链球菌蛋白G分子生物学研究进展

C和G组链球菌细胞壁中含有一种能与免疫球蛋白结合的蛋白质成分称为链球菌蛋白G(SPG)。近年来此种蛋白已被成功分离、纯化,并应用于免疫学研究。与经典的葡萄球菌蛋白A相比,SPG更易与IgG发生反应,亲和力强,结合谱广,已受到密切关注,国外已从分子生物学对其进行     

链球菌G蛋白——一种新型、广谱的免疫检测剂

<正> 某些链球菌菌株的细胞壁中含有一种能与免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)结合的蛋白质成分,称为IgGFc段受体或链球菌G蛋白(streptococcal protein G)。近年来此种蛋白质已被成功分离、纯化并应用于免疫学研究。与经典的葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)相比,链球菌G蛋自(以下简称SPG)更易与IgG发生反应,亲和力强,结合谱广,已受到密切     

链球菌G蛋白用于组织化学染色的实验研究

用理化方法制得链球菌G蛋白(SPG)-辣根过氧化物酶及SPG-胶体金探针,并将其用于常规病理组织切片、电镜包埋后、包埋前及冰冻超薄切片的抗原定位。组织化学染色显示,SPG定位准确、标记密度高,背景清晰,显著优于经典的葡萄球菌A蛋白(SPA)。研究结果表明,SPG的一个最重要的优点就是在免疫组化染色条件下仍有着比SPA更稳定、更可靠、更强的IgG亲合力,尤其适用于单克隆抗体,可获得更为理想的标记结果,因而是一种能用于多种不同条件组织化学染色的新型、高效免疫学检测剂。     

用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测

目的 制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验.方法 全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达.通过SDS-PAGE、Western bl...     

IgG核心岩藻糖基化水平检测方法的建立及应用

为建立IgG核心岩藻糖基化水平检测方法,研究血清IgG核心岩藻糖基化水平与慢性乙肝(CHB)、肝硬化(LC)中IgG异常增高的关系.应用特异性结合核心岩藻糖的LCA凝集素亲和柱分离纯化血清中具有的核心岩藻糖基化蛋白,并对CHB、LC患者的血清总蛋白(TP)和免疫球蛋白G(IgG)的核心岩藻糖基化水平进行检测和对比分析....     

从体外免疫获得的IgM杂交瘤中分离出分泌IgG1的转换体(文摘)

由于IgM分子量数、冷球蛋白的特性以及高浓度时易出现非特异性结合等原因,在实际应用中常受到限制,而IgG则更有实用价值。已有研究表明,在细胞培养中IgM杂交瘤可自发产生分泌IgG的变异体,其几率为10~(-5)～10~(-6)/细胞/代。本实验主要应用连续培养有限稀释法和IgG1特异性双     

用杂交瘤技术生产小鸡单克隆抗体的一种新细胞系

从小鸡获取的免疫球蛋白G(IgG)具有一定的共同特性,有利于免疫化学研究和临床应用,但由于生产这种单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系尚未建立,因此未能广泛应用。作者曾试图建立适合于生产McAb的小鸡B细胞系。但以往所选B细胞融合的杂交瘤细胞系在培养过程中很快便丧失分泌抗体的活性。本文报道一种新的杂交克隆(R27H4)可融合成稳定的杂交瘤细胞系,培养数月仍能持续分泌IgG抗体。     

A蛋白酶免疫试验的发展在筛选杂交瘤中的应用

葡萄球菌A(staphylococcal protein A,简称SPA)它具有与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合的特性.许多学者应用SPA,并结合放射,荧光,酶等技术,建立了许多敏感,特异,快速和简便的     

用蛋白质A-琼脂糖珠亲和层析提纯免疫球蛋白

提纯免疫球蛋白的方法很多。使用蛋白A-琼脂糖珠(Protein A-Sepharose)可直接从血清中分离纯化IgG,是一种快速简便的方法。 蛋白质A是从葡萄球菌细胞膜中分离出来的。它具有能与马、狗、猪、兔、山羊、绵羊和牛的IgG分子的Fc部分结合的特性,当与交联基质(Sepharose CL-4B)偶联后,可用作亲和层析,直接从抗血清中提取IgG。具体方法如下:     

SPA在淋巴瘤及横纹肌肉瘤免疫技术中的应用

葡萄球菌蛋白-A(SPA),是金黄色葡萄球菌细胞壁的一种蛋白戍份,具有与人及多种哺乳动物血清中IgG类抗体Fc段结合的特性,每个SPA分子可以结合二个免疫球蛋白分子,而且结合后并不影响IgG的Fab段和抗原作用。SPA由于不受第一抗血清动物种属的限制,本文将其应用于淋巴瘤(7例)横纹肌肉病(4例)免疫PAP法中,     

新构建的CD4免疫粘附蛋白

作者新构建了一种抗体类似分子,它含有HIV受体的gp120结合序列,能阻止HIV-1对T细胞和单核细胞的感染,具有较长的血浆半衰期及其它抗体类似特性,并能阻止所有的HIV分离株。因为它是CD4与IgG的部分融合产物,具有粘附分子特性,故称之为CD4免疫粘附蛋白(CD4 Immu-     

甲型副伤寒沙门氏菌体抗原抗血清的简易提纯

目的 单克隆抗体以其结合抗原的专一性用于血清学检验是一种必然趋势,而多克隆机体则以其简易的制备方式在目前仍得到广泛的应用,但多克隆抗体的提纯仍有许多繁琐之处,使其优势受到影响。本试验以甲型副伤寒沙门氏菌体抗原多克隆抗体的制备及提纯为例,提出可行的更简易的提纯方法。方法 利用产G蛋白链球菌,以一种较为简易的特异性结合和解离的方法来纯化甲型副伤寒沙门氏菌体抗原免疫血清。结果 得到了特异性IgG抗体。结论 利用这种纯化方法在实验室简易可行。     

抗人IgG单克隆抗体的研究 Ⅲ.8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性分析和初步应用

本文报道8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的血清学特性,其中4种属抗全IgG,3种是对IgG_4无反应的抗IgG,1种是对IgG_3无反应的抗IgG。各单克隆抗体之间的效价和结合抗原的能力有所差异。根据组合试验,选出A_2与B_1二种单克隆抗体进行组合,用以检测正常人血清中IgG含量,与常规抗血清相比较呈良好的相关性(r=0.90)。用以制备亲和层析柱,纯化人IgG,得率比常规抗血清高7.3倍。据此认为,研制这类单克隆抗体将为临床免疫检测提供有效的试剂。     

胃癌单克隆抗体的免疫电镜定位研究

采用免疫电镜技术对作者制备的3种单克隆抗体(mAb)3G9、3H11及PD4在胃癌细胞MGC803及BGC823上的定位进行了研究。经Mu IgG-Sepharose CL-4B亲和层析纯化的山羊抗小鼠IgG(GαMu IgG)以及GαMuIgG与胶体金复合物(GαMu IgG-Au)均     

抗CEA抗体C2-45重链恒定区的置换与活性鉴定

目的:将抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(mAb)C245(IgG4)转变成IgG1,增强其在抗肿瘤免疫中的作用。方法:采用PCR从C245(IgG4)基因中克隆VH和Vk基因,并插入到含有人IgG1恒定区(CH)基因的杆状病毒表达载体pAckCH3中。用构建的重组基因感染Sf9昆虫细胞,将获得的高滴度重组病毒用于最终表达重组蛋白。应用免疫亲和层析法,纯化培养上清中表达的重组蛋白C245(IgG1),并鉴定其与CEA结合的能力和CH的生物学功能CDC及ADCC。结果:经CH置换形成的重组蛋白C245(IgG1),既保留了对于表达CEA的肿瘤细胞的结合,又比原抗体C245(IgG4)的补体依赖的细胞毒作用(CDC)和抗体依赖的淋巴细胞的细胞毒作用(ADCC)强得多。结论:成功地应用基因工程的方法制备了置换CH的抗CEA的人抗体C245(IgG1),使其在肿瘤的免疫治疗中具有更广泛的应用价值。     

抗独特型单克隆抗体疫苗保护BALB/c小鼠防御致死性塞姆利基森林病毒的感染(文摘)

抗独特型单克隆抗体(McAb)具有病毒抗原“内影像”的特点可从被开发成为一种抗病毒疫苗。本文作者应用一种能与抗塞姆利基森林病毒(SFV Semliki forest Virus)E_2膜蛋白抗原位点结合的McAb U M1.13,SFV免疫小鼠制备出2种抗独特型McAb(Ab_2)(1.13 A 112和1.13 A321)。Ig亚类鉴定分别为IgG2a和IgG1。应用EIA检测两个抗独特型McAb均具有阻挡McAbU M 1.13中和SFV的能力。     

RSV CTL表位与G蛋白片段的融合表达对G蛋白片段诱导的免疫应答的调节作用

目的：观察呼吸道合胞病毒（RSV）的CTL表位F/M2与G蛋白抗原活性片段G1融合表达后，对G1诱导的免疫应答的调节作用。方法：将重组表达质粒pET-DsbA-G1和pET-DsbA-G1F/M2分别转化E.coli BL21（DE3），诱导表达融合蛋白DsbA-G1和DsbA-G1F/M2，亲和层析纯化。取上述蛋白，腹腔注射免疫BALB/c小鼠，定期采集血清和脾细胞，用MTT法测定CTL杀伤活性，ELISA测定IgG及其亚类IgG1和IgG2a抗体滴度，空斑抑制实验检测血清中和抗体。结果：经表达和纯化获得了纯度达90%以上的融合蛋白；DsbA-G1F/M2诱导了显著的RSV特异性CTL杀伤活性，而无CTL表位的DsbA-G1则不能诱导产生CTL反应；DsbA-G1F/M2和DsbA-G1均刺激产生了强烈的IgG抗体应答，但DsbA-G1所产生的IgG亚类仅为IgG1，而DsbA-G1F/M2同时诱导了高滴度的IgG1和IgG2a，显著下调了IgG1与IgG2a的比例；二者均诱导了高滴度的中和抗体，但与DsbA-G1相比，DsbA-G1F/M2所诱导的中和抗体滴度有所减弱。结论：CTL表位F/M2与G蛋白片段G1的融合表达产物DsbA-G1F/M2，能够同时诱导细胞免疫和体液免疫应答，CTL的激活下调了IgG1与IgG2a的比例，使得免疫应答更平衡，有利于改善该候选疫苗的安全性。     

抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定

目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论 :用单克隆抗体杂交瘤技术     

G蛋白在心脏功能调节中的作用

G蛋白存在于所有的真核细胞,是一种与GTP结合的信号传递蛋白。随着现代分子生物学技术的发展及应用(如分子杂交、分子克隆技术等),近年来在这方面的进展令人瞩目,更由于G蛋白在心脏信号转导中的转换器作用,使得G蛋白在心脏功能调节中的作用倍受     

不完全外显的遗传性痉挛性截瘫一家系临床与致病基因排除定位分析

目的 描述一个遗传了4代的不完全外显的遗传性痉挛性截瘫(hereditary spastic paraplegia,SPG)大家系的临床特征,并进行致病基因排除定位分析.方法 对SPG家系内11例患者的临床资料进行回顾性分析,并采用荧光多重PCR、毛细管凝胶电泳、Linkage软件包,选择对已定位常染色体显性遗传致病基因位点附近微卫星标记进行连锁分析.结果 该SPG家系的11例患者的发病年龄2～10岁,表现为缓慢进展的双下肢僵硬无力,四肢肌张力轻度增高,双上肢为主的腱反射亢进,剪刀步态和病理征阳性,无小便失禁或尿频、感觉障碍、眼震、痴呆等;遗传学分析该家系符合常染色体显性遗传,但外显不完全,连锁分析和突变分析发现该家系与已知的常染色体显性遗传SPG致病基因位点不连锁.结论 该SPG家系具有典型的"单纯型"痉挛性截瘫临床特点,发病年龄早,上肢体征较下肢明显,遗传学分析不支持该家系与已定位常染色体显性遗传位点相连锁,是一种新的SPG亚型.