miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-27a-3p靶向Rnd3对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-27a-3p调控Rho家族GTP酶3(Rnd3)在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）神经细胞凋亡中的作用及机制。方法 体外培养大鼠PC12神经细胞，氧糖剥夺2 h后分别复氧3、6、9和12 h，检测各时刻细胞活力、miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达筛选最适复氧时间点。采用慢病毒分别转染miR-27a-3p Mimic、miR-27a-3p Inhibitor及二者的阴性对照、转染shRnd3及其阴性对照、或共转染shRnd3和miR-27a-3p Inhibitor入细胞后，CCK-8法检测细胞的活力；流式细胞术检测细胞的凋亡率；RT-qPCR检测miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达；Western blot检测凋亡相关蛋白和Rnd3蛋白的表达；双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和Rnd3的靶向关系。结果 上调miR-27a-3p提高了细胞活力，降低了细胞的总凋亡率、抑制了促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3(C-caspase-3)、Bax和促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，差异有统计学意义（P <0.05）；下调miR-27...     

miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病(T lymphocytic leukemia, TLL)Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法采用miR-181a-5p mimic、pc-B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2, BCL-2)不同组合方式转染Jurkat细胞,并将细胞分为Jurkat组、mimic-scramble组、miR-181a mimic组、pc-BCL-2组和mimic+pc-BCL-2组。RT-PCR检测miR-181a-5p的表达及pc-BCL-2 mRNA水平,Western Blot检测BCL-2蛋白表达,CCK8和流式细胞学检测细胞增殖和凋亡情况。结果与mimic-scramble组比较,miR-181a mimic组miR-181a-5p表达水平显著升高,BCL-2 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。与Jurkat组比较,miR-181a mimic组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率明显升高,pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P0.01);与miR-181a mimic组比较,mimic+pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-181a-5p通过靶向抑制BCL-2表达以抑制TLL细胞系Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

LncRNA TBX5-AS1靶向miR-92a-3p调控结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码RNA T-box转录因子5反义RNA 1(LncRNA TBX5-AS1)对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌组织、癌旁组织中TBX5-AS1和miR-92a-3p的表达量。体外培养人结直肠癌细胞HCT116,分别将TBX5-AS1过表达载体(pcDNA-TBX5-AS1)及其对照空载体(pcDNA)、miR-92a-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-92a-3p)及其阴性对照(anti-miR-NC)、miR-92a-3p寡核苷酸模拟物(miR-92a-3p mmics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、pcDNA-TBX5-AS1与miR-92a-3p mimics转染至HCT116细胞。MTT法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测TBX5-AS1和miR-92a-3p的靶向关系。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中TBX5-AS1的表达量降低,miR-92a-3p的表达量升高,差...     

微小RNA-10a-5p促进紫草素抗卵巢癌细胞的作用

目的 初步探究微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)在紫草素抗卵巢癌中的作用。方法 基于数据库分析miR-10a-5p在肿瘤中的表达水平;瞬时转染miR-10a-5p mimic及NC,通过逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-10a-5p的表达水平;使用CCK-8实验检测紫草素对SKOV3细胞的半数抑制浓度(IC₅₀);通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;活死细胞染色比较细胞死亡情况。结果 miR-10a-5p在多种肿瘤中异常表达,与对照组相比,转染miR-10a-5p mimic后可上调SKOV3细胞中miR-10a-5p的表达水平约80倍,差异有统计学意义(P<0.000 1); miR-10a-5p可促进卵巢癌细胞的凋亡,提高SKOV3细胞对紫草素的敏感性,其IC₅₀由2.45μmol/L降低至1.40μmol/L,降幅达42.9%。与NC相比,转染mimic可促进SKOV3细胞的凋亡,差异有统计学意义(6.73%与17.71%,P=0.007 5)。与无紫草素相比,紫草素可显著促进卵巢癌细胞的凋亡...     

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。     

miR-92a-3p对TNF-α,IL-6和DcR3的影响

目的探讨miR-92a-3p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和诱导因子3(DcR3)的影响。方法用人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)设置阴性对照组(NC)。用1μg/mL LPS分别处理THP-1细胞6h和24h,实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)检测TNF-α,IL-6和DcR3的表达,作为Sepsis组(NC+LPS)。利用1μg/mL的LPS处理过表达miR-92a-3p的THP-1细胞,作为过表达miR-92a-3p的Sepsis组(miR-92a-3p+LPS)。利用q-PCR,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot分别检测各组TNF-α,IL-6和DcR3的表达情况。结果 q-PCR,ELISA和Western blot检测结果显示,TNF-α和IL-6在LPS组、miR-92a-3p+LPS组和NC组的相对表达量均呈下调趋势,差异有统计学意义(P0.05),DcR3表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-92a-3p可抑制TNF-α和IL-6的释放,具有抗炎作用,但是其对DcR3的作用不显著。     

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0. 15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0. 15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。     

LncRNA DDX11-AS1靶向miR-627-3p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11-AS1)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理后血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用50μg/mL的ox-LDL刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)构建动脉粥样硬化细胞模型。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DDX11-AS1和miR-627-3p表达水平,蛋白质印记(Western blot)检测核转录因子p65亚基(p65)和核因子кB抑制蛋白α(IкBα)的磷酸化水平。将DDX11-AS1过表达质粒、miR-627-3p抑制物分别转染HUVEC,检测上调DDX11-AS1或下调miR-627-3p对ox-LDL处理的HUVEC增殖和凋亡的影响。通过荧光素酶报告基因法和RT-qPCR测定DDX11-AS1和miR-627-3p之间的相互作用。结果 ox-LDL处理后HUVEC中miR-627-3p表达、凋亡率及p65和IкBα磷酸化水平升高,DDX11-AS1表达、细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。上调...     

miR-29a-3p靶向肝癌衍生生长因子抑制E6-1细胞增殖并促进其凋亡

目的：探讨miRNA-29a-3p(miR-29a-3p)对肝癌衍生生长因子（HDGF）的调控作用以及急性淋巴细胞白血病细胞系E6-1增殖、凋亡的影响。方法：选择2017年1月-2019年1月在本院就诊的急性淋巴细胞白血病患者35例,同期进行健康体检的成人35例为健康对照组。将miR-29a-3p过表达载体、miR-29a-3p抑制表达载体以及miR-29a-3p和HDGF联合过表达载体转染至E6-1细胞中,用RT-qP CR检测miR-29a-3p和ma-3p HDGF mRNA的表达水平,Western blot检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测iR-29和HDGF的靶向关系,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果：与健康对照组相比,急性淋巴细胞白血病患者血清及细胞mHuT78、E6-1、CCRF-CEM中HDGF高表达,iR-29a-3p低表达（P<0.05）。过表达miR-29a-3p后,白血病细胞E6-1中CyclinD1、Bcl-2表达水平显著降低,p21、Bax表达水平显著升高,E6-1细胞活性显著降低,凋亡率显著升高（均Pm<0.05）。m...     

miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程研究

目的研究miR-29a-3p是否调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。方法前瞻性选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组1(miR-29a-3p过表达组)、实验组2(miR-29a-3p抑制组),对照组未进行任何处理,实验组1转染miR-29a-3p模拟剂,实验组2转染miR-29a-3p抑制剂。通过qRT-PCR法检测三组细胞miR-29a-3p及COL1A1基因表达,通过western blotting法检测三组细胞COL1A1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因分析法验证COL1A1是否是miR-29a-3p靶基因。采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力,采用流式细胞术检测三组细胞凋亡情况。结果 miR-29a-3p模拟剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达升高,COL1A1表达降低;miR-29a-3p抑制剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达降低,COL1A1表达升高。双荧光素酶报告基因分析法证实COL1A1是miR-29a-3p靶基因。miR-29a-3p过表达能抑制Hep-2细胞增殖,增加细胞凋亡;miR-29a-3p抑制表达能增强Hep-2细胞增殖,抑制细胞凋亡。结论 miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。     

miR-193a-3p在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA 193-a-3p(miR-193a-3p)在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制。方法运用实时荧光定量PCR在健康人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16检测miR-193a-3p的相对表达水平;通过TargetScan在线分析和荧光素酶报告系统检测miR-193a-3p的靶基因;过表达或敲低miR-193a-3p后,免疫印迹试验检测靶基因和细胞凋亡标志蛋白的表达量以及细胞凋亡检测试验(Annexin V双染色法)检测细胞的凋亡水平。结果相比于健康人胃黏膜细胞系GES-1,miR-193a-3p在人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16中低表达(P0.05),并且MGC-803的表达量最低。miR-193a-3p靶向P21活化激酶4(PAK4)的3端非编码区。过表达miR-193a-3p后,PAK4的表达量降低,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量升高,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平上升(P0.05)。敲低miR-193a-3p后,PAK4的表达量升高,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量降低,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-193a-3p通过靶向调节PAK4促进胃癌细胞发生细胞凋亡。     

MiR-125a-5p和信号传导与转录激活因子3在胃癌中的表达及其生物学功能

目的 采用生物信息学及分子生物学手段验证miR-125a-5p和信号传导与转录激活因子3(STAT3)在胃癌中的表达及其生物学功能.方法 从30例胃癌患者中分离出胃癌组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(WB)法检测胃癌组织和非癌性胃组织中miR-125a-5p及STAT3的表达.细胞转染后,采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况.采用Transwell迁移实验检测迁移细胞.通过双荧光素酶报告基因检测验证miR-125a-5p与STAT3的靶向关系.通过体内裸鼠成瘤实验对miR-125a-5p的肿瘤抑制作用进行验证.结果 胃癌组织中miR-125a-5p表达较非癌性胃组织降低,差异有统计学意义(P＜0.05).在胃癌细胞系中,与正常上皮细胞相比,miR-125a-5p的表达也下降,差异有统计学意义(P＜0.05).采用miR-125a-5p模拟物转染胃癌细胞,结果表明miR-125a-5p的过表达可以通过靶向作用STAT3抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.裸鼠成瘤实验证实miR-125a-5p过表达能够抑制肿瘤增殖并促进肿瘤细胞凋亡.结论 MiR-125a-5p能够通过抑制STAT3的表达发挥肿瘤抑制作用,这将为临床靶向治疗及早期生物标志物的选择提供可靠的理论依据.     

乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1与miR-513a-5p的表达及临床意义

目的研究乳腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p的表达,并分析二者的关系及临床意义。方法选取2015年8月—2017年8月诊治的乳腺癌患者83例为研究对象。应用实时定量PCR检测乳腺癌及癌旁组织中LncRNA ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p的表达。Pearson相关分析二者的相关性,在线生物信息学软件分析二者的相互作用位点,Kaplan-Meier生存分析二者表达对乳腺癌患者预后的影响,多因素Cox回归分析影响患者预后的危险因素。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1表达降低,miR-513a-5p表达升高(P0.01)。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1与miR-513a-5p表达呈明显负相关(P0.01),且二者存在潜在的结合位点。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p表达与肿瘤分期及淋巴结转移有相关性(P0.05,P0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果LncRNA ADAMTS9-AS1低表达及miR-513a-5p高表达乳腺癌患者的3年总体生存率较低(P0.01)。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1低表达、miR-513a-5p高表达、高肿瘤分期及伴有淋巴结转移是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素(P0.05,P0.01)。结论乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1表达下调,而miR-513a-5p表达上调,二者表达与乳腺癌患者肿瘤分期及不良预后有关,可作为乳腺癌的肿瘤标志物。     

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制。方法采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检测OIP5-AS1和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常细胞肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞A549、NCI-H23和NCI-H2170中OIP5-AS1表达显著增加,miR-511-3表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);敲低OIP5-AS1或者过表达miR-511-3p显著抑制了肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭;OIP5-AS1可以靶向负调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以部分回复敲低OIP5-AS1对肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 LncRNA OIP5-AS1通过靶向调控miR-511-3p的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-493-5p表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA NR2F1-AS1(LncRNA NR2F1-AS1)靶向微小RNA-493-5p(miR-493-5p)的表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR2F1-AS1与miR-493-5p在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测NR2F1-AS1与miR-493-5p的相互作用;采用MTT增殖实验检测干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后卵巢癌细胞增殖能力的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot检测CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达。结果 与正常卵巢上皮细胞比较,NR2F1-AS1在卵巢癌细胞中的表达水平升高,而miR-493-5p的表达水平则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实NR2F1-AS1能与miR-493-5p特异性结合,并可负性调控miR-493-5p的表达及活性。干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后可抑制卵巢癌细胞增殖能力,...     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

微小RNA-203b-3p调控多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的 观察微小RNA-203b-3p(miR-203b-3p)通过调节肿瘤坏死因子超家族成员13b(TNFSF13B)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,探讨miR-203b-3p抑制MM的相关机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹分析(Western blot)检测miR-203b-3p和TNFSF13B在骨髓瘤肿瘤和细胞中的表达情况。miR-203b-3p与TNFSF13B的关系采用双荧光素酶报告实验进行验证。Lipofectamine 2000试剂用于MM细胞转染。miR-203b-3p和TNFSF13B对MM细胞生物功能的影响采用克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验进行分析。结果 与癌旁组织及正常细胞比较,MM组织和细胞中miR-203b-3p的表达量相对较低,而TNFSF13B在MM肿瘤和细胞中的表达量与正常组织和细胞相比升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果表明,TNFSF13B是miR-203b-3p的直接靶点。miR-203b-3p在MM细胞中的过量表达能够抑制细胞的增殖和转移,差异有统计学意义(P...     

MiR-103a-3p靶向FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、 凋亡的分子机制

目的:研究miR-103a-3p对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:运用RT-q PCR法检测甲状腺癌细胞SW579,FTC-133及人甲状腺上皮细胞TEC中miR-103a-3p、脂筏结构蛋白2(FLOT2)的表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-103a-3p mimics(miR-103a-3p组)、anti-miR-NC(anti-miRNC组)、anti-miR-103a-3p(anti-miR-103a-3p组)、si-NC(si-NC组)、si-FLOT2(si-FLOT2组)、miR-103a-3p+pc DNAmimics(miR-103a-3p+pc DNA组)、miR-103a-3pmimics+pc DNA-FLOT2(miR-103a-3p+pc DNA-FLOT2组)用脂质体法转染至SW579细胞。蛋白质印迹法检测细胞中FLOT2、多肿瘤抑制基因(P16)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly-(ADPr i bose)poly merase,PA R P]、裂解的PA R P(cleaved-PA R P)、半胱天冬酶-3的前体(pro-caspase-3)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与人甲状腺上皮细胞TEC相比,甲状腺癌细胞中miR-103a-3p的表达明显下调,FLOT2的表达明显上调(P0.05);过表达miR-103a-3p、敲减FLOT2均可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡;miR-103a-3p明显抑制野生型FLOT2细胞的荧光活性,且负向调控FLOT2的表达;过表达FLOT 2逆转miR-103a-3p对甲状腺癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:miR-103a-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向FLOT2相关,可为甲状腺癌的治疗提供参考。