miR-338-3p对甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化的调控作用

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)过表达靶向沉默信息调节因子（SIRT）6对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的影响。方法 采用荧光素酶报告实验分析miR-338-3p与SIRT6的靶向关系。构建SIRT6 pcDNA载体过表达SIRT6,将miR-338-3p mimic与pcDNA-SIRT6单独或联合转染至TPC-1细胞,根据转染质粒的不同分为6组：对照组（不作处理）、mimic-NC组（转染mimicNC）、miR-338-3pmimic组（转染miR-338-3pmimic）、pcDNA-SIRT6组（转染pcDNA-SIRT6）、mimicNC+pcDNA-SIRT6组（共转染mimic-NC和pcDNA-SIRT6）和miR-338-3p mimic+pcDNA-SIRT6组（共转染miR-338-3p mimic和pcDNA-SIRT6）。分别检测各组TPC-1细胞的克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率及上皮型钙黏蛋白（E-cad）、神经型钙黏蛋白（N-cad）和波形蛋白的表达量。结果 miR-338-3p的...     

miR-146a靶向调控MIF基因对胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对胶质瘤细胞增殖的影响。方法回顾性收集2017年6月至2019年7月济南市人民医院收治的经手术病理证实的胶质瘤患者36例,取胶质瘤组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-146和MIF表达水平。体外培养U87胶质瘤细胞系,检测U87中miR-146a水平,并将U87细胞株分为转染miR-146a模拟物组(miR-146a mimic组)和miR-146阴性对照组(NC组)。采用双荧光素酶检测系统和集落形成实验分析miR-146a与MIF 3’UTR基因靶向关系。采用RT-PCR检测U87细胞转染miR-146a mimic和NC后,MIF mRNA和蛋白表达水平。结果脑胶质瘤组织miR-146a水平为0.30±0.13,显著低于癌旁组织(0.63±0.19),MIF水平为0.54±0.08,显著高于癌旁组织(0.41±0.15),差异均有统计学意义(P <0.05)。miR-146a mimics+pGL3-MIF 3’UTR-Wt共转染组荧光信号为0.43...     

miR-26b-3p靶向调控TRA2B表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖和转移

目的探讨miR-26b-3p在神经胶质瘤细胞中的表达,以及其对神经胶质瘤细胞增殖和转移的影响。方法采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测神经胶质瘤组织与癌旁组织中miR-26b-3p与TRA2B的表达水平;通过向神经胶质瘤细胞细胞系中转染miR-26b-3p mimic和inhibitor干扰内源miR-26b-3p的表达,同时检测其靶基因TRA2B蛋白的表达变化;采用CCK-8法检测各组神经胶质瘤细胞增殖能力的变化,以及划痕实验对癌细胞迁移能力进行评估。结果神经胶质瘤患者组织与癌旁组织比较,miR-26b-3p的表达水平显著上调,TRA2B的表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,在32例神经胶质瘤患者神经胶质瘤组织中,TRA2B的表达水平与miR-26b-3p表达呈显著负相关(r=-0.510;P<0.05);SHG-44细胞体外转染实验结果发现,降低细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著升高,细胞的增殖活性以及转移能力会被抑制;而上调细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著下降,细胞的增殖活性与转移能力会显著提高,相比于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-26b-3p在神经胶质瘤组织中高表达,其可能靶向调控TRA2B的表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖活性与转移能力,在神经胶质瘤的发生发展过程中起着重要的生理功能。     

miR-195-5p过表达对前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭的影响

目的探究miR-195-5p过表达对前列腺PC3细胞增殖和侵袭的影响。方法采用miR-195mimic转染前列腺癌PC3细胞,RT-PCR检测miR-195-5p和血管内皮生长因子A(vascular endothelial cell growth factor A,VEGFA)的表达,预测miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,采用双荧光素酶实验证明miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,利用免疫蛋白印迹检测VEGFA表达情况,CCK8方法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-195 mimic能促进PC3细胞miR-195-5p的表达水平,降低VEGFA的mRNA水平、VEGFA野生质粒的荧光素酶活性、PC3细胞增殖速度和细胞侵袭数,且miR-195-5p有VEGFA的结合位点,pc-VEGFA能升高PC3细胞VEGFA的蛋白表达水平,减弱miR-195 mimic对VEGFA表达的抑制作用,显著促进细胞增殖和侵袭能力,同时减弱miR-195 mimic对细胞增殖和侵袭能力的抑制作用。结论 miR-195-5p通过下调VEGFA的表达以抑制前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭能力。     

miR-145-3p在多发性骨髓瘤中表达及其对多发性骨髓瘤细胞凋亡与自噬作用机制的研究

目的探讨微小m RNA-145-3p(miR-145-3p)在多发性骨髓瘤(MM)中表达及其对MM细胞凋亡与自噬作用机制。方法 2014年6月至2017年5月我院收治的MM患者60例(MM组)、健康体检者30例(正常组),采用荧光定量PCR法检测两组血浆样本及细胞株(MM细胞株选择U266、RPMI-8266、LP-1、H929,以CD138+浆细胞为对照组)中miR-145-3p表达水平,后选择毒性最低的MM细胞株(LP-1)进行miR-145-3p mimic或inhibitor转染(分别为mimic组、inhibitor组),并设立对照,以流式细胞仪进行凋亡检测[吸光度值(OD值)],并采用westren blot检测转染细胞凋亡与自噬相关标志物[肿瘤蛋白21(P21)、unc-51样激酶1(ULK1)、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)]。结果 MM组血浆及细胞株(U266、RPMI-8266、LP-1、H929)中miR-145-3p水平均低于正常组(P 0. 05);转染后随时间延长,OD值均增加,且转染后3 d及5 d OD值大小均为mimic组对照组inhibitor组; mimic组P21水平高于inhibitor组及对照组,ULK1、LAMP2水平低于inhibitor组及对照组(P 0. 05)。结论 miR-145-3p在MM中呈低表达,可能通过靶向调控P21/ULK1/LAMP2信号通路而抑制细胞凋亡,促进细胞自噬。     

miR-381靶向HMGB1抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的探究miR-381调控高迁移率组蛋白1(HMGB1)对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-381在子宫内膜癌细胞和正常子宫内膜细胞中的表达水平。转染miR-381mimic后,检测HEC1A细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验加以验证。细胞分为HEC1A组、miR-381mimic组、pc-HMGB1组、mimic+pc-HMGB1组,采用CCK8法检测HEC1A细胞增殖能力,Transwell和划痕实验分别检测HEC1A细胞侵袭和迁移能力,蛋白印迹法检测HEC1A细胞中Ki67、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达水平。结果 miR-381在正常子宫内膜细胞和癌细胞中存在表达差异。miR-381与HMGB1具有直接的靶向关系。与HEC1A组相比,miR-381组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达则增加(P0.01),pc-HMGB1组上述指标则相反(P0.01);与pc-HMGB1组相比,miR-381mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达增加(P0.01)。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制HEC1A细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-153-3p调控神经突的生长

目的探讨miR-153-3p在大、小鼠神经突生长中的作用。方法对数生长期C57BL/6小鼠N2A细胞和Rattus norvegicus大鼠PC12细胞,随机分为miR-153-3p过表达组(转染miR-153-3p过表达试剂miR-153-3p mimic)、miR-153-3p抑制组(转染miR-153-3p表达抑制剂miR-153-3p inhibitor)、过表达对照组(转染miR-153-3p mimic空白对照试剂miR-153-3p mimic NC)、抑制剂对照组(转染miR-153-3p inhibitor空白对照试剂miR-153-3p inhibitor NC)。转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞miR-153-3p mRNA相对表达量,免疫荧光法检测神经突生长情况。结果 miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞miR-153-3p mRNA相对表达量(28.98±1.63、19.67±0.88)均高于miR-153-3p抑制组(0.94±0.19、0.89±0.05)、过表达对照组(0.99±0.08、1.00±0.09)、抑制剂对照组(1.00±0.04、1.00±0.14)(P0.05),miR-153-3p抑制组、过表达对照组、抑制剂对照组比较差异均无统计学意义(P0.05);miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞神经突总长度[(31.13±3.85)、(38.08±2.12)μm]和最长神经轴突长度[(18.04±2.58)、17.48±1.75)μm]均较miR-153-3p抑制组[N2A细胞:(54.53±1.83)、(31.74±2.36)μm;PC12细胞:(64.46±12.85)、(29.46±7.36)μm]、过表达对照组[N2A细胞:(42.53±6.29)、(24.99±3.47)μm;PC12细胞:(53.58±4.88)、(25.31±3.66)μm]、抑制剂对照组[N2A细胞:(41.33±2.77)、(24.57±3.86)μm;PC12细胞:(44.44±7.59)、(23.04±4.31)μm]短(P0.05),且过表达对照组、抑制剂对照组PC12细胞、N2A细胞神经突总长度和最长神经轴突长度较miR-153-3p抑制组短(P0.05),过表达对照组、抑制剂对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论miR-153-3p可抑制小鼠N2A细胞、大鼠PC12细胞神经突生长。     

微小RNA-150-5p抑制鼻咽癌细胞恶性增殖及增强放疗敏感性的作用研究

目的 探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在鼻咽癌组织中的表达水平及其对癌细胞增殖和放疗敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-150-5p的表达水平。常规培养鼻咽癌细胞CNE2进行miR-150-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-150-5p过表达组(miR-150-5p mimic组)。采用MTT实验检测各组CNE2细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测各组CNE2细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)的表达。结果 miR-150-5p在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.74±0.39),低于癌旁组织中的(1.44±0.54),差异有统计学意义(t=8.140,P<0.001)。转染48 h后,miR-150-5p mimic组CNE2细胞中miR-150-5p的表达水平为(6.31±1.20),高于NC组中的(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=7....     

miR-142-3p靶向HOXA5对急性B淋巴细胞白血病细胞增殖、周期阻滞与凋亡作用的研究

目的:探讨miR-142-3p通过调控同源异型盒基因5(HOXA5)的表达对急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞增殖、周期和凋亡的作用及分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测人B-ALL细胞系Nalm6和人B淋巴母细胞系Hmy2-cir中miR-142-3p和HOXA5的表达水平。使用脂质体转染技术将miR-142-3p模拟物、pcDNAHOXA5过表达质粒、miR-142-3p模拟物+pcDNA-HOXA5过表达质粒及对照物转染至Nalm6细胞。根据microRNA.org预测HOXA5与miR-142-3p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-142-3p与HOXA5基因的靶向关系。使用细胞计数盒8(CCK-8)和细胞克隆形成实验检测miR-142-3p对Nalm6细胞增殖能力的影响。采用流式细胞术检测miR-142-3p对Nalm6细胞周期分布与凋亡的影响。通过Western blot检测细胞周期相关蛋白G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)、周期蛋白依赖性激酶4 (CDK4)以及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)的表达水平。结果:与Hmy2-cir细胞比较,miR-142-3p在Nalm6细胞中低表达而HOXA5呈高表达(P 0.05)。miR-142-3p与HOXA5 3'-UTR存在互补结合区域,转染miR-142-3p模拟物与野生型HOXA5 3'-UTR组荧光素酶活性较转染miR-142-3p阴性对照与野生型HOXA5 3'-UTR组荧光素酶活性显著下降(P 0.05)。转染48和72 h后,转染miR-142-3p模拟物能够抑制Nalm6细胞增殖能力和细胞克隆数目(P 0.05),使Nalm6细胞发生G1期阻滞,从而抑制CyclinD1与CDK4蛋白表达(P0.01),促进Nalm6细胞的凋亡,并且抑制BCL-2蛋白表达,促进Bax、Caspase-3蛋白表达(P 0.05)。结论:miR-142-3p通过靶向下调HOXA5表达来抑制Nalm6细胞增殖,使细胞G1期阻滞,并促进细胞的凋亡。     

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的 探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法 获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果 miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p...     

miR-142-2p通过TCF7调控骨肉瘤细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的研究miR-142-2p对骨肉瘤细胞迁移、侵袭、凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用Western blot检测癌旁组织、骨肉瘤组织或U-2OS细胞中TCF7的蛋白表达;将miR-142-3p组(转染miR-142-3p mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con)均用脂质体法转染至U-2OS细胞; qRT-PCR法检测各组细胞中miR-142-2p的表达; Transwell法检测各组细胞的迁移、侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-142-3p表达显著降低,TCF7表达显著升高(P 0. 05);过表达miR-142-3p、敲减TCF7可抑制U-2OS细胞的迁移侵袭,促进凋亡; miR-142-3p可靶向负调控TCF7的表达。结论 miR-142-3p可抑制骨肉瘤细胞迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与靶向TCF7有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用

目的 分析miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用。方法 回顾性收集2020年9月至2021年12月青岛大学附属青岛市中心医院行手术切除的治疗NSCLC患者39例,术中收取患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-218-5p表达,体外培养H1975细胞株,将H1975细胞分为NC组(mimics NC转染)、miR-218-5p组(miR-218-5p mimics转染)、TPD52-siRNA组(TPD52-siRNA转染)和miR-218-5p+TPD52-siRNA组(转染miR-218-5p mimics后再加入TPD52-siRNA试剂进行转染)。平板克隆形成实验检测H1975细胞的克隆形成数目,Transwell检测H1975细胞侵袭,划痕实验检测H1975细胞迁移,双荧光素酶实验测定miR-218-5p和TPD52靶向关系,蛋白质印迹检测TPD52蛋白表达。结果 NSCLC组织中miR-218-5p的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miR-218-5p的表达与性别、年龄、吸烟无相关性(P> 0...     

miR-432-5p靶向调控DDX41对胃癌细胞增殖、转移和放疗敏感性的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-432-5p对胃癌细胞增殖、转移和放疗敏感性的作用及在此过程中与DEAD-盒解旋酶41(DDX41)的靶向调控关系。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,将HGC-27细胞进行转染并分为NC组(未转染质粒)、miR-NC组(转染miR-432-5p mimics阴性对照)、miR-432-5p组(转染miR-432-5p mimics)、miR-432-5p+pcDNA-NC组(转染miR-432-5p和pcDNA-DDX41阴性对照)、miR-432-5p+pcDNA-DDX41组(转染miR-432-5p mimics和pcDNA-DDX41)。48 h后采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,MTT检测各组细胞增殖活性,Transwell实验检测各组细胞的迁移能力,克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞的放疗敏感性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-432-5p和DDX41的靶向关系,建立裸鼠移植瘤模型并检测肿瘤生长情况,蛋白质印迹法检测裸鼠肿瘤组织中D...     

miR-1调控胃癌细胞SGC-7901迁移能力的实验研究

目的探讨微小RNA-1(miR-1)对胃癌细胞系SGC-7901迁移能力的调控作用。方法脂质体转染寡核苷酸片段NCmimics及miR-1-mimics、NC-inhibitor及miR-1-inhibitor至SGC-7901细胞,定量RT-PCR检测转染后SGC-7901细胞中miR-1的表达水平,Transwell实验观察转染后细胞迁移能力,western blot检测转染后细胞上皮间质转化(EMT)指标。结果miR-1-mimics转染组miR-1的表达水平(900.10±240.40)明显高于NC-mimics转染组(1.01±0.18),差异有统计学意义(t=6.48,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组miR-1的表达水平(0.65±0.04)明显低于NC-inhibitor转染组(1.01±0.14),差异具有统计学意义(t=4.19,P0.05)。miR-1-mimics转染组迁移细胞数量[(362±10)个]明显高于NC-mimics转染组[(112±10)个],差异有统计学意义(t=21.65,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组迁移细胞数量[(64±8)个]明显低于NC-inhibitor转染组[(133±14)个],差异有统计学意义(t=17.07,P0.01)。与NC-mimics转染组比较,miR-1-mimics转染组上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)表达减弱(t=19.28,P0.01),神经钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达增强(t=5.43,P0.01;t=23.14,P0.01);与NC-inhibitor转染组比较,miR-1-inhibitor转染组E-cadherin表达增强(t=6.14,P0.01),N-cadherin和Vimentin表达减弱(t=6.78,P0.01;t=7.94,P0.01)。结论 miR-1过表达可促进胃癌细胞的迁移;miR-1低表达能可抑制胃癌细胞的迁移;miR-1可能通过EMT转化增强胃癌细胞的迁移能力。     

微小RNA miR-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达及意义

目的检测微小RNA(microRNA,miR)-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达水平,并探讨其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测胶质瘤细胞A172和正常星形胶质细胞HA1800中miR-148b-3p的表达水平。合成miR-148b-3p mimics及阴性对照(NC),用Lipofectamine 2000将miR-148b-3p mimics和NC转染至人胶质瘤细胞A172。分别采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验、流式细胞术检测转染miR-148b-3p mimics对胶质瘤细胞A172增殖、侵袭及细胞周期的影响。结果 miR-148b-3p在胶质瘤细胞A172中的相对表达量为0.27±0.06,显著低于在正常星形胶质细胞HA1800中的相对表达量1.16±0.21(P0.01)。MTT检测到miR-148b-3p mimics组A172细胞增殖率在转染后显著降低,转染24h、48h及72h后,细胞增殖率分别下降(12.33±0.46)%、(18.35±0.64)%和(30.54±1.22)%。Transwell实验结果显示miR-148b-3p mimics组A172细胞穿膜细胞数为23.1±1.8,显著低于NC组的87.1±4.6(P0.01),miR-148b-3p mimics能够抑制A172细胞的侵袭能力。流式细胞术结果显示miR-148b-3p mimics显著阻滞A172细胞从G0/G1期向S期转换。结论 miR-148b-3p在胶质瘤细胞中低表达,miR-148b-3p在胶质瘤细胞中发挥抑制肿瘤增殖和侵袭的作用。     

miR-124 靶向调控CMTM6 增强CIK 对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的 研究细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer ,CIK）细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸（miRNA,miR）-124 在此过程中的调节作用及可能机制。方法 收集2017 年3 月～ 2019 年10 月鄂州市中心医院神经外科收治的30 例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR 法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL 跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6 (chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontainingfamily member 6,CMTM6) mRNA 表达量及相关性。诱导培养CIK 细胞后,分别与胶质瘤细胞C6 和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor 及阴性对照序列,通过CCK-8 实验检测CIK 细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124 与CMTM6 基因的靶向关系,qRT-PCR 和Western blot 检测胶质瘤细胞中miR-124,CMTM6 mRNA 及蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124 表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086) 显著降低,CMTM6 mRNA 表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089) 显著升高,差异有统计学意义（t=39.051,26.337,均P ＜ 0.001）,二者呈负相关（r2=0.262）。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic 转染及其与CIK 细胞共培养对C6(72.84%±3.81% vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18% vs 74.59%±3.47%),U87 细胞(71.93%±3.94% vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24% vs 76.28%±3.64%) 增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义（q=16.340,15.486,14.087, 13.886,均P ＜ 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-124 和CMTM6 具有明显的靶向关系。Western blot 结果显示,与转染阴性对照+CIK 组比较miR-124 mimic 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068) 显著降低,转染miR-124 inhibitor 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6 蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068) 显著增加,差异均有统计学意义（q=13.817,10.839, 7.327,17.558,均P ＜ 0.001）。结论 CIK 细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124 可通过靶向抑制CMTM6 增强CIK 细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。     

lncRNA PCAT19靶向miR-769-5p促进口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨lncRNA PCAT19对口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 收集45例口腔鳞癌患者癌组织和癌旁组织，qRT-PCR法检测组织中PCAT19和miR-769-5p表达。体外培养HSC3细胞，转染PCAT19小干扰RNA或miR-769-5p模拟物、或共转染PCAT19小干扰RNA与miR-769-5p抑制剂后，CCK-8法和单克隆实验检测细胞增殖；划痕实验检测细胞迁移；Transwell实验检测细胞侵袭；蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验验证PCAT19和miR-769-5p的调控关系。结果 口腔鳞癌组织中PCAT19表达高于癌旁组织，miR-769-5p表达低于癌旁组织（P <0.05）。干扰PCAT19或过表达miR-769-5p后，HSC3细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低，E-cadherin蛋白表达升高（P <0.05）。PCAT19靶向负调控miR-769-5p。下调miR-769-5p逆转了干扰PCAT19对HSC3...     

miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制研究

目的探讨miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制。方法收集2017年1月—2019年6月证实的胃癌组织和癌旁组织各70例,采用qRT-PCR检测miR-100-5p在胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45和人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中的表达,分析miR-100-5p表达与胃癌患者临床病理参数关系。选择miR-100-5p低表达的胃癌细胞系MKN45,转染miR-100-5p mimic,分为NC组和miR-100-5p mimic组,采用MTS实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测两组细胞转移能力;采用不同浓度奥沙利铂处理两组细胞48 h, MTS实验和流式细胞凋亡实验检测两组细胞对奥沙利铂化疗敏感性;采用Western blotting检测两组细胞中ERK1/2和pERK1/2蛋白表达。结果 miR-100-5p相对表达量胃癌组织低于癌旁组织,胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45均低于人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1,差异有统计学意义(P0.01)。miR-100-5p表达与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期和化疗效果相关(P0.05或P0.01)。细胞中miR-100-5p相对表达量miR-100-5p mimic组高于NC组,MKN45细胞增殖能力及MKN45细胞穿膜细胞数miR-100-5p mimic组低于或少于NC组,MKN45细胞对奥沙利铂化疗敏感性miR-100-5p mimic组较NC组增加,细胞中pERK1/2蛋白表达miR-100-5p mimic组低于NC组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 miR-100-5p可能通过调控ERK1/2信号通路抑制胃癌细胞增殖、转移和对奥沙利铂化疗耐药,是治疗胃癌的潜在靶标。     

MicroRNA-146b-5p对小鼠骨片来源的间充质干细胞成脂分化能力的影响

目的:探讨MicroRNA-146b-5p(miR-146b-5p)对小鼠骨片来源间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响。方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,应用q-PCR检测成脂诱导过程中miR-146b-5p表达量的变化。将miR-146b-5p mimic或inhibitor及其阴性对照转染细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-146b-5p的表达量及转染效率;并于转染培养14 d后进行油红染色,应用q-PCR检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达量,Western blot检测PPARγ的表达量。结果:成功分离出小鼠骨片来源的MSC,miR-146b-5p在成脂诱导过程中随诱导天数的增加呈现上升趋势。转染miR-146b-5p mimic可上调miR-146b-5p表达(P0.001),而转染miR-146b-5p inhibitor可显著下调miR-146b-5p表达(P0.01)。培养14 d后油红染色结果表明,转染miR-146b-5p inhibitor可以抑制成脂分化,而转染miR-146b-5p mimic可促进成脂分化。诱导14 d后,与对照组相比,mimic组高表达PPARγ、C/EBPα(P0.01);与诱导组相比,inhibitor组低表达PPARγ、C/EBPα(P0.05)。mimic组PPARγ的表达量升高,而Inhibitor组则相反。结论:miR-146b-5p在小鼠MSC成脂肪分化过程中高表达,并可促进小鼠骨片来源的MSC向脂肪细胞分化。     

miR-186对HL-60细胞增殖、迁移的调控及机制研究

目的 探讨过表达微小RNA-186(miR-186)对人原髓细胞白血病HL-60细胞上皮间质转化(EMT)、增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路的调控作用。方法 选取体外培养HL-60细胞,按照不同的转染方式分为对照组、mimic NC组、miR-186组、miR-186+抑制剂组、miR-186+激活剂组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Transwell小室法及蛋白免疫印迹法检测miR-186相对表达水平、增殖率、迁移率、EMT相关因子及其信使RNA(mRNA)相对表达水平并进行比较、分析。结果 与mimic NC组相比,miR-186组HL-60细胞miR-186相对表达水平、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及其mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而增殖率、迁移率、磷酸化(p)-PI3K、p-AKT、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)及其mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-18...