抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

HDAC1对结直肠癌细胞凋亡及侵袭能力的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对结直肠癌细胞凋亡及侵袭能力的影响。方法结直肠癌细胞Caco2中转染HDAC1 siRNA和siRNA control记为HDAC1 siRNA和siRNA-NC,以不做转染的细胞为Control。qRT-PCR、Western blotting检测细胞HDAC1 mRNA、HDAC1蛋白水平,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,Western blotting测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)蛋白水平。结果 siRNA-NC细胞HDAC1 mRNA、HDAC1蛋白、细胞凋亡率、细胞侵袭、迁移数目和MMP-2、MMP-9、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平与Control相比无明显变化(P0.05)。HDAC1 siRNA细胞HDAC1 mRNA、HDAC1蛋白明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞侵袭和迁移数目明显减少,细胞MMP-2、MMP-9蛋白水平表达下降,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平升高,与Control相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HDAC1表达下调诱导结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞侵袭及迁移,其作用机制与下调MMP-2、MMP-9和促进Bax、Cleaved caspase-3表达有关。     

MACC1在卵巢癌组织中表达及对卵巢癌细胞生物学特性的影响

目的探讨结肠癌转移相关基因(MACC)1在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞生物学特性的影响。方法收集卵巢癌组织及对应的癌旁组织,Western印迹检测组织中MACC1表达水平。以卵巢癌细胞A2780为研究对象,细胞转染MACC1小干扰RNA(MACC1 siRNA)、siRNA对照(siRNA control),细胞分为未转染组(只加入转染试剂)、siRNA control组(转染siRNA control)、MACC1 siRNA组(转染MACC1 siRNA)。培养24 h后,Western印迹检测细胞中MACC1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果卵巢癌组织中MACC1表达水平高于癌旁组织。siRNA control组细胞中MACC1、MMP-2、MMP-9表达水平及细胞存活率、迁移率、侵袭细胞数目与未转染组相比均没有差异,MACC1 siRNA组细胞中MACC1、MMP-2、MMP-9表达水平及细胞存活率、迁移率、侵袭细胞数目均明显低于未转染组。结论 MACC1在卵巢癌组织中过度表达。干扰MACC1能够抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,作用机制可能与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

miR-193b对结肠癌细胞侵袭转移的影响及其机制

目的探讨miR-193b对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测高转移细胞系SW620、低转移细胞系中SW480 miR-193b的表达,同时设计miR-193b siRNA及miR-193b利用脂质体2000转染入细胞内,并通过RT-PCR检测其转染效率,利用体外划痕及Transwell实验验证转染miR-193b siRNA及miR-193b后对肿瘤细胞的侵袭转移能力的影响,利用Western印迹验证miR-193b对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响。结果 RT-PCR结果显示miR-193b在高转移细胞系SW620中表达水平显著低于转移细胞系SW480;RT-PCR检测转染效率的结果显示转染miR-193b-siRNA的SW480细胞中miR-193b的表达较对照显著降低,而在转染mimic-miR-193b的SW620细胞中其表达水平明显升高;体外划痕实验结果显示SW480-miR-193b-siRNA细胞体外迁移能力显著升高,而在转染mimic-miR-193b的SW620细胞中其迁移能力较对照组显著降低;Transwell小室结果显示体外细胞侵袭及迁移实验中过表达miR-193b均可明显抑制SW620细胞的侵袭转移能力,而抑制miR-193b的表达可显著增加SW480侵袭转移潜能;Western印迹显示过表达miR-193b可显著降低SW620细胞中uPA蛋白的表达,抑制miR-193b可明显提高SW480中uPA蛋白的表达水平。结论 miR-193b通过下调uPA可抑制结肠癌细胞的侵袭和转移。     

吲哚美辛联合奥沙利铂对大肠癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的研究抗炎类药物吲哚美辛联合抗癌药物奥沙利铂对人大肠癌细胞SW620生物学行为的影响,并初步探讨其作用机制。方法体外培养人大肠癌细胞株SW620,将细胞随机分为四组进行处理,对照组、吲哚美辛组、奥沙利铂组、吲哚美辛联合奥沙利铂组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组大肠癌细胞增殖抑制情况,采用流式细胞术检测各组大肠癌细胞凋亡情况,采用Transwell实验检测各组大肠癌细胞体外迁移和侵袭能力,采用Western blotting检测各组大肠癌细胞活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达情况。结果与对照组比较,吲哚美辛组和奥沙利铂组大肠癌细胞增殖抑制率显著升高(P0.05)。与单用药组比较,联合用药组大肠癌细胞增殖抑制率、凋亡率、迁移和侵袭能力均明显升高,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达量明显升高,MMP-2、MMP-9蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论吲哚美辛联合奥沙利铂可协同增强对大肠癌细胞增殖、侵袭和转移抑制作用,协同诱导细胞凋亡,其作用机制可能与吲哚美辛、奥沙利铂调控细胞中Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。     

支架蛋白RACK1小干扰RNA抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭

目的观察支架蛋白RACK1小干扰RNA(siRNA)对卵巢癌CAOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响和基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达变化。方法体外培养CAOV3细胞,实验分scramble siRNA组和RACK1 siRNA组;Lipofectamine 2000转染CAOV3细胞,Western印迹检测RACK1的干涉效能;MTT法测定CAOV3细胞的增殖率;划痕实验和transwell迁移和侵袭实验研究RACK1对细胞体外增殖、迁移和侵袭运动能力的影响;Western印迹检测CAOV3细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果与scramble siRNA组比较,RACK1 siRNA组RACK1的蛋白表达水平降低,明显抑制CAOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,降低MMP-2和MMP-9蛋白表达。结论下调RACK1表达可抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与改变MMP-2和MMP-9蛋白表达相关。     

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组：NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<...     

siRNA干扰缺氧诱导因子2α对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及相关机制

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)-2αsiRNA对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响及相关机制。方法采用RNA干扰(RNAi)技术沉默已建立的缺氧细胞模型MCF-7细胞中HIF-2α的表达;RT-PCR方法检测转染后MCF-7细胞中HIF-2αmRNA的表达;采用划痕实验和侵袭实验探讨细胞侵袭能力的变化;采用Western印迹和RT-PCR方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达。结果 RNAi结果显示,缺氧+siRNA组HIF-2αmRNA的表达与单纯缺氧组相比均明显降低(P<0.05);转染后划痕实验结果显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比细胞伤口愈合速度明显减慢。Transwell侵袭实验显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比穿膜细胞数显著减少(P<0.05);Western印迹和RT-PCR结果显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,MMP-2蛋白及mRNA表达均下调(P<0.05)。结论 HIF-2αsiRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的机制之一可能与MMP-2基因的表达下调有关。     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。     

干扰FTO蛋白对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 观察干扰脂肪量和肥胖相关蛋白（FTO）对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法 取对数生长期SKOV3细胞,分为siFTO-1组、siFTO-2组、si-NC组,siFTO-1组转染第一条靶向FTO的小干扰RNA(siFTO-1),siFTO-2组转染第二条靶向FTO的小干扰RNA(siFTO-2),si-NC组转染无靶向作用的小干扰RNA(si-NC),CCK-8法检测细胞增殖能力（增殖率）,细胞划痕实验检测细胞迁移能力（相对迁移率）,Transwell实验检测细胞侵袭能力（穿膜细胞数）,Western blotting法检测细胞AKT、p-AKT/AKT、PI3K、p-PI3K/PI3K蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,siFTO-1组和siFTO-2组细胞增殖率、相对迁移率、穿膜细胞数高（P均<0.05）;与si-NC组比较,siFTO-1组和siFTO-2组p-AKT/AKT和P-PI3K/PI3K蛋白相对表达量升高（P均<0.05）,PI3K、AKT蛋白相对表达量无显著变化（P均>0.05）。结论 干扰FTO可促...     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

小干扰RNA沉默甲胎蛋白基因对HepG2细胞迁移及侵袭的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法应用合成的靶向沉默AFP小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞,分为空白对照、阴性对照组及AFP siRNA组,各组细胞干预48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测细胞转染后的沉默效率,Transwell小室实验检测沉默AFP基因后HepG2细胞的侵袭、迁移能力,用Western blotting法观察沉默AFP基因的表达对上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、Vimentin和E-cadherin)、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果转染沉默后,与空白对照组相比,AFP siRNA组中AFP mRNA的相对表达量明显降低(P 0.01),抑制率达86.440%,同时AFP siR NA组细胞上清液中AFP蛋白表达水平同样明显降低(P 0.01)。与空白对照组相比,AFP siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降,差异具有统计学意义(P值均0.01)。沉默HepG2细胞中AFP基因的表达后,与空白对照组比较,AFP siRNA组EMT相关蛋白E-cadherin蛋白的表达水平升高(P 0.01),而N-cadherin及Vimentin表达水平均明显降低(P值均0.05),且PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT的表达水平明显降低(P 0.01)。结论沉默AFP可抑制肝癌细胞转移,基于HepG2细胞株的机制研究可能与阻断PI3K/Akt通路抑制EMT相关。     

Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响。方法甲状腺癌BCPAP细胞转染Six1小干扰RNA(Six1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),采用细胞划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭,Western印迹检测Six1、神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达。结果转染siRNA control后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比无变化。转染Six1 siRNA后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比明显降低,而E-cadherin蛋白水平明显升高。结论敲低Six1可能通过影响E-cadherin、N-cadherin表达抑制甲状腺癌细胞侵袭迁移。     

HVEM基因干扰后非小细胞肺癌细胞的迁移、侵袭能力变化及其机制

目的 观察疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因干扰对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 通过Western blotting法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC`细胞系SKMES-1、H1299、H460、H226、H520中HVEM蛋白表达,筛选出HVEM蛋白表达升高最明显的H1299细胞进行后续实验。将H1299细胞分为si-NC组、si-HVEM-1组和si-HVEM-2组,分别用Lipofectamine 2000瞬时转染si-NC、siHVEM-1和si-HVEM-2干扰序列,转染48 h。采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测HVEM、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,si-HVEM-1组和si-HVEM-2组迁移、侵袭细胞数及HVEM mRNA、蛋白相对表达量均减少,且si-HVEM-2...     

敲低hnRNP H基因对子宫内膜癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨敲低核不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H)基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭转移的影响。方法将hnRNP H siRNA转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,利用实时定量PCR、Western印迹方法检测(对照组、阴性对照组、siRNA组),确定siRNA沉默效率(hnRNP H mRNA、蛋白表达)、上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-钙黏着蛋白E-cadherin、神经型钙黏附蛋白N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-7表达情况,划痕实验及Transwell检测细胞迁移能力的改变。结果对照组E-cadherin表达少,而转染组E-cadherin表达明显升高,有统计学差异(P<0.05);对照组N-cadherin、MMP-2及MMP-7表达显著高于转染组(P<0.05)。结论沉默hnRNP H基因能抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化,有效抑制子宫内膜癌细胞转移和侵袭。     

沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC-9706细胞中MMP-9基因表达的影响

目的:探讨在食管鳞癌EC-9706细胞中沉默CXCR4基因对MMP-9基因表达的影响,为阐明CXCR4基因在食管鳞癌侵袭转移中的作用提供实验依据.方法:化学合成2条靶向CXCR4基因的siRNA1和siRNA2,同时设立荧光标记阴性对照和空白对照.脂质体法转染入EC-9706细胞,荧光显微镜下观察转染效率.转染48h后,半定量RT-PCR检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因蛋白表达的变化,侵袭小室检测各组细胞穿膜细胞数的变化,MTT检测各组细胞的A值.结果:与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞CXCR4mRNA和蛋白的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);同时与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达同样明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞穿膜细胞数与阴性对照和空白对照相比明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT结果显示转染CXCR4siRNA1和siR...     

Syndecan-1对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景:Syndecan-1是表达于上皮细胞表面的一种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,在多种肿瘤细胞中的表达下降,与肿瘤的多种生物学行为密切相关,但其在细胞水平上对结直肠癌发展的作用目前尚无深入的研究。目的:评估Syndecan-1对人结肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:分别将Syndecan-1高表达质粒和Syndecan-1 siRNA转染人结肠癌细胞株SW620和SW480,分别以转染空载质粒或无关序列作为阴性对照。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell细胞迁移实验和Matrigel细胞侵袭实验分别检测细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮细胞间质转化主要分子标记物E-cadherin的蛋白表达。结果:与阴性对照组相比,转染Syndecan-1高表达质粒的SW620细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显降低,同时E-cadherin表达升高;转染Syndecan-1 siRNA的SW480细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显升高,同时E-cadherin表达降低。结论:Syndecan-1能抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与上皮细胞间质转化有关。     

RNA干扰基质金属蛋白酶-9对骨肉瘤MG-63细胞侵袭、迁移的影响

目的探讨RNA干扰基质金属蛋白酶(MMP)-9基因对人骨肉瘤MG-63细胞体外侵袭和迁移能力的影响。方法通过慢病毒载体介导shRNA-MMP-9转染MG-63细胞,实验分为:转染组(转染shRNA-MMP-9序列)、对照组(转染shRNA-MMP-9-NC序列)、空白组(磷酸盐缓冲液);RT-PCR检测各组MMP-9和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;Western印迹检测各组MMP-9和VEGF蛋白的表达;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力;细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果转染组MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白表达量显著低对照组和空白组(P0.05);转染组穿膜细胞数[(56.37±3.29)个/视野]显著低于对照组和空白组[(92.06±3.56)个/视野、(93.05±1.52)个/视野](P0.05);转染组划痕愈合率(23.63%±1.47%)显著低于对照组和空白组(57.17%±3.86%、58.13%±2.35%)(P0.05)。结论 RNA干扰沉默骨肉瘤MG-63细胞的MMP-9基因表达,通过作用于VEGF靶基因,抑制其细胞侵袭及迁移能力。     

WWOX对胆囊癌细胞侵袭及迁移能力的影响

目的研究含WW域的氧化还原酶(WW Domain-containing Oxidoreductase,WWOX)对胆囊癌细胞侵袭及迁移能力影响。方法胆囊癌细胞株GBC转染过表达WWOX的真核表达载体(pc DNA3. 1-WWOX)和对照载体(pc DNA3. 1),同时以不做转染的细胞为Control,qRT-PCR检测WWOX水平,Western blotting检测WWOX、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)水平,CCK8检测细胞增殖活性,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果 pc DNA3. 1细胞中WWOX、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin水平和细胞增殖、迁移、侵袭能力与Control相比,差异无统计学意义(P 0. 05)。pc DNA3. 1-WWOX中WWOX水平明显升高,其细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平下降,E-cadherin水平升高,与Control相比差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 WWOX抑制胆囊癌细胞侵袭和迁移,下调细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平,提高细胞中E-cadherin表达。     

lncRNA MVIH在结直肠癌细胞中表达及干扰其表达对SW620细胞功能的影响

目的 探讨肝癌微血管浸润相关的lncRNA (lncRNA MVIH)在结直肠癌细胞中的表达及干扰其表达对SW620细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响。方法 采用实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测lncRNA MVIH在人正常结直肠上皮细胞株FHC和人结直肠癌细胞株SW480、HT29、LOVO、SW620中的表达。将体外培养的SW620细胞分为对照组、阴性组和干扰组,采用CCK-8法、平板克隆实验和Transwell小室法分别检测细胞增殖、克隆形成及细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测细胞中上皮间质转化相关的蛋白E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和N-cadherin的表达。结果 与FHC细胞相比,SW480、HT29、LOVO和SW620细胞中lncRNA MVIH表达水平显著升高(P<0.05),且SW620细胞最高。与对照组相比,干扰组细胞中lncRNA MVIH和Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白的表达水平显著升高,且细胞增殖能力显著减弱,克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细...