粪便中MGMT，p16INK4A及ECAD基因启动子甲基化检测在结直肠癌诊断中的价值

目的：探讨粪便中p16INK4A、ECAD及MGMT基因启动子甲基化在结直肠癌诊断中的应用价值。方法选择我院老年病科2014年2月至2015年11月收治的65岁以上老年健康者50例(对照组)、结直肠镜检查证实良性结直肠疾病者41例(良性肠病组)和结直肠癌患者46例(肠癌组)为研究对象。采用表观遗传学方法应用甲基化特异PCR对上述患者粪便中p16INK4A、MGMT和ECAD基因启动子DNA甲基化进行检测,判断上述标本中各基因启动子的甲基化水平。根据p16INK4A、MGMT和ECAD基因启动子DNA甲基化水平,评价其作为诊断结直肠癌的敏感性和特异性。结果对照组、良性肠病组和肠癌组p16INK4A基因启动子DNA甲基化率分别为14.0%、24.4%和71.7%;MGM基因甲基化率分别为16.0%、14.6%和54.3%;ECAD基因甲基化率分别为12.0%、19.5%和65.2%。上述基因启动子甲基化率在肠癌组明显高于对照组和良性肠病组,差异均有统计学意义(P<0.05);p16INK4A、MGMT和ECAD诊断肠癌的敏感性分别为0.72、0.54和0.65,特异性分别为0.76、0.75和0.80。结论 p16INK4A、MGMT和ECAD基因启动子甲基化发生率在肠癌患者粪便中显著增高,可作为肠癌诊断的分子标志物。     

p16基因甲基化检测在肺癌诊断中的意义

目的:探讨在进行肺癌诊断过程中,p16基因甲基化的检测意义。方法:通过MSP(甲基化特异性聚合酶链反应)方法对134例疑是肺癌患者的痰液、外周血血浆、胸腔积液、BALF(支气管肺泡灌洗液)与活检组织中p16基因当前的甲基化状态进行详细检测。结果:对于84例确诊患者,其每个标本具有的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。对于50例确诊为出现良性病变的患者,除了在患者血液、胸腔积液以及活检标本中发现异常甲基化的1例患者之外,在剩余的标本中都没有出现异常甲基化的情况,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:利用MSP对有关标本中的甲基化状态进行检测,针对肺癌患者的辅助诊断具有极其重要的意义;同时对不同标本的p16基因甲基化状态进行检测,能够有效将肺癌患者诊断的敏感性提高。     

甲基化特异性PCR检测胃癌p16基因甲基化及其临床意义

目的初步探讨甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR）在胃癌临床诊断中的应用价值。方法选取47例胃癌患者的癌组织及配对的癌旁组织，11例远离肿瘤的正常胃黏膜组织。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果47例胃癌组织标本中，22例（46．2％）在p16基因的启动子区域呈现异常甲基化；47例癌旁组织标本中，28例（58．6％）也检测出甲基化存在；11例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论MSPCR技术对胃癌患者组织标本中的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项具有潜力的胃癌早期诊断新技术。     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的 :探讨甲基化特异性聚合酶链反应 ( MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法 :选取 5 6例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液( BALF)及痰标本 ,其中 32例为肺癌 ,2 4例为良性肺部疾病。标本经一般处理 ,PCR扩增后 ,产物经电泳 EB染色 ,紫外灯下观察。结果 :32例肺癌组织标本中 ,1 4例 ( 4 3.8% )在 p1 6基因启动子区域呈现异常甲基化 ,其中 9例 ( 64.3% )在相应的 BALF中检出甲基化存在 ,5例 ( 35 .8% )在相应的痰标本中也检出甲基化存在。良性肺部疾病 2 4例 ,其中肺囊肿 1 0例 ,肺结核 1 4例 ,无论在手术切除标本还是 BALF和痰标本中均未检出 p1 6基因甲基化存在。结论 :MSPCR技术对肺癌患者 BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性 ,是一项很有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

p16基因甲基化在肺癌诊断中的研究进展

肺癌是目前发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一,约占所有肿瘤的12.4%,且5年生存率低于15%[1].目前80%的肺癌患者在明确诊断时已失去了手术治疗的意义,因此,早期诊断是目前大幅度提高肺癌治愈率和患者生存率的有效手段,但目前尚未找到一种较为满意的方法.随着相关研究的发展,现已证实肿瘤抑制基因p16基因因其外显子区域的甲基化而致基因的失活与肺癌的发生发展密切相关[2],此为肺癌的早期诊断提供了一种新的可能路径.本文就此作一综述.     

粪便基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的研究进展

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤相关死亡原因之一.肿瘤抑制基因启动子区域的超甲基化使抑癌基因长期处于沉默状态,可引发肿瘤形成、免疫逃逸和转移,并与结直肠癌的发生发展密切相关,发生于肿瘤发生的早期阶段,可能成为结直肠癌早期检测的分子标志物.改善结直肠癌筛查质量以及提高结直肠癌患者治疗依从性成为近年的研究热点,通过检测血液和粪便...     

检测血浆中p16及CDO1基因甲基化在胶质瘤诊断中的价值

采用甲基化特异PCR(MSP)法分别检测49例胶质瘤患者组织及其对应的术前血浆,10例颅脑外伤患者挫伤的脑组织及其对应的术前血浆和16例健康体检者血浆中p16及半胱氨酸双加氧酶1(CDO1)基因的甲基化状态,以探讨血浆中检测p16及CDO1基因甲基化在胶质瘤临床诊断中的价值.胶质瘤组织中p16及CDO1基因甲基化率分别为53.1%(26/49)、42.9%(21/49),对应的血浆甲基化率为39.0%(19/49)、34.7%(17/49).在肿瘤组织和血浆中p16及CDO1至少一个[p16和(或)CDO1]基因甲基化的频率为75.5%(37/49)和67.3%(33/49).血浆中p16及CDO1基因(甲基化)联合检测胶质瘤的灵敏度为67.3%,较单基因检测的灵敏度明显提高.单因素分析显示术前患者血浆中p16和(或)CDO1基因的甲基化与年龄、性别、肿瘤分级无关.对一些肿瘤特异基因的甲基化状态进行联合检测可提高胶质瘤在血清学诊断水平上的灵敏度,为胶质瘤的筛查及早期诊断提供新的临床诊断思路.     

联合检测微卫星不稳定性和p16甲基化在早期肺癌中的诊断价值

目的研究联合检测微卫星不稳定性(MSI)和p16基因启动子甲基化在早期肺癌中的诊断价值。方法对肺癌、癌前病变和正常肺组织采用PCR单链长度分析法检测MSI,采用甲基化特异PCR法检测p16甲基化。结果癌前病变组MSI的发生率显著高于肺癌组(P0.05)和正常肺组织组(P0.01),肺癌组MSI的发生率显著高于正常肺组织组(P0.01);肺癌组p16甲基化的发生率显著高于癌前病变组(P0.01)和正常肺组织组(P0.01),癌前病变组p16甲基化的发生率显著高于正常肺组织组(P0.01);联合检测MSI和p16甲基化的敏感性显著高于单一检测MSI(P0.01)和p16甲基化(P0.05);联合检测法与单一检测MSI和单一检测p16甲基化的特异性比较,差异无显著性意义(P0.05)。结论联合检测MSI和p16甲基化可以显著提高早期肺癌诊断的敏感性同时不降低其特异性,值得临床推广。     

联合检测粪便ECAD基因甲基化和隐血在结直肠癌诊断中的价值

目的 探讨粪便ECAD甲基化联合隐血在结直肠癌(CRC)中的诊断价值.方法 收集50例健康体检者、50例结直肠良性病变者、50例CRC患者的粪便标本.利用甲基化特异性PCR(MSP)的方法 检测粪便中ECAD基因的甲基化情况,根据肠镜病理诊断进行验证,比较粪便ECAD甲基化率、粪便潜血实验(FOBT)及两者联合对CRC诊断的敏感性及特异性,并进行统计学分析.结果 CRC患者粪便ECAD甲基化率(78%)明显高于健康体检者(16%)和结直肠良性病变者(26%);同时,CRC患者FOBT阳性率(64%)亦明显高于健康体检者(2%)和结直肠良性病变者(26%),差异有统计学意义(P<0.001).粪便ECAD甲基化率与CRC患者肿瘤数目(P=0.048)、病理分级(P=0.006)、TNM分级(P=0.002)及淋巴结转移(P=0.002)密切相关.CRC患者粪便FOBT敏感度为64%(95%CI:49.1%~76.7%),特异度为86%(95%CI:77.3%~91.9%);而ECAD敏感度为78%(95%CI:63.7%~88.0%),特异度为79%(95%CI:69.5%~86.2%).ROC曲线分析提示ECAD的ROC曲线下面积(AUC)为0.795(95%CI为0.716~0.874),略高于FOBT的AUC(0.750,95%CI:0.661~0.839),而两种联合的AUC为0.806(95%CI:0.728~0.884),诊断效能最高.结论 粪便ECAD基因甲基化的检测是早期诊断CRC的有效方法 ,其联合FOBT能有效提高诊断效能.     

诱导痰RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化在肺癌诊断中的价值

目的：探讨诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区异常甲基化及其联合检测在肺癌诊断中的价值。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）技术,检测82例肺癌患者诱导痰和对应肿瘤组织以及25例肺部良性病变组织中RASSF1A,p16和DAPK3种基因启动子区甲基化改变,并分析三者与临床病理资料的关系。结果：肺癌病理组织中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为63.4%,59.8%和58.5%,对应的诱导痰三者甲基化检出率分别为54.9%,48.8%和51.2%;肺部良性病变组织中甲基化检出率均为零,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1A基因甲基化检出率在中高分化和无淋巴结转移的肺癌中明显低于低分化和未分化及有淋巴结转移者（P〈0.05）,与年龄、性别、吸烟指数、临床分期及病理类型无关,而p16和DAPK基因甲基化检出率与上述因素均无明显相关性（P〉0.05）;联合检测3种基因甲基化的检出率为73.2%。结论：联合检测诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区高甲基化有可能作为诊断肺癌及评估预后的简便有效的指标,并能提高检出率。     

p73基因甲基化和CEA联合检测在结直肠癌诊断中的意义

目的探讨p73基因甲基化和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)检测在结直肠癌诊断中的临床意义。方法受检者分为三组,即结直肠癌组(A组)64例,结直肠瘤组(B组)78例,健康对照组(C组)142例。另将A、B组患者病灶组织以外5 cm以上,病理组织学诊断为正常粘膜组织的97例标本纳入组织对照组(D组)。采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)行组织、血浆p73基因甲基化测定,并检测血清CEA,比较单独和联合检测对结直肠癌诊断的敏感性和特异性,以及联合检测对结直肠癌诊断接受者的工作特征曲线(receiver operatingcharacteristics,ROC)分析。结果组织与血浆p73基因甲基化阳性率的差异在A、B两组中均无统计学意义(P0.05);三种检测方法的阳性率在对照组-瘤-癌序列中均逐渐升高(P0.01);联合三种检测方法对结直肠癌诊断的灵敏性高于两两方法的联合检测(P0.05),但特异性的下降无统计学意义(P0.05);联合三种检测方法诊断结直肠癌的ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.896,高于三种检测方法中任意两两联合的AUC(0.828,0.837,0.850)。结论联合组织、血浆p73基因甲基化测定及血清CEA对结直肠癌的诊断有重要的临床意义。     

p16异常甲基化联合高危人乳头瘤病毒检测在早期宫颈癌诊断中的临床价值

目的分析p16异常甲基化联合高危型人类乳头瘤病毒(HPV)检测在早期宫颈癌诊断中的价值。方法选择2018年3月—2019年3月青海大学附属医院妇科门诊活检、子宫全切术及宫颈环形电刀切除术患者100例(病例组)作为研究对象。根据其宫颈上皮是否存在异性细胞、细胞核分裂相、极性及异型细胞侵犯上皮细胞的程度分为宫颈癌亚组20例、高度病变亚组(CINⅡ～Ⅲ)35例、低度病变亚组(CINⅠ)45例,另取正常人宫颈组织30例作为健康对照组。每组均行p16异常甲基化和高危HPV检测,比较各组受试者的高危HPV及p16异常甲基化阳性率,并分析宫颈病变程度与高危HPV病毒载量、p16蛋白表达量的关系,采用ROC曲线对p16异常甲基化联合高危HPV检测在早期宫颈癌诊断中的价值进行分析。结果宫颈癌亚组高危HPV和p16异常甲基化的阳性率分别为90.00%和45.00%,均明显高于高度病变亚组、低度病变亚组及健康对照组(χ~2/P=31.761/<0.001、25.567/<0.00 1);随着宫颈癌病变程度的不断加重,HPV病毒载量,p16蛋白表达量不断增加,两者呈正相关(r/P=0.692/0.000、0.554/<0.001)。p16异常甲基化、高危HPV及p16异常甲基化+高危HPV的ROC曲线下面积分别为0.620、0.743、0.982,p16异常甲基化+高危HPV的cut-off值、敏感度、特异度、阴性预测值、阳性预测值及约登指数明显较高。结论 p16异常甲基化联合高危HPV检测对早期宫颈癌具有较高的诊断价值,值得临床推广应用。     

SEPT9基因甲基化检测联合CA199和CEA在结直肠癌诊断中的应用价值

目的 探讨SEPT9基因甲基化(mSEPT9)联合糖类抗原19-9(CA199)、癌胚抗原(CEA)在结直肠癌诊断中的应用价值.方法 选取2019年6月至2020年6月于本院肛肠科住院患者200例的血液样本,其中70例结直肠癌患者血液样本作为A组,130例结直肠腺瘤患者血液样本作为B组;同期收集本院体检中心100名健康...     

癌组织中p16基因甲基化分析

目的探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系.方法对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶(HpaII)和甲基非敏感酶(MspI)酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5'-CCGG-3'位点甲基化进行检测.结果20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例(25%)和9例(45%),正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例;有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌(Ⅲa、Ⅳ期各1例)中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者(P<0.05).结论p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件.     

肺癌组织p16基因启动子区高甲基化情况分析

目的:了解不同临床病理情况下肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化的情况。方法:采用甲基化特异的PCR(MSP)法,根据5-甲基胞嘧啶与胞嘧啶修饰后的不同,设计甲基化与非甲基化等位基因特异的引物,通过PCR扩增检测手术后53例不同临床病理类型肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化情况。结果:肿瘤组织标本中p16基因启动子区甲基化比例为占71.7%(38/53),其中鳞状细胞癌占80.0%(20/25),腺癌占66.7%(10/15),小细胞肺癌占61.5%(8/13)。长期吸烟史与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(P<0.001),与小细胞肺癌(P=0.293)、腺癌的(P=1.000)p16基因启动子区高甲基化关系不密切。肿瘤T分期与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(χ2=8.719,P=0.013)。结论:肺癌瘤组织标本中p16基因启动子区高甲基化是比较常见的现象;肿瘤组织基因启动子区高甲基化发生率随TNM分期的提高有升高趋势;基因启动子区甲基化状态与吸烟有关,有长期吸烟史的肺癌病人p16基因启动子区甲基化率增高。肺鳞状细胞癌中随T分期增高p16基因启动子区高甲基化比例增高。     

新疆乳腺癌患者外周血中p16基因甲基化的检测意义

目的:探讨新疆乳腺癌患者p16基因甲基化的情况.方法:按照1∶1配比的病例对照研究,采用聚合酶链反应(PCR)对54对研究对象外周血中p16基因进行扩增后焦磷酸测序,检测该基因的甲基化情况.结果:经单因素分析,p16基因各基因位点甲基化程度差异没有统计学意义(P＞0.05).根据ER阴性阳性分组,PM00139972CPG-2的甲基化程度差异有统计学意义(P＜0.05);根据HER-2阴性阳性分组,PM00139972CpG-4的甲基化程度差异有统计学意义(P＜0.05).结论:对新疆乳腺癌患者p16基因各位点的检测结果表明,其异常甲基化对乳腺癌的预后可能有意义.     

p53基因和FHIT基因联合检测在肺癌早期诊断中的意义

目的探讨p53基因突变和FHIT基因缺失在肺癌的筛查和早期诊断中的应用价值。方法收集利用自荧光支气管镜(AFB)活检的27例正常支气管黏膜、74例非典型增生、23例原位癌、161例浸润癌及32例良性病变新鲜标本,应用聚合酶链式反应(PCR)及DNA测序技术检测p53基因突变,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及DNA测序技术检测FHIT基因表达缺失。结果在正常黏膜、非典型增生、原位癌、浸润癌及良性病变中p53基因突变率分别为:0、27.0%、52.2%、67.7%、0。FHIT基因缺失率分别为:0、55.4%、65.2%、66.5%、9.4%。两基因联合检测阳性率分别为:0、56.8%、86.9%、90.7%、9.4%。非典型增生与原位癌组织中p53基因突变差异有统计学意义(P<0.05),非典型增生、原位癌、浸润癌组织FHIT基因缺失差异无统计学意义(P>0.05),组织病理学分类不同的浸润癌组织p53基因突变率和FHIT基因缺失率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p53基因突变和FHIT基因缺失在肺癌及非典型增生组织中是频发事件,在肺癌的发生发展中起重要作用,两基因联合检测可提高肺癌诊断的敏感性及特异性,对肺癌的早期诊断有重要意义。     

P16基因甲基化检测对恶性胸腔积液的诊断价值

目的 检测胸腔积液中沉渣细胞p16基因启动子的甲基化状态,探讨p16基因甲基化检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中的意义.方法 利用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测66例原因不明的胸腔积液患者胸水沉渣细胞p16基因的甲基化状态.结果 66例胸腔积液患者中36例确诊为恶性胸腔积液,30例为良性胸腔积液.恶性胸腔积液沉渣细胞p16基因启动子甲基化阳性率为69.4%(25/36);在良性胸腔积液中为13.3%(4/30);经统计学检验良、恶性胸腔积液组胸水沉渣细胞的p16基因甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=20.915,P<0.01).恶性胸腔积液组沉渣细胞的p16基因异常甲基化阳性率明显高于良性胸腔积液组.恶性胸腔积液组沉渣细胞p16基因甲基化检测的敏感性为69.4%,特异性为86.7%,准确性为77.3%.恶性胸腔积液沉渣细胞p16基因甲基化阳性表达与肿瘤的组织细胞类型及细胞分化程度无关(P均>0.05).结论 MSP检测胸腔积液中沉渣细胞p16基因启动子的甲基化状态,是一种有潜力的鉴别胸腔积液良、恶性的辅助诊断方法.     

联合检测p16甲基化和3p微卫星不稳定性在肺癌早期诊断及与肺结核鉴别中的意义

目的 探讨联合检测p16基因启动子异常甲基化和微卫星不稳定性(MSI)改变在肺癌早期诊断及与肺结核的鉴别诊断中的意义.方法 利用甲基化特异PCR法检测肺癌组、肺癌前病变组、正常肺组织组和肺结核组p16基因启动子甲基化情况;采用PCR单链长度分析法检测肺癌组、肺癌前病变组、正常肺组织组和肺结核组细胞的MSI.结果 肺癌组启动子甲基化的发生率显著高于癌前病变组(P<0.05)和正常肺组织组(P<0.01);癌前病变组启动子甲基化发生率显著高于正常肺组织组(P<0.05);癌前病变组MSI的发生率显著高于肺癌组(P<0.05)和正常肺组织组(P<0.01);肺癌组MSI的发生率显著高于正常肺组织组(P<0.05),肺结核组织中未检测到p16启动子甲基化和MSI的发生.对p16启动子甲基化和MSI进行相关性分析,结果显示二者之间差异无统计学意义(P>0.05).联合检测启动子甲基化和MSI的敏感性显著高于单一检测启动子甲基化(P<0.05)和MSI(P<0.01);联合检测法以及两种单一检测法对于肺癌及其癌前病变的特异性之间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 p16基因启动子甲基化和3p上MSI检测可以作为肺癌的早期诊断指标;联合检测p16基因启动子甲基化和3p上MSI可以显著提高肺癌早期诊断的敏感性同时不降低其特异性,值得临床推广.在肺结核组织中未检测到启动子甲基化和MSI的发生,提示上述两个指标在肺癌和肺结核鉴别困难时是较好的选择.p16基因启动子甲基化和3p上MSI之间无显著相关性,提示二者可能是通过不同的途径对肺癌的发生、发展起作用.