LC-MS法测定麦冬皂苷D’浓度的不确定度评定

目的:评定LC-MS法测定血浆中麦冬皂苷D’浓度的不确定度。方法:对测定方法的全过程进行分析,建立评定其不确定度的数学模型,确定影响不确定度的因素并对各个不确定度因素进行评估,计算合成不确定度并进行扩展。结果:置信概率P为95%时,血浆中低(35.10μg/L)、中(280.80μg/L)、高(702.00μg/L)浓度麦冬皂苷D’的扩展不确定度分别为:6.22、7.64、76.50μg/L。结论:本方法适用于LC-MS法测定人血浆中麦冬皂苷D’浓度的不确定度评定。     

UPLC-MS/MS测定复方丹参方中丹参酮Ⅱ_A、丹参酚酸B、人参皂苷Rg_1及其在大鼠血浆和脑组织的药代动力学研究

建立大鼠血浆和脑组织中丹参酮Ⅱ_A(TSⅡ_A)、丹酚酸B(SAB)、人参皂苷Rg_1(GRg_1)的UPLC-MS/MS分析方法,并开展药物动力学研究。选用SD大鼠,单剂量灌胃(ig)复方丹参方,采集血液与脑组织样品,采用UPLC-MS/MS测定血浆和脑组织中TSⅡ_A、SAB和GRg_1的浓度,以Phoenix Win Nolin 6.1药动学程序软件对数据进行非房室模型拟合,采用统计矩法计算药动学参数。经方法学考证,3种成分的峰面积与其在血样及脑组织中的浓度线性关系良好(r0.992 2);回收率为58.86%~112.1%,日内、日间RSD≤9.7%,准确度及稳定性均符合体内药物分析的要求。大鼠ig给复方丹参方后的血浆药动参数如下:丹参酮Ⅱ_AT_(max)(1.58±0.081)h,C_(max)(725.4±88.20)μg·L~(-1),AUC_(0-t)(2 101.3±124.85)μg·h·L~(-1),MRT_(0-t)(3.66±0.05)h;丹酚酸B T_(max)(1.29±0.21)h,C_(max)(307.9±46.75)μg·L~(-1),AUC_(0-t)(537.4±88.24)μg·h·L~(-1),MRT_(last)(2.08±0.11)h;人参皂苷Rg_1T_(max)(1.42±0.20)h,C_(max)(460.38±154.60)μg·L~(-1),AUC_(0-t)(383.4±88.16)μg·h·L~(-1),MRT_(last)(1.87±0.046)h。脑组织药动参数如下:丹参酮Ⅱ_AT_(max)(0.75±0.22)h,C_(max)(1.41±0.420)ng·g~(-1),AUC_(0-t)(4.34±2.48)ng·h·g~(-1),MRT_(0-t)(4.00±1.90)h;丹酚酸B T_(max)(1.08±0.20)h,C_(max)(21.09±4.850)ng·g~(-1),AUC_(0-t)(14.83±3.160)ng·h·g~(-1),MRT_(0-t)(0.99±0.08)h;人参皂苷Rg_1T_(max)(0.50±0.16)h,C_(max)(130.96±54.220)ng·g~(-1),AUC_(0-t)(136.24±34.350)ng·h·g~(-1),MRT_(0-t)(2.87±0.33)h。该研究所建立的UPLC-MS/MS方法可用于大鼠血浆及脑组织中丹参酮Ⅱ_A、丹酚酸B、人参皂苷Rg_1中的药动学研究。     

α-常春藤皂苷钠盐在大鼠体内药代动力学及组织分布研究

研究α-常春藤皂苷钠盐在正常大鼠体内的药代动力学及组织分布特征,大鼠灌胃给予100 mg·kg-1的α-常春藤皂苷钠盐,LC-MS/MS测定α-常春藤皂苷钠盐在大鼠血浆和组织液中的浓度,血浆和组织样品均用甲醇沉淀蛋白法处理。主要药代动力学参数:达峰时间Tmax为(0.97±1.23)h,峰浓度Cmax为(222.53±57.28)μg·L~(-1),药时曲线下面积AUC0-t为(1 262±788.9)h·μg·L~(-1),半衰期T1/2为(17.94±9.50)h,心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、脂肪组织中均有分布。结果表明α-常春藤皂苷钠盐口服后在大鼠体内吸收较快,消除较慢,在体内组织分布广泛,不同时间点药物浓度均以肝中最高,推测其可能对肝脏有一定的靶向性。     

麦冬皂苷D对心肌细胞脂肪酸代谢酶的影响

该研究探讨麦冬皂苷D对人源心肌细胞AC-16中主要脂肪酸代谢酶的影响,为麦冬的心血管保护机制和临床安全应用提供参考依据。利用CCK-8试剂(cell counting kit-8细胞计数试剂)检测不同浓度的麦冬皂苷D对心肌细胞的活力影响,同时在显微镜下观察不同浓度麦冬皂苷D对心肌细胞形态和数量的影响,并应用RT-PCR技术检测麦冬皂苷D对心肌细胞中脂肪酸代谢酶CYP2J2、CYP4F3、CYP4A11、CYP4A22、CYP4F2 mRNA表达的影响,Western blot法检测不同浓度麦冬皂苷D孵育下CYP4F3蛋白的表达水平。细胞活力检测结果表明,与对照组相比,低浓度的麦冬皂苷D对心肌细胞存活率没有影响,高于20μmol·L~(-1)的麦冬皂苷D能促进存活率。显微镜下观察到低于100μmol·L~(-1)的麦冬皂苷D对心肌细胞形态和数量均未产生明显影响。RT-PCR结果表明,与对照组相比,5μmol·L~(-1)的麦冬皂苷D能引起CYP2J2和CYP4F3 mRNA的轻度上调,高浓度麦冬皂苷D(10、20μmol·L~(-1))能显著诱导CYP2J2和CYP4F3 mRNA表达(P0.05),呈现剂量依赖性。同样浓度的麦冬皂苷D对CYP4A11、CYP4A22、CYP4F2 mRNA表达影响较小。Western blot结果表明,20μmol·L~(-1)的麦冬皂苷D能显著诱导CYP4F3的蛋白表达(P0.05),且呈现剂量依赖性。综合上述结果,低于100μmol·L~(-1)的麦冬皂苷D不会影响AC-16心肌细胞的活力,麦冬皂苷D能够选择性诱导CYP2J2和CYP4F3的表达,调控脂肪酸信号分子的代谢途径,从而起到保护心血管系统的作用。     

UPLC-MS/MS分析地榆皂苷Ⅱ在大鼠体内的药代动力学

目的:通过超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)测定皮下注射地榆皂苷Ⅱ后大鼠体内血浆药物浓度,阐明地榆皂苷Ⅱ经皮下注射给药后在大鼠体内变化的动力学特征。方法:采用XTerraMS C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,5μm),柱温30℃,流动相[0.1%甲酸水溶液-乙腈(9∶1,A)]-[乙腈-0.1%甲酸水溶液(9∶1,B)]梯度洗脱(0~1.5 min,10%B;1.5~2.0 min,10%~53%B;2.0~3.8 min,53%~62%B;3.8~4.1 min,62%~95%B;4.1~4.5 min,95%B;4.5~4.7 min,95%~10%B;4.7~6.0 min,10%B),流速0.4 m L·min-1,进样量2μL;电喷雾离子源(ESI),在多反应监测(MRM)负离子模式下测定血浆中地榆皂苷Ⅱ的血药浓度。结果:建立了地榆皂苷Ⅱ在大鼠血浆中质量浓度测定的方法,线性范围5~2 000μg·L-1(R2=0.997),测得皮下注射地榆皂苷Ⅱ后大鼠体内药物的药峰浓度(Cmax)(95.877±11.433)μg·L-1,半衰期(t1/2)(35.456±23.405)h,药时曲线下面积AUC_(0-24 h)(1 221.983±153.379)μg·h·L-1。结论:建立了一种能快速、准确、灵敏的测定大鼠血浆中地榆皂苷Ⅱ质量浓度的方法,可用于该类成分的血药浓度测定及药代动力学研究,为地榆皂苷的体内药动学研究和临床合理应用提供参考。     

UPLC-MS/MS同时测定麦冬配方颗粒中4个成分的含量及山麦冬成分的检查

目的：采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法(UPLC-MS/MS)建立同时测定麦冬配方颗粒中4个有效成分的含量,并检查是否含有山麦冬的2个专属性成分的方法。方法：采用XBridge BEH C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速：0.2 mL·min^–1,柱温：35℃,电喷雾离子源,多反应监测模式正、负离子全扫描。对麦冬配方颗粒中麦冬皂苷C、麦冬皂苷D、甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C进行含量测定并聚类分析。结果：6个待测成分在各自线性范围内线性关系良好(r≥0.995),平均加样回收率为95.9%～99.3%,RSD为0.9%～2.2%。26批样品中麦冬皂苷C、麦冬皂苷D、甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B的质量分数分别为6.4～17.3、15.1～29.1、9.0～22.6、4.5～14.4μg·g^–1;有3批检出山麦冬皂苷B,其中2批同时检出短葶山麦冬皂苷C。结论：该方法简单、快速、准确,可用于麦冬配...     

ELSD-HPLC法测定麦冬药材中麦冬皂苷D、D'含量

目的采用蒸发光散射检测器(ELSD)测定麦冬中麦冬皂苷D、D'的含量。方法 Waters sy-meteryC18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),水-四氢呋喃-乙腈(52∶3∶45)等度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,增益值10,压力2.5 Pa,飘移管温度65℃。结果麦冬皂苷D和麦冬皂苷D'分别在48.60～972μg·mL-1,24.75～495μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,平均回收率(n=6)分别为101.7%(RSD=2.69%)和97.7%(RSD=3.25%)。结论该方法快速、准确,可用于麦冬药材中麦冬皂苷D和麦冬皂苷D'的含量测定。     

枳实栀子豉汤5种成分在正常大鼠与CUMS抑郁模型大鼠体内药动学比较研究

建立了同时测定大鼠血浆中枳实栀子豉汤中京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷5种成分的LC-MS/MS分析方法。5种成分线性关系良好,专属性、准确度、精密度、稳定性等方法学均符合要求。采用DAS 3.2.2软件计算药代动力学参数,结果表明5种成分体内代谢过程表现均符合非房室模型特征。京尼平龙胆双糖苷在CUMS抑郁模型大鼠与正常组大鼠体内t_(1/2)分别为(3.20±0.51)、(3.07±0.75) h,C_(max)分别为(403.15±96.93)、(229.50±60.63)μg·L~(-1),AUC_(0-t)分别为(612.56±148.50)、(413.14±76.37)μg·L~(-1)·h。栀子苷在CUMS抑郁模型大鼠与正常组大鼠体内t_(1/2)分别为(3.24±0.68)、(4.56±0.96) h,C_(max)分别为(2 961.40±688.02)、(1 833.27±558.13)μg·L~(-1),AUC_(0-t)分别为(10 972.87±1 992.96)、(8 996.27±3 053.48)μg·L~(-1)·h。柚皮苷在CUMS抑郁模型大鼠与正常组大鼠体内t_(1/2)分别为(1.64±0.59)、(1.02±0.25) h,C_(max)分别为(415.13±259.54)、(355.08±180.00)μg·L~(-1),AUC_(0-t)分别为(608.62±289.05)、(501.07±242.68)μg·L~(-1)·h。橙皮苷在CUMS抑郁模型大鼠与正常组大鼠体内t_(1/2)分别为(0.86±0.29)、(0.95±0.31) h,C_(max)分别为(95.17±22.80)、(46.48±18.33)μg·L~(-1),AUC_(0-t)分别为(141.19±54.63)、(69.51±14.73)μg·L~(-1)·h。新橙皮苷在CUMS抑郁模型大鼠与正常组大鼠体内t_(1/2)分别为(0.89±0.29)、(0.90±0.31) h,C_(max)分别为(828.78±361.56)、(314.68±172.45)μg·L~(-1),AUC_(0-t)分别为(1 292.29±553.73)、(385.99±138.55)μg·L~(-1)·h。     

葛兰心宁软胶囊中绞股蓝皂苷A大鼠体内药代动力学研究

目的:应用超高效液相色谱-质谱联用分析方法(UPLC-MS),建立葛兰心宁软胶囊中绞股蓝皂苷A的大鼠血浆中的定量分析方法。方法:测定大鼠口服葛兰心宁软胶囊内容物后,血液中绞股蓝皂苷A的血药浓度随时间的动态变化,用药动学统计软件DAS 3.0进行统计,计算药代动力学参数。结果:线性范围为10～500 ng·mL~(-1)(r=0.998 4);高、中、低浓度的日内RSD分别为2.7%、2.6%、4.2%;日间RSD分别为2.4%、2.8%、3.1%;基质效应84.9%～92.1%,RSD5%;回收率80.0%。口服葛兰心宁软胶囊,绞股蓝皂苷A在大鼠体内的药代动力学参数t_(max)为0.75 h,t_(1/2)为(6.247±2.039)h,药时曲线下面积(AUC)为(2562±252)μg·L~(-1)·h~(-1)。结论:绞股蓝皂苷A的药动学行为特征为口服快速吸收、达峰时间快、快速消除。     

秦皮甲素和秦皮乙素在大鼠体内的药物动力学研究

目的测定秦皮甲素和秦皮乙素在大鼠体内的血药浓度及药代动力学参数。方法大鼠口服给予秦皮甲素和秦皮乙素各60 mg·kg~(-1),于给药后不同时间点采血,UPLC法测定血浆秦皮甲素和秦皮乙素含量,3P87计算药代动力学参数。结果秦皮甲素和秦皮乙素的主要药动学参数:T_(max)分别为0.164,0.0643 h;C_(max)分别为4.778,3.576μg·m L~(-1);AUC_(0-4)分别为5.360,5.682μg·m L~(-1)·h;AUC_(0-∞)分别为7.449,11.691μg·m L~(-1)·h;CL/F(s)分别为7.938,11.055 mg·kg~(-1)·h·μg~(-1)·m L;二者均符合二室模型。结论建立了大鼠血浆中秦皮甲素和秦皮乙素的UPLC检测方法,方法灵敏准确,适用于药代动力学研究。