原癌基因及其在眼肿瘤和细胞生长中的研究进展

原癌基因是正常真核细胞中存在的，与肿瘤细胞的癌基因非常相似的细胞基因，经活化后能变为有转化能力的癌基因。它不仅在肿瘤发生起作用，对正常细胞的生长、分化、增殖及细胞内信息传递也起着重要作用。本介绍原癌基因的研究进展及其在眼部肿瘤和眼的细胞生长方面的概况。对原癌基因的深入研究将有助于从基因调控水平认识眼部肿瘤及增殖性病变的病理机制及寻找新的治疗途径。     

喉癌与癌基因

自Huebner(1969)首次提出癌基因以来,已发现100多种癌基因和抑癌基因.在肿瘤分子生物学的研究中对抑癌基因的了解较晚,Kamb(1994)首次确定一种比P53基因更为重要的抑癌基因P16(MT51,CDK41,CDKN2),因其对保持基因结构稳定、促进细胞正常分化、调节细胞生长、诱导细胞凋亡等密切相关.     

P16和Rb在睑基底细胞癌中的表达及其意义

目的研究Ｐ１６和视网膜母细胞瘤基因（Ｒｂ）的相互关系。方法采用免疫组织化学方法观察了５０例眼部基底细胞癌中抑癌基因Ｐ１６和Ｒｂ的表达并探讨两者的相互关系。结果肿瘤标本中Ｐ１６和Ｒｂ阳性表达率分别为４８％和５２％，其中８例肿瘤组织（１６％）Ｐ１６和Ｒｂ基因均阳性表达，未见同一肿瘤组织中两者均缺失。Ｐ１６和Ｒｂ基因在基底细胞癌中的阳性表达率在肿瘤的组织分化程度方面差异显著（Ｐ＜０．０５）。结论抑癌基因Ｐ１６和Ｒｂ在基底细胞癌的产生和发展过程中起重要作用，但两者同时表达缺失较少见     

肿瘤干细胞在眼部恶性肿瘤中的作用

肿瘤干细胞是肿瘤组织中一小部分具有无限增殖和多向分化潜能的细胞群,在维持肿瘤的恶性增殖、耐药、复发和转移等方面起着决定性作用 眼部恶性肿瘤大多具有高复发、易转移和预后差等特点近年来研究发现眼部恶性肿瘤中存在肿瘤干细胞,可能与肿瘤的发生和发展密切相关.本文对肿瘤干细胞在眼部恶性肿瘤中作用的研究进展进行综述.     

反义Rb基因促进细胞生长

视网膜母细胞瘤易感基因（Rb基因）是一个搞癌基因，在多种肿瘤组织中存在缺失、突变或失活。我们成功构建了Rb基因的反义表达载体DLORBAS并用电穿孔技术将DOLRBAS导入人胚肺纤维细胞（HEL细胞），转染后72小时测定发现HEL细胞的Rb蛋白表达降低，同时生长速度加快，但不能在软琼脂上形成克隆。这表明正常的Rb基因可以抑制HEL细胞的分裂，但单纯的Rb基因失活还不足以导致HEL细胞的恶变。 （中华眼底病杂志，1993，9：198-201）     

p16、RB在眼眶淋巴组织增生病中的研究

p16、RB均为肿瘤的抑癌基因，其蛋白产物能够调节细胞正常增殖活动，它们的缺失或突变导致肿瘤的形成。我们应用p16、RB多克隆抗体，通过免疫组织化学方法，研究其在眼眶淋巴组织增生病中的表达情况。     

眼科的抑癌基因

一、抑癌基因的概念抑癌基因的概念最初是由 Kundson于 1985年在对视网膜母细胞瘤的研究中发现并提出的 ,是指当这类基因发生突变、缺失或失活时可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。 1986年 Sager将抑癌基因的概念扩大 ,认为所有产生可抑制肿瘤生成和发展的因素都可称为抑癌基因。并将其分为 4类 :1癌基因产物的拮抗物 ,2干扰素 ,3生长抑素 ,4控制染色体稳定的因素。随着研究的深入 ,抑癌基因的概念逐渐被缩窄 ,新的抑癌基因的概念是 :抑癌基因是一大类可抑制细胞生长并能潜在抑制癌变作用的基因群 ,它仅在某一种特定的细胞内起作用。确…     

肿瘤坏死因子对晶状体上皮细胞原癌基因表达的作用

目的研究肿瘤坏死因子α （ＴＮ－α）对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞中原癌基因 ｆｏｓ，ｊｕｎ， ｍｙｂ， ｍｙｃ， ｒａｓ等蛋白产物表达的作用。方法细胞经 １０ Ｕ／ｍｌ ＴＮＦ－α作用不同时间后，采用卵白素－生物素－过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）免疫酶标技术测定蛋白表达。结果经ＴＮＦ－α作用后，几种原癌基因表达的阳性细胞百分率均明显增高（Ｐ＜０．０１）。 ｆｏｓ，ｊｕｎ，ｍｙｂ，ｒａｓ在刺激１ｈ后即达到顶峰，ｍｙｃ在刺激２ｈ后达到顶峰，随后很快下降，恢复至正常水平。同时，细胞的阳性反应强度增加，细胞核内变化更为明显。结论ＴＮＦ－α通过激活细胞内原癌基因的表达而促进晶状体上皮细胞的增殖。     

恶性肿瘤的抑癌基因治疗研究进展

越来越多的证据表明,肿瘤的发生是多因素作用的结果,与癌基因的激活与抑癌基因的失活有关。研究表明几乎一半人类肿瘤都存在抑癌基因的失活,可见抑癌基因失活与肿瘤生长有着密切的关系。因此,将正常的抑癌基因导入肿瘤细胞,去补偿和代替突变或缺失的抑癌基因治疗策略,将成为肿瘤基因治疗中一种重要的治疗模式。就抑癌基因ｐ５３,ＤＣＣ,ｎｍ２３,ＴＩＭＰ,ｐ２１,ｐ１６,ｂｃｌ－Ｘ等在恶性肿瘤基因治疗方面的研究进展作一综述。     

survivin和c-myc蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达

细胞凋亡和增殖异常在肿瘤的发生和发展中起重要作用。survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族新成员，具有抗凋亡和参与细胞周期G2期调控的作用，与化疗耐药及预后有重要关系。原癌基因c—myc被认为是具有激活和抑制双重作用的转录调节子，在细胞的增殖、分化和凋亡过程中发挥着重要作用。视网膜母细胞瘤（retinoblastoma，RB）是起源于视网膜神经上皮层的一种儿童时期最常见的眼内恶性肿瘤，但survivin和c—myc蛋白与RB的关系文献报道较少。我们应用免疫组织化学方法研究survivin和c—myc蛋白在RB中的表达，旨在探讨两者在RB中的作用及其与瘤细胞凋亡的关系。     

缺氧对牛视网膜色素上皮细胞增殖的促进作用

目的研究缺氧对视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞的影响。方法采用细胞计数及免疫组织化学的方法，将ＲＰＥ细胞接种于２４孔培养板，分别放入正常和缺氧环境中，３７℃进行培养。不同时间后进行计数及抗ＦＯＳ蛋白抗体染色。结果缺氧组的细胞计数均高于正常组（Ｐ＜０．０５），抗ＦＯＳ蛋白抗体染色，缺氧组明显强于正常组。结论缺氧可以明显促进ＲＰＥ细胞的增殖，其机理是通过诱导ｃ－ｆｏｓ癌基因的表达而起作用。     

基因重组小鼠凝血栓蛋白—1抑制大鼠内皮细胞增殖观察

目的研究凝血栓蛋白对新生血管的抑制机理。方法在体外培养的大鼠心肌微血管内皮细胞的培养液中加入基因重组小鼠凝血栓蛋白－１（ｒｅｃｏｍｂｉａｎｔｍｉｃｅｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１，ｒＴＳＰ１）及表皮生长因子（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃ－ｔｏｒ，ＥＧＦ），以放射性〔３Ｈ〕标记内皮细胞并测定其放射性强度，观察ｒＴＳＰ１对内皮细胞生长、增殖的影响。结果在培养内皮细胞中同时加入ＥＧＦ及ｒＴＳＰ１，细胞生长增殖受到明显抑制，单纯加入ｒＴＳＰ１对细胞生长无影响。结论ｒＴＳＰ１能够特异性地抑制ＥＧＦ诱导的培养内皮细胞的生长及增殖，其抑制作用是通过干扰ＥＧＦ等刺激因子对内皮细胞的诱导作用而实现的。     

缺氧促进视网膜微血管内皮细胞的增殖及C-fos癌基因表达

目的研究缺氧在视网膜新生血管形成中的作用。方法采用细胞计数及免疫组化的方法，将培养的视网膜微血管内皮细胞接种于24孔板,分别放入正常及缺氧（50ml·L-1O2）环境中，37℃进行培养。不同时间后进行计数及抗FOS蛋白抗体染色。结果缺氧组的细胞计数均高于正常组（P＜0.01）,抗FOS蛋白抗体染色，缺氧组明显强于正常组。结论缺氧可以明显促进视网膜微血管内皮细胞的增殖．其机理是通过诱导C－fos癌基因的表达而起作用。     

Bcl-2、bax在培养的人视网膜色素上皮细胞及视网膜前膜中的表达

原癌基因ｂｃｌ－２基因系列是目前研究较为深入的细胞凋亡相关基因之一。在正常组织ｂｃｌ－２基因的表达可能参与细胞的增生和分化，但在正常眼和人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）相关眼病中的表达未见报道。增生性玻璃体...     

microRNAs与晶状体疾病的相关性研究进展

microRNAs是一类长度约22个核苷酸的内源性非编码小RNA分子,广泛存在于真核细胞中,在细胞增殖、凋亡、分化、肿瘤发生以及机体代谢等一系列生命过程中扮演了重要角色,是近年来基因调控研究的热点。许多microRNAs广泛表达于眼部多种组织,并具有组织特异性和时序特异性,可能与眼部组织的生长、发育、功能调节、疾病发生等方面密切相关。研究microRNAs在晶状体发育和病理生理过程中的作用为进一步阐明晶状体疾病的发生机制、探索相关疾病的诊断和治疗方法提供了一种新思路。     

-70℃反复冻融对人眼脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1杀伤作用的体外研究

脉络膜黑色素瘤是成年人最常见的眼内原发性恶性肿瘤。放射治疗、激光光凝、肿瘤手术切除等是现代治疗脉络膜黑色素瘤的常用方法。近年来，现代冷冻治疗技术因其治疗范围广、安全有效及微创等特点，在恶性肿瘤治疗中显示了令人鼓舞的应用价值。在眼部肿瘤治疗中，冷冻治疗常用于视网膜母细胞瘤、血管瘤等，在脉络膜黑色素瘤的治疗中则较少应用。我们通过体外实验观察反复冻融对人眼脉络膜黑色素瘤细胞系OCM-1的杀伤作用及细胞形态学的变化，以期更好的认识和理解眼部肿瘤的冷冻治疗。     

核糖核酸干扰在眼科的应用进展

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程,是生物进化过程中保留下来的基因表达调控机制.本文对RNA干扰的作用机制和在眼部新生血管性疾病、纤维增殖性疾病、氧化损伤性疾病以及细胞凋亡性疾病的应用进展作一综述.     

经绿色荧光蛋白基因修饰的人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1-gfp的生物学行为与基因表达

目的 研究经绿色荧光蛋白（GFP）基因修饰的人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1-gfp在小鼠体内的生长过程、转移规律，以及可能影响肿瘤生长和转移的因素。 方法 用脂质体将GFP基因导入人脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1，建立稳定、高水平表达GFP的克隆;分别接种到Balb/c裸鼠视网膜下和后大腿皮下，建立原位和异位肿瘤模型。眼内肿瘤生长情况用荧光显微镜直接观察，皮下肿瘤大小用游标卡尺测量;采用免疫组织化学方法对肿瘤内13种基因的表达进行检测。 结果 稳定表达GFP的脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1-gfp基本保持了亲代细胞的特征;能在裸鼠体内形成肿瘤并继续生长和转移;在基因表达方面，肿瘤抑制基因p16染色呈阴性，p53染色呈强阳性。其他的肿瘤抑制基因:视网膜母细胞瘤易感基因（Rb）、p21，转录调控因子（E-2F）、核因子κB（NFκB），细胞增生相关基因细胞周期素D1（cyclin D1）、增生细胞核抗原（PCNA），细胞凋亡相关基因bcl-2、bcl-XL/S和bax，以及表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）呈现不同程度的阳性表达。 结论 GFP为直接观察脉络膜黑色素瘤在体内的生长和转移提供了标记;脉络膜黑色素瘤原位与异位移植瘤模型在成瘤率和生长情况方面无明显差异;由OCM-1-gfp生长形成的肿瘤p16、p53及NFκB、cyclin D1、PCNA及EGF和EGFR等多种基因表达异常。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 170-173)     

成纤维活化蛋白在眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞中的表达研究

目的：通过培养、分离、纯化、鉴定眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)及正常眼睑皮肤成纤维细胞(NFs)，将两种成纤维细胞的生物学特性和成纤维活化蛋白(FAP)表达情况进行对比研究，以进一步探究FAP以及CAFs在眼睑基底细胞癌发病及其发展中的作用及意义。

方法：将眼睑基底细胞癌及眼睑正常皮肤组织块贴壁培养获得原代CAFs及NFs，于倒置相差显微镜下观察纯化的两种细胞第3代的细胞形态并用细胞免疫化学染色(SP法)鉴定两种细胞； MTT法检测细胞生长增殖活力； 通过RT-qPCR、Western Blot分别检测其FAP mRNA、蛋白在两种细胞中的表达差异。

结果：眼睑CAFs呈长梭形或纺锤形，胞质突明显减少，而胞浆内具有较多颗粒，细胞体积差异明显，排列紊乱且密集，丧失接触抑制，存在明显的重叠生长现象； NFs呈长梭形，但胞浆内颗粒少见，细胞体积较均一，放射状排列，存在接触抑制，未见重叠生长。眼睑CAFs的增殖速度明显快于NFs。RT-qPCR法检测眼睑CAFs中FAP mRNA相对于内参的表达量为3.672±0.221，明显高于眼睑NFs中的含量1.034±0.024(P<0.05)。Western Blot法检测两种细胞中FAP蛋白表达水平发现，FAP在眼睑CAFs中高表达，而眼睑NFs中几乎不表达(P<0.05)。

结论：眼睑CAFs与眼睑NFs在形态结构、生长增殖、生长因子表达等生物学特征方面发生了显著改变，提示肿瘤微环境随眼睑基底细胞癌的发生发展相应地发生了一些变化，进而诱导NFs生物学特性和功能发生改变，最终转变为CAFs。此外，眼睑CAFs较NFs高表达分泌FAP，表明肿瘤细胞微环境中FAP可能参与肿瘤的发生发展，与眼睑基底细胞癌浸润性生长有一定关系。     

血小板反应蛋白-1在缺氧人视网膜色素上皮细胞中的表达

血小板反应蛋白-1(TSP-1)的生物学功能复杂,在血管生成及肿瘤的研究中发现TSP-1可以降低细胞的黏附,诱导凋亡,抑制血管新生,抑制肿瘤牛长[1-3];同时也有一些相反的报道,认为TSP-1具有促进细胞黏附、增生、血管新牛及肿瘤生长的作用[1].然而其在眼部血管生成中的研究较少.缺氧是眼部血管新生件疾病的一个主要病理过程[4,5],我们观察了常氧和缺氧状态下TSP-1在体外培养视网膜色素上皮(RPE)细胞的表达情况,现将结果报道如下.