人脂肪源细胞外囊泡联合脱细胞脂肪组织支架构建组织工程脂肪

目的探讨人脂肪源细胞外囊泡(human adipose tissue derived extracellular vesicle,hAT-EV)联合脱细胞脂肪组织支架(decellularized adipose tissues,DAT)构建组织工程脂肪的可能性,为临床上软组织缺损修复提供新方案。方法将吸脂手术患者自愿捐赠的脂肪组织分为2份,1份脂肪组织进行脱细胞处理,并采用组织学(HE、Masson染色)、扫描电镜观察,Ⅰ、Ⅳ型胶原及层粘连蛋白免疫组织化学染色和Western blot检测进行表征。另1份脂肪组织使用去外泌体的完全培养基孵化48 h,离心收集培养基上清并使用超高速离心法获取hATEV。使用透射电镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight分析hAT-EV粒径分布范围,Western blot检测分析hAT-EV膜表面蛋白。将PKH26荧光标记的hAT-EV与脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)共培养后,共聚焦荧光显微镜观察hAT-EV能否进入ADSCs;将hAT-EV与ADSCs共培养15 d,油红O染色评估其成脂效果。将DAT组织剪碎并注射至8只6周龄雌性C57小鼠背部两侧,左侧每周注射0.2 mL hAT-EV作为实验组,右侧每周注射0.2 mL PBS作为对照组。12周后处死小鼠,取两侧DAT新生物进行湿重称量,并通过HE染色和围脂滴蛋白免疫荧光染色评估hAT-EV在体内诱导脂肪新生的能力。结果脂肪组织经脱细胞后,HE、Masson染色示DAT主要由排列松散的胶原构成,未见细胞核;扫描电镜示DAT中未发现细胞和细胞碎片,同时可见到粗大的胶原纤维束;免疫组织化学染色及Western blot检测示,DAT中保留了Ⅰ、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白。经鉴定,hAT-EV呈双层包膜的球形,高表达CD63、凋亡诱导因子6相互作用蛋白抗体、肿瘤易感基因101,97.9%粒径分布范围为32.67~220.20 nm,峰值为91.28 nm。共聚焦荧光显微镜和油红O染色示,hAT-EV被ADSCs摄取并诱导其成脂分化。大鼠体内实验显示,实验组新生脂肪组织湿重显著高于对照组(t=2.278,P=0.048);HE染色示,实验组脂滴结构较对照组多,对照组胶原含量高于实验组;围脂滴蛋白免疫荧光染色示,实验组DAT新生物中脂肪组织比例高于对照组(t=4.648,P=0.017)。结论DAT搭载hAT-EV可作为一种诱导脂肪组织新生的新方法,在软组织缺损修复中具有潜在应用前景。     

人脂肪组织细胞外基质支架的构建

目的 探讨从人脂肪组织中提取细胞外基质并构建支架的方法,研究其结构特点,分析其作为脂肪组织工程支架的可行性.方法 收集抽脂术患者的脂肪组织,共7例,每例约310 ml,10 ml用来分离培养脂肪来源干细胞,300 ml提取细胞外基质,并制备成粉末状,扫描电镜观察其表面结构.DiI荧光标记脂肪来源干细胞,统计荧光标记后细胞存活率;将荧光标记前、后的细胞与支架粘附,检测其粘附率,所得数据用SPSS 13.0软件两样本t检验进行统计学比较,分析标记前后细胞粘附率有无差异;荧光显微镜下观察细胞在支架表面生长情况.结果 从人脂肪组织中提取得到脂肪来源干细胞和细胞外基质粉末.脂肪来源干细胞具有成脂、成软骨和成骨分化的能力;扫描电镜观察细胞外基质粉末具有多孔、粗糙表面和光滑表面的结构.脂肪来源干细胞与支架粘附较好;DiI标记前、后细胞粘附率分别为(88.81±4.81)％和(86.48±4.58)％,两样本t检验,P=0.371,差异无统计学意义(P＞0.05).荧光显微镜下脂肪来源干细胞在细胞外基质支架上生长状态良好.结论 人脂肪组织细胞外基质粉末容易获取,形状和颗粒体积具有高度的多样性,表面积较大,有利于脂肪干细胞的粘附和增殖,可作为一种较理想的脂肪组织工程支架材料.     

肌源性细胞注射治疗压力性尿失禁

尿道注射治疗压力性尿失禁是一种微创的治疗手段。但是既往的注射治疗由于注射材料的原因往往不能取得令人满意的远期疗效，并且常有并发症。肌源性细胞包括肌源性卫星细胞和肌源性干细胞，注射后可在体内长期存在，并分化为平滑肌细胞，具有不被分解、不易迁移、低免疫原性的优点。在注射治疗压力性尿失禁方面具有广阔的前景。     

人源性细胞大鼠体内移植的实验研究

骨髓内存在能够向肝细胞分化的干细胞的事实已被广泛接受。然而,骨髓源性肝干细胞还不能作为生物人工肝以及肝细胞移植的细胞来源进行临床应用。主要的原因是难以通过骨髓源性干细胞获取足够数量的肝细胞。本实验通过建立肝损伤的大鼠体内微环境,将人骨髓干细胞和人肝细胞系CL-1细胞移植到大鼠肝脏内,试图实现动物肝脏人肝细胞化,获取足够的人源化肝细胞,为临床肝脏移植和生物人工肝治疗提供新的思路。材料和方法采集成人骨髓10 ml,梯度密度离心法获取单个核细胞,Percoll分离液分离含有核细胞的中间层,裂解红细胞后调整细胞浓度为2×105/m…     

人脂肪组织细胞外基质制备及评价方法研究进展

临床治疗软组织损伤的常用方法有组织工程材料移植及自体脂肪移植。自体脂肪移植后脂肪组织的吸收率较高,要达到患者满意的效果往往需要进行多次脂肪移植。人脂肪组织脱细胞细胞外基质支架因其具有来源丰富、易于获得、独特的三维空间结构及良好的细胞相容性等优点,被认为是治疗软组织损伤的新方法。笔者通过检索脂肪细胞外基质的制备及评价的相关文献,其常用的制备方法包括,物理法、化学法、酶处理法;其评价包括脱细胞评价、表征、有效成分的保存率、免疫原性及其组织相容性。     

人毛乳头细胞条件培养液治疗雄激素源性脱发的临床观察

目的:观察人毛乳头细胞条件培养液治疗雄激素源性脱发患者的临床疗效.方法:用人毛乳头细胞条件培养液皮下注射16例雄激素源性脱发患者的脱发区,每周1次,共4次.结果:人毛乳头细胞条件培养液治疗过的雄激素源性脱发区,可见到重新生长的毳毛和终毛.结论:人毛乳头细胞条件培养液对雄激素源性脱发患者有明显的治疗作用.     

人细胞外基质支架联合脂肪干细胞构建脂肪组织

目的 探讨人脂肪组织细胞外基质(ECM)支架联合人脂肪来源干细胞(ADSCs)构建工程化脂肪组织的可行性.方法 以酶消化法从人抽脂术抽吸物脂质部分获取人ADSCs,体外进行多向分化诱导鉴定,并行DiI荧光标记.从抽脂术的脂质部分分离提取人脂肪组织细胞外基质,经过低温冻干、粉碎、灭菌等处理,制备成粉末状,电镜扫描观察表面特征并将其与ADSCs进行黏附实验,探讨其作为支架材料的可行性.收集人ADSCs,以2×109/L的细胞密度与提取的细胞外基质支架复合后移植于裸鼠背部皮下,同鼠对侧背部皮下移植ECM支架和细胞培养液作为对照,每侧移植0.5 ml,共6只实验鼠.8周后取材,称量标本湿重.取出的标本行苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色进行定性判断,分析人脂肪组织ECM支架联合人ADSCs构建工程化脂肪组织的能力.结果 从脂肪组织中分离得到人ADSCs和ECM支架.ADSCs在相应的诱导环境下能够分化成为脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞.ECM支架电镜扫描和大体观察具有疏松、多孔的结构特征,适合ADSCs的黏附生长.ADSCs与支架相容性良好,黏附率达(89.87±2.59)％,细胞在支架表面可充分伸展生长.体内移植8周后,实验组和对照组都能够形成新生物,湿重比较实验组较对照组重(P＜0.05).经HE切片及油红O染色均证实实验组形成成熟的脂肪组织,对照组不能形成脂肪组织.结论 人脂肪组织ECM支架联合人ADSCs在体内能够成功构建成熟的脂肪组织,8周后支架并无明显吸收.     

脊髓栓系伴神经源性膀胱的治疗

2003年1月至2005年7月，我院共收治17例合并神经源性膀胱的脊髓栓系综合征（tethered cord syndrome．TCS）患者，由泌尿外科医师明确诊断，行尿流动力学评估，神经外科医师行脊髓栓系松解术，双科随诊及后续治疗，疗效满意，现报告如下。     

脂肪组织源性干细胞在临床脂肪雕塑术中的指导意义

注射器法吸脂术与自体脂肪颗粒注射填充移植术临床亦称脂肪雕塑术,取材安全方便,供源充足丰富,容易获取,微创无痕,无排斥反应,无伦理学问题,可反复取材,减少术后瘢痕,受区外形满意,手感自然,无供区畸形并能同时获得吸脂减肥瘦身塑体事半功倍的效果,具有良好的组织免疫相容性。脂肪组织是一种新发现的内分泌组织,是现今整形美容外科领域较理想,最具发展潜力的良好的人体软组织填充材料叫。其中脂肪组织源性于细胞（adipose—derived stem cells,ADSCs）作为组织工程学的种子细胞有着非常重要的研究和应用价值。     

脂肪组织来源的基质细胞研究进展

目的介绍近期国内外脂肪组织来源的基质细胞研究进展. 方法广泛查阅近期有关文献,归纳分析此种细胞的培养和分化的研究状况. 结果脂肪组织中存在一种多能的基质细胞,体外培养条件下这种细胞生长状态类似成纤维细胞,可长期增殖,细胞绝大多数为中胚层来源,混有少量的血管周细胞、内皮细胞和平滑肌细胞,在一定的诱导条件下能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞和神经细胞. 结论脂肪组织来源的基质细胞可替代间充质干细胞作为组织工程的另一种干细胞.     

Wnt/β-catenin信号通路在多种人前列腺癌细胞系中的表达研究及意义

目的:检测多种不同上皮细胞间质转化(EMT)特性的人前列腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达,对细胞中Wnt/β-catenin信号通路的功能状态进行鉴定,分析其在前列腺癌EMT现象中可能的作用。方法:用Western印迹法鉴定LNCaP及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B和ARCaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3、DU145细胞中β-连环素(β-catenin),糖原合成酶3β(t-GSK3β),磷酸化糖原合成酶3β(p-GSK3β)的表达差异情况。结果:β-catenin和p-GSK3β在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中表达较高,在PC-3中表达较低,在DU145中表达缺失,t-GSK3β在上述所有细胞中表达无明显差异。p-GSK3β/t-GSK3β比值在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中较高,在PC-3和DU145中较低。结论:8种不同EMT特性的前列腺癌细胞系中,Wnt/β-catenin信号通路的功能状态存在差异。     

脊髓拴系综合征伴神经源性膀胱的治疗进展

脊髓拴系综合征是指各种原因导致脊髓纵向牵拉、圆锥低位等病理变化而引起的一系列临床病变,主要以排便排尿功能异常为主,给患者的身心健康造成严重影响。目前的治疗方式以手术为主,术后针对膀胱功能的恢复,采取间歇导尿、康复训练、针灸、抗胆碱药物、再次手术等方式,但患者就诊于骨科、神经外科、泌尿外科、针灸科等,诊疗体系不完善,缺乏多学科协作,为康复增加难度,加重经济负担。本文针对近5年来TCS伴神经源性膀胱的中西医临床研究进行综述,以期为临床完整的诊疗体系的建立提供新思路。     

胶质细胞源性神经营养因子与脊髓损伤治疗

脊髓损伤治疗是医学界的热点和难点,从传统的大剂量激素冲击、手术解除压迫、术后康复锻炼等到干细胞移植、基因疗法等均未取得满意效果。大量研究证实,胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)有促进脊髓损伤修复的作用,为脊髓损伤治疗带来新方法。该文就GDNF结构特性及在脊髓损伤修复中的作用研究进展作一综述。     

胶质细胞源性神经营养因子与脊髓损伤治疗

脊髓损伤治疗是医学界的热点和难点,从传统的大剂量激素冲击、手术解除压迫、术后康复锻炼等到干细胞移植、基因疗法等均未取得满意效果.大量研究证实,胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)有促进脊髓损伤修复的作用,为脊髓损伤治疗带来新方法.该文就GDNF结构特性及在脊髓损伤修复中的作用研究进展作一综述.     

人脱细胞脂肪组织水凝胶支架的制备及理化性质检测

目的将人脱细胞脂肪组织(decellularized adipose tissue,DAT)构建成可注射的水凝胶支架,并对其理化特性进行检测。方法自2017—2019年,将从人体中得到的DAT制备成水凝胶支架,并对支架的超微结构、可注射性及体内外凝胶化过程进行观察。结果人体DAT能够被构建成水凝胶支架形态,构建的DAT水凝胶支架具有良好的流动性,在体内外均能自主聚合形成凝胶。结论人DAT在体外能够被构建成可注射的水凝胶支架。     

人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究

目的 探讨人脂肪组织来源的基质细胞（adipose tissue-derived stromal cells，ADSCs）向神经元样细胞分化的可能性，为神经移植探索新的细胞来源。方法 采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs，含血清的培养基进行培养，胰蛋白酶消化传代，采用第3～9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松，诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化，采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果 成功培养出ADSCs来源的基质细胞，细胞在体外生长形态类似成纤维细胞，可维持在未分化状态并稳定增殖，体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白，大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和βⅢ管蛋白；应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松，可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化，其中0．1％～0．2％的细胞分化为神经元样细胞，40％～50％分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态，并能表达神经元标志物；部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论 脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞，并能克服间充质细胞的限制，分化为神经元样细胞，但这种细胞是否为有功能的神经元，还需深入研究。     

血小板源性生长因子和肿瘤坏死因子在人系膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的:探讨血小板源性生长因子-β(PDGF-β)和肿瘤坏死因子(TNF-α)在人类系膜增生性肾小球肾炎中的蛋白表达及其在发病中的作用.方法:采用HE、PAS、PASM、电镜及免疫组织化学SABC染色法对20例人系膜增生性肾小球肾炎和10例对照组肾组织进行观察,并经计算机医学图像分析系统进行分析.结果:电镜下: 肾炎组肾小球基底膜厚薄不均,肾小球系膜区大量云雾状电子致密物沉积.免疫组织化学染色:PDGF-β蛋白在肾小管上皮细胞呈阳性表达,肾小球囊壁及系膜区散在阳性表达;肾小球与肾小管阳性表达与对照组相比, 均有统计学差异(P<0.01).TNF-α阳性反应产物在肾近曲小管上皮细胞呈强阳性表达,与对照组相比有统计学差异(P<0.05);在肾小球系膜区呈弱阳性表达.结论:系膜增生性肾小球肾炎时PDGF-β蛋白和TNF-α蛋白在肾小球与肾小管表达均显著增高,提示该两种因子在肾小球肾炎发病中有一定的作用.     

脂肪组织填充治疗拇指狭窄性腱鞘炎术后粘连

目的探讨脂肪组织填充治疗拇指狭窄性腱鞘炎术后粘连的临床应用效果。方法小针刀术后粘连13例,部分腱鞘切除术后粘连5例。采用显微外科技术彻底松解、局部填充脂肪组织和早期功能锻炼一体化治疗,术后在医生指导下定时、定期进行主被动功能锻炼。结果18例伤口全部一期愈合。随访6—50月,全部拇指指间关节屈伸活动正常,未发生再次肌腱粘连。结论本方法简便易行,效果切实可靠,便于推广应用。