抗孕酮单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的:获得一株特异性强,灵敏度高的抗孕酮单克隆抗体,用辣根过氧化物酶标记孕酮-11α-羟基孕酮半琥珀酸酯制成酶标记物,建立酶联免疫分析(ELISA)方法,用于检测人血清中孕酮含量。方法:用免疫原11α-OH-孕酮-BSA免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,得到14株抗孕酮单克隆抗体;用反射免疫分析(RIA)方法测定抗孕酮单克隆抗体的亲和常数和交叉反应率。结果:获得的14株抗孕酮单克隆抗体具有较高的亲和性和较小的价差反应率;建立ELISA方法学的灵敏度为0.12 ng/ml;批内变异系数为7.5%～11.4%;批间变异系数为:8.2%～12.1%;回收率93.8%～124.7%;高值临床样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为r=0.995 7;与全自动化学发光测定的临床样品值比对结果较好,线性方程为y=0.789 4x+0.760 0,r=0.912 6。结论:方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。     

C-肽化学发光免疫分析方法学研究

目的：建立人血清C-肽化学发光免疫分析法。方法：采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体，以一株包被微孔板制成固相抗体，另一株标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度。结果：以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：5000稀释，在C-肽浓度0．1～15ng／ml范围内线性良好，线性方程为y=0．9575x-0．0869，相关系数0．99；灵敏度为0．01ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．8％、8．4％；平均回收率98．4％，范围91．5％～105．0％。结论：文中建立的人血清C-肽化学发光免疫分析法，首次建立小分子人血清C-肽双抗体夹心化学发光免疫法测定。线性好，灵敏度较常规高出一个数量级，准确度和精密性高，能够满足一般临床诊断和科研的应用。     

孕酮化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立具有较宽检测范围的孕酮(P)化学发光免疫分析方法.方法 采用竞争一步法原理建立P化学发光免疫分析检测体系,对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、免疫试剂的稀释体系及温育时间等进行了考察和优化,最终选定的实验条件分别对该体系的最低检出限、线性、精密度、准确性、特异性进行评估,并与进口全自动化学发光试剂检测结果进行对比.结果 本系统线性范围为0.5~90 ng/mL,最低检出限为0.05ng/mL,批内批间变异变异系数均小于10%,与高浓度孕烯醇酮、雄烯二酮、雌二醇均无交叉反应,添加回收率在96.1%~106.2%.与进口全自动化学发光试剂同时测定175份样本的P浓度,二者测定结果的相关系数r为0.981.结论 成功建立了孕酮化学发光免疫分析法,该方法线性范围宽,灵敏度高,可作为进口化学发光试剂的替代试剂在临床进行推广.     

化学发光免疫分析测定血清甲状腺素

建立了以鲁米诺，过氧化氢作为发光底物，辣根过氧化物酶作同标记酶的化学发光免疫分析法，用于血清中甲状腺素水平测定，此法灵敏度为４．６ｎｇ／ｍｌ，不同水平Ｔ４批内变异系数为４．５％～７．８％，批间变异系数为７．０％～７．４％，加入Ｔ４５０ｎｇ／ｍｌ，１００ｎｇ／ｍｌ，２００ｎｇ／ｍｌ回收率分别为１０５％，１０１％，１０４％，与放免法有较好的相关性，ｒ＝０．８３１，Ｐ〈０．００１，关系式为Ｔ４－ＣＬＩＡ     

血清3,5,3'-三碘甲腺原氨酸化学发光定量免疫分析方法的建立

目的 建立血清3,5,3'-三碘甲腺原氨酸(T3)化学发光定量免疫分析方法.方法 采用固相竞争法,96孔微孔板包被T3抗体,辣根过氧化物酶标记T3,鲁米诺为发光底物,建立T3化学发光定量免疫分析方法.结果 本方法的线性范围为0.5 ～8.0ng/mL;分析灵敏度为0.18ng/mL;批内变异系数为4.4％ ～6.6％,批间变异系数为5.5％～10.6％;回收率为90.0％～113.3％;高值T3血清样品经系列倍比稀释后的测定值与稀释度呈线性关系,相关系数为0.9922;与T4、γT3的交叉率分别为0.35％、0.54％;与罗氏电化学发光分析法的测定值具有较好的相关性.结论 本方法具有分析灵敏度高、特异性好和操作简便快速的特点,适用于临床检测和科研应用.     

化学发光免疫法测定人体甲状腺激素的性能验证及其临床应用

目的 评估化学发光免疫系统在临床甲状腺素检测中的应用效果.方法 选取我院2018年6月至2019年11月区间内的100例甲亢患者、100例甲低患者和100例甲状腺功能正常者作为试验对象,将化学发光免疫法(CLIA)与酶联免疫吸附法(ELISA)、放射免疫测定法(RAI)检测结果比较.结果 使用化学发光免疫系统实测血清促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)时,所得线性范围、准确度、总精密度均较好,标准变异系数(CV)1.58％～6.44％、灵敏度较高且方法总回收率在99.7％～104.6％;且实际样本检测结果优于ELISA法、RAI法.结论 利用化学发光免疫法对甲状腺功能异常患者进行血清中甲状腺素及其抗体检测,可显著提高检测结果准确性并缩短检测周期,具有较高的临床医学推广价值.     

化学发光免疫分析法测定血清甲状腺素

建立了以鲁米诺、过氧化氢作为发光底物，辣根过氧化物酶作为标记酶的化学发光免疫分析法，用于血清中甲状腺素水平测定，此法灵敏度为４．６ｎｇ／ｍｌ，不同水平Ｔ＿４批内变异系数为４．５％～７．８％，批间变异系数为７．０％～７．４％。加入Ｔ＿４５０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ，回收率分别为１０５％、１０１％、１０４％，与放免法有较好的相关性，ｒ＝０．８３１，Ｐ＜０．００１，关系式为Ｔ４－ＣＬＩＡ＝０．９１５Ｔ４－ＲＩＡ＋２７．１（ｎｇ／ｍｌ），ｎ＝２６。　此法操作简便，检测速度快，适合于临床应用。     

促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。     

检测人血清IgD的酶联免疫吸附试验

本文采用亲和层析法，从ＩｇＤ型骨髓瘤病人血清中分离得到高纯度的ＩｇＤ，以此为抗原免疫动物得到ＩｇＤ抗血清，经再次纯化后用于ＥＬＩＳＡ方法中的包被抗体及酶标记抗体。本文还介绍了用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法测定人血清ＩｇＤ含量，该法灵敏度为０．０１～０．０５μｇ／ｍｌ，精确度试验结果：批内平均变异系数为５．５％，批间平均变异系数为８．５％。１００例正常人血清ＩｇＤ定量检测，其均值为７３．６３μｇ／ｍｌ，与文献报道７５．５６μｇ／ｍｌ值相吻合。木文建立了特异、敏感、快速、简便的血清内ＩｇＤ定量检测的ＥＬＩＳＡ方法，适合于临床应用。     

化学发光酶联免疫法检测汉坦病毒IgM抗体的研究

目的建立化学发光酶联免疫分析法（CLEIA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清中IgM抗体。方法以抗人IgM-μ链抗体包被黑色不透明聚乙烯板，辣根过氧化物酶标记汉坦病毒核蛋白作为检测抗原以及luminol-H2O2作为发光底物，建立CLEIA法并对CLEIA与IgM抗体捕获酶联免疫吸附法（MacELISA）进行比较。结果CLEIA与MacELISA相关系数0．97；对于51份确诊的HFRS患者急性期血清CLEIA检测敏感度100％，MacELISA为90．2％；对48份正常人血清两种方法检测特异度均为100％；CLEIA次内变异系数范围5．02％-12．7％，次间变异系数范围0．4％～7．0％，与MacELISA相当。结论化学发光酶联免疫分析法是一种更为灵敏，准确和稳定的方法，适用于检测HFRS早期患者血清中IgM抗体。     

Tuftsin放射免疫分析法及其初步应用研究

报道Ｔｕｆｔｓｉｎ放免分析方法的建立以及人和动物切脾术后血清Ｔｕｆｔｓｉｎ水平的变化将Ｔｕｆｔｓｉｎ与ＢＳＡ相联，制得免疫原，免疫家兔得抗Ｔｕｆｔｓｉｎ抗血清，对氨苯乙酰－Ｔｕｆｔｓｉｎ通过改良氯胺Ｔ法与＾１２５Ｉ标记，得碘化标记物，放免测量方法为液相一步平衡法，曲线测量范围是０．５～１００μｇ／ｍｌ，灵敏度为４０ｎｇ／管，平均批内和批间变异系数分别为６．８％和１０．８％，平均回收率为８９．６％，     

神经降压素放免分析试剂盒研制及其临床初步应用

应用自制兔抗ＮＴ血清研制成ＮＴ－ＲＩＡ试剂盒。抗血清特异性强。与五种多肽无交叉反应。本盒最小检出值为１０．４８ｐｇ／ｍｌ。标准曲线范围２０－１６２０ｐｇ／ｍｌ。批内和批间变异系数平均为１０．２５％和１５．３０％。临床初步应用结果显示对脑梗塞和肝癌的诊断一定意义。     

甲状腺过氧化物酶抗体光激化学发光间接检测法的建立

目的:利用抗免疫复合物IgG多抗体在光激化学发光(Lica)平台上建立间接法检测甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)。方法:以人体IgG对兔子进行免疫耐受,以兔红细胞和人体血清构建免疫复合物IgG并免疫兔子。用纯化的抗免疫复合物IgG多抗和甲状腺过氧化物酶组成一步间接法,检测甲状腺过氧化物酶抗体浓度,并评估其最低检测限、回收率和批内精密度,与传统两步化学发光法(贝克曼)进行比较。结果:甲状腺过氧化物酶的检测方法的最低检测限为0.09 U/ml,平均回收率为96.26%,重复性变异系数(CV)为1.58%～1.97%,与贝克曼方法的结果的相关性r=0.989。结论:成功建立了光激化学发光定量检测Anti-TPO的方法(间接法)。该方法与传统两步间接化学发光法的相关性较好,弥补了光激化学发光平台无法使用间接法进行检测的缺陷。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法.方法 采用两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,采用辣根过氧化物酶/鲁米诺/过硼酸钠体系,建立了测定人血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法,并进行了方法学鉴定.用该法测定80例正常人血清,确定正常参考值范围;测定临床病理样品27例,与Beckman全自动化学发光试剂测定值进行相关性分析.结果 本方法测定范围0.3 ～ 100μg/L,分析灵敏度0.16μg/L;37℃反应时间30min;回收率76.8％ ～ 111.1％;高浓度cTnI血清样品经系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.999;批内、批间变异系数分别为3.90％～6.71％,7.66％～10.34％;与心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白C(TnC)、骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sKTnI)、骨骼肌肌钙蛋白T(sKTnT)、人心肌脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、人心肌肌酸激酶(CK-MB)、人心肌肌红蛋白、C-反应蛋白(CRP)均无交叉;确定临床正常参考值小于0.304μg/L;与Beckman全自动化学发光试剂比较,两者测定值线性相关系数为0.925.结论 该方法反应时间短、特异性强、重复性好,具有应用及推广价值.     

免疫学测定磷酸肌酸激酶-MB同功酶及其临床应用

本文报道测定血清CK-MB的免疫抑制方法及其临床应用。自制抗CK-MM抗血清能够完全抑制CK-MM,但不影响CK-BB的活力,对CK-MB抑制后的残余活力为43.5～53.0％。本法批内变异系数小于9.8％。正常人CK-MB活力≤10IU/L,非急性心肌梗塞患者CK-MB≤14IU/L,急性心肌梗塞患者CK-MB≥15IU/L。本法灵敏度为96.2％,特异性为100％。     

制备醛固酮多克隆抗体建立检测血浆醛固酮的化学发光免疫分析法

目的：制备可用于免疫分析的醛固酮(ALD)多克隆抗体,并建立基于生物素-链霉亲和素放大系统的ALD化学发光免疫分析方法,用于测定人血液中的ALD含量。 方法：对ALD进行化学改造,制备醛固酮肟,再与BSA偶联制备免疫原,免疫兔,制备抗ALD多克隆抗体。以生物素-链霉亲和素放大系统采用竞争法建立ALD化学发光免疫分析方法。结果：经检测免疫的3号兔获得的抗ALD抗体灵敏度最高,50%抑制率（IC₅₀）ALD浓度是268 pg/ml。用该抗体建立的化学发光免疫分析法的检测范围为62.5~2 000 pg/ml,灵敏度为 23.7 pg/ml,批内变异系数为6.9%~9.5%,批间变异系数为8.5%~12.7%,回收率范围为93.1%~104.1%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.996,与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0.932x+4.596,相关系数r=0.948（n=95）。结论：建立的检测ALD的化学发光免疫分析法符合临床应用的基本要求。     

重组乳酸杆菌Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔免疫BALB/c小鼠的抗生育潜能

目的:探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能。方法:用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌Lb.hCGβ和Lb.hCGβ-C3d3以两种剂量(109个和1010个)经鼻腔滴注接种6~8周龄雌性BALB/c小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。于初次免疫后的第6、7、8周收集血清,分别培养MLTC-1、BeWo细胞;化学发光法检测培养上清中孕酮或hCGβ水平;免疫荧光观察抗血清处理后BeWo细胞的融合情况。结果:用1010个Lb.hCGβ-C3d3滴鼻免疫BALB/c小鼠产生的抗血清能显著抑制hCG刺激MLTC-1分泌孕酮,明显抑制BeWo细胞分泌hCGβ及细胞融合。结论:重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔接种诱导的hCGβ抗体可拮抗hCGβ生物学功能,并干扰滋养细胞功能,因此具有抗生育潜能。     

沙鼠IgG兔抗血清的制备及其在IgG抗体检测中的应用

目的用纯化的蒙古沙鼠血清IgG制备相应兔抗血清,并用于幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）疫苗免疫后沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。方法采用饱和硫酸铵沉淀法和Q sepharose high performance阴离子交换层析法纯化蒙古沙鼠血清IgG,免疫日本大白耳兔制备兔抗沙鼠IgG抗血清并进行rProtein A亲和纯化,建立间接ELISA方法用于检测Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠后血清抗原特异性IgG水平。结果以纯化的蒙古沙鼠血清IgG（纯度大于98％）免疫日本大白耳兔获得相应兔抗血清,经亲和层析后其纯度大于90％,回收率约为85％,双扩效价为1：16,ELISA效价为1：320000;ELISA检测结果显示Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠于第2次免疫后产生高水平IgG,第4次免疫后第7天IgG水平达到高峰,随后几周仍然保持高水平。结论所制备的兔抗沙鼠IgG抗体可以用于蒙古沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。     

微粒子化学发光免疫测定促甲状腺素敏感性方法的建立与应用

目的 :建立一种低成本、高敏感性检测血清促甲状腺激素(TSH)的微粒子化学发光免疫分析 (CLEIA)方法。方法 :采用碱性磷酸酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体 (mAb) ,与FITC偶联的抗TSHα亚单位的另一mAb配对 ,构成双抗体夹心免疫结合 ,用抗FITC多抗免疫磁珠做固相分离载体 ,用金刚烷胺CSPD为发光底物的非均相免疫分析法。结果 :方法灵敏度 4 μIU/L ,批内变异系数 (CV)平均为7.4 5 % ,批间CV平均为 10 .4 5 % ,回收率为 91.4 %～ 10 2 .4 %。将实际样品测定与ACS 180  系统检测的结果相比较有较好的相关性。结论 :微粒子化学发光定量测定TSH的成本低、灵敏度及特异性高和稳定性好 ,具有广阔的应用前景     

孕酮质控血清研制

为制备供免疫分析用的孕酮质控血清并确定其参考值与参考范围，用０．４Ｌ混合正常人血清和０．６Ｌ去甾体激素血清，配制低值质控血清；１Ｌ混合正常人血清，作为中值质控血清；在１Ｌ混合正常人血清中加１５００ｕＬ孕酮乙醇溶液（浓度为１０ｕｇ／ｍＬ），配制高值质控血清。三种孕酮质控血清充分搅拌混匀后，按每瓶０５．ｍＬ分装、冻干。用天津德普公司和法国ＣＩＳ公司孕酮ＲＩＡ药盒测定本批和９３０６０１批号甾体激素质控血清孕酮含量。结果表明：采用德普公司药盒数据定值，低、中高值三种质控血清孕酮参考值各为１．２３、２．９５和１５．９ｕｇ／Ｌ，相应的参考范围分别是０．９８－１．４８、２．３６－３．５４和１２．７－１９．１ｕｇ／Ｌ。本批质控血清可以作为实验室用ＲＩＡ药盒检验孕酮时使用。