miR-552-3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移、侵袭功能

目的：探讨miR-552-3p在肝细胞性肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭功能的机制。方法：qRT-PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR-552-3p的表达情况;下载TCGA数据库的HCC样本的微阵列数据分析miR-552-3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR-552-3p mimics以及miR-552-3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR-552-3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK8及Transwell实验检测miR-552-3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁徙、侵袭功能的影响。结果：TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明miR-552-3p在HCC中高表达,同时qRT-PCR显示miR-552-3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR-552-3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭功能而抑制miR-552-3p的结果则相反;荧光素酶报告实验验证了miR-552-3p靶向作用于DACH1的3’-UTR,上调miR-552-3p的表达抑制DACH1而下调miR-552-3p则DACH1表达增加;DACH1的过表达可抑制HCC细胞相关功能,但同时过表达miR-552-3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR-552-3p正向调控Wnt/β-catenin 信号通路的激活。结论：miR-552-3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移、侵袭功能,并参与调控Wnt/β-catenin 信号。可能作为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。     

miR-486-5p/PINK1通路调控线粒体自噬拮抗SK-N-SH细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤

目的 探究微RNA-486-5p/PTEN诱导激酶1(miR-486-5p/PINK1)通路调控线粒体自噬对SK-N-SH细胞糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的影响及机制。方法 实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测45例缺血性卒中(IS)患者和45例健康体检者血清miR-486-5p表达。双荧光素酶报告基因验证SK-N-SH细胞中miR-486-5p对PINK1的靶向关系。取对数生长期SK-N-SH细胞分为：Control、OGD/R、OGD/R+miR-486-5p mimic、OGD/R+miR-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,RT-qPCR检测miR-486-5p、PINK1、帕金蛋白(Parkin) mRNA表达,Western blot检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62、Beclin1、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素C(CytC)蛋白表达,流式细胞术...     

miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。
方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或
inhibitor 转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。
Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果miRNA芯片
结果显示3个肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通
过QPCR验证了10 例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p 和miR-590-3p 均同步显著上调。
QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT
和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2 分别过表达miR-590-5p 和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加（P<0.05）;而HepG2、
Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低（P<0.05）。Targetscan预测,PDCD4
和PTEN 分别作为miR-590-5p 和miR-590-3p 的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot 结果显示miR-590-5p 和
miR-590-3p 可以分别直接下调靶基因PDCD4 和PTEN的表达（P<0.05）。进一步我们发现miR-590-3p 通过下调PTEN激活
PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结
果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进
HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590 在HCC发生发展过程中具有重要的意
义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。
     

miR-483-5p 通过靶基因 ERK1调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡

目的：证明 miR-483-5p 及其靶基因 ERK1参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。方法①体外培养人正常颗粒细胞,调控其 miR-483-5p 超表达,聚合酶链反应（PCR）及Western blot 法检测 ERK1的 mRNA 及蛋白表达情况;将包含野生型或突变型的 ERK1 mRNA 3′UTR 的 DNA 片段克隆在荧光素酶标记的质粒,共转染 miR-483-5p mimics、control-miR mimics 和野生型、突变型重组质粒,检测其颗粒细胞相对荧光素酶活性;②将 miR-483-5p mimics 及 ERK1 siRNAs单独及共同转染颗粒细胞,MTT 法及 TUNEL 法分别检测三种情况下卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡情况。结果① miR-483-5p 超表达后,ERK1基因及蛋白表达均下降;与 control-Wt（野生型）转染组相比,miR-483-Wt 组的荧光素酶活性显著降低;miR-483-Mut（突变型）与 control-Mut 转染组间荧光素酶活性的比较差异无统计学意义;② miR-483-5p mimics与 ERK1 siRNAs 单独及共同转染颗粒细胞,三种转染条件下颗粒细胞增殖均显著受抑制、凋亡率显著升高,且三种作用效果差异无统计学意义。结论 miR-483-5p 通过直接与靶基因 ERK1结合,参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。     

miR-3934-5p靶向抑制β内酰胺酶表达促进肝癌细胞增殖

目的 观察miR-3934-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,探讨其临床意义及分子机制.方法 收集53例2013年9月至2014年8月在本院确诊的肝细胞癌患者的癌旁组织及肿瘤组织.实时定量PCR(RT-qPCR)检测组织和细胞miR-3934-5p的表达;应用人类癌症基...     

miR-17-5p调控LIMK1/cofilin1通路对子宫内膜异位症发生发展的影响

目的：探究微小核糖核酸-17-5p(miR-17-5p)调控LIM激酶1(LIMK1)/丝切蛋白1(cofilin1)通路对子宫内膜异位症发生发展的影响。方法：选取行子宫切除术的30例子宫内膜异位症患者作为子宫内膜异位症在位内膜组,另选取30例非雌激素依赖性疾病患者作为正常子宫内膜组。对两组患者的在位内膜细胞中LIMK1、cofilin1表达量采用实时荧光定量PCR法检测,对所获取的在位内膜细胞进行转染,Transwell法检测细胞的侵袭能力;CCK-8法检测细胞的增殖能力;ELISA法检测子宫内膜细胞中细胞因子ICAM-1、VEGF、MMP-9表达。结果：在位内膜组患者的miR-17-5p表达水平低于正常子宫内膜组(P<0.05);在位内膜组的LIMK1蛋白及其mRNA、 cofilin1蛋白及其mRNA相对表达水平均高于正常子宫内膜组(P<0.05);在位内膜组未转染组(EC组)及转染阴性对照(EC-C组)情况下细胞侵袭能力显著高于正常子宫内膜组(NC组),但转染情况下(EC-miR-17-5p-RNAi组)细胞侵袭能力显著低于正常子宫内膜组(NC-miR-17-5p-...     

结直肠癌患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系分析

目的 研究结直肠癌(CRC)患者血清微小RNA(miR)-21-5p、miR-377-3p表达及与Wnt/β-连环蛋白(catenin)通路及预后的关系。方法 选取2017年1月—2018年1月中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院肿瘤科收治的CRC患者92例作为CRC组,医院同期健康体检者60例作为健康对照组。检测血清miR-21-5p、miR-377-3p表达量及Wnt/β-catenin通路指标Wnt3a、β-catenin、c-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA表达量。Pearson相关分析miR-21-5p、miR-377-3p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达的相关性。比较不同临床病理特征CRC患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达差异。Kaplan-Meier曲线及Logrank检验分析不同血清miR-21-5p、miR-377-3p表达CRC患者预后的差异。多因素Cox回归分析CRC患者预后的影响因素。结果 与健康对照组比较,CRC组患者血清miR-21-5p、Wnt3a、β-catenin、c...     

大豆皂苷调控miR-584-5p/HDAC1通路对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究大豆皂苷调控微小RNA-584?5p（microRNA-584?5p,miR-584?5p）/组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase1,HDAC1）通路对子宫内膜癌（endometrial cancer,EC）细胞增殖及凋亡的影响。方法 以终浓度0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的大豆皂苷处理体外培养的人EC细胞系HEC-1-A,以细胞计数试剂盒8（cell counting Kit-8,CCK-8）法测定各浓度处理后的细胞活力,计算半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）。将对数生长期的HEC-1-A细胞随机分为对照组、大豆皂苷组、miR-584-5p抑制剂组、大豆皂苷+miR-584-5p抑制剂组、大豆皂苷+miR-584-5p抑制剂阴性对照组,分组转染及用药处理后,以CCK-8法测定各组细胞活力;以流式细胞实验检测各组细胞凋亡率;以免疫印迹实验检测各组细胞HDAC1蛋白、增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）及凋亡相关蛋白[天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9（cysteine-containing aspartate-specific proteases 9,caspase-9）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（B-cell lymphoma-2-associated X protein,Bax）]表达;以实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）实验检测各组细胞miR-584-5p与HDAC1 mRNA表达。结果 不同浓度大豆皂苷可抑制HEC-1-A细胞生长,IC50为98.56μg/ml。与对照组相比,大豆皂苷组与大豆皂苷+miR-584-5p抑制剂阴性对照组的细胞活力、PCNA蛋白表达、HDAC1 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05）,凋亡率、caspase-9及Bax蛋白表达、miR-584-5p表达增高（P<0.05）;miR-584-5p抑制剂组的细胞各指标与大豆皂苷组相反。miR-584-5p抑制剂可减弱大豆皂苷对细胞各指标的作用。结论 大豆皂苷可上调miR-584-5p表达,下调HDAC1表达,促使EC细胞凋亡,抑制其增殖。     

miR-215-5p调控YY1通过TGF-β1/Smad信号通路对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的 探究MicroRNA-215-5p(miR-215-5p)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)凋亡的影响,并分析潜在机制。方法 采用脱氢表雄酮(DHEA)建立PCOS大鼠模型,分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组(control组)、sh-NC组、sh-YY1组、sh-YY1+LY2109761组、miR-NC组、miR-215-5p mimic组、miR-215-5p mimic+pc-NC组、miR-215-5p mimic+pc-YY1组。TUNEL法检测PCOS大鼠卵巢组织GC凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢组织/GC中miR-215-5p、阴阳-1(YY1)mRNA表达;CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测PCOS大鼠卵巢组织/GC中YY1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4蛋白表达。结果 miR-215-5p在PCOS大鼠卵巢组织中低表达,YY1 mRNA和蛋白水平在PCOS大鼠卵巢组织中显著升高(P<0.05);敲低YY1或上...     

miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖

目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1 (forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用.方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因CyclinD1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3'-UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3'-UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3'-UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况.结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P＜0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P＜0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R2=0.705,P＜0.05);miR-134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因CyclinD1的表达(P＜0.05);报告基因检测实验证实miR-134可特异性结合于FOXM1 mRNA的3'-UTR(P ＜0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3'-UTR的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P＜0.05).结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3'-UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖.     

miR-105-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖迁移的影响

目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(control)组、转染miR-105-5p阴性对照(miR-NC)组、转染miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimics)组、转染沉默CDC5L阴性对照(si-NC)组、转染沉默CDC5L(si-CDC5L)组、共转染miR-105-5p mimics及pcDNA(pcDNA)组以及共转染miR-105-5p mimics及pcDNA-CDC5L(miR-105-5p mimics+pcDNA-CDC5L)组。qRT-PCR检测胶质瘤组织、正常脑组织及各组U251细胞中miR-105-5p及CDC5L mRNA的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot法检测CDC5L、细胞周期蛋白(CyclinDl)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及细胞周期蛋白依赖性激...     

NRP2及miR-486-5p在胃癌中的表达及临床意义

目的:检测神经纤毛蛋白-2(neuropilin-2,NRP2)和mi R-486-5p在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌淋巴结转移的关系。方法:收集65例胃癌组织及其配对癌旁正常粘膜组织,免疫组织化学法检测组织中NRP2的表达,real-time PCR检测mi RNA-486-5p的表达,免疫组织化学法检测D2-40标记的微淋巴管密度(microlymphatic density,MLD),统计分析NRP2、mi R-486-5p的表达与MLD相关性。结果:免疫组化提示NRP2在肿瘤中表达增高(78.5%vs.29.2%,χ2=16.046,P=0.000),且与淋巴结转移密切相关(χ2=7.222,P=0.007)。real-time PCR结果显示肿瘤组织mi R-486-5p表达明显下调(0.39±0.16 vs.1.00±0.06,P=0.000),NRP2的表达水平与MLD呈正相关(r=0.384,P=0.015),mi R-486-5p的表达水平与MLD呈负相关(r=-0.755,P=0.000)。结论:NRP2和mi R-486-5p与胃癌发生发展密切相关,有望成为胃癌治疗的新靶点。     

miR-101-3p通过MAPK信号通路保护心肌缺血再灌注损伤的机制研究

目的:观察miRNA(miR)-101-3p对小鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤心脏的作用及缺氧/复氧(H/R)H9C2细胞存活的影响,并探究其作用机制。方法:建立I/R小鼠模型和H/R H9C2细胞模型。miR-NC、miR-101-3p注射入I/R小鼠再进行I/R模型制作;脂质体法将agomiR-NC、agomiR-101-3p转入H9C2细胞再进行H/R模型制作,部分细胞用二甲基亚砜(DMSO)、丝裂原活化激酶(MAPK)信号通路抑制剂SB203580预处理30 min;心脏超声检测小鼠左室舒张末压(LVDP)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)等指标;细胞计数试剂盒(CCK8)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞增殖率、凋亡率;双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性;蛋白质印迹法(WB)检测细胞MAPK1、MAPK6、MAPK8蛋白表达。结果:与对照组小鼠心脏或H9C2组细胞相比,I/R组小鼠和H/R H9C2细胞中miR-101-3p的表达均显著降低,小鼠心脏LVDP、LVEF、LVFS均显著下降,细胞增殖率...     

大蒜素通过miR-486-5p/KDM5B轴增加非小细胞肺癌A549细胞放疗敏感性

目的：探讨大蒜素对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞放射敏感性影响及其作用机制。方法：大蒜素联合X射线处理A549 细胞,采用MTT法检测A549 细胞增殖活力;Transwell实验检测A549 细胞侵袭能力;克隆形成实验检测A549细胞对放射的敏感性;彗星实验评估A549细胞DNA损伤情况;Western blot检测γ-H2AX、Snail、Vimentin蛋白和组蛋白去甲基化转移酶（KDM5B）的表达量。qRT-PCR检测miR-486-5p的表达量。双荧光素酶报告基因验证miR-486-5p与KDM5B的靶向关系。结果：不同浓度（20、40、60 μg/mL）大蒜素干预可显著抑制A549细胞增殖活力（P ＜0.05）和侵袭能力（P ＜0.05）,并上调miR-486-5p在A549细胞中的表达量（P ＜0.05）。40 μg/mL大蒜素可明显上调X射线对A549细胞增殖和侵袭能力的抑制作用（均P ＜0.05）,且加速了A549细胞DNA损伤。机制上,大蒜素通过上调miR-486-5p增强A549细胞对X射线的敏感性,但敲低miR-486-5p可显著下调大蒜素对A549细胞放射增敏作用。此外,miR-486-5p靶向负调控KDM5B的表达。结论：大蒜素可通过抑制A549细胞增殖、侵袭并诱导细胞DNA损伤,进而增强A549细胞对X射线的敏感性,其作用机制是通过上调miR-486-5p靶向抑制KDM5B来实现的。     

miR-138-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨微RNA (microRNA,miR)-138-5p对胶质瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法 体外培养人胶质瘤U251细胞,采用随机数字表法将其分为对照组(n=6)、miR-NC组(n=6)、miR-138-5p组(n=6)、miR-138-5p+pc-NC组(n=6)、miR-138-5p+pc-细胞分裂周期5样(cell division cycle 5-like,CDC5L)组(n=6)。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-138-5p、CDC5L mRNA水平,检测细胞增殖活力、细胞周期和细胞凋亡以及细胞侵袭能力,检测细胞中CDC5L和侵袭相关蛋白表达。结果 miR-138-5p的过表达可下调CDC5L mRNA和蛋白水平,降低胶质瘤细胞增殖活力和侵袭能力,并诱导G2/M期细胞周期停滞,促进细胞凋亡,降低N-钙粘蛋白、波形蛋白水平,升高E-钙粘蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05);上调CDC5L表达可明显逆转过表达miR-138-5p对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响(P<0....     

LncRNA FGD5-AS1通过miR-873-5p/GTPBP4轴促进肝细胞癌发展的研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1对肝细胞癌(HCC)发展的调控机制.方法 通过RT-qPCR检测FGD5-AS1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达水平.采用CCK-8、EdU、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验检测FGD5-AS1对HCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭中的作用.运用双荧光...