KLF5转录因子对预测乳癌肺转移的临床意义

目的 探讨Kruppel样因子5(KLF5)及其下游基因在乳癌组织中的表达,分析其与乳癌病理特点的相关性及在预测乳癌肺转移中的临床意义.方法 应用免疫组织化学方法,检测乳癌肺转移乳癌组织(35例)、乳癌无肺转移乳癌组织(35例)、乳腺良性肿瘤组织(20例)及乳癌肺转移原发灶癌旁正常组织(20例)KLF5、肿瘤坏死因子-...     

转录因子KLF5在恶性肿瘤发生中作用的研究进展

Krüppel样因子5(KLF5)是一种能与DNA结合的锌指转录调节因子,其在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌和肺癌等多种恶性肿瘤中的作用具有环境依赖性。微RNA和长链非编码RNA可以调控KLF5的表达。同时KLF5也可以调控众多的下游靶基因的表达。本文主要介绍了KLF5在恶性肿瘤中的作用,也分析了在不同的细胞状态下通过调节KLF5蛋白的水平而影响下游基因表达的机制差异。深入研究这些差异性或能进一步揭示KLF5在肿瘤发生发展中的作用规律。     

转录因子KLF5在恶性肿瘤发生中作用的研究进展

Krüppel样因子5(KLF5)是一种能与DNA结合的锌指转录调节因子,其在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌和肺癌等多种恶性肿瘤中的作用具有环境依赖性。微RNA和长链非编码RNA可以调控KLF5的表达。同时KLF5也可以调控众多的下游靶基因的表达。本文主要介绍了KLF5在恶性肿瘤中的作用,也分析了在不同的细胞状态下通过调节KLF5蛋白的水平而影响下游基因表达的机制差异。深入研究这些差异性或能进一步揭示KLF5在肿瘤发生发展中的作用规律。     

核转录因子KLF4在肾脏缺血再灌注损伤中的表达与保护机制探讨

目的 研究核转录因子KLF4在肾脏缺血再灌注损伤中的表达,并对其保护作用的可能机制进行探讨.方法 Realtime-RT-PCR方法检测大鼠双肾在缺血1h,再灌注后不同时间点的KLF4表达情况,Western Blot方法检测KLF4在过氧化氢(H2O2)刺激的人胚肾细胞HEK293中的表达情况,采用基因转染技术过表达KLF4或抑制HEK293细胞中KLF4表达,观察KLF4的表达改变对H2O2损伤引起HEK293细胞死亡率的影响.结果 KLF4在大鼠肾脏缺血-再灌注时表达显著增高,在遭受H2O2损伤时,人胚肾细胞HEK293中KLF4的mRNA与蛋白表达也显著增高.过表达KLF4基因则能显著降低H2O2所致的HEK293细胞株的死亡率.抑制KLF4的表达能明显增加H2O2导致的HEK293肾细胞的死亡率.结论 KLF4极有可能是一个在肾脏缺血再灌注损伤过程中具有保护作用的核转录因子.     

Kruppel样因子15——多功能转录因子的功能研究

Kruppel样因子15(KLF15)是Kruppel样转录因子家族中的一员。Kruppel样转录因子家族特征性结构是含有3个Kruppel样锌指结构,与DNA的CACCC元件和富含GC区连接,从而调控转录激活或抑制。KLF15在许多生物过程中起重要作用,包括细胞的增殖、分化、发展和凋亡。研究证实,KLF15参与调节三大物质代谢:糖代谢、脂肪酸代谢、氨基酸代谢。在循环系统方面,KLF15过表达能够抑制心肌肥厚,而KLF15的缺乏会引起心力衰竭、主动脉瘤的产生。此外,KLF15在肾病、肾纤维化、骨骼肌脂质利用、昼夜节律等诸多方面起重要作用。随着对KLF15功能的认识越来越深入,KLF15有望成为有效治疗致死性疾病的新靶点。     

人胃癌细胞和胃癌组织中胃肠富集Kruppel样因子和肠道富集Kruppel样因子的表达及其临床意义

目的研究人胃癌细胞株和胃癌组织中胃肠富集Kruppel样因子（GKLF）、肠道富集Kruppel样因子（IKLF）的表达及其临床意义。方法采用免疫细胞化学法检测人正常胃上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株MKN28、SGC7901、BGC823、HGC27中GKLF、IKLF的表达;采用免疫组织化学法检测96例胃癌组织及其远端正常胃组织中GKLF、IKLF的表达。结果GKLF在人正常胃上皮细胞株内阳性表达,在胃癌细胞株内无表达;IKLF在人正常胃上皮细胞株内无表达,在胃癌细胞株内阳性表达。胃癌组织中GKLF阳性率为20.8%,显著低于远端正常胃组织（64.6%,P〈0.01）,胃癌组织中IKLF阳性率为71.9%,显著高于远端正常胃组织（21.9%,P〈0.01）。GKLF、IKLF表达与胃癌患者的年龄、性别、分化程度、Lauren分型无关（P〉0.05）,但与淋巴结是否有转移及TNM分期显著相关（P〈0.01）。结论GKLF、IKLF在胃癌发生、发展中起一定的作用,检测GKLF、IKLF的表达有助于判断胃癌患者的病情程度和预后。     

乳腺癌多药耐药机制的研究进展

化疗在乳腺癌综合治疗中占有极其重要的地位,而耐药性的产生是影响乳腺癌患者化疗疗效及生存的主要原因之一,在耐药性的产生中,多药耐药(MDR)的产生较为复杂,具有较大的临床意义。MDR是指肿瘤细胞对某一化疗药物产生耐药性之后,对其他化学结构和机制不同的化疗药物也产生耐药性。而MDR的产生是一个多阶段发展、多因素参与的复杂事件。该文就近年来有关乳腺癌MDR机制的研究进展予以综述。     

转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路研究

目的:探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法:构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,treeview和DAVID生物信息数据库(DAVID Bioinformatics Resources)以及Enrichr分析KEGG信号通路,绘制热图(heatmap)。结果:BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P<0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物N-cadherin,Twist1,Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P<0.05),克隆大小明显降低。结论:HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和粘附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子(TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。     

前列腺癌组织中KLF5的表达及敲低KLF5对前列腺癌细胞生长的影响

目的:研究前列腺癌组织中KLF5的表达及敲低KLF5对前列腺癌细胞生长的影响。方法:收集前列腺癌和良性前列腺增生组织,抽提RNA并测定KLF5、增殖和上皮间质转化相关基因的mRNA含量;培养DU145细胞,转染KLF5的siRNA以及阴性对照的siRNA后抽提RNA,测定增殖和上皮间质转化相关基因的mRNA含量。结果:前列腺癌组织中KLF5、SRSF1、Survivin、MACC1、c-Met、Ncadherin、Vimentin的mRNA含量显著高于良性前列腺增生组织,TGF-β、E-cadherin、β-catenin的mRNA含量显著低于良性前列腺增生组织;si-KLF5组中SRSF1、Survivin、MACC1、c-Met、TGF-β、N-cadherin、Vimentin的mRNA含量显著低于si-NC组,E-cadherin、β-catenin的mRNA含量显著高于siNC组。结论:前列腺癌组织中KLF5的表达量异常升高,靶向敲低KLF5的表达能够抑制前列腺癌细胞的增殖及上皮间质转化。     

miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor）,YWHAQ干扰组（si-YWHAQ）,以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶...     

结肠癌组织中的KLF8表达及下调KLF8对肠癌细胞的影响

目的研究结肠癌组织中转录因子KLF8的表达及下调KLF8的表达对结肠癌细胞的影响。方法收集结肠癌组织和癌旁正常组织,检测KLF8的蛋白含量;培养结肠癌Lovo细胞株,转染KLF8 siRNA后检测细胞侵袭、迁移以及上皮-间质转化(EMT)。结果结肠癌组织中KLF8的蛋白含量高于癌旁正常组织;转染KLF8 siRNA的结肠癌细胞组迁移距离低于阴性对照组,且侵袭至transwell微孔膜外侧面的细胞数少于阴性对照组;转染KLF8 siRNA的结肠癌细胞组内E-cadherin的表达升高,Vimentin、N-cadherin的蛋白含量低于阴性对照组。结论结肠癌组织中KLF8的表达量升高,下调结肠癌细胞中KLF8的表达可抑制结肠癌细胞侵袭、迁移及上皮-间质转化过程。     

转录因子S tat5a对乳腺癌细胞增殖的影响及其表观遗传学机制探讨

目的：探讨转录因子Stat5a对人类乳腺癌细胞（MCF‐7）增殖的影响及表观遗传学机制。方法利用腺病毒介导的基因转移技术,使MCF‐7大量表达转录因子Stat5a ,应用活细胞计数（M TS）法检测细胞增殖情况,并以染色质免疫共沉淀（ChIP）方法,检测p53基因启动子区域组蛋白甲基化程度。最后以实时定量 PCR进一步确认 p53基因表达水平。结果携带Stat5a cDNA的腺病毒感染后,MCF‐7的数量呈剂量依赖式地增加。当病毒感染增殖活性（MOI）分别为10、20及30时,MCF‐7的细胞密度较对照组细胞分别增加7．6031％、18．1237％及24．8987％。染色质免疫共沉淀分析表明,Stat5a明显导致p53基因启动子区域组蛋白甲基化（H3K27Me3）增加,p53基因表达水平下降。结论 Stat5a导致MCF‐7抑癌基因p53启动子组蛋白甲基化,使启动子活性降低,导致细胞的异常增殖。     

转录因子ETS-1对乳腺癌细胞增殖作用的影响

目的:研究转录因子ETS-1通过调节miR-96对乳腺癌细胞增殖的影响.方法:通过RNAi技术下调乳腺癌细胞MCF-7中ETS-1的表达后,检测miR-96的表达;运用生物信息学方法预测转录因子ETS-1的结合位点,染色体免疫共沉淀反应加以验证;将miR-96转染入乳腺癌细胞MCF-7,观察对乳腺癌细胞增殖和克隆形成的影响.结果:抑制ETS-1表达,miR-96在乳腺癌细胞MCF-7中的表达明显上调(P<0.01);ETS-1通过结合在miR-96启动子区域,调节miR-96的表达;与对照组比较,过表达miR-96后,MCF-7的增殖能力和克隆形成能力均明显增强(P<0.01).结论:ETS-1通过调节miR-96的表达,影响乳腺癌细胞增殖和克隆形成能力,有望在乳腺癌治疗中成为新的靶标.     

探讨Rab27蛋白家族在三阴性乳腺癌细胞耐药机制中的作用

背景 三阴性乳腺癌由于分子表达模式的原因只能使用化疗和免疫治疗,但许多患者因为多药耐药的出现导致化疗失败.Rab27家族与外泌体的释放密切相关,目前已知大部分增强化疗药物外排的机制均由外泌体介导,但该家族两个成员Rab27a和Rab27b在三阴性乳腺癌细胞多药耐药过程中的具体作用尚不明确.目的 本研究通过抑制Rab27蛋白家族的表达,探究其在三阴性乳腺癌细胞耐药过程中发挥的具体作用及分子机制.方法 采用siRNA抑制三阴性乳腺癌细胞中Rab27a和Rab27b的表达后,蛋白印迹法检测外泌体的分泌情况.检测Rab27a和Rab27b分别被抑制后在不同浓度顺铂、阿霉素和紫杉醇处理下的细胞活力,随后分别检测三种药物处理下抑制Rab27家族后肿瘤细胞的凋亡与坏死情况.最后检测分别抑制Rab27a和Rab27b的三阴性乳腺癌细胞耐药相关基因的表达情况.结果 抑制三阴性乳腺癌细胞Rab27a的表达后,外泌体分泌显著下调,抑制Rab27b的表达对外泌体分泌无显著影响.抑制Rab27a和抑制Rab27b均会降低三阴性乳腺癌细胞对顺铂、阿霉素和紫杉醇的耐受程度,提高肿瘤细胞在这几种药物处理下的细胞凋亡率,降低耐药相关基因IL-6、EGR1、ABCC3和ABCC6的表达,抑制Rab27b对肿瘤细胞耐药产生的影响明显强于抑制Rab27a.结论 Rab27家族与三阴性乳腺癌细胞耐药密切相关,Rab27a可能通过直接影响外泌体的分泌参与耐药机制.Rab27b与Rab27a的分子机制不同,它可能通过调控其他耐药相关基因的表达从而参与三阴性乳腺癌细胞的耐药机制.     

异鼠李素对乳腺癌细胞的作用机制

为探讨异鼠李素对乳腺癌细胞中的作用及其机制,以两种乳腺癌细胞株MCF7和BT549作为模型细胞株,通过加入不同浓度的异鼠李素,采用MTT法检测其对细胞增殖活性的抑制作用。在确定增殖抑制作用的基础上,采用流式细胞术测定异鼠李素对细胞周期和凋亡的影响,及采用免疫印迹的方法观察异鼠李素对细胞增殖及凋亡信号通路的影响。实验结果显示,异鼠李素可显著抑制乳腺癌细胞株MCF7及BT-549的增殖,其IC₅₀分别为11.72和8.74 μmol/L;通过流式细胞术检测,发现异鼠李素可引起细胞G₁期的周期阻滞及促进细胞的凋亡,信号通路分析显示异鼠李素可减少细胞增殖通路蛋白AKT和ERK的磷酸化及增殖核抗原Ki67的表达,减少Bcl-2的表达及增加Bax的表达,促进Caspase 3的剪切,从而导致细胞的凋亡。因此,异鼠李素具有显著的抗乳腺癌作用,其作用机制与抑制细胞的增殖通路及促进细胞的凋亡有关。     

乳腺癌组织中耐药和转移相关基因联合表达的临床病理分析

目的 :联合检测乳腺癌组织中 P-糖蛋白 (P-gp)、谷胱甘肽 -S-转移酶 (GST-π)、拓朴异构酶 (Topo ) 3种耐药基因和 nm2 3、CD44 V62种转移相关基因 ,观察其表达情况与临床病理特征的关系。方法 :采用 S-P法和二步法的免疫组化方法检测耐药基因 P-gp、GST-π、Topo 和肿瘤转移相关基因 nm2 3 -H1、CD44 V6在 112例乳腺癌中的表达。结果 :P-gp、GST-π、Topo 与nm2 3、CD44 V6的阳性表达率分别为 5 6.2 %、67.8%、72 .3 %和 65 .2 %、72 .3 % ,相互之间过表达相关性不明显 (P>0 .0 5 ) ;nm2 3、CD44 V6与淋巴结转移有关 (P<0 .0 1)。结论 :作用于乳腺癌的耐药基因和肿瘤转移相关基因相互之间无相关性 ,可能具有不同作用机制 ,每个基因具有独立的临床意义。     

P糖蛋白介导的乳腺癌耐药及逆转的研究进展

乳腺癌对化疗比较敏感,但肿瘤细胞产生的多药耐药性往往导致化疗失败,P糖蛋白介导的多药耐药性是主要的耐药机制,也是逆转耐药的重要靶点,近年有不少新的逆转药物被发现并试用于临床.