苦参碱对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠中Nrf2表达的影响

目的观察Nrf2在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化中的表达及作用,以及苦参碱干预对大鼠肺组织中Nrf2表达的影响。方法按随机数字表法将120只SD大鼠分为正常空白对照组(C)、模型组(M)、泼尼松处理组(P)、苦参碱50处理组(M50)、苦参碱100处理组(M100)。采用免疫组化法(SP)分析每组不同时间点肺组织中Nrf2蛋白水平,RT-PCR检测大鼠肺组织中Nrf2 m-RNA的表达。结果四组实验组动物肺系数在造模后第7、14、28天均高于空白对照组动物(P<0.05);M100组动物肺系数明显低于M组及P组、M50组动物(P<0.05);图像定量分析显示Nrf2在M组、P组、M50组和M100组造模后Nrf2表达高于C组,其中M组的表达量低于P组、M50组、M100组,且其表达在第7、14和28天依次降低(P<0.05)。结论 Nrf2表达在博来霉素诱导的大鼠肺间质纤维化有一定抑制作用,其机制之一可能与早期抑制氧化应激反应有关;苦参碱有抑制博来霉素诱导的大鼠肺纤维化作用,可能与早期上调Nrf2表达调节氧化应激有关。     

慢性氟中毒作用下小鼠切牙成釉细胞的改变

目的 通过观察慢性氟中毒作用下小鼠切牙成釉细胞形态学变化,探讨氟斑牙形成机制。方法培养制作小鼠氟斑牙动物模型,在不同时期肉眼观察各时期成活小鼠切牙颜色及釉质表面变化;45d后处死动物,HE染色,光镜观察小鼠切牙成釉细胞各个时期的细胞形态学变化。结果 随着小鼠日常饮用水中氟化钠浓度的增加和时间的延长,小鼠切牙氟斑牙形态学改变逐渐加重;小鼠切牙成釉细胞扭曲变形,正常的高柱状形态丧失,胞内空泡,大小不等的黑色颗粒,托姆斯突被异位物质压迫等细胞形态学改变逐渐加重。结论 氟对小鼠切牙的毒性效应在其发育初始阶段即已产生影响,并与时间和剂量有密切关系,从小鼠切牙发育初始阶段研究氟斑牙的致病机制可能会有所启示。     

硒对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的作用研究

目的:探讨硒对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的拮抗作用。方法:小鼠成釉细胞未经氟化钠处理为对照组;以氟化钠浓度分别为0.25,0.50,1.00,2.00,4.00mmol/L处理作为单独染氟组;以2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3为单独染硒组;以2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+0.25,0.50,1.00,2.00,4.00mmol/L氟化钠为联合作用组。细胞作用24h后,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA单链断裂情况。结果:与对照组相比,单独染硒组小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值显著性升高(P<0.05),而单独染硒组以上指标均明显下降(P<0.05)。2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+氟化钠联合作用小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值明显低于对照组和相同剂量单独染氟组(P<0.05),且高于相应剂量的单独染硒组(P<0.05)。与2.50μmol/L Na2SeO3+氟化钠联合染毒组比较,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+各剂量氟化钠联合作用组Olive尾矩均升高(P<0.05)。结论:过量摄入氟化物可导致小鼠成釉细胞DNA损伤,而适量的硒对氟致DNA损伤有一定的拮抗作用,且实验浓度为2.50μmol/L时其拮抗效果较好。     

不同处理方式对单侧睾丸扭转大鼠对侧睾丸Nrf2表达的影响

目的：研究未成熟大鼠单侧睾丸扭转后健侧睾丸中核因子E2相关因子2（ Nrf2）的表达,探讨不同处理方式下Nrf2表达与健侧睾丸损伤程度的相关性。方法 SD雄性未成熟大鼠36只,随机分为假手术组即对照组、扭转复位组和扭转切除组（ n＝12）。采用Turner法建立左侧睾丸扭转模型,各组大鼠分别于术后6 h、12 h、24 h以快速脱颈法处死,采集未扭转侧睾丸标本进行病理染色、丙二醛（ MDA）检测和Nrf2表达测定。结果扭转切除组与复位组相比睾丸MDA含量显著减少（P＜0.05）,Nrf2基因转录和蛋白表达显著增加（ P＜0.05）。结论 Nrf2可能是睾丸扭转复位后影响健侧睾丸损伤修复的重要因素。     

氟作用下小鼠切牙成釉细胞的结构改变

目的观察氟作用下小鼠切牙成釉细胞结构的变化,探讨其改变在氟牙症形成过程中的作用。方法建立小鼠氟牙症模型。通过透射电镜观察成釉细胞的超微结构的变化。结果透射电镜示实验组成釉细胞细胞器减少,线粒体肿胀,Tome突极不规则或消失,釉质变薄。结论氟影响成釉细胞超微结构,继而导致其功能异常,与氟牙症形成有相关性。     

纳米二氧化钛对小鼠心肌细胞DNA的损伤及叔丁基对苯二酚的拮抗作用

 目的  探讨纳米二氧化钛(nano-titanium dioxide,Nano-TiO2)对小鼠心肌细胞DNA的损伤作用,并进一步研究核因子NF-E2相关因子（nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2）诱导剂叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)是否可降低此种损伤。方法  30只ICR小鼠随机分为6组:对照组,Nano-TiO2 低(0.5 g/kg)、中(1 g/kg)、高(2 g/kg)剂量组,tBHQ组,tBHQ+ Nano-TiO2组。Nano-TiO2灌胃给予,tBHQ腹腔注射,均1次/天,连续7天。末次染毒后24 h处死小鼠,取新鲜心脏组织,胰酶消化法制备心肌细胞悬液,采用单细胞凝胶电泳技术检测心肌细胞DNA损伤程度。 结果  (1)对照组心肌细胞核呈圆形荧光团,强度均匀,大小较一致,无明显拖尾。不同剂量Nano-TiO2染毒后,各组均存在不同数量的DNA受损心肌细胞,出现彗星拖尾现象,且其尾部的拖尾程度及荧光强度随Nano-TiO2剂量的增加而增强。经CASP软件分析,低、中、高剂量Nano-TiO2组尾部DNA含量(tail DNA percent,TD)分别为28.45±1.70、35.08±0.81、39.94±4.46,明显高于对照组(23.96±2.59),差异有统计学意义(P<0.01),并有良好的剂量 效应关系(r=0.9947)。低、中、高剂量Nano-TiO2组彗星尾矩(olive tail moment,OTM)较对照组均有明显增加且差异有统计学意义(P<0.05),并有良好的剂量-效应关系(r=0.9886)。(2) tBHQ组心肌细胞细胞核呈圆形,无拖尾;Nano-TiO2中剂量(1 g/kg)组细胞拖尾明显,但给予tBHQ可明显降低Nano-TiO2所致的细胞核拖尾程度;与Nano-TiO2组相比,tBHQ +Nano-TiO2组两项指标TD及OTM均明显降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论  Nano-TiO2可剂量依赖性地引起心肌细胞DNA损伤,而Nrf2诱导剂tBHQ可拮抗Nano-TiO2所致心肌细胞DNA损伤。     

氟对小鼠成釉细胞Bcl-2及Bax表达影响的实验研究

目的 :通过研究氟对小鼠牙齿发育中凋亡抑制基因 Bcl- 2及 Bax表达的影响 ,探讨氟在牙齿发育中对成釉细胞的作用机制。方法 :给小鼠饮水中加入不同浓度的氟建立小鼠氟斑牙模型 ,采用 HE染色及免疫组化的方法观察氟对成釉细胞的影响 ,采用图像分析技术对免疫组化结果进行量化分析。结果 :给氟组小鼠 Bcl- 2及 Bax蛋白表达均明显下调。结论 :氟可能通过抑制 Bcl- 2及 Bax的表达而诱导细胞凋亡 ,从而影响釉质发育     

Nrf2 mRNA表达水平与2型糖尿病患者微血管病变发生风险的相关性

目的探究核因子E2相关性因子2(Nrf2) mRNA的表达水平与2型糖尿病患者微血管病变发生风险的相关性。方法选取我院2015年4月至2017年3月2型糖尿病患者188例,随访2年,根据微血管病变发生与否将其分为对照组和病变组。比较两组患者治疗前的基线资料,血糖、血脂、肾功水平、超敏C反应蛋白和Nrf2的表达情况;应用Cox回归分析2型糖尿病患者微血管病变的独立危险因素。结果本研究中,共发生微血管病变50例(26.60%),两组患者在病程、收缩压、空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、Nrf2 mRNA表达水平上存在明显差异(P<0.05)。Cox回归分析结果表明收缩压(HR=1.054,P=0.020),病程(HR=20.413,P=0.001),HbA1c(HR=3.168,P=0.001),hs-CRP(HR=3.131,P=0.020),Nrf2 mRNA表达(HR=20.413,P=0.000)是2型糖尿病微血管病变的独立危险因素,差异有统计学意义。结论 Nrf2 mRNA参与了2型糖尿病...     

Nrf2、NQO1在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的 探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor,Nrf2)、醌氧化还原酶(triphosphopyridine nucleotide quinine oxidoreductase,NQO1)在肾透明细胞癌中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学法检测52例肾透明细胞癌及正常肾组织(癌旁＞ 4cm处正常肾组织,病理学检测证实)Nrf2、NQO1蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链反应法检测36例肾透明细胞癌及正常肾组织Nrf2、NQO1mRNA的表达.结果 肾透明细胞癌组织Nrf2、NQO1蛋白及mRNA的表达明显高于正常肾组织(P＜0.05).同时Nrf2蛋白表达与NQO1蛋白表达呈正相关(rs=0.594,P＜0.05).结论 Nrf2与NQO1在肾透明细胞癌中表达升高,可能成为评价肾透明细胞癌发生、发展的生物学指标.     

低剂量脂多糖诱导PC12细胞中Nrf2的表达及其抗ROS作用的实验研究

目的 研究低剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的PC12细胞中核因子E2相关因子2 (nuclear factor-erythroid 2-related factor-2 ,Nrf2)的表达及其抗活性氧(reactive oxygen species,ROS)的作用.方法 分别以浓度为0 ...     

黄芪甲苷对肥胖糖尿病大鼠肾脏氧化应激、Nrf2蛋白表达和胰岛β细胞的影响

目的观察黄芪甲苷(AS-IV)对肥胖糖尿病(DM)大鼠肾脏氧化应激、Nrf2蛋白表达和胰岛β细胞的影响。方法 2018年1-6月于武汉大学人民医院动物实验室进行实验。最终纳入健康雄性Wistar大鼠24只,随机数字表法分为对照组(n=8)、DM组(n=8)、AS-Ⅳ组(n=8),DM组给予链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg一次性单剂量腹腔注射建立DM模型,AS-Ⅳ组在DM组基础上给予AS-Ⅳ80 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃给药,8周后处死大鼠,检测各组.血尿相关指标、体质量及肾脏氧化应激指标,并观察胰岛细胞病理改变与胰岛细胞凋亡情况,采用Western免疫印迹检测Nrf 2蛋白。结果 (1)DM组及AS-Ⅳ组空腹血糖(FPG)、24h尿白蛋白排泄率(UAER)及体质量显著高于对照组,空腹胰岛素(FINS)显著低于对照组(F=59. 526、69. 342、19. 272、37. 934,P均=0. 000); AS-Ⅳ组FPG、UAER及体质量显著低于DM组,FINS显著高于DM组(P<0. 01)。(2) DM组及AS-Ⅳ组丙二醛(MDA)含量显著高于对照组,总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著低于对照组(F=29. 581、53. 546,P <0. 01); AS-Ⅳ组MDA含量显著低于DM组,T-SOD活性显著高于DM组(P <0.01)。(3)与对照组比较,DM组胰岛细胞数目显著减少,且出现肿胀、坏死及空泡变性,呈不规则排列,AS-Ⅳ组胰岛细胞较DM组显著改善;DM组及AS-Ⅳ组大鼠胰岛细胞凋亡率显著高于对照组(t=9.991、5.987,P均=0.000),AS-Ⅳ组大鼠胰岛细胞凋亡率显著低于DM组,差异均有统计学意义(t=6.952,P=0. 000)。(4) Western免疫印迹结果显示,DM组大鼠肾组织总Nrf 2、核Nrf 2蛋白表达显著低于对照组及AS-Ⅳ组(t=2.542、3.881、2.642、2.267,P=0.024、0.002、0.019、0.040),AS-Ⅳ组大鼠肾组织总Nrf 2、核Nrf 2蛋白表达显著高于DM组,差异均有统计学意义(t=2.985、2.928,P=0.010、0.011)。结论 AS-Ⅳ可有效减轻肥胖DM大鼠肾脏氧化应激反应,上调Nrf2蛋白表达,并延缓胰岛β细胞凋亡,其作用机制可能与Nrf2-ARE通路被激活相关。     

氟对小鼠睾丸间质细胞凋亡与caspase-3表达的影响

目的观察氟化钠对体外培养小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,以及对间质细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的改变。方法将体外培养的小鼠睾丸间质细胞分成4组,加入不同浓度的氟化钠染毒(0,5,10,20 mg/L),染毒48 h后采用流式细胞仪AnnexinⅤ-PI双染法检测细胞凋亡率,并用免疫组织化学法检测氟化钠对小鼠睾丸间质细胞caspase-3的表达。结果所有染氟组均观察到间质细胞凋亡和caspase-3表达的变化。与其他组相比,20 mg/L氟化钠组细胞凋亡值均显著升高,caspase-3表达的平均灰度值则显著降低(P<0.01)。结论氟化钠可促进体外培养小鼠间质细胞凋亡及caspase-3表达,证实了氟化钠对小鼠间质细胞的发育有毒性作用。     

RhoA对小鼠成釉细胞黏附连接的影响

Objective： To investigate the regulation mechanism of RhoA signaling pathway during the enamel formation by using the EGFP RhoA Dominant Negative （EGFP RhoADN）transgenic mice model, from the aspect of adherens junctions, and to provide a theory basis for mechanism of enamel development defects. Methods: The enamel thickness of mandibular first molars of EGFP RhoADN transgenic mice and wild type (WT) mice were observed by scanning electronic microscopy at 20 kV, and the enamel thickness of the distal face of the central cusp was measured at 10 locations via analysis by ImageJ (Rasband, 1997-2009). The enamel organs from mandibular first molars from postnatal 4 day (P4) EGFP RhoADN mice and wild type mice were isolated, and the total RNA and protein were extracted from the epithelium of the enamel organs. The expression level of the adherens junctions components in ameloblasts layer of the postnatal 4 day EGFP RhoADN transgenic mice and wild type mice mandibular first molars were detected by real time PCR and Western blot assay. Results: The EGFP RhoADN transgenic mice had decreased enamel thickness in their bilateral mandibular first molars versus those of control group (n=20), and enamel thickness was (84.60±0.20) μm vs. (106.24±0.24) μm, P＜0.05 .The protein expressions of E cadherin, α E catenin and pan cadherin in ameloblasts layer of postnatal 4 day EGFP RhoADN transgenic mice molars were down regulated, and the protein level of β catenin in ameloblasts layer of P4 EGFP RhoADN transgenic mice molars was up regulated. The mRNA level of E cadherin in ameloblasts layer of P4 EGFP RhoADN transgenic mice molars was down regulated versus that of WT mice, and the gene expression of E cadherin was 0.93±0.01 vs. 1.00±0.02, P＜0.05. The mRNA level of β catenin in ameloblasts layer of P4 EGFP RhoADN transgenic mice molars was up regulated versus that of WT mice, and the gene expression of β catenin was 1.23±0.03 vs. 1.00±0.05, P＜0.05. Conclusion: In the mandibular first molars of EGFP RhoADN transgenic mice, the enamel formation was disrupted and the adherens junctions of EGFP RhoADN transgenic mice ameloblasts were implicated during amelogenesis. RhoA signaling pathway may play a critical role in enamel development by altering the adherens junctions in ameloblasts.     

Effects of hyperosmolality on expression of urea transporter A2 and aquaporin 2 in mouse medullary collecting duct cells

In this study,the effects of hyperosmolality on the expression of urea transporter A2 (UTA2) and aquaporin 2 (AQP2) were investigated in transfected immortalized mouse medullary collecting duct (mIMCD3) cell line.AQP2-GFP-pCMV6 and UTA2-GFP-pCMV6 plasmids were stably transfected into mIMCD3 cells respectively.Transfected mIMCD3 and control cells were cultured in different hy-pertonic media,which were made by NaCl alone,urea alone,or an equiosmolar mixture of NaCl and urea.The mRNA and protein expression of AQP2 was elevated by the stimulation of NaCl alone,urea alone and NaCl plus urea in AQP2-mIMCD3 cells;whereas NaCl alone and NaCl plus urea rather than urea alone increased the mRNA and protein expression of UTA2 in UTA2-mIMCD3 cells,and all the expression presented an osmolality-dependent manner.Moreover,the mRNA and protein expression of UTA2 rather than AQP2 was found to be synergistically up-regulated by a combination of NaCl and urea in mIMCD3 cells.It is concluded that NaCl and urea synergistically induce the expression of UTA2 rather than AQP2 in mIMCD3 cells,and hyperosmolality probably mediates the expression of AQP2 and UTA2 through different mechanisms.     

安宫牛黄丸对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织Nrf2蛋白表达的影响

目的 探讨安宫牛黄丸对脂多糖引起的急性肺损伤的保护机制.方法 将40只SD大鼠按随机数字表法分为对照组(Control组,n=10)、脂多糖组(LPS组,n=10)、脂多糖+安宫牛黄丸组(LPS+AG组,n=10)和安宫牛黄丸组(AG组,n=10).采用一次性腹腔注射脂多糖30 mg/kg建立大鼠急性肺损伤模型.分别检测各组大鼠肺湿重/干重比、支气管肺泡灌洗液蛋白浓度和白细胞计数、肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量、肺组织内转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)水平.结果 LPS+AG组肺组织SOD活性为(325.67±7.85)kU/g,明显高于LPS组的(298.75±6.25)kU/g,差异有统计学意义(P<0.05).MDA、INF-α含量分别为(1.89±0.35)μmol/L、(35.21±3.12)ng/g,均低于LPS组的(2.78±0.41)μmol/L、(41.52±4.87)ng/g,差异均有统计学意义(P<0.05).LPS+AG组肺组织Nrf2蛋白表达为(0.87±0.19),明显高于LPS组的(0.34±0.11),差异有统计学意义(P<0.05).结论 安宫牛黄丸对脂多糖诱发的急性肺损伤具有保护作用,可能与其能激活肺组织Nrf2表达有关.