血清miRNAs在类风湿关节炎患者中的表达及临床意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清miRNAs(miR-146a-5p、miR-155-5p和miR-124a-3p)的表达水平及其临床意义。方法收集2016年10月至2018年10月在我院门诊就诊的39例RA患者临床资料、全血及血清样本。全血样本用于检测血沉(ESR),血清样本用于检测类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)和miRNAs核酸。采用SYBR Green实时荧光定量PCR检测RA患者血清miR-146a-5p,miR-155-5p和miR-124a-3p的表达水平。结果 RA患者治疗前血清miR-146a-5p(1.742±1.058)表达水平显著高于HC组(1.045±0.772),且与DAS28评分(r=0.836 5,P=0.004 5)、ESR值(r=0.437 2,P=0.032 5)和RF含量(r=0.733 6,P=0.013 7)呈正相关;而miR-155-5p(U=42.00,P=0.032 9)和miR-124a-3p(U=44.5,P=0.044 5)表达水平显著低于HC组,且miR-155-5p表达水平与RF含量呈负相关(r=-0.445 3,P=0.031 6),miR-124a-3p表达水平与DAS28评分(r=-0.538 7,P=0.025 8)和RF含量(r=-0.436 5,P=0.046 3)呈负相关;RA患者治疗后血清miR-146a-5p表达水平较治疗前显著下降(U=60.00,P=0.003 8),miR-155-5p(U=64.00,P=0.005 9)和miR-124a-3p(U=85.00,P=0.042 2)表达水平较治疗前显著升高。结论 RA患者血清miR-146a-5p、miR-155-5p和miR-124a-3p的表达水平异常,对RA患者的诊断具有潜在的临床应用价值。     

血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平在类风湿关节炎诊疗中的临床应用研究

目的探讨血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平在类风湿关节炎(RA)诊疗中的应用价值。方法选用RA确诊病例46例(RA组,又分为高度活动组24例、低度活动组22例),健康对照20例作为对照组,采用qPCR SYBR GREENⅠ嵌合荧光染料法,以U6为内参,检测RA组和对照组血清miR-146a-3p、miR-125a-3p表达水平,分析其与RA诊断和疾病活动度的相关性。结果 RA组miR-146a-3p表达水平[0.015(0.005,0.055)]与对照组[0.001(0.001,0.002)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001);RA组血清miR-155-5表达[0.039(0.020,0.079)]与对照组水平[0.008(0.005,0.016)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001)。RA高度活动组血清miR-146a-3p表达[0.055(0.028,0.138)]与低度活动组水平[0.006(0.003,0.007)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001);miR-155-5p表达[0.070(0.055,0.145)]与低度活动组水平[0.024(0.014,0.033)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001)。结论 RA患者血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平明显高于对照组,RA高度活动组血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平高于低度活动组患者,可认为检测两种miRNA血清表达水平可作为RA诊断和活动度观察指标。     

miR-99a-5p在MDS患者骨髓中的表达及功能分析

目的:检测miR-99a-5p在骨髓增生异常综合症(MDS)患者中的表达,利用生物信息学预测其靶基因并进行功能分析,探讨miR-99a-5p在MDS的发生发展中可能的作用。方法:利用qRT-PCR技术检测miR-99a-5p在初治MDS患者骨髓中的表达量,分析其与MDS临床病理参数的相关性;运用靶基因在线预测软件Targetscan、Miranda和Microcosm预测其可能的靶基因,取预测结果的交集作为miR-99a-5p在MDS中的潜在靶基因。结果:与正常对照组相比,MDS患者骨髓中miR-99a-5p表达升高(P0.001)。按IPSS的预后评分,将MDS患者分为相对低危组(包括低危险组和中危1组)和相对高危组(包括中危2组和高危组)发现,在相对低危组中miR-99a-5p的表达量是正常对照组的2.40倍(P0.001),相对高危组中miR-99a-5p的表达量是对照组的6.66倍(P0.001),相对高危组中miR-99a-5p表达量是相对低危组的2.80倍(P0.001);转白血病组(t-MDS)中miR-99a-5p的表达量是对照组的6.35倍(P0.001)。相关分析显示,患者骨髓miR-99a-5p表达量与原始细胞比例呈显著正相关(P0.001);而与染色体核型、外周血血象无明显相关。利用靶基因在线预测软件预测mi R-99a-5p的可能靶基因,并结合文献,得出ST5可能是mi R-99a-5p在MDS中的潜在靶基因。结论:mi R-99a-5p在MDS患者中表达明显上调,且随着危险度的增加其表达呈上升趋势,并可能通过负性调控靶基因ST5参与MDS的发病。     

缺氧对H9C2心肌细胞中miR-19a-3p表达的研究

目的检测大鼠H9C2心肌细胞缺氧后细胞水平和培养液中循环微小RNA(miRNA,miR)-19a-3p的表达,并探讨其与可能靶基因低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LRP2)的关系。方法对H9C2心肌细胞进行缺氧(37℃,5% CO_2,1% O_2)0、4、8、12、16、20、24h处理,采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其在不同时间点细胞水平和培养液中循环miR-19a-3p的表达水平,使用ELISA、qRT-PCR、Western Blot检测LRP2在培养液和细胞中mRNA和蛋白表达。结果 H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达在缺氧0、4、8、12、16h差异无统计学意义(P0.05),在缺氧20h与24h时,H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达与缺氧0h比较,明显高表达(P0.05);在缺氧20h与24h时,H9C2细胞中miR-19a-3p的表达与缺氧0h比较,明显下降(P0.05);H9C2细胞培养液中LRP2的表达在缺氧16h后表达明显升高,缺氧16h[(675.2±42.4)ng/mL,n=3]、缺氧20h[(979.4±204.2)ng/mL,n=3]和缺氧24h[(1 456.0±363.6)ng/mL,n=3]较0h[(245.0±10.84)ng/mL,n=3]明显升高(P0.05);H9C2细胞中LRP2mRNA表达水平在缺氧16h后表达明显升高,缺氧16h[(0.000 503±0.000 100)ng/mL,n=3]、缺氧20h[(0.001 303±0.000 090)ng/mL,n=3]和缺氧24h[(0.001 617±0.000 110)ng/mL,n=3]较0h[(0.000 139 4±0.000 060 0)ng/mL,n=3]明显升高(P0.05);20h[(0.235 000±0.003 427)ng/mL,n=3]与24h[(0.535 000±0.003 427)ng/mL,n=3]LRP2蛋白表达与0h[(0.140 10±0.018 21)ng/mL,n=3]比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-19a-3p可能参与大鼠H9C2心肌细胞的缺氧坏死过程,并且可能通过调控LRP2而发挥作用。     

胃腺癌患者血浆中miR-199a-5p和miR-200c-3p的表达及其诊断和预后判断的价值

目的探讨胃腺癌病人血浆中miR-199a-5p、miR-200c-3p的表达及其诊断和预后判断的价值。方法选取2014年5月至2015年4月胃腺癌病人50例为观察组,同期入选体检健康者50例为研究对照,应用实时荧光定量PCR技术检测两组研究对照血浆中的miR-199a-5p和miR-200c-3p的表达水平情况;比较不同分化程度、淋巴结转移情况的胃腺癌病人的血浆中miR-199a-5p、miR-200c-3p表达水平。结果观察组的miR-199a-5p表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组的miR-200c-3p表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);不同分化程度、淋巴结转移情况的胃腺癌病人的血浆miR-199a-5p、miR-200c-3p表达水平差异有统计学意义(P0.05)。结论胃腺癌病人血浆miR-199a-5p、miR-200c-3p表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况密切相关,可用于评估胃腺癌的病情严重程度及预后。     

miR-550a-5p在骨髓增生异常综合征中的表达及其靶基因预测

目的:探讨miR-550a-5p在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中的表达情况并通过生物信息学分析预测靶基因及其功能,为进一步研究miR-550a-5p及其靶基因在MDS发病机制中的作用提供依据。方法:采用realtime PCR技术检测miR-550a-5p在54例MDS患者、16例MDS转化白血病患者及19例健康对照中的表达量,并分析其与临床病理特征(包括染色体情况、骨髓原始细胞比例及外周血血象)的相关性。应用miRBase获得并分析多个物种miR-550的序列特征;应用Microcosm、Miranda和Targetscan预测miR-550a-5p的靶基因,并取预测结果交集,进一步进行基因功能的GO(富集)分析和信号转导通路(Pathway)的富集分析。结果:miR-550a-5p表达量在所有MDS患者骨髓中均比对照组升高:在低危+中危1组中表达量是对照组的1.7倍(P=1.23×10-10);在中危2+高危组中表达量是对照组的1.9倍(P=1.20×10~(-10));在MDS转化为白血病组中的表达量是对照组的2.0倍(P=5.61×10~(-10))。随着MDS疾病危险度增高,miR-550a-5p表达水平逐渐上升,但其表达量与MDS患者的临床病理特征(包括染色体情况、骨髓原始细胞比例及外周血血象)之间无明显相关。利用生物信息学预测miR-550a-5p在MDS中的靶基因,结合文献报道选出了其中2个可能与miR-550a-5p调控MDS发生发展的病理机制有关的靶基因——PDLIM2和PSME1。结论:miR-550a-5p在MDS患者骨髓细胞中呈现出特异性高表达,推测其可能通过调控靶基因PDLIM2和PSME1参与MDS病理生理过程。     

miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

孤立低高密度脂蛋白胆固醇表型与血浆miR-9-3p、 miR-28-5p的表达分析

目的探讨孤立低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表型血浆miR-9-3p和miR-28-5p的变化模式及其相关性。方法选取唐山市工人医院体检中心2014年1月至2015年12月174例健康体检者资料,收集其外周血血浆样本。根据血清HDL-C水平分为血脂正常表型组(86例)和孤立低HDL-C表型组(88例)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定血浆miR-9-3p和miR-28-5p的表达水平。结果脂代谢表型正常组和孤立低HDL-C表型组血浆中miR-9-3p的检出率分别为86.05%(74/86)和64.78%(57/88),差异有统计学意义(χ2=10.58,P=0.001);女性miR-9-3p水平在脂代谢正常组和孤立低HDL-C异常表型组血浆中的表达水平均高于男性[正常组:0.041(0.024,0.111)vs.0.018(0.009,0.039),Z=3.05,P=0.002;孤立低HDL-C表型组:0.029(0.024,0.059)vs.0.013(0.007,0.027),Z=3.35,P=0.001]。线性回归显示,表观健康者血浆miR-9-3p的相对表达水平与性别(β=-1.337,P0.001)、血清HDL-C(β=1.638,P=0.041)、空腹血糖(β=0.475,P=0.044)相关。血浆miR-28-5p女性组高于男性组,差异有统计学意义[0.003(0.002,0.008)vs.0.004(0.003,0.011),P=0.028],而不同表型组中男、女比较差异无统计学意义(P0.05)。结论血浆miR-9-3p是孤立低HDL-C表型的分子病理特征,性别、血清HDL-C、空腹血糖是其循环水平变化的主要影响因素。     

miR-20a-3p靶向STAT3调控大鼠脊髓损伤轴突修复

目的探索Wistar大鼠脊髓损伤后损伤局部微环境发生改变的分子生物学机制,寻找起关键调控作用的微RNA。方法 15只雌性Wistar大鼠随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=12)。脊髓损伤组根据取材时间分为4 h、3d、7 d、14 d四个组,每组3只。使用Microarray 3.0芯片检测脊髓损伤大鼠损伤局部发生改变的微RNA,运用生物信息学方法论证发挥关键调控作用的微RNA,进行靶基因预测。运用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-20a-3p表达。采用Western blotting技术检测信号传导子和转录激活子(STAT)3表达量,并分析各组中靶蛋白与目标微RNA表达变化趋势相关性。在神经元中抑制关键候选微RNA,并使用免疫荧光观察靶蛋白表达与轴突生长的关系。结果脊髓损伤标本中miR-20a-3p特征性上调明显。生物信息分析结果显示,STAT3可为miR-20a-3p的靶基因,与其趋势相反。细胞实验结果显示,miR-20a-3p抑制组与对照组相比轴突延长。Western blotting结果显示,与对照组相比,miR-20a-3p抑制组STAT3蛋白表达显著上调。结论脊髓损伤后miR-20a-3p通过调节其序列互补靶基因STAT3表达量来影响神经元轴突的生长。miR-20a-3p上调导致STAT3下调,抑制miR-20a-3p,可促进神经元轴突的再生。     

结直肠癌患者血清miR-92a-3p表达水平及其临床意义

目的分析miR-92a-3p在体检健康者、结直肠腺瘤息肉患者以及结直肠癌(CRC)患者手术前后血清中的相对表达水平,探讨其在CRC临床诊断中的应用价值。方法用Trizol法分别对30例体检健康者、25例结直肠腺瘤息肉患者和40例CRC患者术前及术后的血清进行总RNA提取,用实时荧光定量PCR检测miR-92a-3p的相对表达水平,分析其在各组中的表达差异及其与CRC临床病理参数的关系,以受试者工作曲线确定血清miR-92a-3p的CRC诊断效能。结果 CRC术前组血清miR-92a-3p的表达水平高于结直肠腺瘤息肉组(Z=4.75,P0.01)、CRC术后组(Z=4.28,P0.01)和健康人对照组(Z=8.00,P0.01);健康人对照组血清miR-92a-3p的表达水平低于CRC术后组(Z=4.08,P0.01)和结直肠腺瘤息肉组(Z=2.70,P=0.01);结直肠腺瘤息肉组和CRC术后组的血清miR-92a-3p的表达水平差异无统计学意义(Z=0.99,P=0.32);血清miR-92a-3p鉴别CRC的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.899(95%CI:0.840~0.959),当cut off值为2.75时,敏感性和特异性均为80%;血清miR-92a-3p的高低与CRC的浸润深度(Z=2.14,P=0.03)、淋巴结转移(Z=2.86,P=0.04)、TNM分期(Z=2.93,P0.01)等临床病理参数关系密切。结论血清miR-92a-3p可能为临床上CRC的筛查、病情监测等方面提供实验室依据。     

miR-33a-5p通过靶向作用于S1PR1抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的初步探讨miR-33a-5p和鞘氨醇1磷酸酯受体1(S1PR1)在人乳腺癌细胞中的表达水平,确认二者的潜在靶向关系并观察miR-33a-5p及S1PR1的表达调控对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100及4种乳腺癌细胞中miR-33a-5p、S1PR1的相对表达水平并分析二者相关性;生物信息学方法及双荧光素酶报告基因分别预测和鉴定miR-33a-5p与S1PR1基因的靶向关系,并检测miR-33a-5p mimics转染MDA-MB-231细胞后S1PR1蛋白的表达。后将细胞实验分5组:miR-33a-5p对照组(miRNC)、miR-33a-5p模拟物组(miR-33a-5p mimics)、S1PR1空载体组(pLV-NC)、S1PR1过表达组(pLV-S1PR1)以及miR-33a-5p mimics+pLV-S1PR1组,MTT和划痕实验分别检测各组细胞增殖和迁移能力。结果与正常乳腺上皮细胞HBL-100比较,miR-33a-5p及S1PR1在4种乳腺癌细胞系中的表达分别显著降低和升高(P0.05;P0.01),且二者呈显著负相关性(r=-0.994;P=0.006);预测及验证结果显示,S1PR1为miR-33a-5p的靶基因,且miR-33a-5p mimics能显著降低MDA-MB-231细胞中S1PR1蛋白的表达(P0.01);与miR-NC组比较,miR-33a-5p mimics显著降低了细胞增殖、迁移能力(均P0.01);与pLV-NC组比较,S1PR1过表达显著增加了细胞增殖、迁移能力(P0.05;P0.01);且与pLV-S1PR1组比较,miR-33a-5p mimics能显著逆转S1PR1过表达对细胞增殖、迁移能力的促进作用。结论 miR-33a-5p能显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移,其作用机制与靶向负调控S1PR1密切相关。     

藏族和汉族健康人群血浆miRNA表达谱的差异

目的检测并比较藏族和汉族健康人群血浆miRNA表达谱。方法分别采集246例藏族健康人和128例汉族健康人血浆样本,用Taq Man低密度芯片技术对50例藏族和50例汉族组成的2组人混合血浆中的754种miRNA进行检测,随机选取存在miR-130a-3p和miR-629-5p表达差异的样本,用qRT-PCR法进行验证。结果低密度芯片结果显示,藏族和汉族健康人群血浆中miRNA表达谱的相关系数(r)为0.592。与汉族组相比,藏族组血浆中139种miRNA的表达水平发生明显改变,其中62种miRNA表达上调,77种miRNA表达下调。qRT-PCR进一步证实miR-130a-3p和miR-629-5p在藏族组血浆中的含量明显高于汉族组[(467±27.30)×10-5vs(236±9.69)×10-5和(14.67±0.94)×10-5vs(7.58±0.52)×10-5,P均0.01]。结论藏族人群血浆miRNA的表达谱与汉族人群存在明显差异,临床检测miRNA时应考虑民族因素的影响。     

外周血miR-125b-5p和miR-155相对表达量对冠状动脉狭窄程度的预测价值

目的探讨冠心病患者外周血miR-125b-5p与miR-155相对表达量与冠状动脉病变程度的相关性及其对冠状动脉狭窄程度的预测价值。方法冠心病患者57例为冠心病组,体检健康者57例为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测2组血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量,分析冠心病患者血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量与冠状动脉病变支数及最大狭窄程度的相关性;绘制ROC曲线,评估血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量对冠心病患者冠状动脉狭窄50%的预测价值。结果冠心病组患者血浆miR-125b-5p(0.81±0.10)和miR-155(0.64±0.09)相对表达量低于对照组(0.98±0.12、0.82±0.13)(P0.05);冠状动脉狭窄≥50%冠心病患者血浆miR-125b-5p(0.74±0.11)和miR-155(0.59±0.10)相对表达量低于狭窄50%冠心病患者(0.87±0.08、0.72±0.09)(P0.05)。冠心病患者血浆miR-125b-5p、miR-155相对表达量与冠状动脉病变支数(r=—0.643,P0.001;r=—0.669,P0.001)及最大狭窄程度(r=—0.718,P0.001;r=—0.728,P0.001)均呈负相关。当血浆miR-125b-5p相对表达量0.776、miR-155相对表达量0.641为最佳截断值时,预测冠心病患者冠状动脉狭窄≥50%的AUC分别为0.949(95%CI:0.892～0.982,P0.001)、0.907(95%CI:0.839～0.954,P0.001),敏感度分别为91.2%、79.4%,特异度分别为92.5%和92.5%。结论血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量与冠心病病变程度具有负相关性,对冠状动脉狭窄≥50%具有较好预测价值。     

类风湿关节炎患者血清miR-125a-5p、miR-132的表达及意义

摘要:目的探究类风湿关节 炎(RA)患者血清miR-125a-5p. miR-132 的表达水平及临床应用价值。方法选取2021年1月至2022年1月湖北省十堰市太和医院收治的92例RA患者作为RA组,同期体检健康者80例为健康人对照组,采集各研究对象的空腹静脉血标本，实时荧光定量PCR( qRT-PCR)检测miR- 125a-5p和miR-132的表达水平;Pearson法分析miR- 125a-5p与miR-132的相关性以及二者与红细胞沉降率( ESR)、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)和28个关节疾病活动度评分( DAS28)的相关性;ROC曲线评估miR-125a-5p、miR-132 对RA的临床筛查价值。结果与健康人 对照组相比,RA组ESR、RF和CRP的含量以及miR-125a-5p的表达水平均显著升高,而miR-132 的表达水平显著降低，差异有统计学意义(P均<0.05)。高活动组miR-125a-5p的表达水平和DAS28评分显著高于中活动组和低活动组,且中活动组显著高于低活动组(P均<0.05);高活动组miR-132的表达水平显著低于中活动组和低活动组,且中活动组显著低于低活动组(P均<0.05)。RA患者血清miR-125a-5p 的表达与DAS28 评分、ESR、RF CRP呈正相关(P<0.05),而miR-132 的表达与miR-125a-5p 、DAS28评分、ESR、RF .CRP呈负相关( P<0.05)。miR-125a-5p. miR-132 联合检测筛查RA发生的ROC曲线下面积( AUCROC )为0.986(95%CI:0.973~0.998),显著高于二者单独筛查的0.948( 95% CI:0.919~ 0.976)和0. 884( 95%CI:0.834~0.934),差异有统计学意义( Z= 3.638, P<0.001;Z=3.184,P=0.023)。结论RA 患者血清miR-125a-5p表达水平升高,miR-132表达水平降低,二者联合对RA具有一定的临床筛查价值。     

miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和组织中的表达及调控靶基因信号通路富集分析

目的观察miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达,并用生物信息学方法分析其靶基因和富集的信号通路,探讨其生物学行为和功能。方法采用实时荧光定量PCR法检测miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞和正常胃黏膜细胞以及其在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析其临床意义,采用mir WALK网站数据库的预测软件预测其靶基因,选择该网站10个软件中具备3个以上软件支持的靶基因,用DAVID 6.7在线富集其靶基因参与的信号通路。结果 miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞中表达上调(P均0.05),胃癌组织相对于癌旁组织亦明显上调表达(P0.05),miR-20b-5p表达上调与胃癌淋巴结侵袭转移以及浸润深度关系密切(P均0.05);生物信息学分析提示,miR-20a-5p/miR-20b-5p的靶基因富集存在于肿瘤相关的多个信号通路中。结论 miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞系及组织中呈高表达,并于与淋巴结侵袭转移以及浸润深度有关,可作为胃癌潜在的生物学标志物。     

血浆miR-127-3p对原发性乳腺癌患者的检测效果

目的探讨血浆miR-127-3p在原发性乳腺癌患者检测中的应用效果。方法选取2012年6月至2015年8月在该院接受治疗的乳腺癌患者125例组成观察组、良性乳腺肿瘤患者97例组成对照组、健康体检者82例组成健康组,收集以上患者的血浆标本。运用实时荧光定量反转录PCR法对患者血浆中的miR-127-3p表达进行统计,并对乳腺癌患者血浆miR-127-3p水平与癌胚抗原(CEA)、血清癌抗原153(CA153)表达进行相关性分析。Mann-Whitney检验分析血浆miR-127-3p的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果乳腺癌患者血浆中miR-127-3p的相对表达量15.376(6.103~17.254)显著高于乳腺良性肿瘤患者3.213(2.015~5.108)和健康对照者2.410(1.185~4.369),差异具有统计学意义(P0.05)。而对照组患者与健康体检者之间,差异无统计学意义(P0.05)。miR-127-3p表达水平与CA153表达水平呈正相关(r=0.680,P0.05),与CEA无明显相关性(r=0.246,P=0.061)。乳腺癌患者血浆miR-127-3p的表达水平与不同病理特征组间的差异无统计学意义(P0.05)。结论血浆miR-127-3p在乳腺癌患者检测中的高表达可作为一个诊断乳腺癌的重要指标。     

异基因造血干细胞移植后血浆microRNA的表达与急性移植物抗宿主病的相关性研究

目的:探讨血浆microRNA(miRNA)在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)与未发生a GVHD(non-a GVHD)患者的表达情况。方法:采用实时定量PCR(real-time PCR)的方法检测25例患者allo-HSCT移植前和移植后外周血血浆中miR-423,miR199a-3p,miR-93*和miR-377的表达水平。结果:miR-423,miR199a-3p,miR-93*在a GVHD患者中的表达量较未发生a GVHD的患者高(P0.05),而miR-377在两组之间表达无统计学差异(P=0.0818)。结论:异基因造血干细胞移植后发生a GVHD患者的血浆中miR-423,miR199a-3p,miR-93*表达增高,这可作为为监测和诊断a GVHD的生物标志物。     

急性心肌梗死患者PCI手术前后血浆miR-23b及miR-126的变化

目的检测血浆中miR-23b、miR-126在急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)手术前后及健康人群中的差异性表达。方法收集AMI患者105例(AMI组)、健康者82例(对照组),通过荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测患者手术前后miR-23b、miR-126的表达水平;同时检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。结果 AMI患者术前血浆中miR-23b、miR-126的表达水平均高于对照组(P0.05);术前miR-23b表达水平与CK-MB、cTnI水平呈正相关(r=0.832,P0.001;r=0.245,P0.001);术前miR-126表达水平与cTnI水平呈正相关(r=0.316,P0.001);PCI术后血浆miR-23b及miR-126表达明显降低。结论血浆miR-23b和miR-126可能成为一种新型的可对AMI进行早期诊断的标志物。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

首发精神分裂症患者血清miR- 146a-5p、TRAF6的表达及意义

摘要:目的探究首发 精神分裂症(SZ)患者血清微小RNA-146a-5p( miR-146a-5p)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的表达水平变化并分析其临床意义。方法选取2019 年2月至2021年4月于杭州师范大学附属萧山医院收治的95例首发SZ 患者作为SZ组,同期体检健康者98例作为健康人对照组;qRT-PCR检测各受试者血清miR- 146a-5p TRAF6 mRNA的表达水平;Pearson相关系数法分析miR-146a-5p与TRAF6 mRNA表达水平的相关性;以及二者分别与阳性和阴性症状量表( PANSS) 评分和威斯康星卡片分类测验(WCST)评分的相关性;ROC曲线评估miR-146a-5p与TRAF6在首发SZ中的诊断价值;Logistic回归分析影响首发sZ发生的因素。结果与健康人对照组相比,SZ组患者血清miR-146a-5p的表达水平显著降低，TRAF6 mRNA的表达水平显著增加( P<0.01),且二者呈显著负相关(r=-0.444,P= 0.000);与治疗前相比,治疗后SZ组患者血清miR-146a-5p的表达显著增加(P<0.01) , TRAF6 mRNA的表达显著降低(P<0.01),且二者呈显著负相关(r=-0.428,P= 0.000);PANSS总评分、PANSS阳性、-般精神病理症状非持续性错误数、错误应答数与miR-146a-5p 水平均呈负相关,而与TRAF6 mRNA水平均呈正相关( P<0.05) ;相较于miR-146a-5p. TRAF6 mRNA单独诊断首发SZ发生,二者联合检测诊断首发 SZ发生时的ROC曲线下面积显著增加(Z =2.037,P= 0.042;Z= 2.162,P=0.031) ;Logistic回归分析结果表明，miR-146a-5p低表达及TRAF6 高表达是影响首发SZ发生的危险因素。结论首发 SZ患者血清miR-146a-5p的表达显著降低, TRAF6 mRNA 的表达显著增加,且二者与疾病严重程度存在密切相关性,有望成为首发SZ的早期诊断指标。