泛耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵adeB基因表达及耐药性研究

目的：探讨细菌主动外排泵adeB基因在临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离泛耐药鲍曼不动杆菌经外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)处理前后对抗生素最小抑菌浓度(MIC)变化,以聚合酶链反应(PCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外排泵基因adeB及其表达水平。结果50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株加入CCCP后,MIC值小于原值的1/4或1/4以下的四环素42株(84％)、氧氟沙星45株(90％)、亚胺培南45株(90％)、头孢噻肟50株(100％)、庆大霉素50株(100％)。50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株和4株敏感菌株均检测到adeB基因,但泛耐药株表达水平明显高于敏感株(P<0.01)。结论泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵adeB基因高表达密切相关。     

多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性及AdeABC外排泵作用研究

目的了解我院多重耐药鲍曼不动杆菌(MRAB)耐药性及AdeABC外排泵在耐药中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离20株MRAB对10种抗菌药物的最低抑菌浓度(MICs)。PCR、RT-PCR分别检测adeB外排泵基因阳性率和表达水平。结果 20株MRAB,对阿米卡星、环丙沙星、哌拉西林、头孢哌酮MIC均较高,但对多黏菌素B均敏感。PCR扩增adeB基因均阳性,RT-PCR显示MRAB中adeB基因的表达量是敏感株的7.27～19.34倍。结论 AdeABC外排泵过表达是造成鲍曼不动杆菌多重耐药的一个重要原因。     

鲍曼不动杆菌耐药性监测与外排泵adeB基因表达水平检测

目的 探讨鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性以及外排泵adeB基因的表达情况.方法 琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC)、聚合酶链反应(PCR)扩增adeB基因,逆转录PCR(rt-PCR)检测adeB基因的mRNA表达水平.结果 药敏试验结果显示,60株鲍曼不动杆菌对哌拉西林耐药率最高(92.3%),对亚胺培南耐药率最低...     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白与外排泵基因adeB分析

目的了解耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中外膜蛋白表达以及外排泵基因adeB的分布情况。方法收集该院2008年9月至2010年12月亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌65株,采用PCR方法扩增外膜蛋白CarO编码基因及外排泵adeB基因;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析耐药菌与敏感菌外膜蛋白表达的差异。结果 65株菌均检出CarO编码基因与adeB基因,其中2株菌CarO编码基因上游存在ISAba1插入序列。SDS-PAGE显示,耐药菌株与敏感菌株在外膜蛋白上存在主要有大约24×103蛋白的缺失和48×103蛋白的高表达。结论外膜蛋白CarO和adeB基因在亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中广泛存在,adeB基因的高表达以及外膜蛋白表达的差异是鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药的重要机制。     

多药耐药鲍曼不动杆菌抗菌剂外排泵基因研究

目的 了解多药耐药鲍曼不动杆菌(MDR-ABA)抗菌剂外排泵基因存在状况与细菌耐药关系.方法 采用PCR方法检测4种抗菌剂外排泵基因(adeB、mdfA、qacE△1、tehA),PCR阳性产物采用PCR直接全自动荧光法测序.结果 20株MDR-ABA有18株检出同时携带adeB、mdfA、qacE△1基因,阳性率为9...     

多重耐药鲍曼不动杆菌临床株的主动外排泵编码基因检测及分析

目的：探讨多重耐药鲍曼不动杆菌的主动外排泵及相关编码基因携带情况。方法：采用纸片扩散法检测23株鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药情况,应用琼脂稀释法测定加入外排泵抑制剂（奥美拉唑、利血平和氰氯苯腙）后环丙沙星对多重耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度,检测多重耐药鲍曼不动杆菌外排表型,应用PCR和DNA测序技术检测主动外排泵的编码基因。结果：23株鲍曼不动杆菌中,对3种或以上抗菌药耐药有22株。22株多重耐药鲍曼不动杆菌中,经氰氯苯腙、奥美拉唑、利血平筛选,外排表型阳性16株（73%）,PCR阳性16株（73%）,其中11株为经氰氯苯腙筛选的阳性菌株,经测序分析,扩增片段证实为主动外排泵编码adeB基因。氰氯苯腙、奥美拉唑、利血平的筛选阳性率分别为73%（16/22）、18%（4/22）、9%（2/22）。结论：主动外排机制可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因,其基因型主要为AdeB型。氰氯苯腙、利血平和奥美拉唑对鲍曼不动杆菌主动外排泵均有抑制作用,氰氯苯腙更适合作为筛选鲍曼不动杆菌主动外排泵的抑制剂。     

鲍曼不动杆菌 adeB 基因检测及外排泵抑制剂对其药物敏感性的影响

目的：了解该院临床分离的鲍曼不动杆菌外排泵基因 adeB 表达情况。探讨外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙（CCCP）对鲍曼不动杆菌药物敏感性的影响。方法收集、分离及鉴定鲍曼不动杆菌68株,应用聚合酶链反应方法对外排泵基因 adeB进行检测,采用琼脂稀释法检测加入 CCCP 前后 adeB 阳性鲍曼不动杆菌对头孢曲松、环丙沙星、亚胺培南、阿米卡星和阿奇霉素敏感性的变化。结果68株鲍曼不动杆菌中,其中有57株 adeB 基因阳性,阳性率为83．8％,且 adeB 阳性组的耐药率和50％最低抑菌浓度均高于 adeB 阴性组。在 CCCP 干预实验中,利用上述5种抗菌药物为底物,57株 adeB 阳性鲍曼不动杆菌中,分别有31、34、38、35和30株在10μg ／mL CCCP 条件下最低抑菌浓度值降低4倍或4倍以上。结论外排泵基因 adeB 广泛存在于临床分离鲍曼不动杆菌中,外排泵过度表达与细菌多重耐药机制关系密切,CCCP 干预能恢复细菌对抗菌药物的敏感性。     

肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析

目的分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。用PCR法检测鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和主动外排泵基因,包括A类β-内酰胺酶(bla_TEM、bla_PER和bla_CARB)、B类β-内酰胺酶(bla_IMP和bla_VIM)、C类β-内酰胺酶(bla_ADC和bla_DHA)、D类β-内酰胺酶(bla_OXA-23、bla_OXA-24、bla_OXA-51和bla_OXA-58)和主动外排泵相关基因(adeB、adeJ、macB、emrB、emrA、abeS、abeM和craA)。以微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)前后,携带adeB基因鲍曼不动杆菌对亚...     

多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药机制研究

目的探讨多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)对替加环素敏感性降低的机制,为院内感染控制及临床合理用药提供理论依据。方法应用微量肉汤稀释法检测30株临床分离的非重复性MDRAB对替加环素的耐药性及应用外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)处理前后对替加环素的最低抑菌浓度(MIC);采用PCR技术扩增外排泵基因AdeABC、AdeFGH、AdeJ、AdeE、AbeM基因及外排泵调控基因AdeRS。结果 30株多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的MIC值范围为0.25~8.00μg/L。其中替加环素敏感鲍曼不动杆菌(TSAB)共27株(90%),替加环素非敏感鲍曼不动杆菌(TNAB)共3株(10%);加入20μg/ml CCCP外排泵抑制剂进行处理,发现TNAB组菌株MIC值均下降≥4倍,为外排泵阳性菌株;PCR扩增外排泵基因:不敏感组(TNAB)菌株除ade E基因外均为阳性,敏感组(TSAB)中AdeA、AdeB、AdeC、AdeR基因检出率均为90%,Ade S基因检出率93.3%,AdeF、AdeG、AdeH基因检出率83.3%。所有菌株ade J和Abe M均为阳性,未发现ade E基因。结论外排泵系统Ade ABC和Ade FGH可能在多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性下降机制中起重要作用,而外排泵系统AdeIJK和AbeM可能与多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素耐药无关。     

老年科鲍曼不动杆菌耐药性及外排泵基因研究

目的 观察老年科临床分离鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的敏感性及外排泵基因携带情况,为医院感染防控和临床合理用药提供理论依据。方法 收集老年科临床分离的非重复鲍曼不动杆菌85株,采用纸片扩散法检测其对临床常用的15种抗菌药物的敏感性,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测adeB、adeG和adeJ基因的携带情况。结果 鲍曼不动杆菌对多黏菌素B的敏感率为100.0%,对米诺环素(29.4%)、头孢哌酮-舒巴坦(35.3%)、阿米卡星(38.8%)和庆大霉素(41.2%)的耐药率较低,对其他检测药物的耐药率均超过50.0%,其中多重耐药菌为49株(占57.6%)。PCR结果显示,多重耐药鲍曼不动杆菌adeB、adeG和adeJ外排泵基因的阳性率分别为73.5%、77.6%和71.4%,高于非多重耐药鲍曼不动杆菌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 老年科鲍曼不动杆菌耐药形势较严峻,其多重耐药与携带adeB、adeG和adeJ基因相关。     

多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵基因和外膜蛋白基因的检测

摘要：目的：了解鲍曼不动杆菌主动外排系统和外膜蛋白基因的表达情况,探讨其在介导细菌多重耐药中的作用。 方法：K-B法和琼脂二倍稀释法检测100株鲍曼不动杆菌临床分离株的药物敏感性;PCR扩增adeB、adeJ、carO基因;实时荧光定量PCR检测外排泵AdeABC、AdeIJK的mRNA表达水平。 结果：100株中有75株多重耐药株,对米诺环素和多黏菌素B的耐药率分别为60.0%和0%;多重耐药组与敏感组adeB基因阳性率分别为82.7%（62/75）和44.0%（11/25）,carO基因阳性率分别为98.7%(74/75)和40.0%(10/25),差异均有统计学意义（χ²分别为14.223和48.016,P均<0.05）。敏感和多重耐药两组间adeB基因相对表达量差异有统计学意义（t=4.209,P<0.01）,而两组间adeJ基因相对表达量结果无显著性差异。 结论：鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药情况严重;adeB基因在多重耐药及部分敏感株中表达量明显增加;AdeABC主动外排系统在鲍曼不动杆菌多重耐药性的形成中具有一定的作用。     

鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶和RND外排泵相关耐药基因的研究

目的分析鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶和RND外排泵基因的携带情况,并进一步探讨外排泵过表达与菌株耐药性形成的关系。方法采用PCR技术扩增分离鲍曼不动杆菌的B类金属酶(blaNDM-1、blaVIM、blaIMP)、D类苯唑西林酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51、blaOXA-58)以及RND外排泵基因(adeB、adeJ、adeG),再采用qPCR对6株多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)和4株非多重耐药鲍曼不动杆菌(NMDRAB)菌株的adeB、adeJ和adeG水平进行检测。结果 71株MDRAB中blaNDM-1(26.8%,19/71)、blaIMP(88.7%,63/71)和blaOXA-23(84.5%,60/71)的检出率明显高于30株NMDRAB中blaNDM-1(0.0%,0/30)、blaIMP(0.0%,0/30)和blaOXA-23(10.0%,3/30)的检出率,差异均有统计学意义(P0.05)。blaOXA-51的检出率为100.0%,未检测到blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58。71株MDRAB中adeB(98.6%,70/71)和adeG(100.0%,71/71)的检出率显著高于30株NMDRAB中adeB(20.0%,6/30)和adeG(90.0%,27/30)的检出率,差异均有统计学意义(P0.05);adeJ的检出率为100.0%;同时MDRAB菌株的adeB和adeG基因表达量明显高于NMDRAB菌株(P0.05)。结论碳青霉烯酶基因NDM-1、IMP和OXA-23和外排泵adeABC、adeFGH的高表达与鲍曼不动杆菌多重耐药的形成关系密切。     

鲍曼不动杆菌主动外排系统adeR基因分布及耐药性分析

目的通过检测外排泵基因adeR在鲍曼不动杆菌中的分布及对临床常用抗菌药物的药敏情况,初步探讨外排泵对鲍曼不动杆菌耐药性的影响。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测84株鲍曼不动杆菌外排泵基因adeR的分布情况,并根据PCR结果将菌株分为adeR基因阳性组和adeR基因阴性组,比较两组鲍曼不动杆菌对阿米卡星、头孢吡肟、左氧氟沙星和亚胺培南的耐药率。结果 PCR结果显示,收集的鲍曼不动杆菌adeR基因阳性率为70.24%(59/84);adeR基因阳性组对阿米卡星、头孢吡肟、左氧氟沙星和亚胺培南的耐药率分别为83.93%、90.74%、84.75%和67.80%;adeR基因阴性组对各抗菌药物的耐药率分别为58.33%、73.91%、56.00%和44.00%;两组间耐药率比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论外排泵基因adeR在该地区鲍曼不动杆菌中的检出率较高,与临床常用抗菌药物耐药情况高度相关,提示外排系统是该地区鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因之一。     

鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制研究

目的探讨鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法收集我院2006年5月—2007年2月不同患者痰培养标本中分离的鲍曼不动杆菌80株,剔除重复菌株用肉汤稀释法测定菌株在环丙沙星、含有不同浓度羟基氰氯苯胺(CCCP)的环丙沙星、亚胺培南-西司他丁的MIC。PCR扩增gyrA基因和parC基因并进行酶切分析,选取部分PCR扩增产物进行测序鉴定。荧光定量PCR方法检测环丙沙星敏感株与耐药株的adeBmRNA表达的相对定量。结果鲍曼不动杆菌对环丙沙星的敏感率为15%,随加入CCCP的浓度增高而增加,并接近亚胺培南的敏感率。PCR限制性片段长度多态性(RFLP)分析显示,58株耐药菌中39株gyrA基因不能被Hinf I酶切,23株praC基因不能被Hinf I酶切,敏感株均能被Hinf I酶切,耐药株中的gyrA和parC基因存在突变。环丙沙星耐药菌株的adeBmRNA表达量明显高于敏感菌株。结论鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物耐药除了与gyrA、praC基因突变有关外,还与主动外排泵基因adeBmRNA过表达有关。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素膜蛋白机制研究

目的研究膜蛋白在鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素中的作用。方法采用琼脂纸片扩散法(K-B法)及琼脂稀释法从84株广泛耐药鲍曼不动杆菌中筛选出8株仅对多黏菌素敏感、1株全敏感临床株。采用PAβN外排泵抑制试验检测其外排泵表型。超声破碎法提取鲍曼不动杆菌外膜蛋白,双向电泳技术比较鲍曼不动杆菌耐药株及敏感株膜蛋白表达谱,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上蛋白质数据库进行检索和质谱鉴定分析。结果 PAβN抑制试验显示受试8株菌中4株亚胺培南MIC值下降≤原值的1/4,而美罗培南MIC值下降至1/4及以下。耐药菌株和敏感菌株差异膜蛋白组学鉴定出(CarO、OmpA和推测分子量为41 ku外排泵膜蛋白。结论本次试验中膜孔蛋白CarO表达缺失可能参与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药,外排泵过度表达可能参与细菌对美罗培南的耐药。     

耐药结节细胞分化超家族介导鲍曼不动杆菌替加环素耐药机制研究

目的分析耐药结节细胞分化超家族(RND)外排泵介导多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)对替加环素敏感性降低的机制。方法收集20152018年哈尔滨医科大学附属第四医院替加环素不敏感的鲍曼不动杆菌21株及MDR-AB替加环素敏感株39株。以微量肉汤稀释法为标准方法,以替加环素不敏感菌株[最小抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL]为实验组,替加环素敏感菌株(MIC≤1μg/mL)为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)检测鲍曼不动杆菌替加环素敏感性降低相关的RND基因adeB、adeG和adeJ,及其上游调控基因adeS、baeR和baeS,并对adeS扩增产物进行测序,查找插入序列。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测实验组和对照组外排泵adeABC、adeFGH、adeIJK、adeRS和baeRS的转录水平并进行比较。结果微量肉汤稀释法确证有12株MDR-AB为替加环素不敏感株,与替加环素敏感性降低相关的RND基因检出率为100%,且在2株菌株中发现了adeS的ISAbaⅠ插入序列。实验组有3株菌株adeABC表达较对照组明显升高,分别为标准菌株鲍曼不动杆菌(ATCC 19606)的3.3、3.5和2.7倍;有1株菌株adeFGH表达量升高明显;adeIJK、adeRS和baeRS表达量在部分菌株中稍有上调。结论RND外排泵介导的MDR-AB对替加环素敏感性降低与adeABC和adeFGH高表达密切相关,adeABC高表达可能与其上游调控基因adeS中存在ISAbal插入突变有关,但不排除其他替加环素耐药机制的存在。     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制研究

目的研究对氨基糖苷类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌分子流行病学特征和耐药机制。方法采用琼脂稀释法检测抗菌药物对鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC),采用肠杆菌科基因间重复一致性序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)研究耐药菌株的分子流行病学特征,采用特异性PCR、序列分析和接合试验研究介导耐药的分子机制。结果临床分离菌株对包括氨基糖苷类抗菌药物在内的多种药物广泛耐药,同源性分析显示属于7个流行克隆型。所有分离菌株均扩增出介导氨基糖苷类抗菌药物耐药的修饰酶和药物"外排泵"基因,部分菌株扩增出甲基化酶基因。结论修饰酶和甲基化酶介导鲍曼不动杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物耐药,药物"外排泵"参与介导耐药机制形成,垂直传播和通过耐药性质粒的水平传递可能是耐药菌株播散的主要方式。     

多重耐药鲍曼不动杆菌AdeABC外排泵的作用机制研究

目的探讨临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌AdeABC型主动外排系统在耐药性产生中的作用,为研制有效抗菌药物及指导临床合理用药提供科学依据。方法对临床分离的鲍曼不动杆菌进行耐药性检测后收集多重耐药菌株,监测AdeABC型主动外排系统的表达及使用泵抑制剂后的耐药情况。结果多重耐药鲍曼不动杆菌AdeABC外排系统表达增强,而使用泵抑制剂后其表达水平下降,耐药性降低。结论 AdeABC外排泵表达增强是鲍曼不动杆菌产生耐药性的重要机制。     

鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的存在类型。方法用美国BD公司Phoenix-100型全自动细菌鉴定药敏系统鉴定细菌及做药敏试验,用聚合酶链反应（PCR）方法检测5种常见β-内酰胺酶耐药基因。采用随机引物PCR扩增对菌株进行分型。结果 50株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感,,而对其余18种抗生素耐药率为52%-100%,其中24株为泛耐药菌株,共分为8种基因型,B型菌株为主要的流行株,所有菌株均检出TEM-1基因,46株检出AmpC基因,31株检出0XA-24基因、21株检出0XA-23基因,7株检出IMP基因。结论临床分离的鲍曼不动杆菌主要以引起危重病人的呼吸道感染为主,对18种临床常用抗生素耐药率高,对头孢菌素类高度耐药并且存在克隆传播,同时携带多种耐药基因是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺酶类抗菌药物耐药的主要原因。     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌临床分离株的流行病学与耐药机制研究

目的了解耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌流行病学情况以及耐药机制,帮助临床合理使用抗菌药物,为控制医院感染提供依据。方法收集耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌110株及敏感株6株,进行来源病区和标本种类的统计分析;应用重复序列聚合酶链反应(REP-PCR)进行基因型分型;使用PCR检测β-内酰胺酶基因(OXA、IMP、VIM等)及外排泵编码基因(ade A、ade B、ade C、ade J、ade G)的携带情况;采用实时荧光定量PCR对比耐药菌株与敏感菌株的外排泵基因表达量的差异。结果 110株菌株主要来自痰标本,重症监护病房(ICU)分离率最高;所有菌株REP-PCR电泳图谱分为A~G 7型,110株耐药菌株均为A型,且均被检测到含有OXA-23、OXA-51基因,均未检测到含有OXA-24、OXA-58、IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2基因;外排泵编码基因ade A、ade B、ade C、ade J及ade G的阳性率均为100%;耐药菌株外排泵编码基因ade A、ade B、ade C表达量明显高于敏感菌株。结论耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的流行型别基本相同,均为A型,应引起临床医护人员的高度重视;β-内酰胺酶基因(OXA-23、OXA-51)的表达以及外排泵基因(ade A、ade B、ade C)的过度表达与其对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性有关。