动物模型(对照组);使用组织化学方法 对移植肝脏进行形态学观察;利用ELISA检测受体血清细胞因子;通过双向凝胶电泳分离急性排斥组和对照组肝移植后受体大鼠脾脏的淋巴细胞蛋白质,通过软件比较两组蛋白质的质纹图谱,进行差异点分析;选取差异点用基质辅助激光解析-飞行时间质谱进行蛋白鉴定;选取部分鉴定蛋白通过Western blot法进行检测,验证蛋白质组学的分析结果 .结果 ELISA检测结果 表明,移植术后3 d同种异体肝移植大鼠血清中IL-2和IFN-γ的表达上调;急性排斥组肝组织HE染色切片证实均有Ⅱ a～Ⅱ b级(Banff标准)排斥反应表现;差异蛋白质组学分析共鉴定出25个淋巴细胞蛋白质在急性排斥反应中的表达量发生了改变,其中13个蛋白点表达上调,12个蛋白点表达下调;Western blot法验证结果 显示,其中的2个相关蛋白(β-actin和碳酸酐酶)在急性排斥反应中的表达量变化与差异蛋白质组学分析结果 一致.结论 本实验筛选出25个大鼠肝移植急性排斥反应的相关功能蛋白,其中的β-actin和碳酸酐酶在排斥反应中有重要功能,为进一步系统研究这一免疫学现象奠定了基础.     

B细胞介导的体液免疫应答在肝移植急性排斥反应中的作用

目前,国内外肝移植学界对肝移植术后急性排斥反应(AR)的机制阐释为T细胞介导的细胞免疫应答,但为获得长期生存仍需长期乃至终身服用免疫抑制剂。即使如此,临床上AR仍时有发生,并导致相当一部分受者移植肝功能丧失,更重要的是受者术后还受到感染、肿瘤和其他一系列不良反应及沉重经济负担的影响。因此,为肝移植AR机制提出新的理论解释,更全面深入阐明肝移植免疫排斥反应的内在机制,进而依据新的机制研制出新型免疫抑制剂已势在必行。本文就B细胞介导的体液免疫应答在肝移植AR中的作用作一综述。     

TNF-α和IL-2在肝移植急性排斥反应中的表达及意义

目的 检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)在肝移植术后急性排斥反应中的表达情况,以评价其作为肝移植术后急性排斥反应早期诊断指标的价值.方法 建立大鼠原位肝移植模型,应用荧光定量PCR法检测大鼠肝移植术后肝组织中TNF-α和IL-2基因的表达,以组织病理学作为急性排斥反应的诊断标准,研究其表达与急性排斥反应的关系.结果 术后3,5,7d异基因肝移植大鼠移植肝均有急性排斥反应发生.其肝组织TNF-α及IL-2表达水平均显著高于同期同基因肝移植大鼠肝组织的TNF-α,IL-2表达水平.结论 TNF-α和IL-2参与肝移植后排斥反应的发生,其表达可作为术后急性排斥反应的辅助诊断指标.     

FcγRIIb基因修饰树突状细胞对大鼠原位肝移植排斥反应的影响

目的:研究FcγRIIb基因修饰树突状细胞对大鼠原位肝移植术后肝功能及病理排斥反应的影响。方法:利用基因克隆技术构建含Lewis大鼠FcγRIIb基因的重组慢病毒表达载体TRE-FcγRIIb。分别包装TRE-FcγRIIb表达病毒与TET-on可诱导病毒,用其共感染DA大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞并检测FcγRIIb...     

CD4+T细胞ATP含量与肝移植后急性排斥反应的关系

目的 探讨CD4+T细胞ATP含量与肝移植术后围手术期急性排斥反应(acute rejection,AR)的关系.方法 以2009年2月至2009年10月在本院行肝移植术的77例病人为研究对象.肝移植病人术前以及术后1、2、4周各采集1份全血标本,发生AR当日和激素冲击治疗后1周各采集1份全血标本.每次均送检1～2份健康志愿者全血标本作为对照.用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测样本中CD4+T细胞ATP值.结果 AR组病人ATP值在术后第1周达到高峰,显著高于同期非排斥组.术后第1周的高ATP值对诊断肝移植术后围手术期AR具有较好的敏感度和特异度.AR组病人排斥当日的ATP值与排斥活动指数(RAI)呈显著正相关,经激素冲击治疗1周后,AR均达到逆转,ATP值明显降低.结论 肝移植术后围手术期,CD4+T细胞ATP值动态变化与移植肝急性排斥反应密切相关,有望成为诊断和预防围手术期AR发生以及抗排斥治疗效果的无创监测指标.     

肝移植患者外周血辅助性T 17细胞的变化及意义

目的探讨肝移植术后患者外周血辅助性T(Th)17细胞(CD4+IL-17+T淋巴细胞)与急性排斥反应的关系。方法本文研究对象为2008年6月至2012年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院肝胆胰脾外科因良性终末期肝病行原位肝移植术的76例患者。根据患者术后有否发生急性排斥反应,分为排斥组(17例)和非排斥组(59例)。所有患者均按常规定期随访。记录患者排斥反应发生情况及治疗经过。排斥组患者发生急性排斥反应时给予肝穿刺活组织检查确定排斥反应严重程度。所有患者分别于肝移植术前、出院后1年内定期(间隔3~6个月)、或急性排斥反应治疗前和缓解后(3~6个月),检测外周血CD4+IL-17+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分比(CD4+IL-17+T%)。比较两组患者各时间点的CD4+IL-17+T%。分析CD4+IL-17+T%与排斥活动指数(RAI)、免疫抑制剂血药浓度的相关性。结果急性排斥反应发生在术后0.7~12.0个月,中位数2.5个月。肝移植术后,与非排斥组比较,排斥组患者CD4+IL-17+T%明显升高[(1.79±0.44)%比(2.56±0.43)%,P0.001]。排斥组患者发生急性排斥反应时,CD4+IL-17+T%均较未发生急性排斥反应时明显升高[(2.56±0.43)%比(1.50±0.25)%,P0.001)]。非排斥组患者不同时间点的CD4+IL-17+T%变化不明显(P0.05)。排斥组患者发生急性排斥反应时的CD4+IL-17+T%与RAI呈正相关(r=0.72,P=0.001)。排斥组和非排斥组患者他克莫司、环孢素血药浓度与CD4+IL-17+T%无明显相关性(r=0.21,-0.13;均为P0.05)。结论外周血CD4+IL-17+T%可作为诊断和评估肝移植术后急性排斥反应严重程度的监测指标,外周血CD4+IL-17+T%升高提示急性排斥反应严重。     

小剂量环孢素A和骨化三醇联用预防大鼠原位肝移植后急性排斥反应的效果

目的　探讨小剂量环孢素A(CsA)和骨化三醇 [1,2 5 (OH) 2 D3 ]对预防原位肝移植后急性排斥反应的协同效应。方法　以SD大鼠和Wistar大鼠分别作为供者和受者 ,采用Kamada方法建立大鼠原位肝移植模型。受者随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。Ⅰ组为对照组 ;Ⅱ组和Ⅲ组移植后分别接受全剂量CsA和全剂量骨化三醇治疗 ;Ⅳ组移植后接受小剂量CsA和骨化三醇联合治疗。观察移植后生存期及移植后 5、7、12d肝组织病理学变化和IFN γmRNA表达水平等指标。结果　Ⅳ组 5 / 6受者长期存活 ,生存期较Ⅰ组显著延长 (P <0 .0 5 ) ;与Ⅱ组或Ⅲ组比较 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。Ⅳ组移植后各时点排斥反应平均病理学分级分别为 0 .6 7,1和 0 .6 7级 ,较Ⅰ组减低 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;与Ⅱ组或Ⅲ组比较 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。Ⅳ组肝组织IFN γmRNA表达处于低水平 ,较Ⅰ组明显受抑制 (P <0 .0 5 ) ;与Ⅱ组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;与Ⅲ组比较 ,除移植后 7d外 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　原位肝移植后小剂量环孢素A和骨化三醇联用 ,可以有效预防急性排斥反应 ,延长受者生存期。两者具有明显的正协同作用。