GOLPH3在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 研究高尔基磷酸化蛋白-3(GOLPH3)在肺癌组织中的表达,并探讨其对肺癌细胞侵袭和迁移的影响.方法 采用免疫组织化学法检测昆明医科大学第一附属医院收集的72例非小细胞肺癌(NSCLC)及61例远癌组织标本中GOLPH3蛋白表达情况.常规培养A549细胞,转染GOLPH3-shRNA质粒和空质粒,建立GOLPH3...     

过表达FOXB2对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨叉头框蛋白B2（FOXB2）对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用定量PCR检测正常肝细胞LO2细胞和肝癌细胞系Hep3B、Huh7细胞FOXB2 mRNA的表达,构建过表达FOXB2的细胞模型,逆转录实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测过表达效率,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测FOXB2对Huh7细胞增殖能力的影响;平板克隆实验检测FOXB2对Huh7细胞克隆形成能力的影响;Transwell实验检测FOXB2对Huh7细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 FOXB2在肝癌细胞系Huh7和Hep3B细胞中的表达水平低于正常肝细胞LO2（P<0.001）;过表达FOXB2抑制了Huh7细胞的增殖（P=0.005）和克隆形成（P<0.001）;FOXB2过表达肝癌细胞的迁移（P<0.001）和侵袭（P=0.002）能力低于Vector对照细胞。结论 FOXB2在肝癌细胞中低表达,FOXB2过表达抑制了肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

SIRT3通过Rb/p16途径促进肝癌细胞衰老的研究

目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)对肝癌细胞老化的作用,并初步研究其作用机制。方法通过转染SIRT3基因,使其在肝癌细胞内过表达。用实时荧光定量PCR和Western blot技术验证SIRT3基因的过表达效果;BrdU标记实验检测它对肝癌细胞增殖的影响;β-半乳糖苷酶染色检测肝癌细胞的老化情况;Western blot检测它对衰老相关基因Rb、p16、P53蛋白表达的影响。结果 SIRT3过表达质粒使肝癌细胞中SIRT3的mRNA及蛋白水平明显增加。SIRT3基因的过表达能抑制肝癌细胞的增殖,抑制率为40%~50%;同时,SIRT3基因过表达能显著诱导肝癌细胞G_2期周期阻滞:转染pc-DNA3.1质粒的对照组细胞处于G_2期比例为(22.83±1.58)%,而转染SIRT3基因的实验组处于G_2期细胞为(35.65±1.55)%;SIRT3基因过表达使肝癌细胞中衰老相关的β-半乳糖苷酶染色较对照组显著增高,阳性细胞占40%~50%,差异有统计学意义(P0.05),并伴随衰老相关基因Rb、p16蛋白表达水平明显增加。结论 SIRT3基因过表达可能通过Rb/p16途径促进肝癌细胞衰老。     

miR-128-3p靶向调控ZEB1表达对结肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨miR-128-3p在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响和可能的作用机制.方法 选取2015年6月至2017年5月我院手术切除的56例结直肠癌组织及癌旁组织标本,并收集结直肠癌细胞系和人正常结直肠黏膜细胞,采用qPCR法检测miR-128-3p相对表达水平并分析其与结直肠癌临床病理特征的关...     

RhoC-siRNA联合Rapamycin对肝癌细胞Bel7402侵袭和迁移的影响

目的探索RhoC-siRNA联合Rapamycin(Rapa)对肝癌细胞Bel7402侵袭和迁移的影响。方法以人肝癌细胞Bel7402为对象,设空白对照组、阴性质粒组、RhoC-siRNA组、RhoC-siRNA联合Rapa组、阴性质粒联合Rapa组、Rapa组、溶媒组,分别采用RhoC基因沉默、Rapa或RhoC基因沉默联合Rapa处理,半定量RT-PCR法比较细胞周期蛋白相关基因CDK2、P16mRNA和侵袭相关基因MMP-2、MMP-9、VEGFmRNA的表达,Transwell小室检测细胞迁移。结果RhoC基因沉默及Rapa可明显抑制肝癌细胞侵袭及迁移,二者联合应用上述效果更加明显。RhoC-siRNA组及Rapa组MMP2、MMP9、VEGF、CDK2基因表达降低,P16基因表达升高(P<0.05)。RhoC-siRNA联合Rapa组MMP2、MMP9、VEGF、CDK2基因表达水平显著下降,P16基因的表达水平显著升高(P<0.05)。RhoC-siR-NA联合Rapa显著抑制肝癌细胞迁移(P<0.01)。结论RhoC-siRNA质粒转染及Rapa可明显抑制肝癌细胞Bel7402的侵袭及迁移;二者联合应用可进一步加强上述效应。     

miR-338-3p对甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化的调控作用

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)过表达靶向沉默信息调节因子（SIRT）6对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的影响。方法 采用荧光素酶报告实验分析miR-338-3p与SIRT6的靶向关系。构建SIRT6 pcDNA载体过表达SIRT6,将miR-338-3p mimic与pcDNA-SIRT6单独或联合转染至TPC-1细胞,根据转染质粒的不同分为6组：对照组（不作处理）、mimic-NC组（转染mimicNC）、miR-338-3pmimic组（转染miR-338-3pmimic）、pcDNA-SIRT6组（转染pcDNA-SIRT6）、mimicNC+pcDNA-SIRT6组（共转染mimic-NC和pcDNA-SIRT6）和miR-338-3p mimic+pcDNA-SIRT6组（共转染miR-338-3p mimic和pcDNA-SIRT6）。分别检测各组TPC-1细胞的克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率及上皮型钙黏蛋白（E-cad）、神经型钙黏蛋白（N-cad）和波形蛋白的表达量。结果 miR-338-3p的...     

羧肽酶A4活化STAT3促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究肿瘤相关基因羧肽酶A4(CPA4)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关分子机制.方法 慢病毒载体构建MHCC97L-CPA4过表达细胞系和MHCC97H-shCPA4敲减细胞系,分别以MHCC97L-vector和MHCC97H-shNC细胞系作为对照.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和weste...     

miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移及SIRT1表达的调控

目的观察前列腺癌PC-3细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)-221和miRNA-222对细胞增殖和迁移的作用,以及对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响。方法设立无处理细胞组(简称control组)、转染空载质粒pEX-5组(简称pEX-5组)、转染miRNA-221反义抑制质粒组(简称miRNA-221抑制组)、转染miRNA-222反义抑制质粒组(简称miRNA-222抑制组),应用细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞增殖的影响;采用细胞划痕修复实验检测miRNA-221和miRNA-222对细胞迁移能力的影响;采用免疫印迹法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测SIRT1在蛋白水平和mRNA水平的变化;采用miRNAanda靶标进行预测分析。结果在成功抑制了PC-3细胞中miRNA-221或miRNA-222的表达后,连续7 d检测细胞活性,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的细胞活性(A450 nm值)较pEX-5组降低1.5~2.0倍,自第3天起两组之间即有明显差异(t=6.7,P0.01;t=5.3,P0.01);划痕实验显示,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的迁移能力明显低于pEX-5组。miRNA-221抑制组、miRNA-222抑制组中SIRT1蛋白的相对表达量分别为(0.26±0.021)、(0.21±0.005 8),与pEX-5组(0.14±0.017)比较差异均有统计学意义(t值分别为6.3、6.4,P均0.05);而SIRT1 mRNA的表达水平3组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-221和miRNA-222能促进前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移能力,影响SIRT1蛋白的表达。     

过表达DcR3对肝癌细胞自噬功能的影响

目的 初步探讨过表达肝癌诱骗受体3(DcR3)对肝癌细胞自噬功能的影响.方法 构建慢病毒载体DcR3稳定转染HepG2细胞株,转染72 h后收集细胞,做进一步处理.以感染空载慢病毒作为对照组(LV-NC组),以感染DcR3过表达慢病毒作为实验组(LV-DcR3组),采用免疫印迹试验(Western blot)检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3B(LC3B)Ⅱ/LC3BⅠ比例、程序性死亡受体1(Beclin1)]的相对表达水平,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测LC3B和Beclin1 mRNA相对表达水平.结果 与LV-NC组相比,LV-DcR3组LC3B和Beclin1 mRNA相对表达水平明显降低(P<0.05),进一步研究发现LV-DcR3组LC3BⅡ/LC3BⅠ比例和Beclin1蛋白的相对表达水平显著下降(P<0.05).结论 DcR3可抑制肝癌细胞发生自噬.     

RNA干扰抑制JMJD3基因表达对肝癌细胞生长,增殖和侵袭的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)抑制含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)基因对肝癌细胞QGY-7703和HepG2的生长、增殖和侵袭能力的影响。方法利用RNA干扰技术沉默JMJD3(siR-JMJD3),以非特异性序列(pSilencer 2.1)转染肝癌细胞QGY-7703细胞和HepG2细胞作为阴性对照,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法、集落形成、Transwell侵袭实验来检测肝癌细胞生长、增殖和侵袭能力的变化。结果 Western Blot检测结果显示,转染siR-JMJD3质粒的试验组成功抑制肝癌细胞中JMJD3的蛋白表达水平。MTT结果显示转入siR-JMJD3后,QGY-7703和HepG2细胞的生长活性与对照组相比分别降低了约25%和17%。集落形成结果显示2种细胞系的集落形成数分别降低了约31%和25%。Transwell侵袭实验结果显示穿膜细胞数分别下降了约44%和47%。结论应用siRNA技术能有效抑制JMJD3基因的表达,同时有效抑制肝癌细胞QGY-7703和HepG2体外生长、增殖和侵袭,为肝癌的生物学治疗提供了新思路。     

microRNA-19对肝癌细胞系迁移与侵袭能力的影响

目的 比较不同转移潜能肝癌细胞系中microRNA-19（mir-19）表达变化,探讨mir-19对不同转移潜能肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 应用TaqMan MGB探针法定量分析mir-19在高转移潜能肝癌细胞系（MHCC97H、LM3）和低转移潜能肝癌细胞系（HepG2、7402）的表达差异.利用转染试剂将人工合成的mir-19的前体转染高转移潜能细胞系,人工合成的mir-19抑制剂转染低转移潜能细胞系.采用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测mir-19对细胞增殖的影响,Transwell小室检测mir-19对细胞的迁移和侵袭能力的影响.结果 在不同转移潜能的细胞系中,mir-19表达水平在高转移潜能细胞系较低转移潜能细胞系表达下调（P〈0.05）.功能实验显示mir-19可抑制肝癌细胞的侵袭和增殖（P〈0.05）,利用生物信息学预测mir-19的靶基因发现,许多癌基因3＇UTR包含与mir-19的互补序列.结论 mir-19可能部分通过调节CREB3L4、PDE4A、JAM2、RUNX2等的表达来抑制肝癌细胞的增殖和侵袭转移.     

过表达HIF-2α对肝癌细胞运动和侵袭的影响

目的:探讨缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)对肝癌细胞运动和侵袭的影响。方法:构建HIF-2α过表达载体,转染肝癌细胞,构建过表达稳定表达细胞株。采用实时荧光定量多聚酶联反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测HIF-2α表达水平,通过Transwell运动实验、划痕实验体外分析过表达HIF-2α对肝癌细胞运动的影响;将过表达HIF-2α细胞原位接种裸鼠,观察小鼠肺脏的转移情况。采用蛋白质印迹法检测EMT相关指标分析HIF-2α促进肝癌细胞运动、侵袭能力的作用机制。结果:将过表达载体转染肝癌细胞后,HIF-2αmRNA和蛋白表达水平均升高(P0.05)。Transwell运动实验发现,高表达HIF-2α后,穿膜细胞数目明显增加(P0.01);划痕实验结果也表明高表达HIF-2α的细胞运动能力增强。体内侵袭实验发现高表达HIF-2α组小鼠肺转移灶大小增加。蛋白质印迹结果显示HIF-2α可促进间质细胞相关标志物蛋白表达增加。结论:过表达HIF-2α可能通过促进肝癌细胞的EMT转化提高肝癌细胞的运动、侵袭能力。     

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检...     

电针刺激对膝骨关节炎软骨细胞SIRT1及p53表达的影响

目的 观察电针刺激对膝骨关节炎（OA）软骨细胞中沉默信息调节因子同源蛋白1 (SIRT1)及p53肿瘤抑制基因表达的影响。 方法 采用随机数字表法将36只实验兔分为对照组、模型组及电针组,每组12只。对照组给予正常饲养,无特殊干预;采用石膏固定法将模型组、电针组实验兔左膝关节伸直位固定6周制成OA模型。制模结束后解除石膏固定,将电针组实验兔绑于治疗台上给予电针刺激,连续治疗16 d;模型组仅固定于治疗台上且不给予电针刺激。待实验结束后按照Mankin评分标准分别对3组实验兔关节软骨肉眼观、光镜下苏木精-伊红（HE）染色结果进行计分;检测各组实验兔软骨细胞SIRT1及p53免疫组化染色灰度值。 结果 电针组关节软骨组织病理学分级、大体形态Mankin评分及HE染色各项Mankin评分均明显优于模型组水平（P<0.05）;3组实验兔软骨细胞中均检测到SIRT1及p53表达;通过进一步比较发现,模型组与对照组、电针组比较,其SIRT1灰度值明显增高（P＜0.01）,p53灰度值明显降低（P＜0.01）,表明模型组SIRT1表达较电针组、对照组明显降低,p53表达较电针组、对照组明显增高。 结论 电针干预能有效改善膝OA病理表现,可能与上调软骨细胞SIRT1、抑制关节软骨细胞凋亡、促进细胞再生等多重途径有关。     

苏拉明对子宫内膜癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的通过观察苏拉明对体外培养的人子宫内膜腺癌细胞KLE株系增殖、迁移以及对肿瘤转移相关基因C-Myc表达的影响,探讨苏拉明靶向治疗子宫内膜癌的可能性。方法用不同浓度的苏拉明处理体外培养的人子宫内膜腺癌细胞KLE,分别在处理后的不同时间点,通过Celltiter-Glo Assay测定各孔发光信号并计算苏拉明处理后各组细胞的增殖率,显微镜观察迁移率,荧光定量RT-PCR检测基因表达水平的改变,利用SPSS 18.0软件对相关数据行统计分析,探讨苏拉明对人子宫内膜腺癌细胞增殖、迁移和C-Myc表达的影响是否具有显著性。结果 Transwell迁移实验中与对照组(未加入苏拉明)[(243±27)个/孔]相比,300μg/ml及600μg/ml苏拉明组的KLE细胞数分别为(158±19)个/孔、(107±15)个/孔,结果显示苏拉明处理后KLE细胞的侵袭能力明显低于对照组(P<0.05),且其抑制效果随着浓度增加而增加(P<0.05)。同时苏拉明能够显著抑制C-Myc基因的表达,给药3 d内,抑制率超过40%。结论苏拉明能有效抑制子宫内膜癌KLE细胞的增殖、迁移。有望成为子宫内膜癌的靶向治疗药物之一。     

香菇多糖对肝癌细胞Huh7.5.1增殖和侵袭的影响

目的:探讨香菇多糖对肝癌细胞Huh7.5.1增殖和侵袭的影响。方法:采用MTT法检测6.25、12.5、25、50、100μg/m L香菇多糖分别作用肝癌细胞24、48、72 h后,肝癌细胞增殖抑制率变化;采用Transwell侵袭实验考察其对细胞侵袭的影响。结果:6.25、12.5、25、50、100μg/m L香菇多糖分别作用肝癌细胞24、48、72h后,细胞的抑制率呈浓度和时间依赖性升高,100μg/m L香菇多糖作用48 h后肝癌细胞抑制率为(50.36±5.13)%,作为后续实验浓度和作用时间;100μg/m L香菇多糖处理肝癌细胞48 h后,肝癌Hep G2细胞体外侵袭能力明显抑制(P0.05)。结论:香菇多糖能够抑制肝癌细胞增殖和侵袭。     

LincRNA00858靶向miR⁃3126⁃5p影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)Linc00858通过调控靶向小分子RNA?3126?5p(miR?3126?5p)影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT?PCR)法检测Linc00858在肝癌组织、癌旁正常组织、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况及两者相对关系...