血清总同型半胱氨酸候选参考测量程序(液相色谱串联质谱法)的建立及性能评估

目的建立一种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清总同型半胱氨酸(Hcy)候选参考测量程序并对其性能进行评价。方法采用一种简单的蛋白沉淀方法对血清样本进行前处理,然后采用LC-MS/MS定量检测总Hcy,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI) C62-A文件和C50-A文件对建立的候选参考方法进行线性、检测限与定量限、基质效应、精密度、正确度等基本分析性能验证。结果 LC-MS/MS检测总Hcy的线性范围为0.5～200.0μmol/L。定量限和检测限分别为0.31 nmol/g、0.06 nmol/g。3种不同比例(1∶1、80∶20、20∶80)的血清与溶液混合物的相对基质效应分别为1.94%、1.91%、1.78%。批内、批间变异系数(CV)分别为2%和1%。3种浓度(30.58、49.21、65.42 nmol/g)的加标样本平均加标回收率分别为99.8%、100.2%、100.8%。测定NIST SRM 1950标准物质的结果偏移1%。样本处理后分别在室温[(23±2)℃]和自动进样器(温度为10℃)中放置24 h,检测结果均非常稳定。结论成功建立了基于LC-MS/MS技术的血清总Hcy候选参考测量程序。该参考测量程序准确度高、精密度好,能够用于常规临床检验方法的量值溯源,保证测定结果的准确性。     

艾瑞德免疫分析仪C反应蛋白检测项目的性能评价

目的对检测C反应蛋白的艾瑞德干式免疫分析仪进行性能验证,确保其结果的准确、可靠。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)推荐的EP5-A2文件进行精密度验证,参考EP15-A2文件进行正确度的验证,参考EP6-A2文件进行线性范围的验证,参考CLSI C28-A2文件进行参考区间的验证,参考常规检测方法进行携带污染率的验证。结果全血高、低浓度批内精密度分别为3.29%、3.68%,总精密度分别为4.91%、5.26%;参考区间为0~10mg/L;线性回归方程Y=1.070 2 X+0.448 4,r=0.979;线性范围为2.5~160.0mg/L;携带污染率小于1%。结论艾瑞德免疫分析仪具有良好的精密度、准确度,较宽的线性范围、较快的检测速度等优点,适用于临床检测。     

血清胆汁酸LC-MS/MS测定及在老年人血清检测中的应用

目的：建立稳定、有效的血清中所有胆汁酸的液相色谱-串联质谱（LC-MS／MS）测定方法，分析老年人血清胆汁酸谱的特征。方法：建立血清胆汁酸LC-MS／MS定量检测方法，并对方法的灵敏度、精密度、回收率、线性范围等性能指标进行评价；利用该检测方法对10例老年人和15例儿童的空腹血清中所有胆汁酸进行定量检测，分析老年组血清胆汁酸组成特征。结果：该检测体系中，血清中15种胆汁酸和内标在10分钟内完成定量检测，最低检测极限为2～4ng／ml，浓度在3．9～3000ng／ml范围内线性良好，相对回收率为91．95～108．25％，偏移系数为1．71％～10．83％，日内变异度为0．68％～7．05％，日间变异度为2．04％～11．05％；与儿童组相比，老年组血清中胆汁酸总量、疏水性胆汁酸的含量百分较高。结论：所建立的胆汁酸LC-MS／MS检测方法稳定可靠，能满足临床定量检测要求；老年人体内血清胆汁酸谱可能促进胆石症的发生。     

VITROS XT 3400生化分析系统测定8种新型复合干片项目的性能验证

目的 评价清蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐(Cr)、尿素(Urea)、总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)8种复合干片项目在VITROS XT 3400生化分析系统中的性能。方法 参照CLSI EP15-A3文件验证8种复合干片项目的正确度；参照WS/T492—2016文件验证项目的精密度；参照CLSI EP06-Ed2文件验证项目的线性范围；参照CLSI C28-A3c文件验证项目的参考区间；参照CLSI EP7-A2文件验证项目的抗干扰能力；参照CNAS-GL047文件进行方法学比对。结果 8种复合干片项目的正确度验证结果显示，检测结果的均值均在确认区间(VI)内或检测偏差≤1/2允许总误差(TEa),符合EP15-A3文件要求。8种复合干片项目2个水平的精密度测定样品实验室内变异系数均≤1.66%,符合<1/3TEa的要求。所有项目检测结果的线性偏差90%置信区间(CI)均与1/2TEa相交，符合EP06-Ed2文件要求。参考区间验证显示90%以上的表观健康人群检测值落在厂商预设的参考区间之内，符合C28-A3...     

均相酶法检测香草扁桃酸方法学评估及相关指标生物参考区间建立

目的评估均相酶法检测香草扁桃酸(VMA)主要方法学性能;建立适合本地区成年人群随机尿VMA/尿肌酐(Ucr)比值生物参考区间。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP15-A、EP6-A、EP17-A、C28-A3文件,对精密度、线性范围、定量检测下限,参考区间进行验证。采用两个水平校准品,测定均值,计算均值与靶值的偏倚,验证其准确度;参照CLSI C28-A3,建立随机尿VMA/Ucr比值生物参考区间。收集37例肾上腺疾病及高血压相关疾病患者随机尿及24h尿,分别检测其VMA及Ucr,比较24h尿VMA及随机尿VMA/Ucr之间的相关性。结果均相酶法检测VMA,计算均值与靶值的平均偏倚为17.34%;批内、批间精密度CV10%;线性范围为1.74~96.77mg/L(R~2=0.989 5);VMA的LoQ为2.2mg/L;健康个体24h尿VMA均在厂家声明参考区间内。随机尿VMA/Ucr比值95%参考区间为(0.333~1.259)×10~(-3) mg/μmol(1.67~6.29μmol/mmol)。肾上腺疾病及高血压患者24h尿VMA与随机尿VMA/Ucr相关性为r=0.579(P0.01),二者具有明显相关性。结论均相酶法检测VMA主要方法学性能符合实验室要求,满足临床应用;成功建立适合本地区成年人群随机尿VMA/Ucr比值的生物参考区间。     

罗氏cobas 8000全自动生化分析仪的性能验证

目的 验证罗氏cobas 8000全自动生化分析仪的分析性能。方法 按照NCCLS推荐的EP5-A2验证批内和批间精密度,按照EP15-A2文件验证准确度,按照NCCSL EP6-A文件验证线性范围,按照CLSI C28-A2文件验证参考区间。结果 批内精密度在0.5%~2.3%,批间精密度在0.8%~3.11%,结果均小于1/4Tea(CLIA′88);各项目的检测结果与靶值均有较好的相关性(r2>0.99);各个检测项目的线性范围均符合试剂说明书给定的线性范围;引用的生物参考区间均符合本实验室服务的人群。结论 罗氏cobas 8000全自动生化分析仪的各项性能指标均符合质量要求,可用于临床常规生化检测工作。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定15种胆汁酸的方法分析

目的初步建立同时测定人体血清中15种胆汁酸的超高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的分析方法。方法通过同位素标记的胆汁酸作为内标,使用乙腈对血清中的胆汁酸进行提取,采用Waters BEH C18色谱柱,对15种胆汁酸进行分离。使用串联质谱进行检测,在负离子模式使用多反应监测模式定量分析血清中胆汁酸的浓度。结果 15种胆汁酸在1.0~6 000.0nmol/L范围内线性关系良好,线性相关系数r20.993;目标物的定量限为1.0~10.0nmol/L;低、中、高浓度的平均回收率为97.1%~108.3%,日内、日间平均相对标准偏差小于7.8%。所开发的方法被应用于检测24例健康志愿者的血清标本,健康者的胆汁酸以甘氨酸结合型为主,游离型胆汁酸和牛磺酸结合型胆汁酸浓度相对较低。男性血清中脱氧胆酸浓度显著高于女性,男性血清中甘氨熊脱氧胆酸浓度显著低于女性,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中15种胆汁酸的水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清15种胆汁酸检测的参考方法。     

超高效液相色谱－串联质谱联用检测血清胆汁酸谱方法的建立及初步临床应用

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)联用方法检测血清中胆汁酸表达的方法,并初步探讨胆汁酸亚型与肥胖的关系.方法 采用固相萃取方法处理血清标本,经UPLCHSS T3色谱柱梯度洗脱后,用负离子多反应监测模式对血清中的胆汁酸组分进行质谱检测,并根据中国国家食品药品监督管理局(SFDA)的指导原则对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、不精密度和相对回收率进行性能验证.利用UPLC-MS/MS方法检测10例单纯性肥胖者和10名健康对照者血清胆汁酸浓度,并采用秩和检验进行统计分析.结果 UPLC-MS/MS方法可同时检测人血清中14种胆汁酸亚组分,在10～20 000 nmol/L范围内线性相关良好.其对不同亚组分的最低检出限(LOD)为0.02～7.90 nmol/L,最低定量限(LOQ)为0.07～44.20 nmol/L;其日内不精密度为0.35％～12.41％;日间不精密度为1.11％ ～13.04％;相对回收率为89.8％～114.6％.初步临床应用显示,单纯性肥胖者及健康对照者血清胆汁酸谱色谱图有一定差异,单纯性肥胖者血清中游离胆汁酸和结合胆汁酸浓度分别为0.49(0.45 ～1.90)、1.44(0.84～3.72) μmol/L,均低于健康对照组的0.98(0.53～3.06)、1.99(0.67 ～2.88) μmol/L,但差异均无统计学意义(Z=-0.958、-0.801,P均＞0.05).结论 建立的UPLC-MS/MS方法可有效分离并定量检测血清中各种胆汁酸亚型,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,可用于临床标本游离胆汁酸和结合胆汁酸的分析测定.     

液相色谱-串联质谱法检测人血浆中碘帕醇

目的建立一种稳定的检测人血浆碘帕醇的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),并对该方法进行性能评价。方法以氘代同位素作为内标,人血浆样品经直接沉淀法前处理后进样,用XSelect^TM HSS PFP色谱柱进行分离,用含0.1%甲酸-5mmol/L九氟戊酸-10%乙腈的水溶液等度洗脱;正离子电喷雾离子化扫描检测,多反应监测(MRM)扫描分析,建立检测血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。根据CLSI EP10-A和CLSI C62-A,评价该方法的线性范围、正确度、精密度、选择性、基质效应、稳定性。结果 LC-MS/MS检测血浆碘帕醇的线性范围为1～1 000μgI/mL(以含碘量计算);低、中、高浓度(3、50、800μgI/mL)血浆质控品检测结果与理论靶值的偏移为-6.1%～7.5%,重复性以不精密度表示,CV<6.6%(4.6%～6.6%),期间精密度CV<8.5%(6.6%～8.5%),方法回收率为92.5%～95.9%,基质效应为88.8%～95.2%;方法选择性良好,溶血和脂血因素均不影响检测结果。血浆样品在室温下放置最好不要超过48 h,在-80℃下反复冻融不超过2次,经前处理后的血浆样品4℃自动进样器中放置不超过72 h,碘帕醇可稳定检测。结论建立并评价了一种可靠的检测人血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。     

同位素稀释液相色谱-串联质谱法检测血清睾酮候选参考方法的建立及应用

目的建立基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清睾酮候选参考方法,并采用该方法对临床常规检测方法(微粒子化学发光法)的正确性进行评价。方法采用睾酮-2,3,4-~(13)C_3作为内标,以等体积比的正己烷-乙酸乙酯溶液对样本进行液液萃取,上清液采用氮气吹干后用流动相复溶,进行LC-MS/MS分析。采用五点包括法计算血清睾酮浓度。参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)C62-A文件和EP15-A3文件对建立的同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法进行性能评价(方法残留、特异性、线性范围、精密度、准确度),参考CLSI EP9-A3文件对微粒子化学发光法的正确性进行评价。结果建立的ID-LC-MS/MS方法检测血清睾酮的分析时间为5min,特异性好,无残留,线性范围为0.034～22.00ng/mL,批内不精密度≤2.3%,批间不精密度≤2.2%,测定有证参考物质SRM971(Level male)的相对偏移为0.2%,测定2017 RELA-A、2017 RELA-B样本的相对偏移分别为-2.9%、-3.3%,测定2017 RELA-A样本的不确定度为0.11 ng/mL。微粒子化学发光法与ID-LC-MS/MS的相关性较好(r=0.963),但偏差较大[总平均偏差为-24.4%,低浓度样本(≤1 ng/mL)平均偏差为-62.4%,高浓度样本(1 ng/mL)平均偏差为6.3%]。结论成功建立了检测血清睾酮的ID-LC-MS/MS候选参考方法。该方法的精密度、准确度均较好,且操作简单,分析时间短。     

Axceed 260测定人血清中糖类抗原50性能验证

目的验证Axceed 260磁微粒全自动化学发光免疫分析系统(MCLIA)检测人血清中糖类抗原50(CA50)的分析性能。方法依照美国临床实验室标准化协会(CLSI)公布的EP15-A2、EP28-A3c、EP6-A、EP7-A2标准指南文件,对Axceed260检测CA50项目的精密度、正确度、参考区间、线性范围、分析干扰进行验证。结果 Axceed 260检测CA50项目的批内精密度、实验室内精密度变异系数分别为3.45~4.95%和3.35~4.64%;定值参考物测值在验证区间内;测定线性范围与厂商提供的范围一致;参考区间适用于本地区人群;与CA199,CA125无交叉反应;常规干扰物(胆红素(0.2mg/ml)、血红蛋白(5mg/ml)、甘油三酯(10mg/ml))对试剂盒无影响。结论 Axceed 260磁微粒全自动化学发光免疫分析仪检测糖类抗原CA50的主要分析性能与厂家声明一致,适用于临床检测需求。     

尿微量白蛋白检测试剂盒性能验证

目的对Orion免疫比浊法尿微量白蛋白(m ALB)检测试剂盒的性能进行验证。方法根据中华人民共和国卫生行业标准(WS/T)492-2016文件进行精密度和正确度验证,根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)的EP6-A2文件进行线性范围验证,根据CLSI的C28-A2文件进行生物参考区间验证。结果共检测5批10个标本,批内精密度为0.7%~1.0%,批间精密度为1.5%~1.8%,小于1/4美国临床实验室修正法规1988(CLIA'88)的允许范围和1/3 CLIA'88的允许范围;正确度验证实验显示高,低两个浓度水平校正品靶值均在置信区间范围内;线性范围验证显示在6.45~151.40 mg/L呈线性;参考区间验证显示参考区间有效。结论采用Orion免疫比浊法的m ALB检测试剂盒性能良好,可以满足临床的质量要求。     

液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测。方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析。用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05%甲酸)-水(0.05%甲酸),流速为0.3 m L/min。用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据"生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)"对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价。用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间。结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05~10 nmol/L范围内线性关系良好。该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15%,稳定性良好。初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法。     

液相色谱串联质谱法检测血浆12种神经酰胺方法建立与性能评价

目的建立一种稳定、灵敏的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测人血浆12种神经酰胺方法。方法收集2021年10月至2022年10月在遵义医科大学及其各附属医院健康体检的438名表观健康人群, 建立12种神经酰胺生物参考区间。采用氘代同位素作为内标, 使用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm, 1.7 μm)色谱柱进行分离, 流动相为水(含0.1%甲酸)和异丙醇:乙腈(1∶1, v/v, 含0.1%甲酸), 流速0.4 ml/min, 梯度洗脱。使用Qlife Lab 9000 Plus三重四极杆质谱建立LC-MS/MS检测12种神经酰胺的方法。并从线性、定量下限、精密度、回收率和稳定性几个方面对该方法进行性能评价。结果该方法通过了线性、定量下限、回收率、精密度、稳定性的性能评价。12种神经酰胺批内和批间精密度为1.3%～14.3%, 正确度通过加标回收实验验证, 回收率在91.9%～111.0%, 最低定量下限范围为0.001～0.100 μmol/L, 标准曲线显示出良好的线性关系(r>0.990), 稳定性实验显示12种神经酰胺在生物基质中及不...     

罗氏 cobas 8000全自动生化分析仪的性能验证

目的：验证罗氏 cobas 8000全自动生化分析仪的分析性能。方法按照 NCCLS 推荐的 EP5-A2验证批内和批间精密度,按照 EP15-A2文件验证准确度,按照 NCCSL EP6-A 文件验证线性范围,按照 CLSI C28-A2文件验证参考区间。结果批内精密度在0．5％～2．3％,批间精密度在0．8％～3．11％,结果均小于1/4 Tea（CLIA′88）;各项目的检测结果与靶值均有较好的相关性（r2＞0．99）;各个检测项目的线性范围均符合试剂说明书给定的线性范围;引用的生物参考区间均符合本实验室服务的人群。结论罗氏 cobas 8000全自动生化分析仪的各项性能指标均符合质量要求,可用于临床常规生化检测工作。     

妊娠期女性血浆抗凝血酶Ⅲ和D-二聚体参考区间的建立

目的建立该实验室不同孕期健康孕妇血浆抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)和D-二聚体(D-D)参考区间。方法选取该院2 850例不同孕期健康孕妇及同期260例非妊娠期健康女性,采用法国STA-R Evolution全自动血凝仪及配套试剂,检测所有研究对象的AT-Ⅲ活性及D-D浓度,参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)C28-A3文件,建立该实验室各指标的参考区间。结果非妊娠健康女性血浆AT-Ⅲ及D-D参考区间分别为84.7%~123.3%,≤0.52μg/mL。≤13孕周、13~27孕周、27孕周的孕妇血浆AT-Ⅲ的参考区间分别为81.8%~115.8%、77.7%~112.1%、68.1%~113.1%。≤13孕周、13~20孕周、20~27孕周、27孕周的孕妇血浆DD的参考区间分别为:≤0.75、≤1.04、≤2.14、≤3.24μg/mL。结论建立该实验室健康孕妇不同孕期血浆AT-Ⅲ及D-D的参考区间,有助于临床评价妊娠期女性凝血、抗凝及纤溶功能。     

基于EP文件的西门子全自动检验流水线性能验证

目的对西门子Aptio Automation自动化系统检验流水线从准确度、精密度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间5个方面进行性能验证,以保证其检测结果的准确可靠性。方法根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)颁布的有关系统性能验证EP5-A2、EP9-A、EP6-A文件的方法对选定的检测项目的准确度、精密度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间进行评价。结果批内精密度小于1/4CLIA′88,总精密度小于1/3CLIA′88;线性范围与厂家声明一致;临床可报告范围满足临床实践要求。结论西门子Aptio Automation自动化系统检验流水线符合质量目标要求,可用于临床检测。     

尿液10项肾损伤标志物检测试剂的性能评价

目的 对尿液10项肾损伤标志物检测试剂进行性能评价,并评估其临床适用性。方法 对北京利德曼公司尿液α₁微球蛋白(u-α₁MG)、总蛋白(u-TP)、免疫球蛋白G(u-IgG)、微量清蛋白(u-Alb)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(u-NGAL)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(u-CysC)、视黄醇结合蛋白(u-RBP)、β₂微球蛋白(u-β₂MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(u-NAG)、转铁蛋白(u-Trf)检测试剂盒进行性能评价。正确度和精密度验证参考美国临床和实验室标准协会(CLSI) EP15-A3,验证物质采用ERM-DA470k、ERM-DA471、B2M-NIBSC等参考物质及纯度物质;线性验证参考CLSI EP06;抗干扰能力参考CLSI EP07;不同检测系统间比对参考CLSI EP09。结果 正确度方面,10项标志物检测试剂测定标准物质在低值、中值、高值的偏倚分别为-2.69%～4.67%、-3.60%～3.33%、-2.38%～3.02%;不精密度方面,重复性以不精密度...     

临床实验室对定量检测产品精密度的评价

随着体外诊断(IVD)行业的不断发展以及临床实验室对IVD定量检测产品精密度验证活动的不断实践和认识的加深,国家、行业、用户对产品质量要求不断提高。为了使临床实验室对于IVD定量检测产品精密度验证达成统一标准,笔者依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP15-A3文件,编制了临床实验室定量测量项目精密度验证程序,旨在为临床实验室IVD定量检测产品精密度的验证提供参考。     

全自动生化分析仪检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性能验证

目的对奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)进行性能验证。方法参照CLSI EP5-A2、EP6-A、C28-A2文件和相关文献要求,对奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG进行精密度、功能灵敏度、线性范围、临床可报告范围和参考区间的验证试验。结果 NAG的高、低浓度标本总变异系数分别为6.05%和9.50%;功能灵敏度为0.72U/L;线性范围为1.5~196.0U/L;临床可报告范围为0.72~1 960.00U/L;参考区间为0.3~12.0U/L。结论奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG的各项分析性能与厂家的声明基本一致,可用于临床检测。